CZ20004310A3

CZ20004310A3 - Sloučenina sestávající z proaktivní alkylační části a bioreduktivní části a chinonový derivát

Info

Publication number: CZ20004310A3
Application number: CZ20004310A
Authority: CZ
Inventors: Mitsunori Ono; Keizo Koya; Lijun Sun; Yumiko Wada; Wojciech Wrona; Natalie Dales; Xueliang Tao; Sylvia Holden
Original assignee: Shionogi Biores Corp
Priority date: 1999-05-20
Filing date: 1999-05-20
Publication date: 2001-06-13

Abstract

Sloučenina sestávající z proaktivní alkylační části obsahující elektrony přitahující skupinu, bioreduktivní části obsahující alespoň dvě dvojné vazby a linker spojující proaktivní část a CO bioreduktivní část. Je popsán také chinonový derivát obecného vzorce I, v němž jednotlivé symboly mají specifický význam

Description

Oblast techniky

Předložený vynález se týká sloučeniny sestávající z proaktivní alkylační části obsahující skupinu přitahující elektrony, bioreduktivní části obsahující alespoň dvě dvojné vazby a linker spojující proaktivní alkylační část a bioreduktivní část. Předložený vynález se týká také chinonového derivátu substituovaného v polohách 2,3,5 a 6.

Dosavadní stav techniky

Na základě statistik Americké společnosti pro rakovinu od roku 1990 zemřely na rakovinu přibližně čtyři miliony lidí. Rakovina se po onemocněních srdce stala druhou hlavní příčinou smrti ve Spojených státech. Mezi léčení rakoviny obvykle patří chemoterapie, ozařování, hormony, imunoterapie a chirurgické ošetření. Chemoterapie zůstává výhodným ošetřením, zvláště u těch typů rakovin, které nejsou operovatelné nebo které jsou ve metastatických formách.

V chemoterapii jsou nyní dostupná mnohá cytotoxická činidla, včetně antimetabolitů, antibiotik, alkylačních činidel a mitotických inhibitorů. Tato činidla obvykle destruují jak normální tak rakovinové buňky. Je žádoucí vyvinout takové protirakovinové činidlo, které preferenčně ničí rakovinové buňky před normálními buňkami.

Díky jejich pathologickým stavům se nádorové buňky odlišují od normálních buněk v tom, že jejich okolní krevní krevní cévy jsou špatně organizovány, což vede k neúčinnému dodávání kyslíku do místa nádoru. Jinými slovy, nádorové buňky jsou hypoxické (deficitní na kyslík). Tato jedinečná fysiologie otevírá dveře pro navržení takových cytotoxických činidel, která jsou specifická pro nádorové buňky.

Podstata vynálezu

Aspekt tohoto vynálezu se týká cytotoxické sloučeniny, která sestává ze tri složek: 1) proaktivní alkylační části obsahující skupinu potahující elektrony, 2) bioreduktivní části obsahující alespoň dvě dvojné vazby a 3) linkeru spojujícího spolu proaktivní alkylační část a bioreduktivní část. Proaktivní alkylační část znamená funkční skupinu, která, jakmile je jednou aktivována, nahrazuje aktivní atomy vodíku jiné sloučeniny, jako je DNA, jednou ze svých alkylových skupin kovaletním způsobem. Bioreduktivní část znamená takovou část, která je schopna podléhat in vivo redukci (reakce pňjímací elektrony), tj. bioredukci. Dvojné vazby bioreduktivní části, buď samy o sobě nebo společně s vazbami linkeru, tvoří konjugovaný systém. Konjugovaný systém umožňuje elektronům, aby přecházely y bioreduktivní části na skupinu přitahující elektrony proaktivní akylační skupiny po redukci bioreduktivní části. To vede k rozpadu vazby mezi skupinou přitahující elektrony a linkerem a převedení proaktivní alkylační části do aktivní alkylační sloučeniny.

Příkladem proaktivní alkylační části je aromatická skupina (např. fenylová skupina nebo naftylová skupina) substituovaná skupinou přitahující elektron (např. esterem, urethanem nebo uhličitanem) a di(halogenethyl)aminová skupina (např. di(chlorethyl)aminová skupina nebo dusíkový yperit. Di(halogenethyl)aminová skupina po bioredukci přechází na alkylační skupinu. Jestliže aromatická část znamená fenyl, je výhodné, aby dva substituenty byly navzájem k sobě v polohách meta nebo para. Každá ze zbývajících poloh fenylu je nezávisle popřípadě substituována alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, aminovou skupinou, aminoalkylem, hydroxylem, hydroxyalkylem, alkoxyskupinou, aryloxyskupinou, aralkoxyskupinou, heteroaryloxyskupinou, heteroaralkoxyskupinou, oligoalkylenglykolem, amidovou skupinou, esterem, aralkoxykarbonylaminovou skupinou, ureidoskupinou, thioskupinou, alkylthioskupinou, arylthioskupinou nebo heteroarylthioskupinou. Z nich je výhodný alkyl, alkoxyskupina, oligoalkylenglykol, aryloxyskupina, heteroaryloxyskupina a aminová skupina. Je výhodné, aby každý z těchto substituentů byl v ortho poloze vzhledem k di(halogenethyl)aminové skupině.

• · · · » · · · • · • ·

Bioreduktivní část se bioredukcí převádí do alkylačního činidla. Některé příklady bioreduktivní části jsou 1,4-benzochinon (tj. chinon), nitrobenzen nebo 1,2-dioxocyklohexa-3,4-dien. Jestliže bioreduktivní část znamená chinon, každá z neoxo-poloh chinonového kruhu je nezávisle popřípadě substituovaná alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, aminovou skupinou, aminoalkylem, hydroxylem, hydroxyalkylem, alkoxyskupinou, aryloxyskupinou, aralkoxyskupinou, heteroaryloxyskupinou, heteroaralkoxyskupinou, karboxylátem, acyloxyalkylem, esterem, amidovou skupinou, amidoalkylem, sulfonamidoskupinou, sulfonylaminovou skupinou, thioskupinou, alkylthioskupinou, arylthioskupinou, aralkylthioskupinou, heteroarylthioskupinou nebo heteroaralkylthioskupinou. Výhodnými substituenty jsou alkyl, aminová skupinou, aminoalkyl, alkoxyskupina, hydroxyalkyl a acyloxyalkyl. Jestliže jsou na chinonu substituovány obě polohy 2-C a 3-C nebo obě polohy 5-C a 6-C, tyto dva substituenty popřípadě spolu tvoří kruh. Dva napojené kruhy mohou být tvořeny chinonovým kruhem, jestliže všechny neoxo-polohy chinonu jsou substituovány a každý pár substituentů společně tvoří kondenzovaný kruh. Kondenzovaný kruh může být bud alifatický nebo aromatický. Je také popřípadě substituován alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, aminovou skupinou, aminoalkylem, hydroxylem, hydroxyalkylem, alkoxyskupinou, aryloxyskupinou, aralkoxyskupinou, heteroaryloxyskupinou, heteroaralkoxyskupinou, karboxylátem, acyloxyalkylem, esterem, amidovou skupinou, amidoalkylem, sulfonamidoskupinou, sulfonylaminovou skupinou, thioskupinou, alkylthioskupinou, arylthioskupinou, aralkylthioskupinou, heteroarylthioskupinou nebo heteroaralkylthioskupinou. Kondenzovaný kruh popřípadě obsahuje 1 až 3 heteroatomy, jako je atom dusíku, kyslíku nebo síry.

Linker, který spojuje proaktivní alkylační část a bioreduktivní část dohromady, může znamenat jednu z následujících skupin: methylenovou skupinu, uhlovodíkový řetězec se 3 atomy uhlíku obsahující dvojnou vazbu nebo uhlovodíkový řetězec s 5 atomy uhlíku obsahující dvě alternativní dvojné vazby. Tento linker je popřípadě substituován alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem nebo oligoalkylenglykolem. Jestliže linker obsahuje více než dva substituenty, mohou se spolu dva z nich spojit za vzniku 5- až 6-členného kruhu. Tento kruh může být alifatický nebo aromatický a je popřípadě substituován alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem nebo oligoalkylenglykolem. Část tohoto kruhu mohou tvořit jeden až tři heteroatomy, jako je atom dusíku, atom kyslíku nebo atom síry.

Sůl cytotoxické sloučeniny je také v rozsahu tohoto vynálezu. Tato sůl může být například vytvořena mezi aminovým substituentem cytotoxické sloučeniny a negativně nabitým protiiontem. Mezi vhodné protiionty patří, ale bez omezení na ně, chlorid, hydrochlorid, bromid, jodid, síran, dusičnan, fosforečnan nebo octan. Podobně - negativně nabitý substituent, např. karboxylát, sloučeniny podle tohoto vynálezu může také tvořit sůl s kationtem, např. kationtem alkalického kovu, jako je sodný ion nebo draselný ion, kationtem kovu alkalické zeminy, jako je hořečnatý kation nebo vápenatý kation, nebo amoniovým kationtem, který může být substituován jednou nebo více organickými skupinami, jako je tetramethylamoniový ion nebo diisopropylethylamoniový ion.

Pojem alkyl v tomto popisu označuje přímý nebo větvený uhlovodíkový řetězec s 1 až 8 atomy uhlíku nebo cyklický uhlovodíkový řetězec obsahující 3 až 8 atomů uhlíku. Cyklický uhlovodíkový řetězec může obsahovat 1 až 3 heteroatomy, jako je atom dusíku, atom kyslíku nebo atom síry, a může obsahovat také kondenzované kruhy. Kondenzované kruhy znamenají kruhy, které sdílejí obvyklou vazbu atomy uhlíku. Mezi příklady alkylu patří, ale bez omezení na ně, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sek.butyl, terc.butyl, amyl, isopentyl, hexyl, isohexyl, heptyl, oktyl, cyklopropyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl, norbomyl, isobomyl, cyklohexylmethyl, 1- nebo 2-cyklohexylethyl, 1-, 2- nebo 3-cyklohexylpropyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, piperidinyl, morfolinová skupina a pyrrolidinylová skupina.

Pojem alkenyl znamená přímý nebo větvený uhlovodíkový řetězec se 2 až 8 atomy uhlíku nebo cyklický uhlovodíkový řetězec, např. cykloalkenyl, se 3 až 8 atomy uhlíku, který se vyznačuje tím, že má jednu nebo dvě dvojné vazby. Cykloalkenyl může obsahovat 1 až 3 heteroatomy, jako je atom dusíku, atom kyslíku nebo atom síry, tj. heterocykloalkenyl, a může obsahovat také kondenzované kruhy. Mezi typické alkenylové skupiny patří allyl, 2-butenyl, 2-pentenyl, 2-hexenyl, cyklopropenyl, cyklopentenyl, cyklohexenyl, cykloheptenyl, cyklooktenyl a norbomylenyl.

Aryl znamená cyklickou aromatickou skupinu obsahující 3 až 8 atomů uhlíku a může obsahovat také kondenzované kruhy. Kondenzované kruhy znamenají takový aromatický kruh, který sdílí společnou vazbu mezi atomy uhlíku s jinou cyklickou částí. Touto cyklickou částí může být buď aryl, cykloalkyl nebo heterocykloalkyl. Mezi arylové skupiny typicky patří fenyl, 1 naftyl, 2-naftyl, bifenyl, fenanthryl a antracyl. Heteroaryl znamená arylové skupiny, které obsahují 1 až 3 heteroatomy. Mezi typické heterocyklické aromatické kruhy patří kumarinyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrimidyl, furyl, pyrrolyl, thienyl, thiazolyl, oxazolyl, imidazolyl, indolyl, benzofuranyl a benzthiazolyl. Příkladem aralkylové skupiny je 2-fenylethyl.

