CZ2005337A3 - Antimykotické a antimykobakteriální thiosalicylanilidy a způsob jejich přípravy - Google Patents

Abstract

Způsob přípravy thiosalicylanilidů obecného vzorce I, kde R.sup.1.n. znamená atom vodíku, atom halogenu, alkyl C1 až C15, cykloalkyl C3 až C8, alkoxyskupinu C1 až C15, trifluormethyl, nitroskupinu, hydroxyskupinu nebo jejich kombinaci v polohách 3,4,5 nebo 6 a R.sup.2.n. znamená atom vodíku, atom halogenu, alkyl C1 až C15, cykloalkylC3 až C8, alkoxyskupinu C1 až C15, aryloxyskupinu, trifluormethyl, nitroskupinu, hydroxyskupinu nebo jejich kombinaci v polohách 2,3,4,5 nebo 6, spočívá v tom, že se na příslušný salicylanilid působí thionačním činidlem v molárním poměru salicylanilidu a thionačního činidla 1 : 0.5 až 10, a na získanou reakční směs se působí hydrolyzačním činidlem přímo nebo po předchozí izolaci meziproduktu.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká antimykoticky a antimykobakteriálně aktivních látek na bázi thiosalicylanilidů obecného vzorce I,

kde R¹ znamená atom vodíku, atom halogenu, alkyl Cl až 05, cykloalkyl C3 až C8, alkoxyskupinu Cl až 05, trifluormethyl, nitroskupinu, hydroxyskupinu nebo jejich kombinaci v polohách 3,4,5 nebo 6 a R² znamená atom vodíku, atom halogenu,, alkyl spočtem atomů uhlíku Cl až 05, cykloalkyl C3 až C8, alkoxyskupinu Cl až 05, aryloxyskupinu, trifluormethyl, nitroskupinu, hydroxyskupinu nebo jejich kombinaci v polohách 2,3,4,5 nebo 6 .

Vynález se týká dále způsobu jejich syntézy.

V posledních letech výrazně stoupá zájem o salicylanilidy a jejich analoga, především v souvislosti s jejich významnou biologickou aktivitou a s nově nalezenými mechanismy jejich účinku. Salicylanilidy i thiosalicylanilidy projevují např. anthelmintický, antibakteriální, antimykobakteriální, antimykotický, antiprotozoámí, antialgální a herbicidní účinky (Kubicová L., Waisser K.: Česk. Slov. Farm. 41, 208, 1992; Waisser K., Kubicová L.: Česk. Slov. Farm. 42, 218, 1993). Velká část biologických aktivit salicylanilidů a podobných látek byla v poslední době vysvětlena na molekulární úrovni. Bylo zjištěno, že salicylanilidy interagiijí s regulačními systémy, které se účastní regulace buněčného cyklu bakterií (Hlasta D. J. et al.·. Bioorg. Med. Chem. Lett. 8, 1923, 1998; Kauppi A. M. et al.·. Adv. Exp. Med. Biol. 97, 529, 2003), virů (Zhang X. W., Yap Y. L.: Bioorg. Med. Chem. 12, 2517, 2004), rostlin (Papon N. et al.·. FEBS Lett. 537, 101, 2003) i obratlovců (Brtko J., Thalhamer J.: Curr. Pharm. Design 9, 2067, 2003; Liechti Ch. et al.·. Eur. J. Med. Chem. 39, 11, 2004;

Hangeland J. J. et al.: Bioorg. Med. Chem. Lett. 14, 3549,2004; Hardaker E. L. et al.: FASEB J. 18, 191, 2004). Thiosalicylamidy obsahující v molekule fragment substituované fenoxyoctové kyseliny jsou in vivo vysoce účinné selektivní inhibitory aldosareduktasy ALR2, která hraje důležitou roli v rozvoji chronických diabetických komplikací včetně neuropatie, retinopatie a nefropatie (Van Zandt M. C. et al.: Bioorg. Med. Chem. 12, 5661, 2004). Tyto poznatky řadí salicylanilidy a jejich analoga včetně thiosalicylanilidů mezi základní modelové struktury pro vývoj nových typů antimikrobiálních a protinádorových chemoterapeutik, antivirotik a jiných léčiv.

V souvislosti s preklinickým hodnocením antifungálních 2,4-dihydroxythiobenzanilidů byly provedeny toxikologické studie, které ukázaly, že akutní toxicita

2.4- dihydroxythiobenzanilidů je relativně nízká. LD₅₀ u myší byly v rozmezí 239 mg.kg'¹ (2,4-dihydroxy-4'-trifluormethylthiobenzanilid) až 840,5 mg.kg'¹ (3'-chlor-2,4-dihydroxy-2'-methylthiobenzanilid). Testované látky snižovaly lokomoční aktivitu umyší, ale neovlivňovaly hexobarbitalem navozený spánek (Kleinrok Z., Niewiadomy A., Matysiak J.: Pharmazie 57, 198, 2002). Cytotoxicita 2,4-dihydroxythiobenzanilidů byla nižší než u enilkonazolu použitého jako standard a závisela na substituci v anilidové části molekuly (Kowalska-Pylka H. et al.: ATLA-Altem. Lab. Anim. 29, 547, 2001). U derivátu

2.4- dihydroxythiobenzanilidu nebyl nalezen toxický účinek na lymfocyty (Matysiak J. et al.: Pharmazie 57, 774, 2002).

Thiosalicylanilidy jsou zajímavé i z hlediska možného technického využití například při přípravě fotosenzorů na bázi azobarviv (Shiino Y., Kikuchi N.: Jpn. Kokai Tokkyo Koho JP 01241563 (1989)). Thiosalicylanilidy, analogicky jako i jiné thioamidy jsou obecně použitelné jako výchozí sloučeniny při syntéze heterocyklických sloučenin (Jagodzinski T.: Chem. Rev. 103, 197, 2003; Potts K. T. et al.: J. Org. Chem. 54, 1077, 1989). Je obecně známo, že mezi heterocyklické sloučeniny patří mnoho látek s významnou biologickou aktivitou, používaných jako léčiva nebo zemědělské či technické chemikálie.

Dosavadní stav techniky

Dosud známé způsoby přípravy thiosalicylamidů a thiosalicylanilidů mají závažné nedostatky, které omezují možnosti výzkumu a použití těchto vysoce biologicky aktivních látek. Příčinou potíží při přípravě thiosalicylamidů a thiosalicylanilidů je přítomnost reaktivní fenolické hydroxyskupiny v poloze 2. Tato hydroxyskupina však významně přispívá k jejich biologické aktivitě, a proto je její zachování v molekule z hlediska biologické aktivity žádoucí.

Jsou známy obecné metody a thionační činidla, jimiž lze převést oxoskupinu OO na thioxoskupinu C=S (Walter W., Bode K.-D.: Angew. Chem. 79, 285, 1967; Jagodzinski T.: Chem. Rev. 103, 197, 2003; Polshettiwar V.: Synlett 2004, 2245). Tímto způsobem byla z příslušných substituovaných amidů připravena řada odpovídajících thioamidů, včetně thiobenzanilidů bez substituce v poloze 2, které lze připravit s výtěžkem až 95 % v jednom reakčním stupni přímou thionací příslušných benzanilidů thionačním činidlem (Yde B., Lawesson S. O.: Tetrahedron 40, 2047, 1984; Waisser K., Kuneš J., Odlerová Ž., Roman M., Kubicová L., Horák V.: Pharmazie 53, 127, 1998). Pokusy o přípravu thiosalicylamidů nebo thiosalicylanilidů přímou thionací salicylamidů či salicylanilidů sulfidem fosforečným však vedly k nízkým výtěžkům thiosalicylamidů nebo thiosalicylanilidů a vzniku nečistot, které nebyly přesně identifikovány a způsobovaly značné potíže při jejich izolaci. Přesto je takový postup předmětem patentového spisu zr. 2003, jehož autoři uvádějí, že při dvoudenním zahřívání substituovaných salicylanilidů se sulfidem fosforečným vzorce P2S5 v poměru 2 : 1 v pyridinu při 95 °C vznikají thiosalicylanilidy ve výtěžku 10 % (Hara Y., Saika M., Hamamura H.: Japan Kokai Tokkyo Koho JP 2003^48876, 2003), což odpovídá tomu, že se jedná o minoritní produkty reakce. Ani v tomto případě se autoři patentu nezabývali izolací ani identifikací hlavních produktů reakce substituovaných salicylanilidů se sulfidem fosforečným, ani se nepokusili podrobit reakční směs takovým podmínkám, které by vedly ke vzniku thiosalicylanilidů ve větším než 10%j«tajj výtěžku. Uvedené prameny se vyznačují nevhodně zvoleným molámím poměrem reagujících komponent. Ten sice je prokazatelně postačující pro thionací analogických benzanilidů bez substituce v poloze 2 (Waisser K., Kuneš J., Odlerová Ž., Roman M., Kubicová L., Horák V.: Pharmazie 53, 127,1998; Waisser K, Kubicová L., Odlerová Ž.: Collect. Czech. Chem. Commun. 58, 205, 1993), ale v případě salicylamidů nebo salicylanilidů má relativně nízký obsah sulfidu fosforečného v reakční směsi za následek nekompletní thionací, která se projeví přítomností výchozího amidu v produktu. Autoři výše uvedených postupů patrně nebrali v úvahu, že následkem přítomnosti hydroxyskupiny v poloze 2 poskytují jak salicylamidy a salicylanilidy, tak i thiosalicylamidy a thiosalicylanilidy další reakce za účasti použitého thionačního činidla, kterého proto v reakční směsi již nezbývá dostatek na zamýšlenou thionaci. Nízký obsah sulfidu fosforečného v reakční směsi použili možná úmyslně ve snaze zabránit vzniku sloučenin, které mylně považovali za balastní produkty, aniž by našli způsob, jak tyto látky rozložit za vzniku thiosalicylanilidu.

K neuspokojivým výsledkům vedly i pokusy o thionaci salicylamidů či salicylanilidů Lawessonovým činidlem vzorce III, tj. 2,4-bis(4-methoxyfenyl)-2X⁵,4X⁵-cyklodifosfathian2,4-dithionem (Cava Μ. P., Levinson M. I.: Tetrahedron 40, 5061, 1985; Scheibye S., Pedersen B. S., Lawesson S. O.: Bull. Soc. Chim. Belg. 87, 299, 1978). Thiosalicylamidy či thiosalicylanilidy byly silně znečištěny organickými látkami, jejich výtěžky byly nízké a jejich izolace byla obtížná. Bylo zjištěno, že přítomnost hydroxyskupiny v poloze 2 má v případě thionace Lawessonovým činidlem za následek vznik produktů, které byly identifikovány jako deriváty 2-(4-methoxyfenyl)-l,3,2X⁵-benzoxazafosfinin-2,4(3tf)-dithionu a 2-(4methoxyfenyl)-4-thioxo-l,3,2X⁵-benzoxazafosfmin-2(3//)-onu (Scheibye S., Pedersen B. S., Lawesson S. O.: Bull. Soc. Chim. Belg. 87,299,1978).

Bylo sice dosaženo omezení cyklizačních reakcí použitím hexamethyltriamidu fosforylu jako reakčního prostředí (Cava Μ. P., Levinson M. I.: Tetrahedron 40, 5061, 1985), tato sloučenina je však toxická a karcinogenní (Sofuni T. et al.·. Mutagenesis 11, 349, 1996; http://www.state.nj.us/health/eoh/rtkweb/0973.pdf; http://hazmap.nlm.nih.gov). Proto je lépe se jejímu použití vyhnout, a to jak z hlediska zdravotního, tak i z hlediska ekologického, zejména pokud by se jednalo o výrobu většího množství thiosalicylanilidů, kdy by únik hexamethyltriamidu fosforylu při havárii provozu mohl vést k obecnému ohrožení nebo ekologické katastrofě různého rozsahu.

