CZ2005332A3 - Zpusob partenogenetické aktivace zvírecích oocytudonory oxidu dusnatého - Google Patents
Zpusob partenogenetické aktivace zvírecích oocytudonory oxidu dusnatého Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2005332A3 CZ2005332A3 CZ20050332A CZ2005332A CZ2005332A3 CZ 2005332 A3 CZ2005332 A3 CZ 2005332A3 CZ 20050332 A CZ20050332 A CZ 20050332A CZ 2005332 A CZ2005332 A CZ 2005332A CZ 2005332 A3 CZ2005332 A3 CZ 2005332A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- oocytes
- activation
- nitric oxide
- animal
- donors
- Prior art date
Links
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 39
- 230000004913 activation Effects 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 21
- 230000001776 parthenogenetic effect Effects 0.000 title claims abstract description 11
- AZLYZRGJCVQKKK-UHFFFAOYSA-N dioxohydrazine Chemical compound O=NN=O AZLYZRGJCVQKKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 4
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical class O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000002840 nitric oxide donor Substances 0.000 claims description 19
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 6
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 5
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 4
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 4
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000010924 continuous production Methods 0.000 description 1
- XEYBHCRIKKKOSS-UHFFFAOYSA-N disodium;azanylidyneoxidanium;iron(2+);pentacyanide Chemical compound [Na+].[Na+].[Fe+2].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].[O+]#N XEYBHCRIKKKOSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000008186 parthenogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000000541 pulsatile effect Effects 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229940083618 sodium nitroprusside Drugs 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Resení se týká zpusobu zrychlené partenogenetickéaktivace zvírecích oocytu in vitro donory oxidu dusnatého, kdy se na zvírecí oocyty opakovane strídave krátkodobe pusobí látkami, které obsahují ci neobsahují donory oxidu dusnatého. Tato aktivace mávelké vyuzití pri reprodukcních biotechnologiích hospodárských zvírat i v asistované reprodukci v humánní medicíne.
Description
Způsob partenogenetické aktivace zvířecích oocytů donory oxidu dusnatého
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu partenogenetické aktivace zvířecích oocytů donory oxidu dusnatého. Tato aktivace má velký význam zejména při klonování hospodářských zvířat.
Dosavadní stav techniky
V současné době se aktivace zvířecích oocytů, což jsou samičí pohlavní buňky, provádí mnoha způsoby. Jedním ze způsobů je např. partenogenetické aktivace podle publikace Petr J. a kol. z roku 2005, při které se aktivace oocytů provádí látkami, které uvolňují molekulu oxidu dusnatého (tzv. donory NO). Tento způsob aktivace vyžaduje dlouhodobou kultivaci oocytů s donory NO, přinejmenším 10 hodin, což je dost nevyhovující zejména z provozního hlediska. Takto aktivované oocyty mají dále nízkou kvalitu, především nízkou vývojovou schopnost. Obecně je aktivace oocytů hospodářsky významných druhů savců využívána pro širokou škálu účelů, jako např. pro klonování metodou přenosu jader somatických buněk, tvorbu embryonálních kmenových buněk z partenogenetických embryí nebo pro tvorbu embryí intracytoplasmatickou injekci spermií (ICSI). Je proto žádoucí, aby aktivace oocytů probíhala vždy co nejefektivněji.
5
Podstata vynálezu
Uvedené nedostatky odstraňuje způsob partenogenetické aktivace zvířecích oocytů donory oxidu dusnatého podle vynálezu, jehož podstata spočívá v tom, že na zvířecí oocyty in vitro opakovaně střídavě krátkodobě působí látky obsahující či neobsahující donory oxidu dusnatého.
Způsob podle vynálezu se dále provádí tak, že na zvířecí oocyty in vitro opakovaně střídavě po dobu 5 až 30 minut působí látky obsahující či neobsahující donory oxidu dusnatého.
Způsob podle vynálezu se výhodně provádí tak, že na zvířecí oocyty in vitro 6x až 20x opakovaně střídavě po dobu 5 až 30 minut působí látky obsahující či neobsahující donory oxidu dusnatého.
Způsob partenogenetické aktivace zvířecích oocytů donory oxidu dusnatého podle vynálezu se konkrétně provádí tak, že se dozrálé zvířecí oocyty in vitro nacházející se ve stádiu zrání metafáze II zbaví kumulačních buněk opakovaným pipetováním úzkou skleněnou pipetou, propláchnou se kultivačním médiem (např. médium M199 obohacené o 1^/o bovinního telecího séra) a pak jsou přeneseny do kultivačního média s přídavkem molekul uvolňujících oxid dusnatý (např. nitroprusid sodný nebo (±)-S-nitroso-N-acetylpenicilamin - SNAP) v koncentracích od 0,1 do 3 mM. V tomto médiu se oocyty kultivují po dobu 5 až 30 minut. Následné jsou oocyty opláchnuty v médiu, které neobsahuje látky uvolňující oxid dusnatý a jsou v tomto médiu kultivovány rovněž po dobu 5 až 30 minut. Tento postup se opakuje tak, aby celková doba pobytu oocytů v médiu obsahujícím molekuly uvolňující oxid dusnatý dosáhla 1 až 3 hodin. Pak jsou oocyty kultivovány běžným laboratorním postupem.