Pojem oligoalkylenglykol znamená řetězec dvou až pěti alkoxyskupin. Každá z těchto alkoxyskupin může být stejná nebo nemusí být stejná. Příkladem olígoalkylenglykolu je ethoxymethoxyskupina.

Substituenty, jak se zde používají, jako je aminová skupina, amidoskupina, ester, sulfonamidová skupina, sulfonylaminová skupina a ureidoskupina, buď nejsou substituovány nebo jsou substituovány alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem nebo heteroaralkylem. Dále pak dvojvazný substituent, jako je amidová skupina nebo ester, může být napojen na své dvě sousedící části v jakékoliv orientaci. Tyto substituenty cyklické skupiny, např. fenyl, mohou být napojeny v jakékoliv dostupné poloze.

• · · · φ φ φ φ φφ Φ Φ 9 « · Φ ·

Jiný aspekt tohoto vynálezu se týká prostředku, který obsahuje jednu ze shora popsaných cytotoxických sloučenin (nebo její sůl) a farmaceuticky přijatelný nosič. Sloučeniny je takové množství, které je účinné pro léčení nádorů. Ještě jiný aspekt tohoto vynálezu se týká způsobu ošetření nádorů, vyznačujícího se tím, že zahrnuje podávání pacientovi, který to potřebuje, efektivního množství takové cytotoxické sloučeniny nebo její soli. Některými příklady nádorů, které mohou být tímto způsobem léčeny, jsou leukemie, rakovina plic, rakovina žaludku, rakovina CNS, melanom, rakovina vaječníků, renální rakovina, rakovina prostaty a rakovina prsu. Použití této cytotoxické sloučeniny pro výrobu léčiva pro léčení shora uvedených nádorů je rovněž v rozsahu tohoto vynálezu.

Další znaky a výhody přeldoženého vynálezu budou zřejmé z následujícího popisu výhodných provedení a také z připojených nároků.

V následující části je vynález popsán podrobně.

Předložený vynález se týká cytotoxické sloučeniny, která má 1) proaktivní alkylační část obsahující skupinu přitahující elektrony a 2) bioreduktivní část.

Mezi příklady bioreduktivní části patří o

•I

o

no₂

Mezi příklady proaktivní alkylační části patří:

o

<^X^N(CH₂CH₂)CI o

ních₂ch₂)c:

Všimněte si, že u obou shora uvedených příkladů esterová skupina proaktivní alkylační části znamená skupinu přitahující elektrony.

Jak bylo shora uvedeno, cytotoxické sloučenina popsaná v tomto vynálezu je schopna převedení na dvě alkylační činidla po bioredukci. Mechanismus této konverze lze obecně rozdělit do dvou stadií. Cytotoxické sloučenina, která obsahuje jako bioreduktivní Část chinon, jako linker methylenovou skupinu a jako proaktivní alkylační část di(chlorethyl)aminofenylester, se používá jako příklad v následujícím popisu.

První stupeň zahrnuje redukci bioreduktivní části. Té se typicky dosáhne buněčnými enzymy, např. cytochromreduktasou P450. Chinon může podléhat bioredukci ve dvou jednoelektronových stupních, které v první redukci poskytují semichinonový radikálový anion a ve druhé hydrochinon. Semichinonový radikálový anion je velmi reaktivní vůči kyslíku. V normálních tkáních, kde existuje hojnost kyslíku, většina radikálových aniontů je reoxidována zpět na chinon.

chinon semichinonový radikálový anion hydrochinon o

o le le

OH

Jak je uvedeno v základní části, místo nádoru se vyznačuje špatně oraganizovaným vaskulámínm systémem, který vede k obecně více hypoxickému okolí (s deficitem kyslíku) pň srovnání s normální tkání. Jinými slovy - je méně pravděpodobné, že se redukované sloučeniny setkají s molekulou kyslíku a že se zpětně oxidují. Semichinonové radikálové anionty mají tedy delší poločas života a mohou být dále zredukovány za vzniku hydrochinonu.

Ve druhém stupni pár elektronů putuje z atomu kyslíku hydrochinonu na chinonový kruh (viz ilustraci uvedenou níže, kde skupina přitahující elektrony znamená skupinu -O-(C=O)- (ester) a linker znamená skupinu -CH₂- (methylen)) a nakonec na atom kyslíku skupiny přitahující elektrony proaktivní alkylační části přes linker, který spojuje bioreduktivní a proaktivní alkylační část. Tato elektron přesunující se aktivita tedy vede ke štěpení vazby mezi skupinou přitahující elektrony a linkerem, čímž se chinonová část převádí na chinon-methid. Chinonové methidy jsou známými alkylačními činidly, které jsou schopny napadat nukleofily, např. DNA (viz Lín a spol.:

J. Med. Chem. 1972, 15, 127; J. Med. Chem. 1973, 16, 1268; J. Med. Chem. 1974, 17,688; J. Med. Chem. 1975, 18, 917; J. Med. Chem. 1976, 19,1336.).

o i!

chinonový methid

Důsledkem tohoto štěpení vazby je převedení skupiny přitahující elektrony na skupinu, která přitahuje elektrony mnohem méně. Toto převedení dále zvyšuje elektronovou hustotu di(halogenethyl)aminové skupiny a převádí proaktivní alkylační část na alkylační činidlo. Použitím například esterové skupiny je její silný charakter spočívajíí v přitahování elektronů indikován Hammetovou substituční konstantou (p_p = 0,45 a p_m = 0,37), což udržuje di(chlorethyl)aminovou alkylační část v deaktivovaném

• · · 9 · · · • 9 9 · • · 9 9 stavu. Jakmile se esterová skupina převede na karboxylát, který je skupinou, která mnohem méně přitahuje elektrony (p_p = 0 a p_m = -0,1), elektronová hustota aminového atomu dusíku di(halogenethyl)aminové skupiny se zvýší, což tedy vede ke zesílení jejích alkylačních aktivit.

Skupina cytotoxických sloučenin podle tohoto vynálezu znamená sloučeninu níže uvedeného obecného vzorce I

O

II

v němž každé A, B, C i D nezávisle znamená skupinu -R¹, -R-NR¹R², -O-R¹, -R-OH, -C(=O)O-R¹, R-O-C(=O)R¹, -C(=O)-N¹R¹R², -R-NR¹-C(=O)R², -SO2-NR¹R², -N=SO2l -S-R¹ nebo -L-W-Ph-N(CH2CH2X)2. Popřípadě A a B společně tvoří 5- až 6-členný kruh kondenzovaný s chinonovým kruhem, jestliže žádný ze substituentů A a B neznamená skupinu -L-W-Ph-N(CH2CH2X)2. Podobně C a D popřípadě společně tvoří 5- až 6-členný kruh kondenzovaný s chinonovým kruhem, jestliže žádný ze substituentů C a D neznamená skupinu -L-W-Ph-N(CH2CH2X)2. Kondenzovaný kruh popřípadě obsahuje 1 až 3 heteroatomy, jako je atom dusíku, kyslíku nebo síry a může být popřípadě substituován alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, skupinou -R-NR¹R², -O-R¹, -R-OH, -C(=O)O-R¹, -R-O-C(=O)R¹, -C(=O)-NR¹R², -R-NR¹-C(=O)R², -SO2-NR¹R², -N=SO2 nebo -S-R¹. Každá R nezávisle znamená alkyl nebo je vynechána. Každá R¹ a R² nezávisle znamená atom vodíku, alkyl, alkenyl, aryl, aralkyl, heteroaryl nebo heteroaralkyl. L znamená skupinu -(CR³=CR⁴)n-CR⁵R⁶, kde každá ze skupin R³, R⁴, R⁵ a R⁶ nezávisle znamená atom vodíku, alkyl, alkenyl, aryl, aralkyl, heteroaryl, heteroaralkyl nebo -(O-alkyl)^, a n znamená číslo 0, 1 nebo 2. Pojem -(O-alkyOvs znamená alkoxyskupinu (-(O-alkyl)i) nebo oligoalkylenglykolovou skupinu (-(O-alkyl)₂-5^H). R³ a R⁴, jestliže n neznamená číslo 0, popřípadě společně tvoří 5- až -6-členný kruh. Tento kruh může být alifatický

φ * φ φ φ φ φ φφφφ φ φφφφ φ φ φ φ φ φ φ φφφφ nebo aromatický a může být popřípadě substituován alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, nebo skupinou -(-O-aikyl)^. Jeden až tň heteroatomy, např. atom dusíku, kyslíku nebo síry, mohou také tvořit část tohoto kruhu. W znamená skupinu -O-C(=O)-, -O-C(=O)-NR¹- nebo -O-C(=O)O-. Ph znamená fenylovou skupinu, popřípadě substituovanou alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, skupinou -R-NR¹R², -OH, -(-O-alkyl)^, -O-aryl, -O-aralkyl, -O-heteroaryl, -O-heteroaralkyl, -R-OH, -C(=O)O-R¹, -O-C(=O)R¹, -C(=O)-NR¹R², -NR¹-C(=O)R², -NR¹-C(=O)O-R², -NR¹-C(=O)NR¹R² nebo -S-R¹. X znamená atom halogenu, např. atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu.

Všimněte si, že jestliže žádný ze substituentů A a B nebo C a D netvoří kruh kondenzovaný s chinonovým kruhem, potom alespoň jeden ze substituentů A, B, C nebo D znamená skupinu -L-W-Ph-N(CH2CH₂X)₂. Dále pak jestliže žádný ze substituentů A, B, C a D neznamená skupinu -L-W-Ph-N(CH2CH₂X)₂, potom A a B nebo C a D (včetně A a B stejně jako C a D) společně tvoří kruh kondenzovaný s chinonovým kruhem. Tento kondenzovaný kruh (nebo alespoň jeden z těchto dvou kondenzovaných kruhů, jestliže jsou přítomny dva kondenzované kruhy) obsahuje dvojnou vazbu mezi dvěma atomy kruhu a je substituován na jednom nebo dvou atomech kruhu skupinou -L-W-Ph-N(CH₂CH₂X)2- Tato dvojná vazba, společně s dvojnými vazbami chinonového kruhu, tvoří konjugovaný systém, který umožňuje aby se elektrony přelévaly z jedné dvojné vabzy na jinou.

Některé specifické příklady (vzorců 1 až 25) sloučeniny obecného vzorce I jsou uvedeny níže.