Analogický průběh a výsledek (vznik cyklizačních produktů obsahujících v molekule fosfor a síru) má i použití jiných thionačních činidel (Meisel M., Donath C.: Phosphorus Sulfur Relat. Elem. 18, 159, 1983; Qijie Ch., LongguanX.: Kexue Tongbao 81,1184, 1986).

Lze tedy shrnout, že dosavadní pokusy o přímou thionaci salicylamidů či salicylanilidů za použití běžných thionačních činidel jako je např. sulfid fosforečný nebo Lawessonovo činidlo nevedly k uspokojivým výsledkům. Bylo zjištěno, že v důsledku přítomnosti hydroxyskupiny v poloze 2 vede thionace salicylamidů nebo salicylanilidů k nízkým výtěžkům thiosalicylamidů, resp. thiosalicylanilidů silně znečištěných organickými látkami, které byly v některých případech identifikovány jako deriváty l,3,2X^s-benzoxazafosfinin2,4(377)-dithionu a 4-thioxo-l,3,2X⁵-benzoxazafosfinin-2(37/)-onu. Vznik těchto cyklických produktů lze sice omezit použitím hexamethyltriamidu fosforylu jako reakčního prostředí, tato látka je však toxická a karcinogenní, a proto je její použití nebezpečné.

Doposud nebyl zaznamenán pokus podrobit reakční směs během thionace a/nebo po thionaci takovým reakčním podmínkám, které by vedly k přeměně některých z produktů reakce salicylamidů či salicylanilidů s thionačním činidlem na thiosalicylamidy či thiosalicylanilidy, a tím i ke zvýšení jejich výtěžku.

Ve snaze o řešení problémů se syntézou thiosalicylanilidů byly vyvíjeny metody spočívající v zabránění vzniku nežádoucích produktů thionace chráněním hydroxyskupiny nebo přeměnou amidové skupiny salicylanilidů nebo úpravou výchozí salicylové kyseliny. Chránění fenolické hydroxyskupiny v poloze 2 lze provést například cyklizací (Wagner G., Singer G.: Z. Chem. 4, 148, 1963; Wagner G., Singer D., Weuffen W.: Pharmazie 21, 161, 1966; Kurz J., Kólling H., Federmann M.: Brit. 1 164 016 (1967); Kurz J„ Kólling H., Federmann M.: Ger. 1 793 578 (1974)) nebo acetylací (Jančevska M., Prisaganec B., Lazarevič M.: Godisen Zbomik Prir. Mat. Fak. Univ. Skopje, sekce A: Mat. Fyz. Chem. 24, 65, 1974). Thionaci meziproduktů schráněnou hydroxyskupinou za použití sulfidu fosforečného a následným odchráněním hydroxyskupiny alkalickou hydrolýzou se získají thiosalicylanilidy. Další možnou úpravu výchozí kyseliny představuje sulfinylbis-(2,4dihydroxythiobenzoyl), který reakcí s aniliny poskytuje 4-hydroxythiosalicylanilidy (Niewiadomy A., Matysiak J., Macik-Niewiadomy G.: Pat. PL 330 263 (2000); Legocki I, Matysiak J., Niewiadomy A., Kostečka M.: J. Agric. Food Chem. 51, 362,2003).

Chránění fenolické hydroxyskupiny cyklizací se provádí reakcí salicylanilidů s estery kyseliny chlormraveněí v prostředí pyridinu, kdy vzniká derivát 3-fenyl-2//-l,3-benzoxazin2,4(37/)-dionu, který tavením se sulfidem fosforečným při teplotě okolo 200°C poskytne směs derivátů 3-fenyl-4-thioxo-2//-l,3-benzoxazin-2(3//)-onu a 3-fenyl-27/-l,3-benzoxazin2,4(3H)-dithionu. Jejich alkalickou hydrolýzou vzniká thiosalicylanilid (Wagner G., Singer D.: Z. Chem. 4, 148, 1963; Wagner G., Singer D., Weuffen W.: Pharmazie 21, 161, 1966; Kurz J., Kólling H., Federmann M.: Brit. 1 164 016 (1967); Kurz J., Kólling H., Federmann M.: Ger. 1 793 578 (1974)). Jiní autoři (Jančevska M., Prisaganec B., Lazarevič M.: Godisen Zbomik Prir. Mat. Fak. Univ. Skopje, sekce A: Mat. Fyz. Chem. 24, 65, 1974) využili k chránění hydroxyskupiny acetylací výchozí substituované salicylové kyseliny. 2-Acetyl-5bromsalicylovou kyselinu nejprve převedli reakcí s dichloridem thionylu na 2-acetoxy-56 brombenzoylchlorid, jehož reakcí s anilinem získali 2-acetoxy-5-brombenzanilid. Ten podrobili thionaci sulfidem fosforečným v pyridinu. Odchránění hydroxyskupiny provedli alkalickou hydrolýzou.

Jiný přístup spočívá v přeměně amidové skupiny salicylanilidů reakcí s chloridem thionylu. Vznikají V-(a-chlor-2-hydroxybenzyliden)aniliny, které se thionují např. sulfanem, hydrogensulfidem nebo organickými sloučeninami se snadno hydrolyzovatelnou vazbou HSΚ. Ze vzniklého meziproduktu se thiosalicylanilidy uvolni hydrolýzou (Kurz J., Kólling H., Federmann M.: Brit. 1 164 016 (1967); Kurz J., Kólling H., Federmann M.: Ger. 1 793 578 (1974)) Při použití thiokyseliny jako thionačního činidla dojde nejprve k reakci thiokyseliny s V-(a-chlor-2-hydroxybenzyliden)anilinem. Následuje intramolekulámí přesmyk acylu thiokyseliny na fenolickou hydroxyskupinu za vzniku 2-acyloxythiobenzanilidu (Kólling H., Kurz J.: Auslegeschrift 1 805 156 (1976)).

Společnou nevýhodou skupiny metod přípravy thiosalicylanilidů založených na zabránění vzniku vedlejších produktů chráněním hydroxyskupiny nebo přeměnou amidové skupiny salicylanilidů nebo úpravou výchozí salicylové kyseliny je, že zvyšují počet reakčních kroků, a tím obecně snižují výtěžek thiosalicylanilidů a zvyšují ekonomickou náročnost přípravy thiosalicylanilidů. Postup využívající chránění fenolické hydroxyskupiny cyklizací za vzniku derivátů 3-fenyl-2/Z-l,3-benzoxazin-2,4(3//)-dionu, které se podrobují tavení se sulfidem fosforečným, mimoto ještě omezuje možnosti substituce. Nelze ho např. použít pro přípravu nitroderivátů (nitrolátky nelze zahřívat na 200 °C) a 4'-methoxyderivátů (nepatrné výtěžky složitých směsí). Postupy spojené s úpravou výchozí kyseliny chráněním hydroxyskupiny nebo thionaci vyžadují, aby tento krok byl proveden pro každou použitou kyselinu, což je obzvlášť nevýhodné, jsou-li připravovány thioamidy odvozené od většího počtu různě substituovaných salicylových kyselin.

Thiosalicylanilidy lze připravit i postupy založenými na principu Friedelovy-Crafisovy reakce vhodně substituovaných fenolů s fenylisothiokyanáty za přítomnosti katalyzátorů, jako je např. chlorid hlinitý. Omezení použitelnosti tohoto způsobu přípravy thiosalicylanilidů je dáno obecně známými orientujícími vlivy skupin při elektrofilní substituci. Reakce probíhá přednostně do polohy para vůči fenolické hydroxyskupině (Desai R. D.: J. Indián Chem. Soc. 3, 193, 1968). Thiosalicylanilidy vznikají z fenolů teprve tehdy, je-li poloha para vůči fenolické hydroxyskupině obsazena např. alkylem, alkoxyskupinou nebo halogenem (Ginwala

K. K., Trivedi J. P.: J Indián Chem. Soc. 40, 897, 1963; Jagodzinski T.: Synthesis 9, 717, 1988). Uvícesytných fenolů probíhá reakce přednostně do polohy para vůči jedné z fenolických hydroxyskupin, je-li taková poloha volná (Gattermann L.: J. Prakt. Chem. 59, 572, 1899; Yoneyama K.: Agric. Biol. Chem 53, 2281, 1989). Skupina metod založených na Friedelově-Craftsově reakci fenolů s fenylisothiokyanáty umožňuje připravit pouze thiosalicylanilidy s určitými kombinacemi substituentů vthioacylové části molekuly. Neumožňuje připravit thiosalicylanilidy nesubstituované vthioacylové části molekuly ani thiosalicylanilidy s volnou polohou 5, s výjimkou 4-hydroxythiosalicylanilidů připravovaných z resorcinolu, kdy elektrofilní substitucí do polohy para vůči kterékoliv z obou fenolických hydroxyskupin vzniká tentýž produkt. Jako nej výhodnější katalyzátor se jevil chlorid hlinitý ve dvacetinásobném nadbytku oproti použitému fenylisothiokyanátu a jako nejvhodnější rozpouštědlo sirouhlík (Ginwala K. K., Trivedi J. P.: J. Indián Chem. Soc. 40, 897, 1963) nebo nitromethan (Jagodzinski T.: Synthesis 9, 717, 1988). Sirouhlík je vysoce toxický, silně hořlavý a jeho páry se vzduchem vytvářejí výbušnou směs ((Marhold J.: Přehled průmyslové toxikologie. Anorganické látky. 2. vyd. Avicenum, Praha 1980, s. 165.; Casarett and Doulls Toxicology: The Basic Science of Poisons. Eds.: Seils A., Noujaim S. R., Sheinis L. A.

6. vyd. McGraw-Hill, 2001, s. 903-905; http://www.emergency.cz/cz/05-05.asp). Také nitromethan je toxický a karcinogenní (Dreisbach R.H.: Handbook of Poisoning. 12. vyd. Norwalk, Appleton and Lange 1987, s. 144; Pattýs Industrial Hygiene and Toxicology: Volume 2A, 2B, 2C: Toxicology. Eds.: Clayton G. D., Clayton F. E. 3. vyd. New York, John Wiley Sons, 1981-1982; NCI/NTP Carcinogenesis Technical Report Series; National Cancer Institute/National Toxicology Program; U.S. Department of Health and Human Services, TR461,1997; http://toxnet.nlm.nih.gov).

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu jsou antimykotika na bázi thiosalicylanilidů obecného vzorce I,

kde R¹ znamená atom vodíku, atom halogenu, alkyl Cl až C15, cykloalkyl C3 až C8, alkoxyskupinu Cl až C15, trifluormethyl, nitroskupinu, hydroxyskupinu nebo jejich kombinaci v polohách 3,4,5 nebo 6, a R² znamená atom vodíku, atom halogenu, alkyl Cl až

05, cykloalkyl C3 až C8, alkoxyskupinu Cl až 05, aryloxyskupinu, trifluormethyl nitroskupinu, hydroxyskupinu nebo jejich kombinaci v polohách 2,3,4,5 nebo 6, účinná in vitro proti houbám z řádu Mucorales, zejména houbě Absidia corymbifera.

