CZ20002203A3

CZ20002203A3 - Derivát cyklického peptidu jakožto inhibitor integrinu

Info

Publication number: CZ20002203A3
Application number: CZ20002203A
Authority: CZ
Inventors: Jörg Meyer; Berthold Nies; Dirk Finsinger; Alfred Jonczyk; Horst Kessler; Martin Kantlehner
Original assignee: Merck Patent Gmbh
Priority date: 1998-12-09
Filing date: 1998-12-09
Publication date: 2001-01-17

Abstract

Derivát cyklického peptidu obecného vzorce R - Q- X, kde znamená R cyklo-(Arg-Gly-Asp-Z), přičemž Zje vázán v postranním řetězci na Q, nebo pokud Q chybí, na X, Q chybí nebo znamená -[CO-R‘-NH-]m, -[NH-R'-CO-]m, -[CO-R'-CO- ]m, -(CO.CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2.NH-)n, -(NH-CH2-OCH2CH2-CO-)n, -(NH-CH2CH2-O-CH2CH2-CO-)n nebo -(COCHz-O-CHzCHrO-CHrCHz-NH-MCO-RkNH-]™ X skupinu -CO-CH=CH2, -CO-C(CH3)=CH2,-NH-CH-CH2, - NH-C(CH3)=CH2 nebo -NH- (CH2)P-SR10; Z zbytek aminokyseliny nebo di- nebo tripeptidu, přičemž aminokyseliny jsou voleny ze souboru zahrnujícího Ala, Aan, Asp, Arg, Cys. Gin, Glu, Gly, His Homo-Phe, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Phg, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val a skupinu M a jeho soli je jakožto inhibitor integrinu vhodný pro ošetřováníporuch, způsobených implantáty, defektů, zánětů, osteolytických poruch, jako je osteoporóza, trombózy, srdečního infarktu a arteriosklerózy a pro urychlení integračního procesu implantátu nebo biokompaktibilního povrchu do tkáně.

Description

Derivát cyklického peptidu jakožto inhibitor integrinu

Oblast techniky

Vynález se týká derivátu cyklického peptidu obecného vzorce I

R - Q - X ( I) kde znamená

R cyklo-(Arg-Gly-Asp-Z), přičemž Z je vázán v postranním řetězci na Q, nebo pokud Q chybí, na X,

Q chybí nebo znamená - [CO-R^NH-Jn, . - [NH-R^CO-Jn,,

-[CO-R^CO-k, - (CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-) _n/

- (NH-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-CO-) _n,

- (NH-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂-CO-)_{R ne}bo

- (CO-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-) _n- [CO-R¹-NH-] _m,

X Skupinu -C0-CH=CH₂, -C0-C(CH3)=CH₂, -NH-CH=CH₂,

-NH-C(CH₃>=CH₂ nebo -NH-(CHtelp-SR¹⁰,

Z na sobě nezávisle zbytek aminokyseliny nebo zbytek dipeptidu nebo tripeptidu, přičemž aminokyseliny jsou na sobě nezávisle voleny ze souboru zahrnujícího Ala, Asn, Asp, Arg, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Homo-Phe, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Phg, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val a M, přičemž tyto aminokyseliny jsou popřípadě derivatizovány a aminokyselinové zbytky jsou navzájem vázány peptidovým způsobem prostřednictvím ce - am i noskup i n nebo ce-karboxylo» 44

4

444

4 « • 4

4444

4 • 4

4

4 4 vých skupin, a skupina M je obsažena vědy,

M skupinu NH(R^S)-CH(R³)-COOH,

R¹ chybí nebo znamená skupinu R², R⁹, R²-R⁹-R² nebo fenylenovou skupinu, která je nesubstituovaná nebo má jeden nebo dva substituenty R⁵, přičerně řetězce R⁵ jsou vědy na sobě nezávislé,

R² skupinu alkylenovou s 1 aě 10 atomy uhlíku, přičemž jedna nebo dvě methylenové skupiny jsou popřípadě nahrazeny atomem síry, skupinou -CH=CH- nebo -C=C-,

R³ skupinu -R⁵-R⁴, -R⁶-R⁴ nebo -R⁷-R⁴,

R⁴ skupinu OH, NH₂, SH nebo COOH,

R⁵ skupinu alkylenovou s 1 aě 6 atomy uhlíku,

R° skupinu alkylenfenylenovou se 7 aě 14 atomy uhlíku,

R⁷ skupinu alkylenfenylalkylenovou s 8 aě 15 atomy uhlíku,

R^s atom vodíku nebo skupinu A nebo alkylenfenylovou se 7 aě 12 atomy uhlíku,

R⁹ skupinu cykloalkylenovou se 3 aě 7 atomy uhlíku,

R^w atom vodíku nebo skupinu chránící atom síry, skupinu alkylovou s 1 aě atomy uhlíku,

Hal atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu,

·· ·· • · · • · · • · · man na sobě nezávisle 0, 1, 2 nebo 3,

P 1,2 nebo 3, přičemž pokud jde o zbytky opticky aktivních aminokyselin a derivátů aminokyselin, jsou zahrnuty D a L formy a jejich solí.

Dosavadní stav techniky

Podobné deriváty cyklických peptidů jako podle vynálezu jsou popsány například v německém patentovém spise číslo DE 43 10 643 a DE 195 38 741.

Sloučen i nu cyklo-(Art-Gly-Asp-Glu(6-Ahx-Cys-NH2)-D-Val) popsal D. Delforge a kol. (Anal. Biochem. 242, str. 180 až 186, 1996).

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je shora charakterizovaný derivát cyklického peptidu jakožto inhibitor integrinu.

Vvynález je založen na poznatku, že sloučeniny obecného obecného vzorce I mají hodnotné vlastnosti, především ty z uvedených sloučenin, které se hodí pro výrobu léčiv.

Zjistilo se, že sloučeniny obecného vzorce I a jejich solí mají velmi hodnotné farmakologické vlastnosti spolu s dobrou snášenlivostí. Působí zvláště jako inhibitory integrinu, přičemž především inhibují vzájemné působení a.v, &3~ nebo £5integrinových receptorů s ligandy, například vazbu fibrinogenu na <33-integrinový receptor. Obzvláštní účinnost vykazují sloučeniny obecného vzorce I v případě integr i nů afvíks, oevřís, otiibP3

9

• · • · 9 9 9 9 jakož také ofvpi, civíte a otvPs .