O

ó o

·· 4·

9 9

9 9 9

Ο V-/ Cl « · • · • · • · · · 9 9 9 9 • · · · · · • 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9

999 9999 9 9 99

Cl

Příprava sloučeniny obecného vzorce I je obvykle rozdělena do tří částí: 1) příprava bioreduktivní chinonové části, 2) příprava di(halogenethyl)aminofenylové části a 3) kondenzace bioreduktivní chinonové části s di(halogenethyl)aminofenylovou částí. Obecné syntetické postupy částí ad 1) až ad 3) jsou popsány níže:

1) Příprava bioreduktivní části obsahující chinonový kruh: Odcházející skupina, např. halogenid, která je připojena na linker příslušně chráněné bioreduktivní části, se nutně zkondenzuje na žádanou di(halogeethyl)aminovou skupinu obsahující fenylovou část v části 3). Odcházející skupina a linker se mohou zavést v neoxo-poloze chinonového kruhu, např. elektrofilní substituční reakcí. Jak je ilustrováno v části ad

1) příkladu 1, hydroxymethylová skupina vzniká na atomu uhlíku C₂ dimethylesteru 3,5,6-trimethylhydrochinonu jak hydrochinon reaguje s paraformaldehydem. Jelikož k této reakci dochází v kyselině chlorovodíkové, hydroxymethyl reaguje dál a výsledkem je náhrada hydroxylové skupiny chloridovým iontem. Tato reakce tedy poskytuje chlormethylovou skupinou substituovaný chinon. Dvě methylesterové chránící skupiny pak byly hydrolýzou odstraněny.

φφ φ φφ φφ ·· • · · · · · φφφφ • φ φ φ φ φ φ φ φφ φ φ φ φ φ φ φ φ φ φφ φφφφ φφφφ ΦΦΦ· φφφ φφφφ φφ φφ

2) Příprava di(halogenethyl)aminovou skupinu obsahující fenylové části (atom chloru v následujícím popisu znamená atom halogenu): Di(chlorethyl)aminofenylová část se může vyrobit např. z nitrobenzoové kyseliny. Karboxylát se může chránit ve formě esteru. Vhodné substituenty na benzenovém kruhu lze v tomto bodě buď kondenzovat nebo transformovat, např. viz část 2) příkladu 1. Potom se může nitroskupina zredukovat na aminovou skupinu. Tato aminová skupina pak může reagovat s ethylenoxidem za vzniku disubstituované hydroxyethylaminové skupiny.

Alkylační část, tj. di(chlorethyl)aminová část, se konečně vyrobí tehdy, když se chlorační činidlo, např. thionylchlorid, přidá k di(hydroxyethyl)aminovou skupinu obsahujícímu meziproduktu. Podobně jako u reakce odstraňující chránění v části ad 1), esterová skupina se hydrolýzou odštěpí.

3) Kondenzační reakce bioreduktivní části obsahující chinonový kruh a fenylové části obsahující di(chlorethyl)aminovou skupinu: V typickém příkladu se část obsahující chinonový kruh, např. 2-chlormethyl-3,5,6-trimethylbenzochinon v příkladu 1, může zkondenzovat na fenylovou část obsahující di(chlorethyl)aminovou skupinu, např. 3-[di-(2-chlorethyl)amino-j-4-methoxybenzoovou kyselinu, nukleofilní substituční reakcí. Karboxylát, který působí jako nukleofil, nahrazuje halogenidový ion a vede k vytvoření esterové vazby.

Jak bylo shora uvedeno, farmaceutický prostředek podle tohoto vynálezu, který obsahuje cytotoxickou sloučeninu v efektivním množství, může být použit pro léčení nádorů. V rozsahu tohoto vynálezu je také způsob léčení nádorů podáváním tohoto prostředku pacientovi. Efektivní množství cytotoxické sloučeniny (nebo soli této cytotoxické sloučeniny) je definováno jako takové množství sloučeniny, které po podání pacientovi, který to potřebuje, přináší léčenému pacientovi terapeutický účinek. Efektivní množství, které se pacientovi podává, je typicky závislé na věku, ploše povrchu, hmotnosti a stavu pacienta. Vzájemný vztah mezi dávkováním pro zvířata a pro člověka (vztaženo na miligramy na metr čtvereční povrchu těla) je popsán Freireichem a spol.: Cancer Chemother. Rep. 1966, 50, 219. Plocha povrchu těla může být přibližně stanovena z výšky a hmotnosti pacienta. Viz např. Scientific Tables,

Geige Pharmaceuticals, Ardley, New York, 1970, 537. Efektivní množství cytotoxické sloučeniny používané v praxi podle tohoto vynálezu může být v rozmezí od 0,1 do 250 mg/kg. Efektivní dávka se bude také měnit, jak je známo zručnému odborníkovi z oblasti techniky, podle způsobu podávání, podle použitého vehikula a podle možnosti společného používání jiného terapeutického ošetření zahrnujícího jiná protinádorová činidla a radiační terapii.

Farmaceutický prostředek může být podáván parenterální cestou, zahrnující podávání orálně, místně, subkutánně, intraperitoneálně, intramuskulámě a intravenózně. Mezi příklady parenterálních dávkových forem patří vodné roztoky aktivního činidla v isotonickém solném roztoku, 5% (hmotn.) glukose nebo jiném dobře známém farmaceuticky přijatelném vehikulu. Jako farmaceutická vehikula pro dodávání terapeutických sloučenin se mohou používat solubilizující činidla, jako jsou cyklodextriny, nebo jiná solubilizující činidla dobře známa odborníkům z oblasti techniky.

Cytotoxická sloučenina podle tohoto vynálezu se může sestavovat také dodávkových forem pro jiné způsoby podávání použitím dobře známých způsobů. Farmaceutický prostředek se může sestavit například do dávkových forem pro orální podávání v tobolce, gelovém obalu nebo tabletě. Tobolky mohou obsahovat jakýkoliv dobře známý farmaceuticky přijatelný materiál, jako je želatina nebo celulosové deriváty. Tablety mohou být sestavovány podle konvenčních postupů vylisováním směsí účinných sloučenin podle předloženého vynálezu a pevného nosiče a mazadla. Mezi příklady pevných nosičů patří škrob a cukerný bentonit. Cytotoxická sloučenina se může podávat také ve formě tablety v tvrdém obalu nebo jako tobolky, které obsahují například laktosu nebo manitol jako pojivo a konvenční plnidlo a tabletující činidlo.

Protinádorová aktivita sloučenin podle tohoto vynálezu může být předběžně vyhodnocena použitím testu regrese růstu nádoru, který vyhodnocuje schopnost testovaných sloučenin inhibovat růst vytvořených pevných nádorů u myší. Tento test se může provádět implantováním nádorových buněk do tuku tlapek nahých myší. Ná16 • · ·· φφφ»

Φ·· φφφφ φφφ φφφφ φφ φφ dorové buňky se pak nechají růst do jisté velikosti před tím, než se podávají cytotoxické sloučeniny. Objemy nádoru se pak sledují po řadu týdnů, např. tři týdny.

Během testu se sleduje také celkové zdraví testovaných zvířat.

Předpokládá se, že bez dalšího vypracování může zručný odborník z oblasti techniky na základě zde uvedeného popisu využít předložený vynález k jeho plnějšímu rozsahu. Následující specifické příklady, které popisují syntézu a biologická testování různých sloučenin podle předloženého vynálezu, jsou zkonstruována pouze jako ilustrativní a nikoliv jakýmkoliv způsobem omezující zbytek popisu. Všechny publikace, které jsou zde uvedeny, včetně patentů, jsou zde celé zahrnuty jako odkaz.

Příklady provedení vynálezu

Každý z příkladů 1 až 7 popisuje podrobně syntézu sedmi cytotoxických sloučenin podle tohoto vynálezu. Každý příklad je rozdělen do tří částí: 1) příprava bioreduktivní chinonové části, 2) příprava di(chlorethyl)aminofenylové části a 3) kondenzační reakce těchto dvou částí.

Příklad 1

Syntéza sloučeniny vzorce 1

1) Syntéza 2-chlormethyl-3,5,6-trimethylbenzochinonu

Plynný chlorovodík se zavádí od směsi dimethyletheru 3,5,6-trimethylhydrochinonu (1 g, 5,5 mmolu) a paraformaldehydu (1 g) v kyselině octové obsahující 1N HCI (30 ml). Potom se reakční směs míchá 1 hodinu při 60 °C. Směs se nalije do 400 ml vody a potom se zfiltruje. Zbytek se rozpustí ve 100 ml ethylacetátu a promyje se nasycneým roztokem chloridu sodného (100 ml). Extrakty se vysuší na síranem hořečnatým a rozpouštědlo se za sníženého tlaku odstraní. Dimethylether methyl-4-2-chlormethyl-3,5,6-trimethylhydrochinonu byl získán jako bílá pevná látka (0,8 g, 6 ·· • ♦ · · 4 · · · • ·· · 4 4 4 4 4 4 • 4 · 4 4 4 4 4

44·· ···· ··· ···· ·· ·· % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 4,47 (s, 2 H), 3,79 (s, 3 H), 3,66 (s, 3 H), 2,3 (s, 2 H), 2,20 (s, 3 H), 2,18 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C₁₂H₁₉CIO₂vypočteno: 230,73, nalezeno: 231,7 (M+H)⁺.

0,8 g (3,5 mmolu) dimethyletheru 2-chlormethyl-3,5,6-trimethylhydrochinonu se rozpustí ve 20 ml acetonitrilu. Po přidání 9,6 g dusičanu ceričitoamonného ve 200 ml vody k tomuto roztoku se směs extrahuje ethylacetátem (100 ml a 50 ml). Spojený extrakt se vysuší nad síranem hořečnatým a rozpouštěldo se za sníženého tlaku odstraní. Ke zbytku se přidá 50 ml vody a směs se potom extrahuje ethylacetátem (50 ml). Extrakt se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného (100 ml). Extrakt se vysuší nad síranem hořečnatým. Rozpouštědlo se za sníženého tlaku odstraní. Získá se tak 2-chlormethyl-3,5,6-trimethylbenzochinon jako žluté krystaly. ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 4,47 (s, 2 H), 2,16 (s, 3 H), 2,06 (s, 3 H), 2,05 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C10H11CIQ2 vypočteno: 198,65, nalezeno: 199,6 (M+H)⁺.

2) Syntéza 3-di(2'-chlorethyl)amino-4-methoxybenzoové kyseliny

Reakční směs methylesteru 3-amino-4-methoxybenzoové kyseliny (10,94 g,

0,06 molu) a ethylenoxidu (12,5 g, 0,28 molu) v kyselině octové (150 ml) se míchá 24 hodin za teploty místnosti. Potom se zahustí na asi 80 ml na rotačním odparováku, zředí se vodou (300 ml) a extrahuje se směsí dichlomnethnau s ethylacetátem (1:1, 6 x 300 ml). Organický roztok se zahustí. Získá se tak téměř bílý olej (8,6 g, 54 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,85 (m, 2 H), 6,94 (d, J = 8,1 Hz, 1 H),

3,90 (s, 3 H), 3,84 (s, 3 H), 3,52 (m, 4 H), 3,24 (m, 4 H).

K benzenovému roztoku (40 ml) methylesteru 3-(2'-di(hydroxyethyl)amino)-4-methoxybenzoové kyseliny (2,80 g, 10,40 mmolu) se pomalu za míchání a za teploty místnosti přidá thionylchlorid (1,2 ml). Po přidání se reakční suspenze zahřívá 0,5 hodiny pod zpětným chladičem. Reakční směs se pak zpracuje s ledem/vodou (100 ml) a extrahuje se ethylacetátem (100 ml). Ethylacetátový roztok se promyje hydrogenuhličitanem sodným (100 ml), vysuší se nad síranem hořečnatým a zahustí se. Získá se tak produkt jako téměř bílá pevná látka (2,50 g, 79 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,76 (dd, J = 8,4 Hz a 2,4 Hz, 1 H), 7,69 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 6,90 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 3,90 (s, 3 H), 3,85 (s, 3 H), 3,52 (s, 8 H). ES-MS spektrum: pro Ci₃Hi₇CI₂NO3 vypočteno: 305,1, nalezeno: 328,0 (M+Na)⁺.