Dále předmětem vynálezu jsou antimykobakteriální thiosalicylanilidy účinné in vitro proti Mycobacterium tuberculosis, obecného vzorce I,

u nichž jsou R¹ a R² v kombinacích uvedených v následující tabulce 1:

Tab. 1

Látka	R1	R2	Látka	R1	R2
1	H	4-F	2	H	4-isoC3H7
3	3-CH3	H	4	3-CH3	4-C1
5	3-CH3	3-Br	6	3-CH3	4-Br
7	3-CH3	3-F	8	3-CH3	4-F
9	3-CH3	3-CH3	10	3-CH3	4-CH3
11	3-CH3	4-C2H5	12	3-CH3	4-ÍS0C3H7
13	3-CH3	4-C4H9	14	3-CH3	3-Cl,4-F
15	4-CHj	H	16	4-CH3	4-C1
17	4-CH3	3,4-Ch	18	4-CH3	3-Br
20	4-CH3	3-F	21	4-CH3	4-F
22	4-CH3	3-CH3	23	4-CH3	4-C2H5
25	4-CH3	4-C4H9	26	4-CH3	4-56/^4¾

27	5-CH3	4-C1	28	5-CH3	3,4-Cl2
29	5-CH3	3-Br	30	5-CH3	4-Br
31	5-CH3	3-F	32	5-CH3	4-F
33	5-CH3	4-CH3	34	5-CH3	4-C2H5
35	5-CH3	4-ÍS0C3H7	36	5-CH3	4-C4H9
37	5-CH3	í-sek-C^Rc)	38	5-CH3	4-OCH3
39	5-C1	3,4-Cb	40	5-C1	3-Br
41	5-C1	4-Br	42	5-C1	3-F
44	5-C1	4-C2H5	45	5-C1	4-ÍS0C3H7
46	5-C1	4-C4H9	47	5-C1	4-5^-04¾
48	3,5-012	3-Br	49	3,5-Cl2	3-F
50	3,5-Cl2	4-F	51	3,5-Cl2	4-CH3
52	3,5-Cl2	4-C2H5	53	3,5-Cl2	4-1S0C3H7
56	5-Br	3-Br	57	5-Br	3-F
58	5-Br	4-F	59	5-Br	3-CH3
60	5-Br	4-C2H5	61	5-Br	4-ÍS0C3H7
62	5-Br	4-C4H9	63	5-Br
64	5-Br	4-OCH3	65	5-Br	3-NO2
69	H	4-Br	72	5-C1	H
73	5-C1	4-C1	74	5-C1	4-CH3
75	5-C1	4-OCH3	76	3,5-Cl2	H
80	3,5-Clz	4-OCH3	84	5-Br	4-Br

Dále předmětem vynálezu jsou nové dosud nepopsané thiosalicylanilidy obecného vzorce I,

u nichž jsou R¹ a R² v kombinacích uvedených v následující tabulce 2:

Tab.2

Látka	Rl	R2	Látka	R1	Rž
1	H	4-F	2	H	4-1S0C3H7
3	3-CH3	H	4	3-CH3	4-C1
5	3-CH3	3-Br	6	3-CH3	4-Br
7	3-CH3	3-F	8	3-CHa	4-F
9	3-CH3	3-CH3	10	3-CH3	4-CH3
11	3-CH3	4-C2H5	12	3-CH3	4-1S0C3H7
13	3-CH3	4-C4H9	14	3-CH3	3-Cl,4-F
15	4-CH3	H	16	4-CH3	4-C1
17	4-CH3	3,4-Cl2	18	4-CH3	3-Br
19	4-CH3	4-Br	20	4-CH3	3-F
21	4-CH3	4-F	22	4-CH3	3-CH3
23	4-CH3	4-C2H5	24	4-CH3	4-1S0C3H7
25	4-CH3	4-C4H9	26	4-CH3	4-5e/r-C4H9
27	5-CH3	4-C1	28	5-CH3	3,4-Cl2
29	5-CH3	3-Br	30	5-CH3	4-Br
31	5-CH3	3-F	32	5-CH3	4-F
33	5-CH3	4-CH3	34	5-CH3	4-C2H5
35	5-CH3	4-ÍS0C3H7	36	5-CH3	4-C4H9
37	5-CH3	4-5eA-C4ÍÍ9	38	5-CH3	4-OCH3
39	5-C1	3,4-Cl2	40	5-C1	3-Br
41	5-C1	4-Br	42	5-C1	3-F
43	5-C1	4-F	44	5-C1	4-C2H5
45	5-C1	4-1S0C3H7	46	5-C1	4-C4H9
47	5-C1	4-jeA-C4ÍÍ9	48	3,5-Cl2	3-Br
49	3,5-Cl2	3-F	50	3,5-Cl2	4-F
51	3,5-Cl2	4-CH3	52	3,5-Cl2	4-C2H5
53	3,5-Cl2	4-ÍS0C3H7	54	3,5-Cl2	4-C4H9
55	3,5-Cl2	4-.se/c-C4H9	56	5-Br	3-Br
57	5-Br	3-F	58	5-Br	4-F
59	5-Br	3-CH3	60	5-Br	4-C2H5

61	5-Br	4-ÍS0C3H7	62	5-Br	4-C4H9
63	5-Br	4-sek-CAic)	64	5-Br	4-OCH3
65	5-Br	3-NO2	86	4-OCH3	4-OCH3
87	4-C1	4-C1	88	5-OH	4-0
89	6-OH	4-C1	90	3,5-Cl2	3-NO2
91	H	4-cykloC6Hn

Dále je předmětem vynálezu způsob přípravy thiosalicylanilidů obecného vzorce I,

kde R¹ znamená atom vodíků, atom halogenu, alkyl Cl až Cl5, cykloalkyl C3 až C8, alkoxyskupinu Cl až Cl5, trifluormethyl, nitroskupinu, hydroxyskupinu nebo jejich kombinaci v polohách 3,4,5 nebo 6, a R² znamená atom vodíku, atom halogenu, alkyl Cl až 05, cykloalkyl C3 až C8, alkoxyskupinu Cl až 05, aryloxyskupinu, trifluormethyl nitroskupinu, hydroxyskupinu nebo jejich kombinaci v polohách 2,3,4,5 nebo 6.

Připravují se thionací salicylanilidů obecného vzorce V

kde R¹ a R² mají vpředu uvedený význam, na který se působí thionačním činidlem vybraným ze skupiny tvořené sulfidem fosforečným (P4S10), Lawessonovým činidlem, pyridinium-1ylfosfonochloridodithioátem nebo dichloridem A^V-dimethylfosforamidothioové kyseliny v molárním poměru salicylanilidů a thionačního činidla 1 : 0.5 až 10, na získanou reakční směs se působí hydrolyzačním činidlem, kterým je kyselina vybraná ze skupiny tvořené kyselinou chlorovodíkovou, sírovou, fosforečnou, mravenčí, octovou, šťavelovou, citrónovou, trifluoroctovou, chloroctovou a sulfonovými kyselinami.

Reakce salicylanilidu s thionačním činidlem se s výhodou provádí přímým tavením reakčních komponent nebo v roztoku pyridinu nebo chlorbenzenu nebo v chlorbenzenu s přídavkem pyridinu nebo triethylaminu nebo diethylaminu nebo triethanolaminu při teplotě varu reakční směsi až do 250 °C při přímém tavení reakčních komponent bez rozpouštědla do zreagování veškerého salicylanilidu.

Reakce salicylanilidu s thionačním činidlem se s výhodou provádí v mikrovlnném reaktoru při výkonu 300 až 1000 W po dobu od 5 minut do 80 minut.

Ze získané reakční směsi po thionaci se může isolovat směs meziproduktů ochlazením, převrstvením vodou nebo ledem nebo vodou s ledem a následnou filtrací nebo dekantací před jejich hydrolýzou, ale nemusí.

Hydrolýza se s výhodou provádí ve vodném prostředí nebo ve směsi organické rozpouštědlo-voda, kde organickým rozpouštědlem se rozumí například cyklohexan, benzen, chlorbenzen, nitrobenzen, ethylbenzen, isopropylbenzen 1,2-dichlorbenzen, chloroform, dichlormethan, toluen nebo xyleny, a to v závislosti na lipofilitě vznikajícího thiosalicylanilidu.

Výchozí salicylanilid se připraví reakcí příslušně substituované salicylové kyseliny s příslušně substituovaným anilinem s výhodou v mikrovlnném reaktoru při výkonu 300 až 1000 W po dobu od 5 minut do 20 minut.

Podle tohoto vynálezu se povedlo odstranit nedostatky výše uvedených dosavadních postupů (Spilker A.: Ber. Deut. Chem. Ges. 22, 2767, 1889; Dubský J. V., Polster M.: Chem. Listy 40, 209, 1946; Hara Y., Saika M., Hamamura H.: Japan Kokai Tokkyo Koho JP 2003^48876, 2003) vyznačujících se daleko nižším obsahem sulfidu fosforečného v reakční směsi a izolací thiosalicylanilidů přímo z reakční směsi po thionaci. Podle tohoto vynálezu se naopak zvyšuje podíl thionačního činidla v reakční směsi, což má za následek vymizení výchozího salicylanilidu z reakční směsi a ze vzniklých meziproduktů se jejich kyselou hydrolýzou uvolní další thiosalicylanilid.

Jedná se o dvoustupňovou syntézu, avšak bez nutnosti izolace meziproduktu, jehož složení je závislé na použitém thionačním činidle a reakčním prostředí. Jestliže je například thionačním činidlem sulfid fosforečný v prostředí pyridinu, je hlavním meziproduktem substituovaný pyridinium-3-fenyl-2,4-dithioxo-3,4-dihydro-1,3,2X⁵-benzoxazafosfinin-213 thiolát, který lze izolovat z reakční směsi ve výtěžku okolo 90 až 95 %, viz příklad číslo 8. Jeho izolace se provádí například nalitím reakční směsi na led a dekantací nebo odfiltrováním vyloučených krystalů za sníženého tlaku. Čištění se provede např. krystalizací z ethanolu. Bylo ověřeno, že kthionaci lze místo sulfidu fosforečného použít jiná thionační činidla obsahující v molekule thiofosforyl, např. Lawessonovo činidlo vzorce III; nevýhodou však je větší znečištění takto získaných thiosalicylanilidů balastními látkami oproti syntéze používající sulfid fosforečný, která poskytovala nejvyšší výtěžky a zároveň umožňovala nejsnazší izolaci výsledných thiosalicylanilidů.

Reakční schéma prvního kroku při použití sulfidu fosforečného jako thionačního činidla v prostředí pyridinu:

V prvním reakčním stupni se zahřívá směs salicylanilidu a thionačního činidla, např. sulfidu fosforečného P4S10 v molárním poměru 1 : 0.5 až 1 : 10 v rozpouštědle, například pyridinu, pod zpětným chladičem, minimálně do vymizení výchozího salicylanilidu, obvykle však po dobu 9 až 13 hod. Reakce se ukončí přerušením zahřívání. Reakční směs se použije bez dalšího zpracování do druhého kroku syntézy nebo se zpracuje, například nalitím na drcený led s vodou a oddělením surového meziproduktu filtrací za sníženého tlaku nebo dekantací. Bylo ověřeno, že kromě pyridinu, který představuje optimální reakční prostředí, lze použít i jiná rozpouštědla, například chlorbenzen, nebo směsi rozpouštědel, například směs aprotického a bazického rozpouštědla (např. chlorbenzen-pyridin, chlorbenzen-triethylamin aj.). Dále bylo ověřeno, že thionaci salicylanilidů lze provádět i bez rozpouštědla přímým tavením výchozího salicylanilidu a thionačního činidla, např. sulfidu fosforečného, avšak při dodržení molámího poměru salicylanilidu a thionačního činidla 1 : 0.5 až 1 : 10.

Reakční čas prvního kroku syntézy lze podstatně snížit v mikrovlnném reaktoru, například na 15 až 80 minut za použití rozpouštědla, např. pyridinu, jako reakčního prostředí, nebo na 5 až 30 minut při přímém tavení reakční ch komponent bez rozpouštědla, při výkonu od 300 W do 1000 W, nejčastěji 600 W.

Reakční schéma druhého kroku - hydrolýzy meziproduktu vzniklého thionací substituovaného salicylanilidu sulfidem fosforečným v pyridinu:

^SÁ>

HÚHaO

Druhým reakčním krokem je kyselá hydrolýza meziproduktu za vzniku thiosalicylanilidu, kdy se ve vodné vrstvě udržuje pH nižší než 3 přidáním kyseliny, například 35%{níj kyseliny chlorovodíkové. Množství přidané kyseliny závisí na použité kyselině a na složení a způsobu zpracování reakční směsi v prvním stupni syntézy. Podmínkou zdárného průběhu druhého stupně syntézy je kyselé prostředí, tzn. pH nižší než 7, avšak bylo ověřeno, zeje vhodné volit pro hydrolýzu pH nižší než 3, optimálně v rozmezí pH 1 až 2.