Toto působení lze doložit například způsobem, který popsal J. W. Smith a kol. (J. Biol. Chem. 265, str. 12267 až 12271, 1990).

Závislost původu angiogeneze na vzájemné působení vaskulární ch integrinů a extrace1ulárnich matricových proteinů popsal P.C. Brooks, R.A. Clark a D.A. Cheresh (Science 264, str. 569 až 571, 1994).

Možnost využití inhibice tohoto vzájemného působení a tím navození apoptosy (programované umírání buněk) angiogenních vaskulárních buněk působením cyklického peptidu popsal P.C. Brooks, A.M. Montgomery, M. Rosenfeld, R.A. Reisfeld, T.-Hu, G. Klier a D.A. Cheresh (Cell 79, str. 1157 až 1164, 1994).

Sloučeniny obecného vzorce I, které blokují interakcí integrinových receptorů a ligandů, jako fibrinogen k fibrinogenovému receptoru (glykoprotein Ilb/IIIa), zabraňují jakožto GPIIb/IIIa antagonisty rozšiřování nádorových buněk metastázováním. Je to doloženo následujícím pozorováním.

K rozšiřování nádorových buněk z lokalizovaného nádoru do vaskulárního systému dochází vytvářením mikroaregátů (mikrothrombů) jako následek vzájemného působení nádorových buněk a krevních destiček. Nádorové buňky jsou odstíněny ochranou v mikroagregátu a nejsou od buněk imunitního systému rozpoznány.

Mikroagregáty se mohou usazovat na stěnách cév, tím usnadňují další penetraci nádorových buněk do tkáně. Jelikož je vytváření mikrotrombů zprostředkováváno vázáním fibrinogenu na fibrinogenové receptory na aktivovaných krevních destičkách, mohou být GPIIa/IIIb antagonisty považovány za účinné inhibi5 • ·· 00 00 »· -· 0 0 0 0 0 0 0 • · · · ··· 0 00 0

0·00 00 00 000 ·0 0 • 0000 0000 ··· 0 00 00 00 00 tory metastáz.

(Meth)akrylátové skupiny slouží k vazbě peptidů kovalentně na biokompatibilni povrch například implantátu, které mají volné akrylátové nebo methakrylátové skupiny, které mají například výrobky lisované 2 poly(methylmeth)akrylátu (kostní cementy) nebo vrstvy obsahující akrylát nebo methakrylát, například na kovovém povrchu.

V souhlase s tím thiolové skupin slouží peptidovým vazbám například na zlaté povrchy.

Vynález se proto týká zvláště sloučenin obecného vzorce I pro kovalentní vázání prostřednictvím funkční skupiny zbytku X na biokompatibilni povrchy.

Pokud znamená X skupinu -NH-(CH2)p-SR¹⁰, je funkční skupinou, která se váže na povrch, skupina SH, pokud znamená R^w atom vodíku.

Peptidy podle vynálezu tedy umožňují biofunkcionalizaci biomateriálů, zvláště implantátů pro všechny možné orgány tím, že se povléknou, přičemž se zvláště stimuluje adheze buněčných druhů, které v každém případě mají sklon realizovat tkáňovou integraci vhodného biomateriálu. Použitím takových povlaků se dosahuje po zavedení do těla urychlení a zvýšení integrace různých systémů biomateriály/implantáty se zlepšenou dlouhodobou stabilitou.

Proto se poukazuje také na současně podávanou přihlášku vynálezu, ve které se popisují vhodné biomateriály a jejich povlékání sloučeninami podle vynálezu.

Peptidy podle vynálezu se selektivně váží na integriny. Po imobilizaci na biokompatibilnich povrchách, například na β

• flfl flfl flfl flfl

-· flflfl flflflfl • · · · flflfl · · · · • flflfl fl· flfl flflfl flfl · • fl··· flflflfl » · flfl flfl flfl flfl implantátech, stimulují adhezi buněk, které nesou integriny. Po nanesení sloučenin na povrchy mohou tyto buňky selektivně stimulovat vazbu, která podporuje dosažení integrace implantátu do přírodní tkáně po implantaci. Například osteoblasty, osteoklasty a endotelové buňky jsou buněčnými druhy nesoucími

Vynález se tedy týká sloučenin obecného vzorce I jakožto integrinových inhibitorů pro selektivní buněčné obohacení na implantátech.

Po zakotvení na povrchu biokompatibi 1 ηího implantátu se sloučeniny obecného vzorce I mohou používat jakožto léčiva v humánní a ve veterinární medicíně zvláště se mohou používat jako integrinové inhibitory pro ošetřování poruch, defektů a zánětů způsobených implantáty, jako jsou nepřiměřená nebo zpožděná integrace biomateriálů a implantátů, trombózy způsobená implantáty, poškožení kostí a zubů a také osteolytických poruch, jako je osteoporóza, trombózy, srdečního infarktu, arter iosklerózy, při hojení ran pro napomáhání procesu hojení a také pro urychlení a pro podporu integračních procesů implantátu nebo biokompatibilni ho povrchu do tkáně.

Sloučeniny obecného vzorce I se mohou používat jakožto antimikrobiálně působící látky při operacích, při kterých se používá biologického materiálu, implantátů, katheteru nebo srdečních stimulátorů. Přitom tyto sloučeniny působí antiseptický. Účinnost antimikrobiální aktivity se může doložit způsobem, který popsal P. Valentin-Weigund a kol. (Infection and Immunity, str. 2851 až 2855, 1988).

Vynález se tak týká sloučenin obecného vzorce I jakožto integrinových inhibitorů pro ošetřování poruch způsobených implantáty, defektů, zánětů a osteolytických poruch, jako je osteoporóza, trombózy, srdečního infarktu, arteriosklerózy a ta- 7 φ · • ΦΦΦ φ

φ φφ ·* φφ φ* φφφ φφφφ φ φφφφ φ φφ φ φ φφ φφφ φφ φ φφφφ φφφφ φφ φφ φφ φφ ké pro urychlení a podporu integračních procesu implantátu nebo biokompatibilniho povrchu do tkáně.

Vynález se také týká použití sloučenin obecného vzorce I pro výrobu léčiv pro ošetřování poruch způsobených implantáty, defektů, zánětů a osteolytických poruch, jako je osteoporósa, trombózy, srdečního infarktu, arteriosk1erózy a také pro urychlení a podporu integračních procesů implantátu nebo biokompat ibi lni ho povrchu do tkáně.