Suspenze methylesteru 3-di(2'-chlorethyl)amino-4-methoxybenzoové kyseliny (2,70 g, 8,823 mmolu) v koncentrované HCI (37% (hmotn.) ve vodě, 40 ml) se zahřívá 1 hodinu pod dusíkem pod zpětným chladičem. Reakční směs se zpracuje s ledem/vodou (200 ml) a extrahuje se ethylacetátem (4 x 150 ml). Organický roztok se zahustí. Získá se tak bílá pevná látka (2,05 g, 80 % hmotn.). ES-MS spektrum: pro C₁₂H₁₅CI₂NO₃ vypočteno: 291,0, nalezeno: 292,0 (M+H)⁺.

3) Kondenzace meziproduktů z ad 1) a ad 2)

Acetonový roztok (25 ml) 3-di(2'-chlorethyl)amino-4-methoxybenzoové kyseliny (0,51 g, 1,750 mmolu) a 2-chlormethyl-3,5,6-trimethylbenzochinonu (0,56 g, 2,819 mmolu) se zahřívá 2 hodiny pod zpětným chladičem pod dusíkem v přítomnosti uhličitanu draselného (2,0 g) a jodidu sodného (1,2 g). Organická vrstva se oddělí, zředí se ethylacetátem (50 ml), promyje se vodným uhličitanem draselným (2 x 50 ml), vysuší se nad síranem hořečnatým a zahustí se na olej. Vyčištění bleskovou chromatografií na silikagelu poskytlo produkt jako lepivý olej (0,61 g, 77 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,70 (dd, J = 8,4 Hz a 1,8 Hz, 1 H), 7,65 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 6,86 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 5,25 (s, 3 H), 3,90 (s, 3 H), 3,50 (s, 8 H), 2,18 (s, 3 H), 2,06 (s, 3 H), 2,05 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C₂₂H₂₅CI₂NO5 vypočteno: 453,1, nalezeno: 454,1 (M+H)⁺.

»· 9 99 99 99

999 9 «9 9 9 999 9 • 9 9 99999

99 9 999999

9 99 9999

9999 9999 999 9999 99 9«

Příklad 2

Syntéza sloučeniny vzorce 2

1) Viz část ad 1) z příkladu 1.

2) Viz část ad 2) z příkladu 1 kromě toho, že výchozím materiálem je 3-amino-4-methylbenzoát místo 3-amino-4-methoxybenzoátu.

3) Kondenzace meziproduktů z ad 1) a ad 2)

3-Methyl-4-di(2'-chlorethyl)aminobenzoová kyselina (830 mg, 3,02 mmolu) a 2-chlormethyl-3,5,6-trimethylbenzochinon (500 mg, 2,51 mmolu) se rozpustí v acetonu (20 ml) a zahřívá se na 500 °C v přítomnosti uhličitanu draselného (1 g) a jodidu sodného (80 mg) 1,5 hodiny. Směs se vlije do 300 ml vody a extrahuje se ethylacetátem (100 ml, 4krát). Extrakt se vysuší nad síranem hořečnatým a potom se za sníženého tlaku zahustí. Získá se chinon-yperit A jako olej (800 mg, 72 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,75 (dd, J = 2,19 Hz a 2,19 Hz, 1 H), 7,63 (m, 1 H), 6,65 (d, J = 8,52 Hz, 1 H), 5,22 (s, 2 H), 3,48 (m, 8 H), 2,31 (s, 3 H), 2,15 (s, 3 H), 2,14 (s, 3 H), 2,04 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C22H25CI2NO4 vypočteno: 438,31, nalezeno: 439,0 (M+H)⁺.

·· ·* · ·· ·· ··

9 9 » ·· * · 99 9 9

9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9 · · · 9 · · · ·*·· ·>·« ··· ·«·· ·· 99

Příklad 3

Syntéza sloučeniny vzorce 3

1) Viz část ad 1) z příkladu 1.

2) Syntéza 4-di(2'-chlorethyl)amino-3-oktoxybenzoové kyseliny

Suspenze methylesteru 3-hydroxy-4-nitrobenzoové kyseliny (5,5 g, 0,028 molu), jodoktanu (10,0 g, 0,042 molu) a uhličitanu draselného (20 g) v DMF (100 ml) se míchá 3 hodiny při 100 °C. Reakčni směs se ochladí na teplotu místnosti, zředí se vodou (500 ml) a potom se extrahuje směsí etheru s ethylacetátem (9:1, 2 x 200 ml). Spojený organický roztok se promyje vodou (400 ml), vysuší se nad síranem sodným a zahustí se na téměř bílý olej (8,7 g, 100 %).

Methanolový roztok (150 ml) methylesteru 4-nitro-3-oktoxybenzoové kyseliny (8,7 g, 0,028 molu) se míchá 29 hodin za teploty místnosti v přítomnosti 10% (hmotn.) paladia na uhlí ve vodíkové atmosféře. Reakčni směs se zfiltruje celitem. Zahuštěním se získá téměř bílá pevná látka (7,6 g, 96 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,25 (d, J = 2,1 Hz, 1 H). MS spektrum: pro C16H25NO3 vypočteno: 279,2, nalezeno: 279.

Reakčni směs methylesteru 4-amino-3-oktoxybenzoové kyseliny (3,47 g, 12,4 mmolu) a ethylenoxidu (4,5 g, 198 molů) v kyselině octové (100 ml) se míchá 12 hodin za teploty místnosti. Zředí se vodou (500 ml) a extrahuje se směsí chloroformu s methanolem (95:5, 4 x 100 ml). Organický roztok se zahustí na hnědý olej. Vyčištění bleskovou chromatografií (silikagel, 5 až 10 % methanolu v chloroformu) poskytlo produkt jako téměř bílý olej (2,25 g, 42 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI3): 7,62 (dd, J = 8,1 Hz a 2,1 Hz, 1 H), 7,55 (d, J = 2,1 Hz, 1 H), 7,12 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 4,06 (t, J = 6,9 Hz, 2 H), 3,90 (s, 3 H), 3,64 (t, J = 5,1 Hz, 4 H), 3,38 (t, J =

5,1 Hz, 4 Η), 1,86 (J = 5,1 Hz, 2 H), 1,30 (m, 10 H), 0,89 (t, J = 6,9 Hz, 3 H). ES-MS spektrum: pro C₂oH₁₃NOs vypočteno: 367,2, nalezeno: 390,3 (M+Na)⁺.

K míchanému roztoku methylesteru 4-di(2'-hydroxyethyl)amino-3-oktoxybenzoové kyseliny (2,20 g, 6,0 molu) v benzenu (50 ml) se za teploty místnosti za míchání pomalu přidá thionylchlorid (1,2 ml, 16 mmolů). Po přidání se reakční směs vaří 1,5 hodiny pod zpětným chladičem. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti, zpracuje se se směsí led/voda (100 ml) a extrahuje se ethylacetátem (50 ml). Organický roztok se promyje hydrogenuhličitanem sodným (20 ml), vodou (50 ml), vysuší se nad síranem hořečnatým a zahustí se. Získá se tak produkt jako téměř bílý olej (2,1 g, 87 % hmotn.). ’H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,58 (dd, J = 8,1 Hz a 1,8 Hz, 1 H), 7,51 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 6,92 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 4,03 (t, J = 6,6 Hz, 1 H), 3,89 (s, 3 H), 3,60 (m, 8H), 1,85 (J = 7,2 Hz, 2 H), 1,30 (m, 10 H), 0,89 (t, J = 6,9 Hz, 3 H). ES-MS spektrum: pro C2oH₃iCI₂N0₃ vypočteno: 403,2, nalezeno: 404,2 (M+H)⁺.

Suspenze methylesteru 4-di(2'-chlorethyl)amino-3-oktoxybenzoové kyseliny (1,8 g, 4,5 mmolu) v koncentrované HCI (37% (hmotn.) ve vodě, 50 ml) se zahřívá 0,5 hodiny pod dusíkem pod zpětným chladičem. Reakční směs se nechá zreagovat se směsí ledu s vodou (100 ml) a extrahuje se chloroformem (3 x 50 ml). Organický roztok se zahustí. Získá se tak hnědý olej. Vyčištění bleskovou chromatograf i í (silikagel, 2 % methanolu v chloroformu) poskytlo produkt jako téměř bílou pevnou látku (1,58 g, 88 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,67 (dd, J = 8,1 Hz a 1,5 Hz, 1 H), 7,56 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 6,93 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 4,40 (d, J = 6,6 Hz, 2 H), 3,65 (m, 8 H), 1,85 (J = 7,8 Hz, 2 H), 1,35 (m, 10 H), 0,90 (t, J = 6,6 Hz, 3 H). ES-MS spektrum: pro C29H29CI₂NO₃ vypočteno: 389,2, nalezeno: 390,2 (M+H)⁺.

3) Kondenzace meziproduktů z částí ad 1) a ad 2)

Stejný postup, jako je popsán v části ad 3) příkladu 1 a 2. ¹H NMR spektrum (δ): 7,76 (dd, J = 8 Hz a 1,8 Hz, 1 H), 7,68 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 6,98 (d, J = 8 Hz, 1 H), • φ · φφφφφ φ « φ » φφφφφφ « φ φφ ΦΦΦΦ «φφφ ΦΦΦΦ φφφ ΦΦΦΦ φφ φφ

5,25 (s, 3 Η), 3,53 (široký s, 8 Η), 3,6 (t, J = 5,0 Hz, 2 Η), 2,18 (s, 3 Η), 2,0 (s, 3 Η),

2,02 (s, 3 Η), 1,86 (J = 5,0 Hz, 2 H), 1,30 (m, 10 H), 0,89 (t, J = 6,9 Hz, 3 H). ES-MS spektrum: pro C29H39CI2NO5 vypočteno: 552,2, nalezeno: 553,1 (M+H)⁺.

Příklad 4

Syntéza sloučeniny vzorce 4

1) Viz část ad 1) z příkladu 1.

2) Syntéza 2-di(2'-chlorethyl)amino-3,5-dimethylbenzoové kyseliny

Reakční směs methylesteru 2-amino-3,5-dimethylbenzoové kyseliny (7,0 g,

0,039 molu) a ethylenoxidu (10 g, 0,23 molu) v kyselině octové (150 ml) se míchá 19 hodin za teploty místnosti. Potom se zahustí na 100 ml na rotačním odpařováku, zředí se vodou (300 ml) a extrahuje se chloroformem (5 x 200 ml). Organický roztok se zahustí. Získá se tak téměř bílý olej (10,0 g, 96 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI3): 7,31 (šiorký s, 1 H), 7,16 (široký s, 1 H), 3,91 (s, 3 H), 3,73 (m, 2 H),

3,63 (m, 2 H), 3,26 (široký m, 4 H), 2,32 (s, 3 H), 2,30 (s, 3 H).