Bylo ověřeno, že hydrolýzu meziproduktu lze provádět ve vodném nebo heterogenním prostředí nebo v prostředí tvořeném směsí organické rozpouštědlo-voda. Optimální provedení hydrolýzy se volí podle lipofility připravovaného produktu, tj. v závislosti na substituentech v obou částech molekuly. Šetrné k produktu je provést hydrolýzu například ve směsi organické rozpouštědlo-voda, např. toluen-voda 1:1, chlorbenzen-voda nebo chloroform-voda 1:1, kdy se lipofilnější produkt, tj. thiosalicylanilid hromadí v organické vrstvě a lze ho z ní snadno izolovat, zatímco ve vodné vrstvě zůstávají balastní látky. Hydrolýza ve dvoufázovém systému chloroform-voda probíhá velmi efektivně tak, že při zahřívání spodní chloroformová vrstva vře, čímž dochází k intenzivnímu promíchání celé reakční směsi. Je-li vznikající thiosalicylanilid málo lipofilní, volí se pro hydrolýzu obvykle vodné prostředí.

Velmi významnou výhodou námi navržené metody je, že do druhého kroku syntézy (hydrolýza) lze pokračovat bez izolace meziproduktu, tj. se surovým meziproduktem nebo i s celou reakční směsí po prvním kroku (thionaci), aniž by se to negativně projevilo na výtěžku nebo čistotě připraveného thiosalicylanilidu. Druhý reakční krok je ukončen, když z reakční směsi vymizí meziprodukt nebo jsou detegovatelné pouze jeho stopy, obvykle po 20 až 24 hodinách. Reakční směs se zpracuje způsobem, který odpovídá použitému homogennímu nebo heterogennímu prostředí a rozdělení vzniklého thiosalicylanilidu v reakční směsi. Jestliže se thiosalicylanilid vyskytuje převážně v organické vrstvě, oddělí se organická vrstva od vodné a organické rozpouštědlo se oddestiluje, nejlépe za sníženého tlaku, buď do sucha, nebo ke krystalizací. Není-li většina produktu přítomna v organické vrstvě nebo byla-li hydrolýza provedena v homogenním prostředí, odpaří se celá reakční směs nebo popřípadě zvlášť vodná a organická vrstva ke krystalizací nebo do sucha, nejlépe za sníženého tlaku. Surový produkt se čistí například sloupcovou chromatografii na silikagelu, nebo krystalizací např. z ethanolu nebo ze směsi ethanol-voda nebo z vody podle lipofility thiosalicylanilidu.

Bylo ověřeno, že také druhý krok syntézy lze provádět v mikrovlnném reaktoru, což vede ke zkrácení reakčního času na 0,5 až 2 hodiny.

Způsobem přípravy podle vynálezu byly připraveno více než 100 thiosalicylanilidů obecného vzorce I obsahujících substituenty s různými vlastnostmi (donory elektronů, akceptory elektronů, hydrofobní a hydrofilní substituenty). Většinou se jedná o nové, dosud nepopsané sloučeniny. Při substituci byly použity různé kombinace substituentů v thioacylové (R¹) a anilidové (R²) části molekuly. Výtěžky se pohybovaly v rozmezí 25 až 75 % teoretického výtěžku, vztaženo na výchozí substituovaný salicylanilid, tj. po dvou reakčních krocích. Výsledné thiosalicylanilidy bylo v některých případech možné izolovat krystalizací, většinou ale byla vhodnější chromatografie na sloupci silikagelu. Všechny připravené thiosalicylanilidy a všechny nové salicylanilidy byly identifikovány pomocí NMR a byla unich změřena IČ a UV spektra a provedena elementární analýza, která se shodovala s vypočtenými hodnotami s rozdílem do 0,3 %. *H NMR spektra byla změřena při frekvenci 300 MHz a ¹³C NMR spektra při 75MHz na přístroji VARIAN MERCURY Vx BB 300. Pro měření byly použity roztoky látek v deuteriochloroformu CDCI3, hexadeuteriodimethylsulfoxidu DMSO-í/6 nebo hexadeuterioacetonu (CD3)2CO-</6. Chemické posuny δ (ppm) jsou nepřímo vztaženy k tetramethylsilanu (TMS) jako standardu pomocí zbytkového rozpouštědla (DMSO-rfo 2,49 (’H), 39,7 (¹³C); CDC13: 7,26 ('H), 77,0 (¹³C); (CD₃)₂CO-ď₆: 2,04 (^lH), 29,8 (¹³C)). NMR spektroskopická data odpovídala ve všech případech navržené struktuře a v příkladech jsou uvedena v pořadí: chemický posun J; integrovaná intenzita (v protonových spektrech); multiplicita: s (singlet), d (dublet), dd (dublet dubletu), ddd (dublet dubletu dubletů), t (triplet), td (triplet dubletu), q (kvartet), m (multiplet), dm (dublet multipletu), bs (broad singlet), bd (broad dublet), bt (broad triplet); interakční konstanty J v Hz. U thiosalicylanilidů a výchozích salicylanilidů popsaných v odborné literatuře byla nalezena shoda teploty tání s údaji z literatury.

Způsob přípravy thiosalicylanilidů podle vynálezu má oproti dosavadním postupům řadu předností: zejména podstatně rozšiřuje dosavadní syntetické možnosti přípravy thiosalicylanilidů, není náročný finančně ani experimentálně a vede k dobrým výtěžkům čistých produktů. Je vhodný i pro syntézu thiosalicylanilidů, ke kterým lze dospět při použití dosud známých metod jen s obtížemi nebo vůbec ne (např. nitro- a methoxyderiváty).

Analogicky byly navrženým postupem připraveny thiosalicylamidy obecného vzorce II, kde R¹ má stejný význam jako u thiosalicylanilidů obecného vzorce I a R³ znamená atom vodíku, alkyl Cl až Cl5, cykloalkyl C3 až C8, aryl, substituovaný aryl nebo arylalifatický substituent, viz příklady číslo 14 až 17.

Ze stereoelektronických důvodů lze předpokládat, že tímto způsobem budou reagovat i analogické amidy odvozené od alifatických, aromatických, arylalifatických, cyklických nebo heterocyklických kyselin substituovaných hydroxyskupinou v poloze 2.

Látky ze skupiny thiosalicylanilidů, které byly tímto způsobem připraveny, mají in vitro antimykotické účinky proti vysoce nebezpečným houbám z řádu Mucorales, jak bylo zjištěno testováním in vitro s výsledkem uvedeným v příkladech číslo 20 a 21. Jmenované houby způsobují u imunoalterováných pacientů těžké systémové mykózy s krajně nepříznivou prognózou a jsou rezistentní na většinu současných systémových antimykotik kromě vysokých dávek nefrotoxického polyenového antimykotika amfotericinu B, který se používá v kombinaci s razantními chirurgickými zásahy zahrnujícími odstranění postižených tkání. Navzdory intenzívní léčbě se u těchto mykóz udává smrtelný průběh až ve 100 % případů, v závislosti na pacientově základní chorobě a formě mukormykózy (Prabhu R. M., Patel R.: Clin. Microbiol. Infect. Dis. 10 Suppl. 1,31, 2004; Kerr O. A., Bong C., Wallis C., Tidman M. J.: Brit. J. Dermatol. 150, 1212, 2004). Thiosalicylanilidy připravené pomocí postupů viz příklady číslo 1 až 7 a číslo 9 až 13 překonávají in vitro v účinnosti proti testovaným kmenům hub z řádu Mucorales v praxi používaná polyenová antimykotika amfotericin B nebo nystatin, jak vyplývá z příkladů číslo 20 a 21. Výchozí salicylanilidy, které lze jednoduše a s vysokými výtěžky připravit postupem podle příkladů číslo 18 a 19, jsou proti uvedeným kmenům hub podstatně méně účinné než nově připravené thiosalicylanilidy.

Mezi připravenými thiosalicylanilidy byly nalezeny sloučeniny in vitro vysoce účinné proti Mycobacterium tuberculosis, původci tuberkulózy, viz příklad číslo 22. Tuberkulóza je v současné době jedním z globálních zdravotních problémů lidstva a dosud nebyla eradikována ani v jediné zemi. Podle Světové zdravotnické organizace (WHO) onemocní tuberkulózou až 8 milionů lidí ročně a 3 miliony ročně zemřou. U HIV pozitivních osob a nemocných s AEDS je tuberkulóza jednou z nejčastějších závažných komplikací zdravotního stavu a příčin smrti. Hrozbou se stává multirezistentní tuberkulóza, která vzdoruje jakékoliv léčbě a vyznačuje se rychlou progresí k smrti (Tripathi R. P., Tewari N., Dwivedi N., Tivari

V. K.: Med. Res. Rev. 25, 93, 2005).

Následující příklady ilustrují tento vynález takovým způsobem, jakým ho lze prakticky provádět. Rozsah tohoto vynálezu však není omezen pouze na uvedené příklady.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava 3',4'-dichlorthiosalicylanilidu (68)

Směs 8,00 g (0,0284 mol) 3',4'-dichlorsalicylanilidu, 6,30 g (0,0142 mol) sulfidu fosforečného a 50 ml pyridinu byla zahřívána pod zpětným chladičem 9 hodin. Poté byla reakční směs převrstvena ledovou drtí (200 g) a destilovanou vodou (100 ml). Vzniklá medovitá hmota byla dekantována a převedena do baňky opatřené magnetickým míchadlem se 150 ml vody a 150 ml toluenu. Přídavkem 3 ml koncentrované (35%) kyseliny chlorovodíkové byla okyselena vodná vrstva na hodnotu pH< 3 a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem za intenzivního míchání 20 hod. Surový produkt byl získán oddělením organické vrstvy, vysušením a oddestilováním toluenu za sníženého tlaku. Závěrečné čištění produktu bylo provedeno sloupcovou chromatografií. Jako mobilní fáze byla použita směs petrolether-aceton 15:1. Stacionární fází byl Silica gel 60 (Fluka) v množství 30 g silikagelu na lg surového produktu. Výtěžek činil 5,5 g (64 % teorie) 3',4'-dichlorthiosalicylanilídu o teplotě tání 157 až 158 °C, literatura uvádí 154 až 157 °C (Wagner G., Singer D., Weuffen

W. :Pharmazie 21, 161,1966).

Příklad 2

Příprava 4,4'-dichlorthiosalicylanilidu (87)

Směs 0,80 g (0,0028 mol) 4,4'-dichlorsalicylanilidu, 1,24 g (0,0028 mol) sulfidu fosforečného a 12 ml pyridinu byla zahřívána pod zpětným chladičem v mikrovlnném reaktoru po dobu 1 hodiny pří výkonu 600 W. Poté byla směs převedena do baňky opatřené magnetickým míchadlem a ke směsi bylo přidáno 80 ml vody a 80 ml toluenu. Přídavkem 12 ml koncentrované (35%) kyseliny chlorovodíkové byla okyselena vodná vrstva na hodnotu pH< 3. Následně byla směs umístěna do mikrovlnného reaktoru, kde byla za intenzivního míchání zahřívána pod zpětným chladičem po dobu 1,5 hodiny při výkonu 500 W. Surový produkt byi získán oddělením organické vrstvy, vysušením a oddestilováním toluenu za sníženého tlaku. Závěrečné čištění produktu bylo provedeno sloupcovou chromatografií. Jako mobilní fáze byla použita směs hexan-ethyl-acetát 16:1. Stacionární fází byl Silica gel 60 (Fluka) v množství 30 g silikagelu na lg surového produktu. Výtěžek činil 0,55 g (66 % teorie) 4,4'-dichlorthiosalicylanilidu o teplotě tání 146 až 148 °C. ^!H NMR (300 MHz), δ (ppm), J (Hz): (DMSO) δ 6,92 (1H, dd, 7=8,2 Hz, 7=1,9 Hz, H5); 7,03-7,06 (1H, m, H3); 7,56 (1H, d, 7=8,2 Hz, H6); 7,45-7,52 (2H, m, AA', BB', H3', H5'); 7,94-8,01 (2H, m, AA', BB', H2', H6'); 10,43 (1H, bs, OH); 11,82 (1H, bs, NH). ¹³C NMR (75 MHz), δ (ppm): (DMSO) δ 116,0; 119,0; 124,9; 128,7; 129,8; 129,9; 132,1; 134,9; 138,8; 153,9; 194,2.