Vhodné peptidy obsahující thiozakotvujicí skupiny, se mohou kovalentně vázat na pozlacené nosiče, jako jsou například implantáty, prostředí pro afinitní chromatografií nebo mikrotitrové destičky.

Vynález se také týká použití nových sloučenin obecného vzorce I v afinitní chromatografií pro eluování vázaných prote i nů.

Sloučeniny podle vynálezu se zvláště mohou používat jakožto integrinové ligandy pro eluování integrinů.

Uváděné zkratky zbytků aminokyselin znamenají zbytky následujících aminokyselin:

Abu 4-aminomáselná kyselina

Aha 6-aminohexanová kyselina, 6-aminokapronová kyselina

Ala alanin

Asn asparagin

Asp asparagová kyselina

Arg arginin

Cys cystein

Dab 2,4-diaminomáselná kyselina

Dap 2,3-diami noprop i onová kyše1 i na

Gin glutamin e * φφ

8« • Φ · • ·ΦΦ· • · • · Φ 4 ** «* • · · • Φ ΦΦΦ • · Φ Φ φ • Φ · Φ

ΦΦ · Φ

Φ Φ • Φ a Φ Φ φ φ • Φ

Φ φ φ >

φ φ a φ

Glp	pyroglutamová kyselina
Glu	glutamová kyselina
Gly	glycin
His	histidin
homo-Phe	homo-fenylalanin
Ile	isoleucin
Leu	1euc i n
Lys	1 ys i n
Met	methionin
Nle	norleucin
Orn	ornitin
Phe	fenylalanin
Phg	fenylglycin
4-Hal-Phe	4-halogenfenylalanin
Pmc	2,2,5,7,8-pentamethylchroman-6-sulfonyl
Pro	pro1 i n
Ser	serin
Thr	threon i n
Trp	tryptofan
Tyr	tyros i n
Val	val i n

Kromě toho se ještě uvádějí skratky, které mají následu jící význam:

Ac

BOC

CBZ nebo Z

DCC1

DMF

EDC1

Et

FCA

FITC

Fmoc

FTH acety1 terč.-butoxykarbonyl bensy1oxykarbonyl dicyklohexylkarbodi imid dimethylformamid

N-ethyl -Ν,N -(dimethy1aminopropy1)karbodi imid, ethyl fluoresceinkarboxylová kyselina f1uoresce i n i soth i okyanát

9-fluorenylmethoxykarbony1 f1uoresce i nth i omočov i na

	• « - Q>·- · · · • ·«·· 4 • · ··· ·	** ftft »♦ ·· • · · ftftft ft · ftftft · ft · • ftft ftftft ftft • ftftft ftftft • ft ftft ftft ftc
HOBt	1 -hydroxybenzotr i azo1
HONSu	N-hydroxysukci n i m i d
Me	methyl
MBHA	4-methylbenzhydrylamin
Mtr	4-methoxy-2,3,6-trimethylfenylsulfonyl
OBut	terč.-butylester
Oct	oktanoy1
OMe	methylester
OEt	ethy1 ester
POA	fenoxyacetyl
Pbf	pentamethylbenzofurany1
Sal	salicyloyl
Su	suke i nyl
TFA	trifluoroctovou kyselinu
Trt	trityl (trifenylmethyl).

Pokud shora uvedené aminokyseliny mohou být v několika enantiomerních formách, například vědy jako podíl sloučenin obecného vzorce I podle vynálezu, všchny tyto formy a také jejich směsi (například DL formy) vynález zahrnuje. Kromě toho mohou být aminokyseliny, například jako podíl sloučenin obecného vzorce I, chráněny o sobě známými chránícími skupinami. Zvláště modifikace případného postranního řetězce argininu například v případě nepept i dových civ/33 -antagon i stů (například R. Keenan a kol., Abstr. Pap. 211 ACS National Meeting, (New Orleans, Sp. st. a.) 1996, MÉDI 236) se rovněž mohou používat v případě cyklopeptidů, například benzimidazolových derivátů místo guanidinové skupiny.

Sloučeniny podle vynálezu zahrnují také tak zvané prodrogové deriváty, to znamená například alkylovými nebo acylovými skupinami, cukry nebo oligopeptidy obměněné sloučeniny obecného vzorce I, které se v organismu rychle štěpí na účinné sloučeniny podle vynálezu. Do této skupiny patří také biologicky odbouráte1 né polymerní deriváty sloučenin podle vynálezu popsané v literatuře (například J. Pharm. 115, str. 61 až 67,

1995).

Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají shora uvedený význam, nebo její soli spočívá podle vynálezu v tom, že

a) pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I, kde Q chybí nebo znamená skupinu -[CO-R¹-NH-lm,

-(CO-CH₃-o-CH2CH2-o-CH2CH2-NH-)n nebo - ( CO-CH3-0-CH2CH2-0-CH2CH2-NH-)_n-(CO-R¹-NH-1_m,

X skupinu -C0-CH=CH2 nebo -CO-C(CH3>=CH₂ a R má shora uvedený význam

i) se sloučenina obecného vzorce II

R-H (II) kde R má shora uvedený význam, nechává reagovat se sloučeninou obecného vzorce III

L-Q-X (III) kde

Q chybí nebo znamená skupinu -[CO-R¹-NH-]_m,

- ( CO-CH₂- 0-CH2CH2-0-CH2CH2-NH-)_n nebo -(CO-CH2-O-CH2CH2-0-CH2CH2-NH-)_n-tCO-R¹-NH-]_m,

X znamená skupinu -C0-CH=CH₂ nebo -C0-C(CH₃)=CH₃ a L znamená atom chloru, bromu, jodu nebo volnou nebo rektivní funkčně obměněnou hydroxylovou skupinu, nebo i i) se sloučenina obecného vzorce IV

R-Q-H (IV) • · • · • ·« kde

Q chybí nebo znamená skupinu -[CO-R¹-NH-,

-(CO-CH2-0-CH2CH2-0-CH2CH2-NH-)n nebo -(CO-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-)_n-[CO-R¹-NH-]_m a