K míchanému roztoku methylesteru 2-di(2'-hydroxyethyl)amino-3,5-dimethylbenzoové kyseliny (7,0 g, 0,026 mmolu) v benzenu (200 ml) se za teploty místnosti pomalu přidá thionylchlorid (12 ml, 0,026 molu). Po přidání se reakční suspenze míchá 12 hodin za teploty místnosti. Reakční směs se zpracuje se směsí led/voda (500 ml) a extrahuje se ethylacetátem (2 x 300 ml). Ethylacetátový roztok se promyje vodou (300 ml), hydrogenuhličitanem sodným (200 ml), vysuší se nad síranem hořečnatým a zahustí se. Získá se tak produkt jako čirý olej (5,6 g, 71 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,31 (d, J = 2,1 Hz, 1 H), 7,17 (d, J = 2,1 Hz, 1 H),

3,88 (s, 3 H), 3,53 (m, 4 H), 3,37 (široký m, 4 H), 2,35 (s, 3 H), 2,30 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro CuH^CbNC^ vypočteno: 303,1, nalezeno: 304,1 (M+H)⁺.

• · • · * · · • «·ΰ· · · · · • · · ····· • · · · ······ • · ·· φ · · · ···· ···· ··· ···· ·· ··

Suspenze methylesteru 2-di(2'-chlorethyl)amino-3,5-dimethylbenzoové kyseliny (5,6 g, 0,018 molu) v koncentrované HCI (37% (hmotn.) ve vodě, 150 ml) se zahřívá 3 hodiny pod dusíkem pod zpětným chladičem. Reakční směs se nechá zreagovat se směsí ledu s vodou (200 ml) a extrahuje se chloroformem (3 x 150 ml). Organický roztok se zahustí. Získá se tak bílá pevná látka (5,1 g, 96 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 8,01 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 7,23 (dd, J = 1,5 a 0,6 Hz,

H), 3,6 (m, 8 H), 2,43 (s, 3 H), 2,35 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C₁₃H₁₇CI₂NO₂vypočteno: 289,1.

3) Kondenzace meziproduktů z částí ad 1) a ad 2)

Acetonový roztok (15 ml) 2-di(2'-chlorethyl)amino-3,5-dimethylbenzoové kyseliny (0,45 g, 1,551 mmolu) se zahřívá pod zpětným chladičem pod dusíkem v přítomnosti uhličitanu draselného (1,5 g) a jodidu sodného (1,0 g). K tomuto roztoku se pomalu přidává acetonový (5 ml) roztok 2-chlormethyl-3,5,6-trimethylbenzochinonu (0,45 g, 2,413 mmolu). Po 20 minutách varu pod zpětným chladičem se reakční směs ochladí na teplotu místnosti, zředí se vodou (50 ml) a extrahuje se ethylacetátem (50 ml). Organická vrstva se promyje vodou (50 ml), vysuší se nad síranem hořečnatým a zahustí se na olej. Vyčištění bleskovou chromatografií na silikagelu poskytlo produkt jako lepivý olej (0,52 g, 76 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,25 (d, J = 2,1 Hz, 1 H), 7,17 (d, J = 2,1 Hz, 1 H), 5,24 (s, 2 H), 3,49 (m, 4 H), 3,38 (široký m, 4 H), 2,33 (s, 3 H), 2,28 (s, 3 H), 2,20 (s, 3 H), 2,07 (s, 3 H), 2,06 (s, H). ES-MS spektrum: pro C₂₃H₂₇CI₂NO₄ vypočteno: 451,1, nalezeno: 452,1 (M+H)⁺.

Příklad 5

Syntéza sloučeniny vzorce 5

1) Viz část ad 1) z příkladu 1 s použitím 2-(2-acetoxyethyl)-benzochinonu jako výchozího materiálu.

2) Viz část ad 2) z příkladu 1 s použitím 4-nitrobenzoové kyseliny jako výchozího materiálu.

3) Dioxanový roztok (6 ml) 2-chlormethyl-5-(2'-acetoxyethyl)benzochinonu (110 mg, 0,453 mmolu) a 4-di(2'-chlorethyl)aminobenzoové kyseliny (80 mg, 0,305 mmolu) se míchá v přítomnosti uhličitanu draselného za teploty mítnosti 5 hodin. Reakční směs se zředí hexany (15 ml), zfiltruje se vrstvičkou celitu a organická fáze se zahustí na olej. Vyčištění bleskovou chromatografií na silikágelu poskytlo produkt jako žlutou pevnou látku (18 mg, 12 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,97 (d, J = 9,0 Hz, 2 H), 6,80 (m, 4 H), 5,20 (d, J = 1,8 Hz, 2 H), 4,26 (t, J = 6,3 Hz, 2 H), 3,83 (t, J = 6,6 Hz, 4 H), 3,68 (t, J = 6,6 Hz, 2 H), 2,76 (dt, J = 6,0 a 1,2 Hz, 2 H), 2,03 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C22H23CI2NO6 vypočteno: 467,1, nalezeno: 490,0 (M+Na)⁺.

Příklad 6

Syntéza sloučeniny vzorce 6

1) Viz část ad 1) z příkladu 1 pro analogický postup syntézy 2,3-dimethylbenzochinonnu.

2) Viz část ad 2) z příkladu 1.

3) 3-Di(2'-chlorethyl)amino-4-methoxybenzoová kyselina (180 mg, 0,618 mmolu) se rozpustí v acetonu (10 ml) a zahřívá se pod zpětným chladičem s uhličitanem draselným (0,58 g). K tomuto roztoku se přikape acetonový roztok (5 ml) 2,3-dichlormethyl-5,6-dimethylbenzochinonu (75 mg, 0,323 mmolu). Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti, zředí se ethylacetátem (15 ml), promyje se vodným uhličitanem draselným (2 x 50 ml), vysuší se nad síranem hořečnatým a zahustí se na olej. Vyčištění bleskovou chromatografií na silikágelu poskytlo produkt jako lepivý olej (85 mg, 37 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,59 (m, 4 H), 6,75 (d, J = 9,0 • ·

Ηζ, 2 Η), 5,39 (s, 4 Η), 3,86 (s, 6 Η), 3,48 (m, 16 Η), 2,08 (s, 6 Η). ES-MS spektrum: pro C34H39CI4N2O8 vypočteno: 742,1, nalezeno: 789,1 (M+2Na-H)⁺.

Příklad 7

Syntéza sloučeniny vzorce 7

1) Viz část ad 1) z příkladu 1.

2) Syntéza methylesteru 4-di(2'-chlorethyl)amino-3-(2'-(2-methoxyethoxy)ethoxy)benzoové kyseliny

Suspenze methylesteru 3-hydroxy-4-nitrobenzoátu (5,5 g, 0,028 molu), 1-brom-2-(2-methoxyethoxy)ethanu (10,0 g, 0,055 molu) a uhličitanu draselného (20 g) v DMF (100 ml) se míchá 2 hodiny při 90 až 100 °C. Reakční směs se ochladí na teplotu místnosti a zředí se vodou (400 ml). Výsledná pevná látka se isoluje odfiltrováním, promyje se vodou (100 ml) a vysuší se. Získá se tak produkt jako bílá pevná látka (6,2 g, 74 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,82 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,78 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 7,69 (dd, J = 8,1 a 1,2 Hz, 1 H), 4,33 (t, J = 4,5 Hz, 2 H), 3,95 (s, 3 H), 3,92 (t, d, J = 4,8 Hz, 2 H), 3,73 (m, 2 H), 3,55 (m, 2 H), 3,38 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C₁₃H₁₇NO₇ vypočteno: 299,1, nalezeno: 300,1 (M+H)⁺.

Methanolický roztok (200 ml) methylesteru 3-(2'-(2-methoxyethoxy)ethoxy)-4-nitrobenzoové kyseliny (6,0 g, 0,020 molu) se míchá za teploty místnosti v přítomnosti 10% (hmotn.) paladia na uhlí a kyseliny octové (10 ml) v atmosféře vodíku 20 hodin. Reakční směs se zfiltruje celitem. Zahuštěním se získá téměř bílá pevná látka (5,0 g, 93 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,55 (d, J = 8,7 a 2,4 Hz, 1 H), 7,47 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 6,67 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 4,22 (t, J = 4,8 Hz, 2 H),

3,87 (m, 2 H), 3,85 (s, 3 H), 3,70 (t, J = 4,8 Hz, 2 H), 3,58 (t, J = 4,8 Hz, 2 H), 3,39 (s, 3 H). MS spektrum: pro C₁₃H₁₉NO₅ vypočteno: 269,1, nalezeno: 270,1 (M+H)⁺.

Reakční směs methylesteru 4-amino-3-(2'-(2''-methoxyethoxy)ethoxy)benzoové kyseliny (5,0 g, 18,6 mmolu) a ethylenoxidu (8,8 g, 200 molů) v kyselině octové (150 ml) se míchá 12 hodin za teploty místnosti. Zředí se vodou (300 ml) a extrahuje se směsí chloroformu s methanolem (95:5, 4 x 200 ml). Organický roztok se zahustí na téměř bílý olej (6,1 g, 92 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,62 (dd, J = 8,1 a 2,1 Hz, 1 H), 7,52 (d, J = 2,1 Hz, 1 H), 7,05 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 4,22 (m, 4 H), 3,89 (s, 3 H), 3,9 až 3,8 (m, 4 H), 3,68 (m, 6 H), 3,58 (m, 2 H), 3,38 (m, 2 H), 3,37 (s, 1 H). ES-MS spektrum: pro C17H27NO7 vypočteno: 357,2, nalezeno: 358,3 (M+H)⁺

K míchanému roztoku methylesteru 4-di(2'-hydroxyethyl)amino-3-(2'-(2-methoxyethoxy)ethoxy)benzoové kyseliny (5,0 g, 13,3 molu) v benzenu (100 ml) se za teploty místnosti pomalu přidá thionylchlorid (5,1 ml, 68 mmolú). Po přidání se reakce míchá 16 hodin za teploty místnosti. Reakční směs se zpracuje se směsí led/voda (500 ml) a extrahuje se ethylacetátem (2 x 300 ml). Spojený ethylacetátový roztok se promyje hydragenuhličitanem sodným (20 ml), vodou (50 ml), vysuší se nad síranem sodným a zahustí se. Získá se tak produkt jako téměř bílý olej (3,9 g, 74 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,58 (dd, J = 8,7 Hz a 2,1 Hz, 1 H), 7,49 (d, J = 2,1 Hz, 1 H), 6,88 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 4,18 (m, 2 H), 3,87 (m, 2 H), 3,86 (s, 3H), 3,69 (m, 2 H), 3,63 (m, 8 H), 3,56 (m, 2 H), 3,37 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C₁₇H₂₅CI₂NO₅vypočteno: 393,1, nalezeno: 394,2 (M+H)⁺.