Příklad 3

Příprava 3,5-dichlor-4'-methoxythiosalicylanilidu (80)

Směs 1,00 g (0,0032 mol) 3,5-dichlor-4'-methoxysalicylanilidu, 0,71g (0,0016 mol) sulfidu fosforečného a 10 ml pyridinu byla zahřívána pod zpětným chladičem 10 hodin. Poté byla reakční směs převrstvena ledovou drtí (100 g) a po 1 hodině stání za pokojové teploty byla kvantitativně převedena do baňky se 100 ml toluenu, opatřené magnetickým míchadlem. Přídavkem 30 ml 20% kyseliny sírové byla okyselena vodná vrstva na hodnotu pH< 3 a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem za intenzivního míchání 24 hod. Surový produkt byl získán oddělením organické vrstvy, vysušením a oddestilováním toluenu za sníženého tlaku. Závěrečné čištění produktu bylo provedeno sloupcovou chromatografií. Jako mobilní fáze byla použita směs petrolether-ethyl-acetát 16:1. Stacionární fází byl Silica gel 60 (Fluka) v množství 100 g silikagelu na lg surového produktu. Výtěžek činil 0,57 g (54 % teorie) 3,5~ dichlor-4'-methoxythiosalicylanilidu o teplotě tání 149 až 150 °C, literatura uvádí 140 °C (Bayer A.-G.: Fr. 1522005 (1968)).

Příklad 4

Příprava 4'-5eA:-butyl-4-methythiosalicylanilidu (26)

Směs 2,00 g (0,007 mol) 4'-5e/c-butyl-4-methylsalicylanilidu, 1,56 g (0,0035 mol) sulfidu fosforečného a 15 ml pyridinu byla zahřívána pod zpětným chladičem 9 hodin. Poté byla reakční směs převrstvena ledovou drtí (100 g) a destilovanou vodou (50 ml) a po dekantaci byla vzniklá medovitá hmota převedena do baňky opatřené magnetickým míchadlem se 150 ml vody a 150 ml chloroformu. Přídavkem 3 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové (35%) byla okyselena vodná vrstva na hodnotu pH< 3 a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem za intenzivního míchání 24 hod. Surový produkt byl získán oddělením organické vrstvy, vysušením a oddestilováním toluenu za sníženého tlaku. Závěrečné čištění produktu bylo provedeno sloupcovou chromatografií. Jako mobilní fáze byl použit cyklohexan. Stacionární fází byl Silica gel 60 (Fluka) v množství 100 g silikagelu na lg surového produktu.Výtěžek činil 1,33 g (63% teorie) 4'-se^-butyl-4-methythiosalicylanilidu o teplotě tání 119 až 121 °C. *H NMR (300 MHz), δ (ppm), J (Hz): (CDC1₃) δ 0,84 (t, 3H,

J=7,15 Hz, CH₃); 1,26 (d, 3H, J=7,15 Hz, CH₃); 1,53-1,70 (m, 2H, CH₂); 2,34 (s, 3H, CH₃); 2,54-2,76 (m, 1H, CH); 6,69-6,76 (m, 1H, H5); 6,86-6,90 (m, 1H, H3); 7,23-7,29 (m AA', BB', 2H, H3', H5'); 7,34 (d, 1H J=7,97 Hz, H6); 7,43-7,52 (m AA', BB', 2H, H2', H6'); 8,97 (bs, 1H, OH); 11,34 (bs, 1H, NH). ¹³C NMR (75 MHz), δ (ppm): (CDClj) δ 12,2; 21,5; 21,6; 31,1; 41,3; 119,9; 120,5; 120,9; 123,8; 124,8; 127,7; 135,3; 144,8; 147,3; 159,2; 194,9.

Příklad 5

Příprava 3'-fluor-3-methylthiosalicylanilidu (7)

Směs 1,50 g (0,006 mol) 3'-fluor-3-methylsalicylanilidu, 2,66 g (0,006 mol) sulfidu fosforečného a 12 ml pyridinu byla zahřívána pod zpětným chladičem 11 hodin. Po převrstvení reakční směsi ledovou drtí (75 g) a destilovanou vodou (75 ml) byla vzniklá směs kvantitativně převedena do baňky se 150 ml toluenu opatřené magnetickým míchadlem. Přídavkem 5 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové (35%) byla okyselena vodná vrstva na hodnotu pH< 3 a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem za intenzivního míchání 24 hod. Surový produkt byl získán oddělením organické vrstvy, vysušením a oddestilováním toluenu za sníženého tlaku. Závěrečné čištění produktu bylo provedeno sloupcovou chromatografií. Jako mobilní fáze byla použita směs petrolether-aceton 15:1. Stacionární fází byl Silica gel 60 (Fluka) v množství 70 g silikagelu na lg surového produktu. Výtěžek činil 0,49 g (tj. 31 % teorie) 3'-fluor-3-methylthiosalicylanilidu o teplotě tání 108 až 109 °C. *H NMR (300 MHz), δ (ppm), J (Hz): CDC1₃) δ 2,30 (s, 3H, CH₃); 6,83 (t, 1H, J=7,69 Hz, H5); 7,05 (dt, 1H, J=8,24 Hz, J=2,47 Hz, J=0,82 Hz, H5'); 7,24-7,32 (m, 3H, H2', H4', H6'); 7,367,51 (m, 2H, H4, H6); 9,01 (bs, 1H, OH); 11,18 (bs, 1H, NH). ¹³C NMR (75 MHz), δ (ppm), J (Hz): (CDCI3) δ 16,4; 112,4 (d, J=24,9 Hz); 114,5 (d, J=21,2 Hz); 118,8; 120,4 (d, J=3,2 Hz); 121,5; 123,1; 128,8; 130,4 (d, J=9.1 Hz); 134,8; 139,0 (d, J=10.3 Hz); 157,2; 162,6 (d, J=247,4Hz); 195,8.

Příklad 6

Příprava 4'-brom-5-chlothiosalicylanilidu (41)

Směs 1,00 g (0,003 mol) 4'-brom-5-chlorsalicylanilidu, 2,67 g (0,006 mol) sulfidu fosforečného a 10 ml pyridinu byla zahřívána pod zpětným chladičem 9 hodin. Poté byla reakční směs nalita do 100 ml studené destilované vody a vzniklý krystalický meziprodukt byl po odfiltrování za sníženého tlaku převeden do baňky opatřené magnetickým míchadlem se 100 ml vody a 100 ml toluenu. Přídavkem 3 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové (35%) byla okyselena vodná vrstva na hodnotu pH< 3 a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem za intenzivního míchání 24 hod. Surový produkt byl získán oddělením organické vrstvy, vysušením a oddestilováním toluenu za sníženého tlaku. Závěrečné čištění produktu bylo provedeno sloupcovou chromatografií. Jako mobilní fáze byl použit cyklohexan. Stacionární fází byl Silica gel 60 (Fluka) v množství 50 g silikagelu na lg surového produktu. Výtěžek činil 0,57 g (55 % teorie) 4'-brom-5-chlorthiosalicylanilidu o teplotě tání 174 až 175 °C. *H NMR (300 MHz), δ (ppm), J (Hz): (CDC1₃) δ 7,01 (d, J=8,75 Hz, 1H, H3); 7,35 (dd, J—8,75 Hz, J=2,19 Hz, 1H, H4); 7,40-7,52 (m, 3H, H6, H3', H-5'); 7,55-7,63 (m, 2H, H2', H6'); 8,98 (bs, 1H, NH); 10,91 (s, 1H, OH). ¹³C NMR (75 MHz), δ (ppm): (CDC1₃) δ 121,22; 121,35; 122,73; 123,83; 124,44; 126,59; 132,25; 133,45; 134,76; 157,35; 193,30.

Příklad 7

Příprava 3,5-dichlor-4'-ethylthiosalicylanilidu (52)

Směs 2,00 g (0,0065 mol) 3,5-dichlor-4'-ethylsalicylanilidu, 2,89 g (0,0065 mol) sulfidu fosforečného a 10 ml pyridinu byla zahřívána pod zpětným chladičem 9 hodin. Poté byla reakční směs převrstvena ledovou drtí 100 g a destilovanou vodou (50 ml). Vzniklá medovitá hmota byla dekantována a převedena do baňky opatřené magnetickým míchadlem se 100 ml vody a 100 ml toluenu. Přídavkem koncentrované kyseliny chlorovodíkové (2 ml 35%) byla okyselena vodná vrstva na hodnotu pH< 3 a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem za intenzivního míchání 24 hod. Surový produkt byl získán oddělením organické vrstvy, vysušením a oddestilováním toluenu za sníženého tlaku. Závěrečné čištění produktu bylo provedeno sloupcovou chromatografií. Jako mobilní fáze byla použita směs petroletheraceton 15:1. Stacionární fází byl Silica gel 60 (Fluka) v množství 30 g silikagelu na lg surového produktu. Výtěžek činil 1,40 g (66 % teorie) 3,5-dichlor-4'-ethylthiosalicylanilidu o teplotě tání 147 až 148 °C. *H NMR (300 MHz), δ (ppm), J (Hz): (DMSO) δ 1,18 (t, 3H, J=7,69 Hz, CH₃); 2,61 (q, 2H, J=7,69 Hz, CH₂); 7,23-7,30 (m, AA', BB', 2H, H3', H5'); 7,44 (d, 1H, J=2,75 Hz, H4); 7,60 (d, 1H, J=2,75 Hz, H6); 7,76-7,83 (m, AA', BB', 2H, H2', H6'); 11,99 (bs, 1H, NH). ¹³C NMR (75 MHz), δ (ppm): (DMSO) δ 15,8; 28,1; 122,8; 123,0; 123,5; 127,2; 128,0; 129,8; 133,7; 137,2; 142,4; 148,3; 191,6.

Příklad 8

Příprava pyridinium-3-(4-chlorfenyl)-2,4-dithioxo-3,4-dihydro-l,3,2X⁵-benzoxazafosfinin-2- thiolátu

4,95 g (0,02 mol) 4’-chlorsalicylanilidu bylo rozpuštěno ve 40,0 ml pyridinu a za studená bylo přidáno 8,89 g (0,02 mol) sulfidu fosforečného. Reakční směs byla zahřívána pod zpětným chladičem. Průběh reakce byl sledován pomocí TLC v mobilní fázi aceton- petrolether 1:4, toluen-ethyl-acetát 9:1 a ethyl-acetát. Výchozí 4'-chlorsalicylanilid zcela vymizel po 2,5 hodinách. Po dalších 6 hodinách byla reakční směs ochlazena na pokojovou teplotu a nalita na směs 200 g ledové drti a 200 ml destilované vody. Po 48 hodin stání za pokojové teploty byly vyloučené krystaly odfiltrovány za sníženého tlaku a podrobeny krystalizací z ethanolu. Výtěžek byl 7,84 g (90 % teorie) pyrídinium-3-(4-chlorfenyl)-2,4—dithioxo-3,4-dihydro-l,3,2L⁵-benzoxazafosfinin-2-thiolátu o teplotě tání 165 až 167 °C. ^lH

NMR (300 MHz), δ (ppm), J (Hz): (DMSO) δ 7,07-7,13 (m, 1H, H8); 7,14-7,22 (m, 1H, H6); 7,26-7,32 (m, 2H, H3', H5'); 7,42-7,47 (m, 2H, H2', H6'); 7,52-7,61 (m, 1H, H7); 8,02-8,08 (m, 2H, H3, H5); 8,35 (dd, 1H, J=8,24 Hz, J=1,65 Hz, H5); 8,58 (tt, 1H, >7,96 Hz, >1,64 Hz, H4); 8,88-8,94 (m, 2H, H2, H6). ¹³C NMR (75 MHz), δ (ppm): (DMSO) δ 119,9; 123,2; 125,5; 127,3; 128,5; 131,3; 131,8; 133,8; 134,4; 142,2; 142,7; 146,2; 149,8; 193,4.