R má shora uvedený význam, nechává reagovat se sloučeninou obecného vzorce V

L-X (V) kde znamená

X skupinu -CO-CH=CH2 nebo -CO-C(CH3)=CH2 a L atom chloru, bromu, jodu nebo volnou nebo rektívní funkčně obměněnou hydroxylovou skupinu, nebo

b) pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I, kde

Q chybí nebo znamená skupinu -[NH-R¹-CO-Ím nebo

-[CO-R¹-CO-]_m, -(NH-CH2-CH₂-0-CH2CH2-0-CH2-CO-)n nebo - ( NH-CHz-0-CH2 CHz-O-CH₂ CH2-CO-)_n,

X skupinu -NH-CH=CH2 nebo -NH-C(CH3)=CH2 nebo -NH-(CH2)p-SR¹⁰

R¹⁰ skupinu chránící atom síry a R má shora uvedený význam,

i) se sloučenina obecného vzorce VI

R-L (VI) kde znamená

L atom chloru, bromu, jodu nebo volnou nebo rektivní funkčně obměněnou hydroxylovou skupinu a

R má shora uvedený význam, nechává reagovat se sloučeninou obecného vzorce VII

H-Q-X (VII) • ··· ···· ·« · · · · · · ·· · ······ ·· ··· · · · • ···· ···· • ·· · · · · ·· kde

Q chybí nebo znamená skupinu -[NH-R¹-CO-3m nebo -(NH-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-CO-)n nebo -(NH-CH₂CH₂-0-CH₂CH₂-0-CH2-CO-)η,

X znamená skupinu -NH-CH=CH₂ nebo -NH-C(CH3)=CH₂ nebo -NH-(CH₂)p-SR¹⁰

R¹⁰ znamená skupinu chránící atom síry nebo i i) se sloučenina obecného vzorce VIII

R-Q-L (VIII) kde

Q chybí nebo znamená skupinu -[NH-R¹-CO-lm nebo

-[CO-R¹-CO-3m, -(NH-CH₂-0-CH₂CH₂-0-CH₂CH₂-CO-)_n nebo -( NH-CH₃CH₂-O-CH₂CH₂-0-CH₃-CO-)_n,

L znamená atom chloru, bromu, jodu nebo volnou nebo rekt ivní funkčně obměněnou hydroxylovou skupinu a

R má shora uvedený význam, nechává reagovat se sloučeninou obecného vzorce IX

H-X (IX) kde znamená

X skupinu -NH-CH=CH₂ nebo -NH-C(CH₃)=CH₂ nebo -NH-(CH₂)p-SR¹⁰ a

R¹⁰ skupinu chránící atom síry, nebo

c) se sloučenina obecného vzorce I uvolňuje ze svých funkčních derivátů zpracováním solvolyzačním nebo hydrogenolyzačním činidlem, a/nebo se zásaditá sloučenina nebo kyselá sloučenina obecného vzorce I převádí na svoji sůl zpracováním kyselinou nebo zásadou.

Shora uvedené symboly R, Q, X a L mají význam uvedený u obecných vzorců I, II, III, IV, V, VI, VII, VIII a IX pokud není jinak vysloveně uvedeno.

• ·

Ve shora uvedených vzorcích se míní alkylem především skupina methylová, ethylová, propylová, isopropylová, butylová, isobutylová, sek.butylová nebo terč.butylová, dále také pentylová, 1-, 2- nebo 3-methylbutylová, 1,1-, 1,2- nebo 2,2dimethy1propylová, 1-ethylpropylová, hexylová, 1-, 2-, 3- nebo 1,1-, 1,2-, 1,3-, 2,2-, 2,3- nebo 3,3-dinebo 2-ethylbutylová, 1-ethyl - 1-methylpropylová, 1 -ethy1 -2-methy1propylová a 1,1,2- nebo 1,2,2-trimethyl propyl ová skupina.

- methy1pentylová, methylbutylová, 1Symbol R¹ znamená skupinu R² , R^g, R²-R⁹-R² nebo fenylenovou skupinu, která je nesubstituována nebo má jeden nebo dva substituenty R⁵, přičemž řetězce R⁵ jsou vždy na sobě nezávislé, nebo R¹ chybí. Symbol R¹ znamená zvláště skupinu alkylenovou s 1 až 10 atomy uhlíku.

Alkylenovou skupinou je s výhodou skupina methylenová, ethylenová, butylenová, pentylenová nebo hexylenová, dále také heptylenová, oktylenová, nonylenová nebo decylenová.

Alkylenfenylovou skupinou je s výhodou skupina benzylová nebo fenethylová.

Alkylenfenylalkylenovou skupinou je s výhodou skupina 4methylenbenzylová nebo 4-ethylenbenzylová skupina.

Symbol Q znamená s výhodou například zbytek kyseliny 6-aminohexanové (6-aminokapronové), jantarové kyseliny, skupinu -(CO-CH₂-0-CH2CH3-0-CH3CH2-NH-),

-(CO-CH₂-0-CH2CH2-0-CH2CH2-NH-)CO-(CH3)5 -NH-,

-(C0-CH₂)5-NH-)2 nebo • · • · φ

- ( CO-CH₃-Ο-CH2CH2-Ο-CH2CH2-NH-)2CO-(CH2)5 - ΜΗ-.

Symbol Μ znamená s výhodou Dap, Ser, Cys, Asp, D-Asp, Dab, homoserin, homocystein, Glu, D-Glu, Thr, Orn, Lys, D-Lys, 4-aminomethyl-Phe nebo 4-aminomethyl-D-Phe.

Uvedené aminokyseliny nebo aminokyselinové zbytky ve výnamu 2 mohou být také der ivatizovány, přičemž jsou výhodnými N-methylové, N-ethylové, N-propylové, N-benzylové nebo Ccf-methylové deriváty. Deriváty Asp a Glu jsou zvláště methyl-, ethyl- propyl-, butyl-, terč.butyl, neopentyl- nebo benzylestery postranních karboxylových skupin a přídavně jsou výhodnými deriváty Arg, které mohou být substituovány na skupině -NH-C(=NH)-NH2- skupinou acetylovou, benzoylovou, methoxykarbonylovou nebo ethoxykarbonylovou.