Suspenze methylesteru 4-di(2'-chlorethyl)amino-3-(2'-(2-methoxyethoxy)ethoxy)benzoové kyseliny (3,0 g, 7,64 mmolu) v koncentrované HCI (37% (hmotn.) ve vodě, 50 ml) se zahřívá 2 hodiny pod dusíkem pod zpětným chladičem. Reakční směs se nechá zreagovat se směsí ledu s vodou (100 ml) a extrahuje se chloroformem (2 x 100 ml). Organický roztok se zahustí. Získá se tak bílá pevná látka (2,8 g, 97 % hmotn.). ¹H NMR spektrum (300 MHz, CDCI₃): 7,68 (dd, J = 8,4 Hz a 2,1 Hz, 1 H), 7,55 (d, J = 2,1 Hz, 1 H), 6,92 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 4,22 (m, 1 H), 3,89 (m, 2 H), 3,67 (m, 10 H), 3,62 (m, 2 H), 3,39 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro Ci_eH₂₃CI₂NO₅vypočteno: 379,1, nalezeno: 408,2 (M-H)⁺

• · · • · · • · · • · · • · *·

3) Kondenzace meziproduktů z částí ad 1) a ad 2)

Použije se stejný postup, jako je popsán v části ad 3) příkladu 1. ¹H NMR spektrum (δ): 7,58 (dd, J = 8,7 a 2,1 Hz, 1 H), 7,9 (d, J = 2,1 Hz, 1 H), 6,88 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 5,26 (s, 2 H), 3,18 (m, 2 H), 3,87 (m, 2 H), 3,69 (m, 2 H), 3,63 (m, 8 H), 3,56 (m, 2 H), 3,37 (s, 3 H), 2,12 (s, 3 H), 2,05 (s, 3 H), 2,02 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C26H33CI2NO7 vypočteno: 52,2, nalezeno: 53,1 (M+H)⁺.

Následující sloučeniny byly syntetizovány analogickými postupy, jako jsou postupy ve shora popsaném příkladu.

Příklad 8

Syntéza sloučeniny vzorce 8 ¹H NMR spektrum (δ): 7,59 (dd, J = 8,0 a 2,1 Hz, 1 H), 7,1 (d, J = 2,1 Hz, 1 H),

6,88 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 5,23 (s, 3 H), 3,87 (d, J = 6,6 Hz, 2 H), 2,63 (q, J = 7,2 Hz, H), 3,65 (s, 8 H), 1,30 (m, 1 H), 1,10 (t, J = 7,2 Hz, 6 H), 0,68 (m, 2 H), 0,38 (m, 2 H). ES-MS spektrum: pro C28H36CI2N2O5 vypočteno: 551,2, nalezeno: 552,1 (M+H)⁺.

Příklad 9

Syntéza sloučeniny vzorce 9 ¹H NMR spektrum (δ): 7,58 (dd, J = 8,7 a 2,1 Hz, 1 H), 7,49 (d, J = 2,1 Hz, 1 H),

6,88 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 5,06 (q, J = 7 Hz, 1 H), 3,92 (t, J = 7 Hz, 1 H), 3,63 (m, 8 H), 3,56 (m, 2 H), 2,12 (s, 2 H), 2,05 (s, 2 H), 2,02 (s, 3 H), 1,80 (m, 2 H), 1,45 (s, 2H), 1,00 (d, J = 7 Hz, 3 H). ES-MS spektrum: pro C26H33CI2NO5 vypočteno: 510,1, nalezeno: 511,2 (M+H)⁺.

• 9 · · · «· · · ·· • φφφ «Φ·« · · « · • · φ · · · · · φ «φ · ······ • · · · ΦΦΦ·

Φ······· ······· ·· ··

Příklad 10

Syntéza sloučeniny vzorce 10 ¹H NMR spektrum (δ): 7,62 (dd, J = 8,0 a 2,1 Hz, 1 H), 7,5 (d, J = 2,1 Hz, 1 H), 7,30 (d, J = Hz, 1 H), 6,85 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 6,0 (d, J = Hz, 1 H), 6,25 (d, J = Hz, 1 H), 5,23 (s, 2H), 5,50 (s, 2 H), 3,85 (s, 6 H), 3,65 (s, 8 H), 2,05 (s, 3 H), 2,00 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C27H30CI2N2O6 vypočteno: 549,2, nalezeno: 550,1 (M+H)⁺.

Přikladli

Syntéza sloučeniny vzorce 11 ¹H NMR spektrum (δ): 7,58 (dd, J = 8,7 a 2,1 Hz, 1 H), 7,9 (d, J = 2,1 Hz, 1 H),

6,88 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 5,26 (s, 2H), 5,18 (s, 2 H), 3,92 (s, 3 H), 3,87 (m, 2 H), 3,69 (m, 2 H), 3,63 (m, 8 H), 3,56 (m, 2 H), 3,37 (s, 3 H), 2,05 (s, 3 H), 2,02 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C26H33CI2NO8 vypočteno: 558,2, nalezeno: 559,1 (M+H)⁺.

Příklad 12

Syntéza sloučeniny vzorce 12 ¹H NMR spektrum (δ): 7,52 (dd, J = 8,4 a 2,1 Hz, 1 H), 7,7 (d, J = 2,1 Hz, 1 H), 6,86 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 5,25 (s, 2H), 3,98 (d, J = 6,9 Hz, 2 H), 3,60 (m, 8 H), 2,82 (m, 1 H), 2,25 až 2,1 (m, 2 H), 2,18 (s, 3 H), 2,05 (s, 3 H), 2,0 (s, 3 H), 2,0 až 1,7 (m, H). ES-MS spektrum: pro C26H33CI2NO8 vypočteno: 558,2, nalezeno: 559,1 (M+H)⁺.

·· · * · «· · · ··

Příklad 13

Syntéza sloučeniny vzorce 13 ¹H NMR spektrum (δ): 7,59 (dd, J = 8,4 a 2,1 Hz, 1 H), 7,1 (d, J = 2,1 Hz, 1 H),

6,88 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 5,23 (s, 3 H), 3,87 (d, J = 6,6 Hz, 1 H), 2,63 (q, J = 7,2 Hz, H), 3,65 (s, 8 H), 2,15 (s, 3 H), 2,08 (s, 3 H), 2,0 (s, 3 H), 1,30 (m, 1 H), 1,10 (t, J = 7,2 Hz, 6 H), 0,68 (m, 2 H), 0,38 (m, 2 H). ES-MS spektrum: pro C28H36CI2N2O5 vypočteno: 551,2, nalezeno: 552,1 (M+H)⁺

Příklad 14

Syntéza sloučeniny vzorce 14 *H NMR spektrum (δ): 7,4 (dd, J = 8,7 a 1,8 Hz, 1 H), 7,0 (d, J = 1,8 Hz, 1 H),

6,75 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 5,38 (s, 2H), 3,96 (t, J = 6,6 Hz, 2 H), 3,56 (m, 8 H), 2,08 (s, 3 H), 2,0 (s, 3 H), 1,80 (m, 2 H), 0,99 (t, J = 7,2 Hz, 3 H). ES-MS spektrum: pro C25H29CI2N3O5 vypočteno: 522,2, nalezeno: 523,1 (M+H)⁺.

Příklad 15

Syntéza sloučeniny vzorce 15 ¹H NMR spektrum (δ): 7,4 (dd, J = 8,7 a 1,8 Hz, 1 H), 7,0 (d, J = 1,8 Hz, 1 H),

6,75 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 5,38 (s, 2 H), 5,67 (m, 2 H), 3,96 (t, J = 6,6 Hz, 2 H), 3,91 (s, 3 H), 3,56 (m, 8 H), 2,23 (s, 3 H), 2,08 (s, 3 H), 1,80 (m, 2 H), 1,8 (m, 2 H), 0,99 (t, J = 7,2 Hz, 3 H). ES-MS spektrum: pro C28H3CI2N2O6 vypočteno: 565,2, nalezeno: 566,1 (M+H)⁺.

• «· · · • · · · · · · • · · · « • · · · · · • · · e · ······· ··

Příklad 16

Syntéza sloučeniny vzorce 16 ¹H NMR spektrum (δ): 7,4 (dd, J = 2,19 a 2,19 Hz, 1 H), 7,63 (m, 1 H), 6,65 (d, J = 8,52 Hz, 1 H), 5,22 (s, 2 H), 3,8 (m, 8 H), 2,31 (s, 3 H), 2,15 (s, 3 H), 2,00 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C22H25CI2NO vypočteno: 38,31, nalezeno: 39,0 (M+H)⁺.

Příklad 17

Syntéza sloučeniny vzorce 17 ¹H NMR spektrum (δ): 7,76 (dd, J = 8 a 1,8 Hz, 1 H), 7,68 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 6,98 (d, J = 8 Hz, 1 H), 5,30 (s, 2 H), 3,53 (široký s, 8 H), 2,35 (s, 3 H), 2,18 (s, 3 H), 2,0 (s, 3 H), 2,02 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C22H25CI2NO vypočteno: 822,1, nalezeno:

823.1 (M+H)⁺.

Příklad 18

Syntéza sloučeniny vzorce 18 ¹H NMR spektrum (δ): 7,70 (dd, J = 8 a 1,8 Hz, 1 H), 7,65 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 6,86 (d, J = 8 Hz, 1 H), 5,25 (s, 3 H), 3,90 (s, 3 H), 3,50 (s, 8 H), 2,18 (s, 3 H), 2,06 (s, 3 H), 2,05 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C22H25CI2N5O vypočteno: 53,1, nalezeno:

5.1 (M+H)⁺.

• · • ♦ · · · • · ♦ · · • · · · ·

Příklad 19

Syntéza sloučeniny vzorce 19 ¹H NMR spektrum (δ): 7,76 (dd, J = 8 a 1,8 Hz, 1 H), 7,68 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 6,98 (d, J = 8 Hz, 1 H), 5,22 (s, 2 H), 3,68 až 3,80 (široký m, H), 3,53 (široký s, 8 H), 3,6 (t, J = 5,0 Hz, 2 H), 2,58 až 2,6 (široký m, H), 2,0 (s, 3 H), 2,02 (s, 3 H), 1,86 (J = 5,0 Hz, 2 H), 1,30 (m, 10 H), 0,89 (t, J = 6,9 Hz, 3 H). ES-MS spektrum: pro C₃iH CI2N2O6 vypočteno: 611,2, nalezeno: 612,1 (M+H)⁺.

Příklad 20

Syntéza sloučeniny vzorce 20 ¹H NMR spektrum (δ): 7,4 (dd, J = 2,19 a 2,19 Hz, 1 H), 7,63 (m, 1 H), 6,65 (d, J = 8,52 Hz, 1 H), 5,22 (s, 2 H), 3,90 (s, 3 H), 3,8 (m, 8 H), 2,0 (t, J = 7 Hz), 2,15 (s, 3 H), 2,0 (s, 3 H), 1,65 (m, 2 H), 1,3 (m, 2 H), 0,92 (t, J = 8 Hz). ES-MS spektrum: pro C26H32CI2N2O6 vypočteno: 539,2, nalezeno: 50,1 (M+H)⁺.

Příklad 21

Syntéza sloučeniny vzorce 21 ¹H NMR spektrum (δ): 7,4 (dd, J = 2,19 a 2,19 Hz, 1 H), 7,63 (m, 1 H), 7,20 (m, 5 H), 6,65 (d, J = 8,52 Hz, 1 H), 5,22 (s, 2 H), 5,18 (s, 2 H), 3,80 (s, 6 H), 3,8 (m, 8 H), 2,15 (s, 3 H), 2,0 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C30H33CI2N3O6 vypočteno: 602,2, nalezeno: 603,1 (M+H)⁺.