Příklad 9

Příprava 4’-chlorthiosalicylanilidu (67)

4,36 g (0,01 mol) pyridinium-3-(4-chlorfenyl)-2,4-dithioxo-3,4-dihydro-l,3,2?Á - benzoxazafosfinin-2-thiolátu bylo suspendováno ve směsi 200 ml toluenu a 200 ml destilované vody. Reakční směs byla okyselena přídavkem 2 ml 35% kyseliny chlorovodíkové a zahřívána za teploty varu pod zpětným chladičem do vymizení pyridinium-3-(4-chlorfenyl)—2,4-dithioxo-3,4-dihydro-l,3,2X⁵-benzoxazafosfinin-2-thiolátu (25 hod). Po celou dobu reakce bylo pH vodné vrstvy udržováno na hodnotě 1-3. Průběh reakce byl sledován pomocí TLC v mobilních fázích hexan-aceton 4:1, toluen-ethyl-acetát 9:1 a ethyl-acetát. Surový produkt byl získán oddělením organické vrstvy, vysušením a oddestilováním toluenu za sníženého tlaku. Závěrečné čištění produktu bylo provedeno sloupcovou chromatografií. Jako mobilní fáze byla použita směs petrolether-aceton 15:1. Stacionární fází byl Silica gel 60 (Fluka) v množství 40 g silikagelu na lg surového produktu. Výtěžek činil 2,16 g (82 % teorie) 4'chlorthiosalicylanilidu o teplotě tání 113 až 114 °C, literatura uvádí 113 až 115 °C (Wagner

G., Singer D., Weuffen W.: Pharmazie 21,161,1966).

Příklad 10

Příprava 4'-chlorthiosalicyIanilidu (67)

Směs 2,47 g (0,01 mol) 4'-chlorsalicylanilidu, 4,45 g (0,01 mol) sulfidu fosforečného a 50 ml chlorbenzenu byla zahřívána pod zpětným chladičem. Průběh reakce byl sledován pomocí TLC. Výchozí 4'-chlorsalicylanilid zcela vymizel po 90 minutách. Po 3 hodinách byla reakční směs nalita na směs 100 g ledové drtí a 100 g destilované vody. Po 48 hodinách bylo přidáno 200 ml chlorbenzenu. Přídavkem koncentrované kyseliny chlorovodíkové (1 ml 35%) byla okyselena vodná vrstva na hodnotu pH< 3 a směs byla zahřívána pod zpětným chladičem za intenzivního míchání 23 hod. Průběh reakce byl sledován pomocí TLC. Surový produkt byl získán oddělením organické vrstvy, vysušením a oddestilovámm chlorbenzenu za sníženého tlaku. Závěrečné čištění produktu bylo provedeno sloupcovou chromatografií. Jako mobilní fáze bylo použito směsi petrolether-aceton 15:1. Stacionární fází byl Silica gel 60 (Fluka) v množství 50 g silikagelu na lg surového produktu. Výtěžek činil 1,60 g (61 % teorie) 4'chlorthiosalicylanilidu o teplotě tání 113 až 115 °C, literatura uvádí 113 až 115 °C (Wagner G., Singer D., Weuffen W.: Pharmazie 21, 161, 1966).

Příklad 11

Příprava 4'-chlor-2,6-dihydroxythiobenzanilidu (89)

Směs 1,0 g (0,0038 mol) 4'-chlor-2,6-dihydroxybenzanilidu, 1,53 g (0,0038 mol) Lawessonova činidla a 15 ml pyridinu byla zahřívána pod zpětným chladičem v mikrovlnném reaktoru po dobu 80 minut při výkonu 600 W. Poté byla směs převedena do baňky opatřené magnetickým míchadlem ke směsi 100 ml vody a 100 ml toluenu. Přídavkem 15 ml koncentrované (35%) kyseliny chlorovodíkové byla vodná vrstva okyselena na hodnotu pH<

3. Následně byla směs zahřívána pod zpětným chladičem po dobu 15 hodin. Surový produkt byl získán oddělením organické vrstvy, vysušením a oddestilováním toluenu za sníženého tlaku. Závěrečné čištění produktu bylo provedeno sloupcovou chromatografií. Jako mobilní fáze byla použita směs chloroform-ethanol, gradientová eluce z 1:0 na 3:7. Stacionární fází byl Silica gel 60 (Fluka) v množství lOOg na lg surového produktu. Výtěžek činil 0,4 g (38 % teorie) 4'-chlor-2,6-dihydroxythiobenzanilidu o teplotě tání 188 až 190 °C. ^!H NMR (300 MHz), δ (ppm), J (Hz): (CD₃COCD₃) δ 6,50 (d, 2H, J=8,2 Hz, H3, H5); 7,15 (t, 1H, J=8,2 Hz,

H4); 7,44-7,55 (m, AA', BB', 2H, H3', H5'); 7,75-7,86 (m, AA', BB', 2H, H2', H6'); 10,47 (bs, 2H, OH); 11,50 (bs, 1H, NH). ¹³C NMR (75 MHz), δ (ppm): (CD₃COCD₃) δ 109,2;

114,6; 127,4; 128,6; 132,4; 133,2; 138,5; 157,5; 193,4.

Příklad 12

Příprava 4'-chlor-2,4-dihydroxythiobenzanilidu

Směs 1,0 g (0,0038 mol) 4'-chlor-2,4-dihydroxýbenzanilidu, 1,68 g (0,0038 mol) sulfidu fosforečného a 15 ml pyridinu byla zahřívána pod zpětným chladičem v mikrovlnném reaktoru po dobu 70 minut při výkonu 600 W. Poté byla směs převedena do baňky opatřené magnetickým míchadlem ke směsi 150 ml vody a 150 ml chloroformu. Přídavkem 15 ml koncentrované (35%) kyseliny chlorovodíkové byla vodná vrstva okyselena na hodnotu pH<

3. Následně byla směs zahřívána pod zpětným chladičem po dobu 11 hodin. Surový produkt byl získán oddělením organické vrstvy, vysušením a oddestilováním chloroformu. Závěrečné čištění produktu bylo provedeno sloupcovou chromatografií. Jako mobilní fáze byla použita směs chloroform-ethanol, gradientová eluce od 1:0 do 3:7. Stacionární fází byl Silica gel 60 (Fluka) v množství 120g na lg surového produktu. Výtěžek činil 0,6 g (57 % teorie) 4'-chlor2,4-dihydroxythiobenzanilidu o teplotě tání 175 až 177 °C, literatura uvádí. 177 až 178 °C (Matysiak J., Niewiadomy A., Macik-Niewiadomy G.: Eur. J. Pharm. Sci. 35, 393,2000). Příklad 13

Příprava 4'-chlor-2,5-dihydroxythiobenzanilidu (88)

Směs 1,0 g (0,0038 mol) 4'-chlor-2,5-dihydroxybenzanilidu, 1,68 g (0,0038 mol) sulfidu fosforečného a 15 ml pyridinu byla zahřívána pod zpětným chladičem v mikrovlnném reaktoru po dobu 80 minut při výkonu 600 W. Poté byla reakční směs převrstvena ledovou drtí (100 g) a po dekantací byla vzniklá hmota převedena do baňky opatřené magnetickým míchadlem se 150 ml vody a 150 ml chloroformu. Přídavkem 3 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové (35%) byla okyselena vodná vrstva na hodnotu pH< 3. Následně byla směs umístěna do mikrovlnného reaktoru, kde byla za intenzivního míchání zahřívána pod zpětným chladičem po dobu 1,5 hodiny při výkonu 600 W. Surový produkt byl získán oddělením organické vrstvy, vysušením a oddestilováním chloroformu. Závěrečné čištění produktu bylo provedeno sloupcovou chromatografií. Jako mobilní fáze byla použita směs chloroformethanol, gradientová eluce z 1:0 na 3:7. Stacionární fází byl Silica gel 60 (Fluka) v množství 70g na lg surového produktu. Výtěžek činil 0,62 g (59 % teorie) 4'-chlor-2,5dihydroxythiobenzanilidu o teplotě tání 172 až 174 °C. 'H NMR (300 MHz), δ (ppm), J (Hz): (CD₃COCD₃) δ 6,84 (d, 1H, J=8,8 Hz, H3); 6.92 (dd, 1H, J=8,8 Hz, H4); 7,36 (d, 1H, J=2,9

Hz, H6), 7,44-7,51 (m, AA', BB', 2H, H3', H5'); 7,77-7,89 (m, AA', BB', 2H, H2', H6');

11,80 (bs, IH, NH). ¹³C NMR (75 MHz), δ (ppm): (CD₃COCD₃) δ 115,3; 119,4; 121,3;

126,2; 127,2; 129,5; 132,1; 139,0; 150,4; 150,7; 195,9.

Příklad 14

Příprava 4’-chlor-5-methylsalicylanilidu

K směsi 5 g (0,033 mol) kyseliny 5-methylsalicylové a 4,2 g (0,033 mol) 4- chloranilinu v 50 ml chlorbenzenu bylo přikapáno 1,5 ml (2,3 g; 0,017 mol) chloridu fosforitého. Reakční směs byla umístěna do mikrovlnného reaktoru a zahřívána pod zpětným chladičem 15 min při výkonu 600 W. Produkt byl po oddestilování chlorbenzenu rekrystalizován ze směsi ethanol-voda. Výtěžek činil 8,0 g (93 % teorie) 4’-chlor-5- methylsalicylanilidu o teplotě tání 197 až 198 °C, literatura uvádí 197 až 198 °C (Waisser K. etal.: Arch. Pharm. Pharm. Med. Chem. 336, 53, 2003).

Příklad 15

Příprava 4,4'-dichlorsalicylanilidu g (0,0058 mol) kyseliny 4-chlorsalicylové a 0,74 g (0,0058 mol) 4-chloranilinu bylo rozpuštěna v25ml acetonu ve 100 ml baňce s kulatým dnem. K roztoku byly přidány 2 g Fluka Silica gelu 60 a směs byla odpařena na vakuové odparce. Směs byla podrobena reakci v mikrovlnném reaktoru po dobu 10 min při výkonu 300 W. Poté byla směs suspendována v 30 ml acetonu a přefiltrována za sníženého tlaku. Surový produkt byl získán odpařením filtrátu do sucha a podroben krystalizací ze směsi ethanol-voda. Výtěžek činil 1,47 g (90 % teorie) 4,4'-dichlorsalicylanilidu o teplotě tání 221 až 223 °C, literatura uvádí 222 až 223 °C (Waisser K. et al.: Arch. Pharm. Pharm. Med. Chem. 336, 53,2003).

Příklad 16

Antimykotická aktivita in vitro proti Absidia corymbifera z řádu Mucorales

Hodnocení antimykotické aktivity připravených látek proti kmenu Absidia corymbifera

272 bylo provedeno in vitro mikrodiluční bujónovou metodou (Klimešová V. et al.: Arch. Pharm. Pharm. Med. Chem. 329, 438, 1996) za použití živného média RPMI 1640 (SEVAPHARMA) při pH 7. Jako standardy byla použita polyenová antimykotika amfotericin B a nystatin. Sloučeniny byly rozpuštěny v dimethylsulfoxidu. Minimální inhibiční koncentrace (MIC; pmol dm') byly stanoveny po 24 a 48 hodinách statické inkubace při 35°C a jsou uvedeny v tabulce 3.