Způsobem podle vynálezu jsou oocyty in vitro vystaveny jen po krátkou dobu, výhodně cca 5 až 30 minut a opakovaně asi 6x až 20x, donoru oxidu dusnatého a mezi tím jsou vždy kultivovány látkami bez donoru oxidu dusnatého. Tento donor působí tedy na oocyty opakovaně v poměrně krátkých obdobích, tzv. pulsech, proto původci vynálezu nazývají svůj nový způsob aktivace oocytů jako „pulzační aktivace“. Při způsobu podle vynálezu jsou oocyty vystaveny účinku donoru oxidu dusnatého celkově nejvýše po dobu 3 hodin a proto jsou mnohem méně zatíženy přítomností tohoto donoru. Výsledkem zrychleného šetrného způsobu aktivace podle vynálezu je aktivace vyššího podílu oocytů a partenogenetický vývoj takto aktivovaných oocytů je podstatně vyšší, než při dosud používaných způsobech, což má velký hospodářský význam. Způsob „pulsační“ aktivace oocytů podle vynálezu lze využít zejména při reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat (např. klonování, ICSI) i v asistované reprodukci v humánní medicíně, kdy při současném snižování porodnosti tato metoda zvláště nabývá na významu.
Následující příklady provedení způsob podle vynálezu pouze dokládají, aniž by ho jakkoliv omezovaly.
Příklady provedení wnalazu.
Příklad 1
Při klasickém dvouhodinovém kontinuálním ošetření prasečích
Zi oocytů 2 mM SNAP dochází k partenogenetické aktivaci u 1l^o oocytů.
Podle nového postupu jsou dozrálé prasečí oocyty in vitro ve stádiu ťlST\ ί ) metafáze II kultivovány 6x po 20 minut v médiu obsahujícím 2 mM SNAP a mezitím jsou 6x kultivovány po 20 minut v médiu bez SNAP.
V následujících hodinách je partenogeneticky aktivováno 77j% oocytů. Při klasickém kontinuálním způsobu se partenogenetická embrya nevyvíjejí za stádium 4 buněk. Při pulsačním způsobu aktivace látkami uvolňujícími oxid dusnatý pokračuje vývoj až do stádia blastocysty. Takto získané zvířecí parthenogenetické zárodky ve vývojovém stádiu blastocyty lze využít například pro tvorbu embryonálních kmenových buněk.
Příklad 2
U některých živočišných druhů (např. kůň) provází oplození v podmínkách in vitro problémy s penetrací spermie do vajíčka. Tento problém se obchází tzv. intracytoplasmatickou injekcí spermie, při kterém je spermie vpravena do vajíčka mikroinjekcí. Tento postup nachází uplatnění i v humánní medicíně při léčbě neplodnosti nebo při záchraně druhů savců ohrožených vyhubením. Mikroinjekce spermie ale nemusí navodit podmínky aktivace nezbytné pro zahájení vývoje vzniklého zárodku. Také v tomto případě se může uplatnit „pulsační aktivace“ oocytu látkami uvolňujícími oxid dusnatý. Po mikroinjekcí spermie je vajíčko kultivováno 9x po 20 minut v médiu obsahujícím 2 mM SNAP a mezitím jsou 9x kultivovány po 20 minut v médiu bez SNAP.
V následujících hodinách nastane u značného podílu takto ošetřených vajíček aktivace a zárodek pokračuje ve vývoji až do stádia blastocyty, kdy je schopen přenosu do dělohy náhradní matky.
Při klonování savců dochází ke vnášení jaderné dědičné informace
Příklad 3 somatické buňky do cytoplasmy vajíčka, jež bylo vlastní jaderné dědičné informace zbaveno (bylo enukleováno). Pro následný vývoj embrya klonu je nezbytná aktivace takto vzniklé buňky. Adekvátní aktivační stimul je nezbytný především v případě využití tzv. honolulské techniky, kde je jádro somatické buňky vneseno do cytoplasmy enukleovaného vajíčka míkroinjekcí. Pro aktivaci takto vzniklého zárodku klonu lze využít „pulsační aktivace“ oocytu látkami uvolňujícími oxid dusnatý. Po vnesení jádra somatické buňky míkroinjekcí do enukleovaného oocytu je vzniklý zárodek kultivován 9x po 20 minut v médiu obsahujícím 2 mM SNAP a mezitím je 9x kultivovány po 20 minut v médiu bez SNAP. V následujících hodinách nastane u značného podílu takto ošetřených zárodků aktivace a zárodek pokračuje ve vývoji až do stádia blastocyty, kdy je schopen přenosu do dělohy náhradní matky.