Příklad 22 • · • · · · · «·

Syntéza sloučeniny vzorce 22 ¹H NMR spektrum (δ): 8,20 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 8,11 (d, J = 7,0 Hz, 1 H), 7,70 (dd, J = 8 a 1,8 Hz, 1 H), 7,65 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,53 (m, 2 H), 6,86 (d, J = 8 Hz, 1 H), 5,25 (s, 3 H), 3,90 (s, 3 H), 3,50 (s, 8 H), 2,18 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C₂ FbCfeNOs vypočteno: 76,1, nalezeno: 77,0(M+H)⁺

Příklad 23

Syntéza sloučeniny vzorce 23 ¹H NMR spektrum (δ): 7,76 (dd, J = 8,4 a 1,8 Hz, 1 H), 7,55 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 7,02 (d, J = 8 Hz, 1 H), 6,86 (d, J = 8 Hz, 1 H), 5,23 (s, 2 H), 3,90 (s, 3 H), 3,50 (s, 8 H), 2,26 (s, 3 H), 2,03 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro 0₂₃Η₂₃Ο₂Ν0₆ vypočteno: 80,1, nalezeno: 80,2(M+H)⁺.

Příklad 24

Syntéza sloučeniny vzorce 24 ¹H NMR spektrum (δ): 7,4 (dd, J = 8,7 a 1,8 Hz, 1 H), 7,0 (d, J = 1,8 Hz, 2 H),

6,75 (d, J = 8,7 Hz, 2 H), 5,38 (s, H), 3,96 (t, J = 6,6 Hz, H), 3,56 (m, 16 H), 1,80 (sextet, J = 7,5 Hz, H), 1,8 (sextet, J = 7,5 Hz, H), 0,99 (t, J = 7,2 Hz, 6 H). ES-MS spektrum: pro C₀H5oCIN₂0₈ vypočteno: 826,2, nalezeno: 827,1 (M+H)⁺.

• ·

Příklad 25

9 9 0

9 9 9

9 9

Syntéza sloučeniny vzorce 25 ¹H NMR spektrum (δ): 7,80 (dd, J = 2,19 a 2,19 Hz, 1 H), 7,53 (m, 1 H), 6,6 (d, J = 8,52 Hz, 1 H), 5,22 (s, 2 H), 3,80 (s, 3 H), 3,8 (m, 8 H), 2,3 (s, 3 H), 2,31 (s, 3 H), 2,15 (s, 3 H), 2,0 (s, 3 H). ES-MS spektrum: pro C₂ H₂₈CI₂N₂O vypočteno: 08,2, nalezeno: 09,1 (M+H)⁺.

Příklad 26

Biologická testování

Nádorové buňky lidského karcinomu prsu (MDA-35), které byly adaptovány na růst jako pevné nádory u nahých myší, byly implantovány injekcí suspenze nádorových buněk (3,5.10® buněk) do tuku tlapek nahých myších samic (Taconic Labs). Bylo použito pět myší ve skupině. Když byl nádor hmatatelný, dva až tři týdny po implantaci, byly zvířatům injekčně intravenózně podány cytotoxické sloučeniny podle tohoto vynálezu třikrát za týden pň MTD. Objemy nádorů byly měřeny kaliperem týdně během podávání dávek a dvý týdny po tom, co bylo dávkování zastaveno. Objem nádoru, za předpokladu za má poloelipsovitý tvar, byl vypočten použitím rovnice:

objem = 1/2.(L/2.W/2.H)/3k, kde L znamená délku, W znamená šířku a H znamená výšku nádoru. Zvířata byla odvážena a během testu bylo sledováno celkové zdraví. Když nádory dosáhly průměru přibližně 15 mm (kolem 800 mm³) nebo byly nekrotické nebo když zvířata umírala, byla zvířata usmrcena asfyxií CO₂.

Byly vypočteny objemy nádorů u zvířat, které byly ošetřeny různými cytotoxickými sloučeninami podle tohoto vynálezu, a tyto objemy byly srovnány s objemy

získanými od zvířat, která byla ošetřena chlorumbucilem (protinádorovým léčivem obsahujícím aromatický dusíkový yperit), a také s těmi, které byly získány od neošetřených zvířat. Testované cytotoxické sloučeniny podle tohoto vynálezu vykazovaly nečekaně vysokou účinnost při inhibování růstu nádoru.

Další provedení

Ze shora uvedeného popisu může zručný odborník v oblasti techniky snadno zjistit podstatné znaky předloženého vynálezu, aniž by se odchýlil od ducha a rozsahu tohoto vynálezu, a může provést různé změny a úpravy vynálezu tak, aby ho přizpůsobil různým použitím a stavům. Například linkery, které obsahují heteroatomy, např. -CH=N-CH₂- nebo -N=N-CH₂-, i když nejsou shora popsány, mohou fungovat také jako část konjugovaného systému cytotoxické sloučeniny podle tohoto vynálezu. V rozsahu těchto nároků jsou tedy také jiná provedení.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Sloučenina sestávající z proaktivní alkylační části obsahující skupinu přitahující elektrony, bioreduktivní části obsahující alespoň dvě dvojné vazby a linkeru spojujícího proaktivní alkylační část a bioreduktivní část, při čemž linker znamená methylenovou skupinu, uhlovodíkový řetězec se 3 atomy uhlíku obsahující dvojnou vazbu nebo uhlovodíkový řetězec s 5 atomy vodíku obsahující dvě alternativní dvojné vazby, dvojné vazby bioreduktivní části, bud samy o sobě, jestliže linker znamená methylenovou skupinu, nebo společně s dvojnou vazbou linkeru se 3 atomy uhlíku nebo dvojnými vazbami linkeru s 5 atomy uhlíku tvoří konjugovaný systém, který umožňuje elektronům téci z bioreduktivní části do skupiny přitahující elektrony proaktivní alkylační části po redukci bioreduktivní části, čímž se rozpadne vazba mezi skupinou přitahující elektrony a linkerem a proaktivní alkylační část se převede na aktivní alkující sloučeninu, nebo její sůl.
2. Sloučenina podle nároku 1, v němž proaktivní alkylační část znamená arylovou skupinu substituovanou esterem, urethanem nebo uhličitanem a di(halogenethyl)aminovou skupinou a každá ze zbývajících poloh arylu je nezávisle popřípadě substituována alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, aminovou skupinou, aminoalkylem, hydroxylem, hydroxyalkylem, alkoxyskupinou, oligoalkylenglykolem, aryloxyskupinou, aralkoxyskupinou, heteroaryloxyskupinou, heteroaralkoxyskupinou, esterem, amidovou skupinou, aralkoxykarbonylaminovou skupinou, ureidovou skupinou, thioskupinou, alkylthioskupinou, arylthioskupinou, aralkylthioskupinou, heteroarylthioskupinou nebo heteroaralkylthioskupinou, nebo její sůl.
3. Sloučenina podle nároku 1, v němž bioreduktivní část je převedena redukcí na alkylační sloučeninu, nebo její sůl.

• ·
4. Sloučenina podle nároku 3, v němž bioreduktivní část znamená chinon, každá z neoxo-poloh chinonu je nezávisle popřípadě substituována alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, aminovou skupinou, aminoalkylem, hydroxylem, hydroxyalkylem, alkoxyskupinou, aryloxyskupinou, aralkoxyskupinou, heteroaryloxyskupinou, heteroaralkoxyskupinou, karboxylátem, acyloxyalkylem, esterem, acyloxyalkylem, amidovou skupinou, amidoalkylem, sulfonamidoskupinou, sulfonylaminovou skupinou, thioskupinou, alkylthioskupinou, arylthioskupinou, aralkylthioskupinou, heteroarylthioskupinou nebo heteroaralkylthioskupinou, a jestliže jak poloha C-2 tak poloha C-3 nebo jak poloha C-5 tak poloha C~6 je substituována, tyto dva substituenty jsou popřípadě spolu navzájem spojeny, takže tvoří popřípadě substituovaný kruh, nebo její sůl.
5. Sloučenina podle nároku 4, v němž každá z neoxo-poloh chinonu je nezávisle popřípadě substituována alkylem, aminovou skupinou, aminoalkylem, alkoxyskupinou, acyloxyalkylem nebo hydroxyalkylem, nebo její sůl.
6. Sloučenina podle nároku 5, v němž proaktivní alkylační část znamená fenyl substituovaný esterovou skupinou a di(chlorethyl)aminovou skupinou, které jsou navzájem k sobě v meta nebo para polohách, a každá ze zbývajících poloh fenylu je nezávisle popřípadě substituována alkylem, alkoxyskupinou, oligoalkylenglykolem, aryloxyskupinou, heteroaryloxyskupinou nebo aminovou skupinou, nebo její sůl.
7. Sloučenina podle nároku 6, v němž fenyl je substituován alkylem, alkoxyskupinou nebo oligoalkylenglykolem v poloze ortho k di(chlorethyl)aminové skupině, nebo její sůl.
8. Sloučenina podle nároku 4, v němž jak poloha C-2 tak C-3 nebo jak jak poloha C-5 tak C-6 jsou substituovány a tyto dva substituenty spolu spojené tvoří popřípadě substituovaný kruh, nebo její sůl.

φφφφ φφφ φφ ·· • φ » · φφφ φ · φ φ · • · · φ φ φ φ φ • · · φ ΦΦΦΦ·· • φ · · φφφφ • ΦΦΦ ···· Φ·· φφφφ φφ φφ
9. Sloučenina podle nároku 8, v němž proaktivní alkylační část znamená fenyl substituovaný esterovou skupinou a di(chlorethyl)aminovou skupinou, které jsou navzájem k sobě v meta nebo para polohách, a každá ze zbývajících poloh fenylu je nezávisle popřípadě substituována alkylem, alkoxyskupinou, oligoalkylenglykolem, aryloxyskupinou, heteroaryloxyskupinou nebo aminovou skupinou, nebo její sůl.
10. Sloučenina podle nároku 9, v němž fenyl je substituován alkylem, alkoxyskupinou nebo oligoalkylenglykolem v poloze ortho k di(chlorethyl)aminové skupině, nebo její sůl.
11. Sloučenina podle nároku 4, v němž proaktivní alkylační část znamená fenyl substituovaný esterovou skupinou, urethanem nebo uhličitanem a di(halogenethyl)aminovou skupinou, a každá ze zbývajících poloh fenylu je nezávisle popřípadě substituována alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, aminovou skupinou, aminoalkylem, hydroxylem, hydroxyalkylem, alkoxyskupinou, oligoalkylenglykolem, aryloxyskupinou, aralkoxyskupinou, heteroaryloxyskupinou, heteroaralkoxyskupinou, esterem, amidovou skupinou, aralkoxykarbonylaminovou skupinou, ureidoskupinou, thioskupinou, alkylthioskupinou, arylthioskupinou, aralkylthioskupinou, heteroarylthioskupinou nebo heteroaralkylthioskupinou, nebo její sůl.
12. Sloučenina podle nároku 11, v němž di(halogenethyl)aminová skupina znamená di(chlorethyl)aminovou skupinu, nebo její sůl.
13. Sloučenina podle nároku 12, v němž fenyl je substituován esterem, nebo její sůl.
14. Sloučenina podle nároku 13, v němž ester je v para nebo meta poloze vzhledem k di(chlorethyl)aminové skupině, nebo její sůl.