Tab. 3

Minimální inhibiční koncentrace MIC [μηιοί dm'3]
Látka	R1	R2	MIC 24h/48h	Látka	R1	R2	MIC 24h/48h
1	H	4-F	0,49/0,98	2	H	4-ÍS0C3H7	0,98/0,98
3	3-CH3	H	0,98/0,98	4	3-CH3	4-C1	0,49/0,98
5	3-CH3	3-Br	0,49/0,49	6	3-CH3	4-Br	0,24/0,48
7	3-CH3	3-F	0,98/1,95	8	3-CH3	4-F	0,98/0,98
9	3-CH3	3-CH3	0,49/0,98	10	3-CH3	4-CH3	0,24/0,24
11	3-CH3	4-C2H5	0,12/0,24	12	3-CH3	4-ÍS0C3H7	0,12/0,24
13	3-CH3	4-C4H9	0,49/0,98	14	3-CH3	3-Cl,4-F	- /3,91
15	4-CHj	H	0,49/0,98	16	4-CH3	4-C1	0,24/0,24
17	4-CH3	3,4-Cl2	0,24/0,49	18	4-CH3	3-Br	0,24/0,49
19	4-CH3	4-Br	1,95/1,95	20	4-CH3	3-F	0,24/0,49
21	4-CH3	4-F	0,49/0,49	22	4-CH3	3-CH3	0,49/0,98
23	4-CH3	4-C2H5	0,98/0,98	24	4-CH3	4-ÍS0C3H7	1,95/1,95
25	4-CH3	4-C4H9	3,91/3,91	26	4-CH3	4-S-C4H9	1,95/3,91
27	5-CH3	4-C1	0,98/1,95	28	5-CH3	3,4-Ch	0,98/3,91
29	5-CH3	3-Br	0,49/1,95	30	5-CH3	4-Br	3,91/3,91
31	5-CH3	3-F	0,98/1,95	32	5-CH3	4-F	1,95/1,95
33	5-CH3	4-CH3	0,98/1,95	34	5-CH3	4-C2H5	1,95/3,91
35	5-CH3	4-1S0C3H7	3,91/3,91	36	5-CH3	4-C4H9	1,95/3,91
37	5-CH3	4-5-C4H9	1,95/3,91	38	5-CH3	4-OCH3	0,98/1,95
39	5-C1	3,4-Cl2	0,98/0,98	40	5-C1	3-Br	1,95/1,95
41	5-0	4-Br	0,03/0,03	42	5-C1	3-F	0,49/0,98
43	5-C1	4-F	0,98/1,95	44	5-C1	4-C2H5	0,98/0,98
45	5-C1	4-ÍS0C3H7	1,95/1,95	46	5-C1	4-C4H9	1,95/1,95
47	5-C1	4-5-C4H9	1,95/3,91	48	3,5-Cl2	3-Br	0,12/0,12
49	3,5-Cl2	3-F	0,48/0,48	50	3,5-Cl2	4-F	0,06/0,12
51	3,5-Cla	4-CH3	0,06/0,12	52	3,5-Cl2	4-C2H5	0,03/0,03
53	3,5-Cl2	4-1S0C3H7	0,06/0,12	54	3,5-Cl2	4-C4H9	0,12/0,12

55	3,5-Cl2	4-5-C4H9	0,12/0,12	56	5-Br	3-Br	0,49/0,49
57	5-Br	3-F	0,49/0,49	58	5-Br	4-F	0,49/0,49
59	5-Br	3-CHs	0,24/0,24	60	5-Br	4-C2H5	0,49/0,49
61	5-Br	4-ÍS0C3H7	0,49/0,98	62	5-Br	4-C4H9	1,95/3,91
63	5-Br	4-5-C4H9	3,91/3,91	64	5-Br	4-OCH3	0,49/0,98
65	5-Br	3-NO2	0,49/0,98	66	H	H	0,98/0,98
67	H	4-C1	0,49/0,49	68	H	3,4-Cl2	0,49/0,49
69	H	4-Br	0,49/0,49	70	H	4-CH3	0,49/0,49
71	5-CH3	H	0,98/0,98	72	5-C1	H	0,49/0,49
73	5-C1	4-C1	0,98/0,98	74	5-C1	4-CH3	0,98/0,98
75	5-C1	4-OCH3	0,98/0,98	76	3,5-Cl2	H	0,24/0,24
77	3,5-Clz	4-C1	0,24/0,24	78	3,5-Cl2	3,4-Cl2	0,49/0,98
79	3,5-Cl2	4-Br	0,12/0,12	80	3,5-Cl2	4-OCH3	0,24/0,24
81	5-Br	H	1,95/1,95	82	5-Br	4-C1	0,98/0,98
83	5-Br	3,4-Clz	0,49/0,49	84	5-Br	4-Br	0,49/0,49
85	5-Br	4-CH3	1,95/1,95	Amfotericin B	2,16/4,32
	Nystatin	34,56/34,56

Příklad 17

Antimykotická aktivita proti proti houbám z řádu Mucorales

Hodnocení antimykotické aktivity připravených látek proti sbírkovým kmenům

Absidia corymbifera 1144, Mucor mucedo 809, Rhizopus oryzae 853 a klinickým izolátům Rhizopus 7580/02 a Mucor 9255/03 bylo provedeno in vitro postupem podle příkladu 20. Jako standardy byla použita polyenová antimykotika amfotericin B a nystatin. Minimální inhibiční koncentrace (MIC; pmol dm') jsou uvedeny v tabulce 4.

Tab.4

Minimální inhibiční koncentrace MIC [pmol dm'³]

L.	R1	R2	AC2 24h/48h	MM 24h/48h	RO 24h/48h	Mucl 24h/48h	Muc2 24h/48h
4	3-CH3	4-C1	0,98/0,98	0,98/0,98	<0,06/0,24	0,98/1,95	<0,06/0,06
5	3-CH3	3-Br	0,49/0,49	0,49/0,49	<0,06/0,24	0,49/1,95	<0,06/0,24
6	3-CH3	4-Br	0,49/0,49	0,49/0,49	0,12/0,24	0,24/1,95	<0,06/0,49

7	3-CHj	3-F	1,95/1,95	1,95/1,95	0,12/0,49	0,49/3,91	<0,06/0,12
8	3-CH3	4-F	1,95/1,95	1,95/1,95	0,06/0,12	0,49/1,95	0,24/0,49
32	5-CH3	4-F	7,81/7,81	15,63/15,63	0,98/7,81	3,91/3,91	0,24/3,91
39	5-C1	3,4-Cl2	0,98/0,98	1,95/1,95	0,24/0,49	0,98/0,98	0,24/0,98
42	5-C1	3-F	1,95/3,91	3,91/3,91	0,24/0,98	0,24/0,98	0,24/0,24
45	5-C1	4-ÍS0C3H7	0,98/0,98	1,95/1,95	0,98/3,91	3,91/3,91	0,24/0,49
46	5-C1	4-C4H9	0,49/0,98	0,98/1,95	15,63/31,25	15,63/31,25	0,49/0,98
47	5-C1	4-J-C4H9	0,98/0,98	0,98/1,95	3,91/3,91	3,91/3,91	0,49/0,49
49	3,5-Cl2	3-F	1,95/1,95	1,95/3,91	0,06/0,12	0,24/0,24	0,12/0,98
51	3,5-Cl2	4-CH3	0,98/0,98	0,98/0,98	0,24/1,95	3,91/7,81	<0,06/0,12
53	3,5-Cl2	4-ÍS0C3H7	0,24/0,49	0,49/0,49	1,95/3,91	3,91/7,81	0,06/0,12
54	3,5-Cl2	4-C4H9	0,12/0,12	0,24/0,24	1,95/1,95	1,95/3,91	0,12/0,24
55	3,5-Cl2	4-5-C4H9	0,24/0,24	0,24/0,49	1,95/1,95	3,91/3,91	0,12/0,24
73	5-C1	4-C1	0,98/0,98	1,95/1,95	<0,06/0,12	<0,06/0,24	0,12/0,24
74	5-C1	4-CH3	0,98/0,98	0,98/0,98	3,91/7,81	3,91/7,81	0,12/0,12
76	3,5-Cl2	H	3,91/3,91	1,95/3,91	<0,06/0,06	<0,06/0,24	0,12/0,12
77	3,5-Cl2	4-C1	0,98/0,98	0,98/0,98	<0,06/0,06	0,12/0,12	0,12/0,12
80	3,5-Cl2	4-OCH3	1,95/1,95	1,95/1,95	0,12/0,24	3,91/3,91	0,49/0,49
81	5-Br	H	3,91/3,91	3,91/3,91	3,91/7,81	7,81/7,81	0,24/1,95
82	5-Br	4-C1	0,98/1,95	1,95/7,81	0,06/0,49	0,12/1,95	0,24/0,24
85	5-Br	4-CH3	1,95/1,95	1,95/1,95	7,81/7,81	7,81/7,81	0,24/0,24
Amfotericin B	1,08/2,16	2,16/2,16	2,16/2,16	2,16/2,16	0,27/0,54
Nystatin	4,32/8,64	4,32/8,64	4,32/8,64	8,64/17,28	2,16/4,32
testované kmeny: AC2 - Absidia corymbifera 1	44; MM -JI	ducor mucedo 809; RO

Rhizopus oryzae 853; Mucl -Rhizopus 7580/02 (klinický izolát); Muc2 -Mucor 9255/03 (klinický izolát)

Příklad 18

Antimykobakteriální aktivita thiosalicylanilidů proti Mycobacterium tuberculosis

Antimykobakteriální aktivita byla hodnocena standardním postupem Tuberculosis

Antimicrobial Acquisition and Coordinating Facility (httn://www.taacf.org/aboutTAACF.htm; Collins L., Franzblau S. G.: Antimicrob. Agents Ghemother. 41, 1004, 1997). Sloučeniny byly nejprve testovány in vitro na aktivitu proti kmeni M. tuberculosis H37R.V (ATCC 27294) v koncentraci odpovídající 6,25 pg/ml a jejich aktivita byla vyjádřena v procentech. U sloučenin s aktivitou větší než 90 % se stanovuje minimální inhibiční koncentrace (MIC) v pg/ml jako nejnižší koncentrace, která způsobuje 90% pokles aktivity oproti kontrole. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 5.

Tab. 5

Antimykobakteriální aktivita thiosalicylanílidů proti Mycobacterium tuberculosis
L.	R1	R2	% inh.	MIC [pg/ml]	L.	R1	R2	% inh.	MIC [pg/ml]
1	H	4-F	97	-	2	H	4-ÍS0C3H7	99	-
3	3-CH3	H	100	-	4	3-CH3	4-C1	94	0,39
5	3-CHj	3-Br	100	-	6	3-CH3	4-Br	94	1,56
7	3-CH3	3-F	82	-	8	3-CH3	4-F	83	-
9	3-CH3	3-CHj	97	-	10	3-CH3	4-CH3	94	0,39
11	3-CH3	4-C2H5	95	-	12	3-CH3	4-ÍS0C3H7	93	-
13	3-CH3	4-C4H9	97	-	14	3-CH3	3-Cl,4-F	96	-
15	4-CH3	H	95	-	16	4-CH3	4-C1	96	-
17	4-CH3	3,4-Cl2	94	0,2	18	4-CH3	3-Br	95	-
20	4-CH3	3-F	96	-	21	4-CH3	4-F	96	-
22	4-CH3	3-CH3	94	-	23	4-CH3	4-C2H5	97	-
25	4-CH3	4-C4H9	96	-	26	4-CH3	4-sefc-C4H9	97	-
27	5-CH3	4-C1	97	0,39	28	5-CH3	3,4-Cl2	96	0,2
29	5-CH3	3-Br	96	0,2	30	5-CH3	4-Br	95	<0,1
31	5-CH3	3-F	95	0,2	32	5-CH3	4-F	96	0,39
33	5-CH3	4-CH3	96	0,2	34	5-CH3	4-C2H5	97	<0,1
35	5-CH3	4-ÍS0C3H7	99	<0,1	36	5-CH3	4-C4H9	99	0,2
37	5-CH3	4-seŘ-C4H9	100	<0,1	38	5-CH3	4-OCH3	99	0,39
39	5-C1	3,4-Cl2	99	0,2	40	5-C1	3-Br	98	<0,1
41	5-C1	4-Br	96	0,2	42	5-C1	3-F	97	-
44	5-C1	4-C2H5	98	<0,1	45	5-C1	4-1S0C3H7	98	<0,1
46	5-C1	4-C4H9	98	0,2	47	5-C1	A-sek-C/Ag	97	<0,1
48	3,5-Cl2	3-Br	97	3,13	49	3,5-Cl2	3-F	96	3,13
50	3,5-Cl2	4-F	95	3,13	51	3,5-Cl2	4-CH3	88	-