Symbol Z znamená s výhodou skupinu M dále s výhodou homoPhe-M, fenylglycin, D-Phe-Μ, D-Trp-M, D-Tyr-M, D-Phe-Lys,

D-Phe-D-Lys, D-Trp-Lys, D-Trp-D-Lys, D-Tyr-Lys,

DrTyr-D-Lys, D-Phe-Orn, D-Phe-Dab, D-Phe-Dap,

D-Phe-D-Orn, D-Phe-D-Dab, D-Phe-D-Dap,

D-Phe-4-aminomethyl-Phe, D-Phe-4-aminomethyl-D-Phe,

D-Trp-4-aminomethyl-Phe, D-Trp-4-aminomethyl-D-Phe,

D-Tyr-4-aminomethyl-Phe, D-Tyr-4-aminomethyl-D-Phe,

D-Phe-Asp, D-Phe-D-Asp, D-Trp-Asp, D-Trp-D-Asp,

D-Tyr-Asp, D-Tyr-D-Asp, D-Phe-Cys, D-Phe-D-Cys,

D-Trp-Cys, D-Trp-D-Cys, D-Tyr-Cys, D-Tyr-D-Cys,

Phe-D-Lys, Trp-D-Lys, Tyr-D-Lys, Phe-Orn, Phe-Dab,

Phe-Dap, Trp-Orn, Trp-Dab, Trp-Dap, Tyr-Orn, Tyr-Dab,

Tyr-Dap, Phe-4-aminomethyl-D-Phe, Trp-4-aminomethylD-Phe, Tyr-4-aminomethyl-D-Phe, Phe-D-Asp, Trp-D-Asp,

Tyr-D-Asp, Phe-D-Cys, Trp-D-Cys, Tyr-D-Cys, Phg-M,

D-Phe-Lys-Gly, D-Phe-M-Gly, D-Trp-Lys-Gly, D-Trp-M-Gly, D-Tyr-Lys-Gly, D-Tyr-M-Gly, D-Phe-Val-Lys, D-Phe-GlyLys, D-Phe-Ala-Lys, D-Phe-Ile-Lys, D-Phe-Leu-Lys, D-Trp-Val-Lys, D-Trp-Gly-Lys, D-Trp-Ala-Lys, • · 00 00 00 00

0·· · 0 · 0*00

0 0 0 0 000 0 0 0 0

0000 00 00 000 00 0

0 00 00 0000

000 0 00 00 00 00

D-Trp-Ile-Lys, D-Trp-Leu-Lys, D-Tyr-Val-Lys, D-Tyr-Gly-Lys, D-Tyr-Ala-Lys, D-Tyr-Ile-Lys, D-Tyr-Leu-Lys.

Skupinou -R^ó-R⁴ je s výhodou skupina 2-, 3- nebo 4-hydroxybenzylová, 2-, 3- nebo 4-aminobenzy1ová, 2-, 3- nebo 4-merkaptobenzylová, 2-, 3- nebo 4-karboxybenzylová, dále také skupina 2-, 3- nebo 4-hydroxyfenethylová, 2-, 3- nebo 4aminofenethylová, 2-, 3- nebo 4-merkaptofenethylová, nebo 2-, 3- nebo 4-karboxyfenethylová.

Cyk1oa1kylenovou skupinou je s výhodou skupina cyk1opropy1enová, 1,2- nebo

1.3- cyklobutylenová, 1,2- nebo 1,3-cyklopentylenová, 1,3- nebo

1.4- cyklohexylenová nebo 1,2-, 1,3- nebo 1,4-cykloheptylenová skupina.

Symbol R¹⁰ znamená skupinu chránící atom vodíku nebo síry, například tri tylovou skupinu.

Skupinou chránící aminoskupinu se míní s výhodou skupina acetylová, propionylová, butyrylová, fenylacetylová, benzoylová, toluylová, skupina POA, methoxykarbony1ová, ethoxykarbonylová, 2,2,2-trichlorethoxykarbonylová, BOC, 2-jodethoxykarbonylová, CBZ ( karbobenzoxyskupina ) , skupina 4-methoxybenzyloxykarbony1ová, skupina FMOC, Mtr, benzylová skupina, Pbf nebo Pmc.

Atomem halogenu se míní atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou mít jedno nebo několik chirálních center a mohou být proto v různých stereoizomerních formách. Obecný vzorec I všechny tyto formy zahrnuje.

• Β » · · Β Β Β ΒΒΒ

ΒΒ ΒΒ • Β Β «

Β Β Β Β

ΒΒ ΒΒ ΒΒ ΒΒ

Vynález se tedy týká zvláště sloučenin obecného vzorce I, ve kterých alespoň jeden ze symbolů má shora uvedený výhodný význam. Některými výhodnými skupinami sloučenin obecného vzorce I jsou následující sloučeniny dílcích vzorců la až If, kde zvlášť neuvedené symboly mají význam uvedený u obecného vzorce I, přičemž znamená v obecném vzorci

a) Z D-Phe-M, Phe-M, D-Trp-M, Trp-M, D-Tyr-M,

Tyr-M, D-Phg-M, Phg-M, D-homo-Phe-M, homo-Phe-M _; D-Phe-Lys-Gly;

b) Z D-Phe-M, Phe-M, D-Trp-M, Trp-M, D-Tyr-M,

Tyr-M, D-Phg-M, Phg-M, D-homo-Phe-M, homo-Phe-M, D-Phe-Lys-Gly,

X -CO-CH=CH₂, -NH-CH=CH₂, / -NH-(CH₂) p-SH;

c) Z , D-Phe-M, Phe-M, D-Trp-M, Trp-M, D-Tyr-M,

Tyr-M, D-Phg-M, Phg-M, D-homo-Phe-M, homo-Phe-M , D-Phe-Lys-Gly,

X -CO-CH=CH₂ , -NH-(CH₂)_P-SH,

b) Z D-Phe-M, Phe-M, D-Trp-M, Trp-M, D-Tyr-M,

Tyr-M, D-Phg-M, Phg-M, D-homo-Phe-M, homo-Phe-M ' D-Phe-Lys-Gly,

X . -CO-CH=CH₂, -NH-CH=CH_2í ... -NH-(CH₂)_p-SH,

R¹ R²,

e) R . cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-M) nebo

D-Phe-Lys-Gly,

X -CO-CH=CH₂,-NH-CH=CH₂ or -NH-(CH₂) p-SH,

f) R : i cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-M) nebo

D-Phe-Lys-Gly,

Q · -CO-(CH₂)s-NH, -CO-(CH₂)₂-CO-, -CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂-NH-, • « ···· • ··

- (CO-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-) 2-CO(CH₂) s-NH-z - (CO-CH₂-O-CH₂CH2-O-CH2CH2-NH-)iCO-(CH₂)s-NH- nebo

-(CO-(CH₂)₅-NH)₂-,

X -CO-CH=CH₂, -NH-CH=CH_{2 a} -NH- (CH₂)_p-SH,

R¹ R².