·· ·β

9 9 9 9 · • » • · · • 9 99 99

9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9

9999 99 99
15. Sloučenina podle nároku 14, v němž fenyl je substituován alkylem, arylem, heteroarylem, alkoxyskupinou, aryloxyskupinou, heteroaryloxyskupinou nebo oligoalkylenglykolem v poloze ortho k di(chlorethyl)aminové skupině, nebo její sůl.
16. Sloučenina podle nároku 1, v němž proaktivní alkylační část znamená fenyl substituovaný esterovou skupinou, urethanem nebo uhličitanem a di(halogenethyl)aminovou skupinou, a každá ze zbývajících poloh fenylu je nezávisle popřípadě substituována alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, aminovou skupinou, aminoalkylem, hydroxylem, hydroxyalkylem, alkoxyskupinou, oligoalkylenglykolem, aryloxyskupinou, aralkoxyskupinou, heteroaryloxyskupinou, heteroaralkoxyskupinou, esterem, amidovou skupinou, aralkoxykarbonylaminovou skupinou, ureidoskupinou, thioskupinou, alkylthioskupinou, arylthioskupinou, aralkylthioskupinou, heteroarylthioskupinou nebo heteroaralkylthioskupinou, nebo její súl.
17. Sloučenina podle nároku 16, v němž fenyl je substituován esterem a di(chlorethyl)aminovou skupinou a ester je v poloze para nebo meta vzhledem k di(chlorethyl)aminové skupině, nebo její sůl.
18. Sloučenina podle nároku 17, v němž fenyl je substituován alkylem, arylem, heteroarylem, alkoxyskupinou, aryloxyskupinou, heteroaryloxyskupinou nebo oligoalkylenglykolem v poloze ortho k di(chlorethyl)aminové skupině, nebo její sůl.
19. Sloučenina podle nároku 18, v němž bioreduktivní část znamená chinon, každá z neoxo-poloh chinonu je popřípadě substituována alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, aminovou skupinou, aminoalkylem, hydroxylem, hydroxyalkylem, alkoxyskupinou, aryloxyskupinou, aralkoxyskupinou, heteroaryloxyskupinou, heteroaralkoxyskupinou, karboxylátem, acyloxyalkylem, esterem, acyloxyalkylem, amidovou skupinou, amido39
20.
21.

20.

·· «· • 9 9 · • · • · · • · ** »· ·»· * * ♦ · « · · · • · 9 9 9

9 9 9 » • 4 ·· alkylem, sulfonamidem, sulfonylaminem, thioskupinou, alkylthioskupinou, arylthioskupinou, aralkylthioskupinou, heteroarylthioskupinou nebo heteroaralkylthioskupinou, a jestliže obě polohy C-2 a C-3 nebo obě polohy C-5 a C-6 jsou substituovány, tyto dva substituenty popřípadě jsou spolu spojeny za vzniku popřípadě substituovaného kruhu, nebo její sůl.

Sloučenina podle nároku 19, v němž každá neoxo-poloha chinonu je nezávisle popřípadě substituována alkylem, aminovou skupinou, aminoalkylem, alkoxyskupinou, acyloxyalkylem nebo hydroxyalkylem, nebo její sůl.

Sloučenina podle nároku 19, v němž obě polohy C-2 a C-3 nebo obě polohy C-5 a C-6 jsou substituovány a tyto dva substituenty jsou spolu spojeny za vzniku popřípadě substituovaného kruhu, nebo její sůl.

Chinonový derivát následujícího obecného vzorce

O

O v němž každé A, B, C i D nezávisle znamená skupinu -R¹, -R-NR¹R², -O-R¹, -R-OH, -C(=O)O-R¹, R-O-C(=O)R¹, -C(=O)-N¹R¹R², -R-NR¹-C(=O)R²,

-SO₂-NR¹R², -N=SO2, -S-R¹ nebo -L-W-Ph-N(CH2CH₂X)₂, popřípadě A a B společně tvoří 5- až 6-členný kruh kondenzovaný s chinonovým kruhem, jestliže žádný ze substituentů A a B neznamená skupinu -L-W-Ph-N(CH₂CH₂X)₂, a C a D společně tvoří 5- až 6-členný kruh kondenzovaný s chinonovým kruhem, jestliže žádný ze substituentů C a D neznamená skupinu -L-W-Ph-N(CH₂CH₂X)₂, kde každá R nezávisle znamená alkyl nebo je vynechána, každá R¹ a R² nezávisle znamená atom vodíku, alkyl, alkenyl, aryl, aralkyl, heteroaryl nebo heteroaralkyl, L znamená skupinu -(CR³=CR⁴)_n-CR⁵R⁶, kde každá ze skupin R³, R⁴, R⁵ a R⁶ nezávisle znamená atom vodíku, alkyl, alkenyl, aryl, aralkyl, heteroaryl, heteroaralkyl nebo -(O-alkyl)^, a n znamená číslo 0, 1 nebo 2, W znamená skupinu -O-C(=O)-, -O-C(=O)-NR¹- nebo -O-C(=O)O-, Ph znamená fenylovou skupinu, popřípadě substituovanou alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, skupinou -R-NR¹R², -OH, -(-O-alkyl)_v5, -O-aryl, -O-aralkyl, -O-heteroaryl, -O-heteroaralkyl, -R-OH, -C(=O)O-R¹, -O-C(=O)R¹, -C(=O)-NR¹R², -NR²-C(=O)R², -NR¹-C(=O)O-R²,

-NR¹-C(=O)-NR¹R² nebo -S-R¹, a X znamená atom halogenu, s tím, že jestliže žádný ze substituentů A a B nebo C a D netvoří kruh kondenzovaný s chinonovým kruhem, potom alespoň jeden ze substituentů A, B, C nebo D znamená skupinu -L-W-Ph-N(CH₂CH₂X)2, a dále s tím, že jestliže žádný ze substituentů neznamená skupinu -L-W-Ph-N(CH₂CH₂X)₂, potom A a B nebo C a D tvoří kruh kondenzovaný s chinonovým kruhem, při čemž tento kondenzovaný kruh obsahuje dvojnou vazbu mezi dvěma atomy kruhu a je substituován na jednom nebo dvou atomech louhu skupinou -L-W-Ph-N(CH₂CH₂X)₂ a uvedená dvojná vazba společně s dvojnými vazbami chinonového kruhu tvoří konjugovaný systém, nebo jeho sůl.
23. Chinonový derivát podle nároku 22, v němž každý ze substituentů A, B, C a D nezávisle znamená skupinu -R¹, -R-NR¹R², -O-R¹, R-O-C(=O)R¹ nebo -R-OH, nebo jeho sůl.
24. Chinonový derivát podle nároku 23, v němž W znamená skupinu -O-C(=O)-, X znamená atom chloru a n znamená číslo 0, nebo jeho sůl.
25. Chinonový derivát podle nároku 24, v němž W a skupina -N(CH₂CH₂X)₂ jsou navzájem v para nebo meta poloze, nebo jeho sůl.
26. Chinonový derivát podle nároku 25, v němž fenylová skupina je substituována alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, skupí• · nou -(-O-alkyl^.5, -O-aryl, -O-aralkyl, -O-heteroaryl nebo -O-heteroaralkyl v poloze ortho ke skupině -N(CH₂CH₂X)2, nebo jeho sůl.
27. Chinonový derivát podle nároku 22, v němž alespoň jeden ze substituentů A, B, C a D znamená skupinu -L-W-Ph-N(CH₂CH₂X)₂, nebo jeho sůl.
28. Chinonový derivát podle nároku 27, v němž žádný ze substituentů A a B nebo C a D netvoří kruh kondenzovaný s chinonovým kruhem a pouze jeden ze substituentů A, B, C a D znamená skupinu -L-W-Ph-N(CH₂CH₂X)₂, nebo jeho sůl.
29. Chinonový derivát podle nároku 28, v němž W znamená skupinu -O-C(=O)-, X znamená atom chloru, n znamená číslo 0, W a skupina -N(CH₂CH₂X)₂ jsou navzájem v para nebo meta poloze a fenylová skupina je substituována alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, skupinou -(-O-alkyl)^, -O-aryl, -O-aralkyl, -O-heteroaryl nebo -O-heteroaralkyl v poloze ortho ke skupině -N(CH₂CH₂X)₂, nebo jeho sůl.
30. Chinonový derivát podle nároku 22, v němž substituenty A a B nebo C a D tvoří kruh kondenzovaný s chinonovým kruhem, nebo jeho sůl.
31. Chinonový derivát podle nároku 30, v němž W znamená skupinu -0-0(=0)-, X znamená atom chloru a n znamená číslo 0, nebo jeho sůl.
32. Chinonový derivát podle nároku 31, v němž W a skupina -N(CH₂CH₂X)₂ jsou navzájem v para nebo meta poloze, nebo jeho sůl.
33. Chinonový derivát podle nároku 32, v němž fenylová skupina je substituována alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, skupinou -(-O-alkyl)^, -O-aryl, -O-aralkyl, -O-heteroaryl nebo -O-heteroaralkyl v poloze ortho ke skupině -N(CH₂CH₂X)₂, nebo jeho sůl.

• ·
34. Chinonový derivát podle nároku 30, v němž žádný z substituentů A, B, C a D neznamená skupinu -L-W-Ph-N(CH₂CH₂X)2, nebo jeho sůl.
35. Chinonový derivát podle nároku 34, v němž W znamená skupinu -O-C(=O)-, X znamená atom chloru, n znamená číslo 0, W a skupina -N(CH₂CH₂X)₂ jsou navzájem v para nebo meta poloze a fenylová skupina je substituována alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, skupinou -(-O-alkyl)i^, -O-aryl, -O-aralkyl, -O-heteroaryl nebo -O-heteroaralkyl v poloze ortho ke skupině -N(CH₂CH₂X)₂, nebo jeho sůl.
36. Chinonový derivát podle nároku 2, v němž W znamená skupinu -O-C(=O)-, X znamená atom chloru a n znamená číslo 0, nebo jeho sůl.
37. Chinonový derivát podle nároku 36, v němž W a skupina -N(CH₂CH₂X)₂ jsou navzájem v para nebo meta poloze, nebo jeho sůl.
38. Chinonový derivát podle nároku 37, v němž fenylová skupina je substituována alkylem, alkenylem, arylem, aralkylem, heteroarylem, heteroaralkylem, skupinou -(-O-alkyQvs, -O-aryl, -O-aralkyl, -O-heteroaryl nebo -O-heteroaralkyl v poloze ortho ke skupině -N(CH₂CH₂X)₂, nebo jeho sůl.
39. Chinonový derivát podle nároku 38, v němž každý ze substituentů A, B, C a D nezávisle znamená skupinu -R¹, -R-NR¹R², -O-R¹, -R-O-C(=O)R¹ nebo -R-OH, nebo jeho sůl.
40. Chinonový derivát podle nároku 39, v němž alespoň jeden ze substituentů A, B, C a D znamená skupinu -L-W-Ph-N(CH₂CH₂X)2, nebo jeho sůl.

• · ··
41. Chinonový derivát podle nároku 40, v němž ani substituent A a B ani C a D netvoří kruh kondenzovaný s chinonovým kruhem a pouze jeden ze substituentů A, B, C a D znamená skupinu -L-W-Ph-N(CH₂CH₂X)2, nebo jeho sůl.
42. Chinonový derivát podle nároku 38, v němž substituenty A a B nebo C a D tvoří kruh kondenzovaný s chinonovým kruhem, nebo jeho sůl.
43. Chinonový derivát podle nároku 42, v němž žádný z substituentů A, B, C a D neznamená skupinu -L-W-Ph-N(CH₂CH2X)2, nebo jeho sůl.
44. Chinonový derivát podle nároku 22 následujícího vzorce 8, 9,12 nebo 13.