52	3,5-Cl2	4-C2H5	89	-	53	3,5-Cl2	4-ÍS0C3H7	86	-
56	5-Br	3-Br	95	0,2	57	5-Br	3-F	94	0,39
58	5-Br	4-F	93	0,2	59	5-Br	3-CH3	98	<0,1
60	5-Br	4-C2H5	100	-	61	5-Br	4-ÍS0C3H7	93	0,39
62	5-Br	4-C4H9	94	3,13	63	5-Br	4-se£-C4H9	94	0,39
64	5-Br	4-OCH3	93	0,39	65	5-Br	3-NO2	93	6,25
69	H	4-Br	98	<0,1	72	5-C1	H	97	0,39
73	5-C1	4-C1	94	0,2	74	5-C1	4-CH3	96	<0,1
75	5-C1	4-OCH3	98	0,2	76	3,5-Cl2	H	96	6,25
80	3,5-Cl2	4-OCH3	96	3,13	84	5-Br	4-Br	93	0,2
Standard	MIC [pg/ml]	Standard	MIC [pg/ml]
Isoniazid	0.025-0.2	Ethambutol	0.95-7.5
Rifampin	0.06-0.5	Ethionamid	0.3-10
Pyrazinamid	6-60

Průmyslová využitelnost

Thisalicylanilidy připravené uvedeným způsobem lze použít pro přípravu léčiv pro humánní a veterinární medicínu a dále jako fungicidní, herbicidní nebo algicidní prostředky v zemědělství, popřípadě jako meziprodukty pro přípravu například heterocyklických nebo koordinačních sloučenin využitelných výše uvedeným způsobem.

W zyvs- .5>τ

Claims (9)

1. PATENTOVÉ NÁROKY kde R¹ znamená atom vodíku, atom halogenu, alkyl Cl až Cl5, cykloalkyl C3 až C8, alkoxyskupinu Cl až 05, trifluormethyl, nitroskupinu, hydroxyskupinu nebo jejich kombinaci v polohách 3,4,5 nebo 6, a R² znamená atom vodíku, atom halogenu, alkyl Cl až 05, cykloalkyl C3 až C8, alkoxyskupinu Cl až 05, aryloxyskupinu, trifluormethyl nitroskupinu, hydroxyskupinu nebo jejich kombinaci v polohách 2,3,4,5 nebo 6, účinné in vitro proti houbám z řádu Mucorales, zejména houbě Absidia corymbifera.
2. 2.Antimykobakteriální thiosalicylanilidy účinné in vitro proti Mycobacterium tuberculosis obecného vzorce I, u nichž jsou R¹ a R² v kombinacích uvedených v následující tabulce 1: Tab. 1

   Látka R¹ R² Látka R¹ R² 1 H 4-F 2 H 4-ÍS0C3H7 3 3-CH₃ H 4 3-CH3 4-C1 5 3-CH3 3-Br 6 3-CH3 4-Br

   7 3-CH₃ 3-F 8 3-CH3 4-F 9 3-CH₃ 3-CH3 10 3-CH3 4-CH3 11 3-CH3 4-C₂H₅ 12 3-CH3 4-ÍS0C3H7 13 3-CH3 4-C4H9 14 3-CH3 3-Cl,4-F 15 4-CH3 H 16 4-CH₃ 4-C1 17 4-CH3 3,4-Ch 18 4-CH₃ 3-Br 20 4-CH3 3-F 21 4-CH3 4-F 22 4-CH3 3-CH3 23 4-CH3 4-C₂H₅ 25 4-CH3 4-C4H9 26 4-CH3 4-5eA:-C4H9 27 5-CH₃ 4-C1 28 5-CH3 3,4-Ch 29 5-CH3 3-Br 30 5-CH3 4-Br 31 5-CH3 3-F 32 5-CH3 4-F 33 5-CH3 4-CH₃ 34 5-CH3 4-C2H5 35 5-CH3 4-ísoC₃H7 36 5-CH5 4-C4H9 37 5-CH3 4-seÁ:-C4H9 38 5-CH3 4-OCH3 39 5-C1 3,4-Ch 40 5-C1 3-Br 41 5-C1 4-Br 42 5-C1 3-F 44 5-C1 4-C2H5 45 5-C1 4-1S0C3H7 46 5-C1 4-C4H9 47 5-C1 4-5eÁ>C4H9 48 3,5-Cl₂ 3-Br 49 3,5-Cl₂ 3-F 50 3,5-Cl₂ 4-F 51 3,5-Ch 4-CH₃ 52 3,5-Ch 4-C2H5 53 3,5-Ch 4-ÍS0C3H7 56 5-Br 3-Br 57 5-Br 3-F 58 5-Br 4-F 59 5-Br 3-CH3 60 5-Br 4-C2H5 61 5-Br 4-1S0C3H7 62 5-Br 4-C4H9 63 5-Br 4-se&-C4H9 64 5-Br 4-OCH₃ 65 5-Br 3-NO2 69 H 4-Br 72 5-C1 H 73 5-C1 4-C1 74 5-C1 4-CH3 75 5-C1 4-OCH3 76 3,5-Ch H 80 3,5-Ch 4-OCH₃ 84 5-Br 4-Br
3. 3 .Thiosalicylanilidy obecného vzorce I, u nichž jsou R¹ a R² v kombinacích uvedených v následující tabulce 2: Tab.2

   Látka R¹ R² Látka R¹ R² 1 H 4-F 2 H 4-ÍS0C3H7 3 3-CH₃ H 4 3-CH3 4-C1 5 3-CH3 3-Br 6 3-CH3 4-Br 7 3-CH3 3-F 8 3-CHj 4-F 9 3-CH3 3-CH3 10 3-CH3 4-CH3 11 3-CH3 4-C₂H₅ 12 3-CHj 4-1S0C3H7 13 3-CH3 4-C4H9 14 3-CH3 3-Cl,4-F 15 4-CH3 H 16 4-CH₃ 4-C1 17 4-CH3 3,4-Cl₂ 18 4-CH3 3-Br 19 4-CH3 4-Br 20 4-CHj 3-F 21 4-CH3 4-F 22 4-CH3 3-CH3 23 4-CH3 4-C₂H₅ 24 4-CH3 4-1S0C3H7 25 4-CH3 4-C₄H₉ 26 4-CH3 4-se&-C4H9 27 5-(¾ 4-C1 28 5-CH3 3,4-Cl₂ 29 5-CH3 3-Br 30 5-CH3 4-Br 31 5-CH3 3-F 32 5-CH3 4-F 33 5-CH3 4-CH3 34 5-CH3 4-C₂H₅ 35 5-CH3 4-ÍS0C3H7 36 5-CH3 4-C4H9 37 5-CH3 4-se£-C4H9 38 5-CH3 4-OCH3 39 5-C1 3,4-Cl₂ 40 5-C1 3-Br 41 5-C1 4-Br 42 5-C1 3-F

   43 5-0 4-F 44 5-C1 4-C₂H₅ 45 5-C1 4-1S0C3H7 46 5-C1 4-C4H9 47 5-C1 4-5βΑ>ΟΗ9 48 3,5-Cl₂ 3-Br 49 3,5-Clz 3-F 50 3,5-Cl₂ 4-F 51 3,5-Cl₂ 4-CH3 52 3,5-Cl₂ 4-C₂H₅ 53 3,5-Cl₂ 4-ÍS0C3H7 54 3,5-Cl₂ 4-C4H9 55 3,5-Cl₂ 4-5eLC4H9 56 5-Br 3-Br 57 5-Br 3-F 58 5-Br 4-F 59 5-Br 3-CHj 60 5-Br 4-C₂H₅ 61 5-Br 4-ÍS0C3H7 62 5-Br 4-C4H9 63 5-Br 4-jek-C4Hg 64 5-Br 4-OCH3 65 5-Br 3-NO₂ 86 4-OCH3 4-OCH3 87 4-C1 4-C1 88 5-OH 4-C1 89 6-OH 4-0 90 3,5-Cl₂ 3-NO₂ 91 H 4-cykloC6Hn
4. 4. Způsob přípravy thiosalicylanilidů\obecného vzorce I,

   4r²

   R¹

   II

   OH kde R¹ znamená atom vodíku, atom halogenu, alkyl Cl až 05, cykloalkyl C3 až C8, alkoxyskupinu Cl až 05, trifluormethyl, nitroskupinu, hydroxyskupinu nebo jejich kombinaci v polohách 3,4,5 nebo 6 a R² znamená atom vodíku, atom halogenu, alkyl Cl až C15,\ alkoxyskupinu Cl až 05, cykloalkyl C3 až C8, aryloxyskupinu, trifluormethyl, nitroskupinu, hydroxyskupinu nebo jejich kombinaci v polohách 2,3,4,5 nebo 6, thionací salicylanilidů obecného vzorce V kde R¹ a R² mají v tomto nároku uvedený význam, vyznačující se tím, že se na salicylanilid obecného vzorce V, kde R¹ a R² mají v tomto nároku uvedený význam, působí thionačním činidlem vybraným ze skupiny tvořené sulfidem fosforečným (P₄Si₀), Lawessonovým činidlem, pyridinium-l-ylfosfonochloridodithioátem nebo dichloridem NJÍdimethylfosforamidothioové kyseliny v molárním poměru salicylamidu a thionačního činidla 1 : 0.5 až 10, na získanou reakční směs se působí hydrolyzačním činidlem, kterým je kyselina vybraná ze skupiny tvořené kyselinou chlorovodíkovou, sírovou, fosforečnou, mravenčí, octovou, šťavelovou, citrónovou, trifluoroctovou, chloroctovou a sulfonovými kyselinami.
5. 5. Způsob podle nároku 4, vyznačuj ící se tím, že reakce salicylanilidu s thionačním činidlem se provádí přímým tavením reakčních komponent nebo v roztoku pyridinu nebo chlorbenzenu nebo v chlorbenzenu s přídavkem pyridinu nebo triethylaminu nebo diethylaminu nebo triethanolaminu a probíhá při teplotě varu reakční směsi až do 250 °C při přímém tavení reakčních komponent bez rozpouštědla do zreagování veškerého salicylanilidu.
6. 6. Způsob podle nároku 4 až 5, vyznačující se tím, že reakce salicylanilidu s thionačním činidlem se provádí v mikrovlnném reaktoru při výkonu 300 až 1000 W po dobu od 5 minut do 80 minut.
7. 7. Způsob podle nároku 4až 6, vyznačující se tím, že se ze získané reakční směsi po thionaci izoluje směs meziproduktů ochlazením, převrstvením vodou nebo ledem nebo vodou s ledem a následnou filtrací nebo dekantaci před jejich hydrolýzou.
8. 8. Způsob podle nároku 4 až 7, vyznačující se tím, že se hydrolýza provádí ve vodném prostředí nebo ve směsi organické rozpouštědlo-voda, kde organickým rozpouštědlem se rozumí například cyklohexan, benzen, chlorbenzen, nitrobenzen, ethylbenzen, isopropylbenzen 1,2-dichlorbenzen, chloroform, dichlormethan, toluen nebo xyleny, a to v závislosti na lipofilitě vznikajícího thiosalicylanilidu.
9. 9. Způsob podle nároku 8, vyznačující se tím, že se výchozí salicylanilid připraví reakcí příslušně substituované salicylové kyseliny s příslušně substituovaným anilinem, přičemž reakce probíhá v mikrovlnném reaktoru při výkonu 300 až 1000 W po dobu od 5 minut do 20 minut.