Průmyslová využitelnost
Řešení se týká zrychlené partenogenetické aktivace zvířecích oocytú in vitro donory oxidu dusnatého, což má velký význam při reprodukčních biotechnologiích hospodářských zvířat í v asistované reprodukci v humánní medicíně.
Claims (3)
1. Způsob partenogenetické aktivace zvířecích oocytů donory oxidu dusnatého, vyznačující se tím, že/řía zvířegí oocyty/ín vitro.) opakovaně střídavě krátkodobě působí^ látl$X obsahující^· neobsahující^donory oxidu dusnatého.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, ž^azvířecí oocytyjin gšfero opakovaně střídavě po dobu 5 až 30 minut působíj látk^e^ obsahujíc^ neobsahujíc^donory oxidu dusnatého.
3. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, žepa zvířecí oocyty in vitro? 6x až 20x opakovaně střídavě po dobu 5 až 30 minut působíjlátky obsahující^ neobsahující donory oxidu dusnatého
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20050332A CZ2005332A3 (cs) | 2005-05-26 | 2005-05-26 | Zpusob partenogenetické aktivace zvírecích oocytudonory oxidu dusnatého |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20050332A CZ2005332A3 (cs) | 2005-05-26 | 2005-05-26 | Zpusob partenogenetické aktivace zvírecích oocytudonory oxidu dusnatého |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ296918B6 CZ296918B6 (cs) | 2006-07-12 |
| CZ2005332A3 true CZ2005332A3 (cs) | 2006-07-12 |
Family
ID=36975428
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20050332A CZ2005332A3 (cs) | 2005-05-26 | 2005-05-26 | Zpusob partenogenetické aktivace zvírecích oocytudonory oxidu dusnatého |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CZ (1) | CZ2005332A3 (cs) |
-
2005
- 2005-05-26 CZ CZ20050332A patent/CZ2005332A3/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ296918B6 (cs) | 2006-07-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wells et al. | Adult somatic cell nuclear transfer is used to preserve the last surviving cow of the Enderby Island cattle breed | |
| Li et al. | Glutathione and cysteine enhance porcine preimplantation embryo development in vitro after intracytoplasmic sperm injection | |
| US6211429B1 (en) | Complete oocyte activation using an oocyte-modifying agent and a reducing agent | |
| Bos-Mikich et al. | Parthenogenesis and human assisted reproduction | |
| Kim et al. | Improved preimplantation development of porcine somatic cell nuclear transfer embryos by caffeine treatment | |
| Muenthaisong et al. | Quality analysis of buffalo blastocysts derived from oocytes vitrified before or after enucleation and reconstructed with somatic cell nuclei | |
| JP2008534000A (ja) | 胚及び／又は細胞操作媒体用補助剤 | |
| CZ2005332A3 (cs) | Zpusob partenogenetické aktivace zvírecích oocytudonory oxidu dusnatého | |
| Mrowiec et al. | Technical, biological and molecular aspects of somatic cell nuclear transfer–a review | |
| CN117925511A (zh) | 提高经体细胞复制的卵子的胚胎发育或胚胎形成的效率的方法 | |
| JP4774514B2 (ja) | 超音波による卵子またはクローン胚の活性化方法ならびに該方法により活性化したクローン胚からのクローン動物の作出 | |
| French et al. | Animal Cloning: Scientific Endeavour, Perception and Ethical Debate | |
| Bori | Developmental potency of goat embryos produced by intra cytoplasmic sperm injection and in vitro fertilization. | |
| CZ2006446A3 (cs) | Zpusob partenogenetické aktivace oocytu se stimulací protein kináz C nezávislých na vápníku | |
| CZ2007197A3 (cs) | Použití inhibitoru histon deacetylázy pro prípravu kultivacního média na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro | |
| KR102159054B1 (ko) | Edta를 활용한 개 배아의 atp를 향상시키는 방법 | |
| Kim GhangYong et al. | Improved preimplantation development of porcine somatic cell nuclear transfer embryos by caffeine treatment. | |
| CZ2005369A3 (cs) | Použití inhibitoru MAP kinázy JNK pro přípravu kultivačního média na prodloužení životnosti savčích oocytů in vitro | |
| CZ307949B6 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem C | |
| CZ2010579A3 (cs) | Kultivacní medium na prodloužení životnosti savcích oocytu in vitro a zpusob tohoto prodloužení | |
| KR20120045555A (ko) | 라파마이신을 포함하는 포유동물 수정란의 배지 조성물 및 이를 이용한 포유동물 수정란 배양 방법 | |
| CZ2018320A3 (cs) | Způsob eliminace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných glyfosátem B | |
| CZ2017366A3 (cs) | Způsob elimace defektů zrání savčích oocytů vyvolaných bisfenolem A nebo bisfenolem S | |
| 박민지 | Study on the Efficient Method to Produce Cloned Embryos and Species Conservation of Jeju Black Cattle Using Somatic Cell Nuclear Transfer Techniques | |
| Perry | Mammalian cloning by nuclear microinjection |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20140526 |