Sloučeniny obecného vzorce I a výchozí látky pro jejich přípravu se připravují o sobě známými způsoby, které jsou popsány v literatuře (například ve standardních publikacích jako Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme Verlag, Stuttgart), a to za reakčních podmínek, které jsou pro jmenované reakce známy a vhodné. Přitom se může také používat o sobě známých, zde blíže nepopisovaných variant.

Výchozí látky se mohou popřípadě vytvářet in šitu, to znamená že se z reakční směsi neizolují, nýbrž se reakční směsi ihned používá pro přípravu sloučenin obecného vzorce I.

Sloučeniny obecného vzorce I se s výhodou připravují reakcí sloučenin obecného vzorce II se sloučeninami obecného vzorce III.

Sloučeniny obecného vzorce II a obecného vzorce III jsou zpravidla známé. Pokud nejsou známé, mohou se připravovat o sobě známými způsoby.

Ve sloučenině obecného vzorce III znamená L s výhodou předaktivovanou skupinu karboxylové kyseliny, s výhodou zbytek halogenidu karboxylové kyseliny, symetrického nebo směsného anhydridů nebo aktivního esteru. Skupiny tohoto typu pro aktivaci karboxylové skupiny při typické acylační reakci jsou v literatuře popsány (například ve standardních publikacích jako Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme Verlag, Stuttgart). Aktivované estery se výhodně vytvářejí φφ φ φ φφ φφ φ φ φ φφφ φ φ φ φφφφ φ φ φ φ φ φ φ φφφφ φφφ φ φφ φφ φφ φ φ φ φ φ φ φ

φ φ φ φφ i η šitu například adicí HOBt nebo N-hydroxysukcinimidu. Symbol

L znamená s výhodou atom vodíku, fluoru, chloru, bromu nebo

-ON-sukcinimidovou skupinu.

ΦΦΦ

Reakce se zpravidla provádí v inertním organickém rozpouštědle, v přítomnosti činidla vázajícího kyselinu, s výhodou organické zásady, jako je DIPEA, triethylamin, dimethylanilin, pyridin nebo chinolin nebo v přítomnosti nadbytku karboxylové sloučeniny obecného vzorce III.

Příznivé může být také přidání hydroxidu, uhličitanu nebo hydrogenuhličitanu alkalického kovu nebo kovu alkalické zeminy nebo jiné soli slabé kyseliny alkalického kovu nebo kovu alkalické zeminy, s výhodou draslíku, sodíku, vápníku nebo cesia.

V něko1 i k 140 ‘C, závislosti na reakčních podmínkách minut až 14 dní, reakční teplota je e

zpravidla -10 až 90 C a zvláště je reakční doba přibližně -30 až přibližně 0 až přibližně 70 C.

Jakožto inertní rozpouštědla jsou vhodné například uhlovodíky jako hexan, petroether, benzen, toluen nebo xylen; chlorované uhlovodíky jako trichlorethylen, 1,2-dichlorethan nebo tetrachormethan, chloroform nebo dichlormethan; alkoholy jako methanol, ethanol, isopropanol, n-propanol, n-butanol nebo terč.butanol; ethery jako diethylether, diisopropylether, tetrahydrofuran (THF) nebo dioxan; glykolethery jako ethylenglykol monomethylether nebo ethylenglykolmonoethylether (methylglykol nebo ethy1glykol), ethylenglykoldimethylether (diglyme) : ketony jako aceton nebo butanon; amidy jako acetamid, dimethylacetamid, dimethylformamid (DMF); nitrily jako acetonitril; sulfoxidy jako dimethylsulfoxid (DMSO); sirouhlík; organické karboxylové kyseliny jako je kyselina mravenčí nebo octová: nitrosloučeniny jako nitromethan nebo nitrobenzen; estery jako ethylacetát; voda nebo směsi těchto rozpouštědel.

Φ· • φ • ••φ • ΦΦ φφ φφ φφ φφ φ φ · φ φ φ φ φ φ φ · φ φ φ · φ φ

Sloučeniny obecného vzorce I se také mohou připravovat reakcí sloučenin obecného vzorce IV se sloučeninami obecného vzorce V.

Sloučeniny obecného vzorce IV a obecného vzorce V jsou zpravidla známé. Pokud nejsou známé, mohou se připravovat o sobě známými způsoby.

Ve sloučenině obecného vzorce V znamená L s výhodou předaktivovanou skupinu karboxylové kyseliny, s výhodou zbytek halogenidu karboxylové kyseliny, symetrického nebo směsného anhydridu nebo aktivního esteru. Skupiny tohoto typu pro aktivaci karboxylové skupiny při typické acylační reakci jsou v literatuře popsány (například ve standardních publikacích jako Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme Verlag, Stuttgart). Aktivované estery se výhodně vytvářejí in šitu například adicí HOBt nebo N-hydroxysukcinimidu. Symbol L znamená s výhodou atom vodíku, fluoru, chloru, bromu nebo -ON-sukcinimidovou skupinu.

Reakce sloučeniny obecného vzorce IV se sloučeninou obecného vzorce V se provádí za stejných podmínek reakční doby, teploty a v inertním organickém rozpouštědle jako reakce sloučeniny obecného vzorce II a obecného vzorce III.

Sloučeniny obecného vzorce I se také mohou připravovat reakcí sloučenin obecného vzorce VI se sloučeninami obecného vzorce VII.

Sloučeniny obecného vzorce VI a obecného vzorce VII jsou zpravidla známé. Pokud nejsou známé, mohou se připravovat o sobě známými způsoby.

Ve sloučenině obecného vzorce V znamená L s výhodou předaktivovanou skupinu karboxylové kyseliny, s výhodou zbytek hat «* I • · · • · · · 4

4 4 4 4

4 4 4

- 20 • 4 ·

»··· 4 * * 4 logenidu karboxylové kyseliny, symetrického nebo směsného anhydridu nebo aktivního esteru. Skupiny tohoto typu pro aktivaci karboxylové skupiny při typické acylační reakci jsou v literatuře popsány (například ve standardních publikacích jako Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme Verlag, Stuttgart). Aktivované estery se výhodně vytvářejí in šitu například adicí HOBt nebo N-hydroxysukcinimidu. Symbol L znamená s výhodou atom vodíku, fluoru, chloru, bromu nebo -0Ksukcinimidovou skupinu.

Reakce sloučeniny obecného vzorce VI se sloučeninou obecného vzorce VII se provádí za stejných podmínek reakční doby, teploty a v inertním organickém rozpouštědle jako reakce sloučeniny obecného vzorce II a obecného vzorce III.

Sloučeniny obecného vzorce I se také mohou připravovat reakcí sloučenin obecného vzorce VIII se sloučeninami obecného vzorce IX.

Sloučeniny obecného vzorce VIII a obecného vzorce IX jsou zpravidla známé. Pokud nejsou známé, mohou se připravovat o sobě známými způsoby.

Ve sloučenině obecného vzorce VIII znamená L s výhodou předaktivovanou skupinu karboxylové kyseliny, s výhodou zbytek halogenidu karboxylové kyseliny, symetrického nebo směsného anhydridu nebo aktivního esteru. Skupiny tohoto typu pro aktivaci karboxylové skupiny při typické acylační reakci jsou v literatuře popsány (například ve standardních publikacích jako Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme Verlag, Stuttgart). Aktivované estery se výhodně vytvářejí in šitu například adicí HOBt nebo N-hydroxysukcinimidu. Symbol L znamená s výhodou atom vodíku, fluoru, chloru, bromu nebo -ON-sukcinimidovou skupinu.

Reakce sloučeniny obecného vzorce VIII se sloučeninou obecného vzorce IX se provádí za stejných podmínek reakční doby, teploty a v inertním organickém rozpouštědle jako reakce sloučeniny obecného vzorce II a obecného vzorce III.

• fl »· flfl flflflfl ♦ fl · · · · · fl · fl • flfl fl · ·«* · · · fl fl flflflfl flfl flfl flflfl flfl · • · flflflfl flflflfl flflflfl flflflfl flflflfl

Cyklické sloučeniny obecného vzorce II se mohou připravovat cyklizaci lineárních sloučenin například způsobem popsaným v německém patentovém spise v publikaci Houben-Weyl, l.c,, svazek číslo DE 43 10 643 nebo 15/11, str. 1 až 806 (1974), nebo způsobem, který popsal S. Zimmer, E. Hoffmann, G. Jung a H. Kessler (Liebig's Ann. Chem. str. 497 až 501, 1993). Lineární peptidy se mohou připravovat například způsobem, který popsal R.B. Merrifield (Angew. Chemie, 97, str. 801 až 812, 1985).

Lineární sloučeniny s otevřeným řetězcem, jako jsou například sloučeniny obecného vzorce III, se mohou také připravovat o sobě známými způsoby přípravy aminokyselin a peptidů, například také syntézou v pevné fázi, kterou popsal R.B. Merrifield (B.F. Gysin a R.B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 94, od str. 3012, 1972).

Sloučeniny obecného vzorce I se dále mohou připravovat uvolněním ze svých funkčních derivátů solvolýzou, zvláště hydrolýzou mnebo hydrogenolýzou.

Pro solvolýzu nebo pro hydrogenolýzu jsou jako výchozí látky vhodné sloučeniny, které mají místo jedné nebo několika volných aminoskupín a/nebo hydroxylových skupin odpovídající chráněné aminoskupiny a/nebo hydroxylové skupiny, s výhodou sloučeniny, které místo jednoho H-atomu, který je spojen s N-atomem mají skupinu chránící aminoskupinu, například sloučeniny, které odpovídají obecnému vzorci I, avšak místo NHa skupiny mají skupinu NHR' (kde R’ znamená skupinu chránící aminoskupinu, například skupinu BOC nebo CBZ).

»4 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9

4 444 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 * ♦ · 4* 44 »·

- 22 • 4 4

4 4 • 444»

Dále jsou jako výchozí látky vhodné sloučeniny, které místo H-atomů hydroxylové skupiny mají skupinu chránící hydroxylovou skupinu, například sloučeniny, které odpovídají obecnému vzorci I, avšak místo hydroxyfeny1ové skupiny mají R’ 'Ofenylovou skupinu (kde R ' znamená skupinu chránící hydroxylovou skupinu).

V molekule výchozí látky může být také několik stejných nebo různých skupin chránících aminoskupinu a/nebo hydroxyskupinu. Pokud molekula obsahuje navzájem odlišné chránící skupiny, mohou se v mnoha případech tyto chránící skupiny selektivně odštěpovat.

Výraz skupina chránící aminoskupinu je obecně znám a jde o skupiny, které jsou vhodné k ochraně (k blokování) aminoskupiny před chemickými reakcemi, které jsou však snadno odstranitelné, když je žádoucí reakce na jiném místě molekuly provedena. Typické pro takové skupiny jsou zvláště nesubstituované nebo substituované skupiny acylové, arylové, aralkoxymethylové nebo aralkylové. Jelikož se skupiny, chránící aminoskupinu, po žádoucí reakci (nebo po sledu reakcí) odstraňují, nemá jejich druh a velikost rozhodující význam. Výhodnými jsou však skupiny s 1 až 20 a zvláště s 1 až 8 atomy uhlíku. Výraz acylová skupina“ je zde vždy míněn v nejširším slova smyslu. Zahrnuje acylové skupiny odvozené od alifatických, aralifatíckých, aromatických nebo heterocyklických karboxylových nebo sulfonových kyselin, jakož zvláště skupiny alkoxykarbonylové, aryloxykarbonylové a především aralkoxykarbonylové. Jakožto příklady takových acylových skupin se uvádějí skupiny alkanoylové jako acetylová, propiony1ová, butyrylová skupina; aralkanoylové jako fenylacetylová skupina; aroylové jako benzoylová nebo toluylová skupina; aryloxyalkanoylové jako fenoxyacetylová skupina (POA); alkoxykarbonylové, jako skupina methoxykarbonylová, ethoxykarbony1ová, 2,2,2-trichlorethoxykarbony1ová, terč.-butoxykarbonylová (BOC), 2-jodethoxykarbonylová; aralkoV» »· ·ο ·· • · · · · · · • · ··· · · · · • ·· » · · » · · • · · · ···· ·» ♦» ·» >« ·· « • · · • ···· » ··· xykarbony1ové jako skupina benzyloxykarbonylová (karbobenzoxy-CBZ), 4-methoxybenzyloxykarbonylová nebo 9-f1uoreny1methoxykarbony1ová (FMOC) skupina a arylsulfonylové jako skupina 4methoxy-2,3.6-tri methyl feny1 sulfonylová (Mtr). Výhodnými skupinami, chránícími aminoskupinu, jsou skupiny BOC a Mtr a také skupina CBZ, Fmoc, benzylová a acetylová skupina.

Výraz skupina chránící hydroxyskupinu“ je obecně rovněž znám a jde o skupiny, které jsou vhodné k ochraně (k blokování) hydroxyskupiny před chemickými reakcemi, které jsou však snadno odstranitelné, když je žádoucí reakce na jiném místě molekuly provedena. Typické pro takové skupiny jsou shora uvedené nesubstituované nebo substituované skupiny arylové, aralkylové nebo acylové dále také skupiny alkylové. Jelikož se skupiny, chránící hydroxyskupinu, po žádoucí reakci (nebo reakčním sledu) odstraňují, nemá jejich druh a velikost rozhodující význam. Výhodnými jsou však skupiny s 1 až 20 a zvláště s 1 až 10 atomy uhlíku. Jakožto příklady skupin chránících hydroxylovou skupinu, se uvádějí skupina benzylová, p-nitrobenzylová, p-toluensulfonylová, terč,butylová a acetylová, přičemž jsou obzvláště výhodnými skupina benzylová a. terč. butylová. Skupiny COOH v kyselině asparagové a glutamové jsou především chráněny ve formě svých terč.butylesterů (například Asp(OBut)).

Uvolňování sloučenin obecného vzorce I z jejích funkčních derivátů se daří - podle použité chránící skupiny - například silnými kyselinami, jako je zvláště kyselina trifluoroctová a chloristá avšak také jinými silnými anorganickými kyselinami, jako je kyselina chlorovodíková nebo sírová, silnými organickými karboxylovými kyselinami, jako je trichloroctová kyselina nebo sulfonovými kyselinami, jako je kyselina benzensul fonová nebo p-toluensulfonová. Je možné, nikoliv však vždy nutné provádět reakci v přítomnosti přídavného inertního rozpouštědla. Jakožto inertní rozpouštědla jsou vhodné organické například karboxylové kyseliny, jako je kyselina octová, ethery, jako je tetrahydrofuran (THF) nebo dioxan, amidy, jako je dimethylformamid (DMF), halogenované uhlovodíky, jako je dichlormethan, dále také alkoholy, jako je methanol, ethanol nebo isopropanol jakož také voda. V úvahu mohou přicházet také směsi těchto rozpouštědel. Kyseliny trifluoroctové se s výhodou používá v nadbytku bez přísady dalších rozpouštědel, kyseliny chloristé ve formě směsi kyseliny octové a 70% kyseliny chloristé v poměru 9 ^: 1 . Reakční teplota pro odštěpení je úo c čelně přibližně 0 až přibližně 50 C, s výhodou 15 až 30 C (teplota místnosti).

Skupina BOC, OBut, Pbf, Pmc a Mtr se může například s výhodou odštěpovat kyselinou trifluoroctovou v dichlormethanu nebo přibližně 3 až 5n kyselinou chlorovodíkovou v dioxanu při teplotě 15 až 30 C, zatímco skupina FMOC přibližně 5 až 50% roztokem dimethylaminu, diethylaminu nebo piperidinu v dimethylformamidu při teplotě 15 až 30 C.

Tritylová skupina se používá ke chránění aminokyselin histidin, asparagin, glutamin a cystein. Odštěpování chránící skupiny se provádí podle žádoucího konečného produktu systémem trif1uoroctová kyselina/10 % thiofenolu, přičemž se tritylová skupina od uvedených aminokyselin odštěpí. Při použití systému trif1uoroctová kyše 1 i na/anisol nebo trif1uoroctová kyselina/ thioanisol se odštěpí pouze tritylová skupina z histidinu, asparaginu a glutaminu, zůstává však na postranním řetězci Cys. Skupina Pbf (pentamethylbenzofuranylová) se používá ke chránění Arg. Odstraňuje se za použití například trif1uoroctové kyseliny v dichlormethanu.

Hydrogenolyticky odstranitelné chránící skupiny (například skupiny CBZ nebo skupina benzylová) se mohou odštěpovat například zpracováním vodíkem v přítomnosti katalyzátoru (například katalyzátoru na bázi ušlechtilého kovu, jako palla25 ·· · · · · · · · · · ···· · · · · ··· ·· · • · · · · ···· • · · · · · · · · dium, účelně na nosiči, jako na uhlí). Jakožto rozpouštědlo se hodí shora uvedená rozpouštědla, zvláště například alkoholy, jako methanol nebo ethanol nebo amidy jako dimethylformamid. Hydrogenolýza se zpravidla provádí při teplotě přibližně 0 až o

100 C, za tlaku přibližně 0,1 až 20 MPa, s výhodou při teplotě 20 až 30 C, za tlaku přibližně 0,1 až 1 líPa. Hydrogenolýza CBZ skupiny se daří například dobře na 5 až 10% palladiu na uhlí v methanolu, nebo za použití amoniumformátu (místo vodíku) na palladiu na uhlí v systému methanol/dimethy1formamid při teplotě 20 až 30 C.

Zásada obecného vzorce I se může kyselinou převádět na příslušnou adiční sůl s kyselinou, například reakcí ekvivalentního množství zásady a kyseliny v inertním rozpouštědle, jako je například ethanol a následným odpařením rozpouštědla. Pro tuto reakci přicházejí v úvahu vzláště kyseliny, které poskytují fyziologicky přijatelné soli. Může se používat anorganických kyselin, jako jsou kyselina sírová, dusičná, halogenovodíkové kyseliny, jako chlorovodíková nebo bromovodíková, fosforečné kyseliny, jako kyselina ortofosforečná, sulfaminová kyselina a ogranické kyseliny, zvláště alifatické, alicyklické, aralifatické, aromatické nebo heterocyklické jednosytné nebo několikasytné karboxylové, sulfonové nebo sírové kyseliny, jako jsou kyselina mravenčí, octová, propionová, pivalová, diethyl octová, malonová, jantarová, pimelová, fumarová, maleinová, mléčná, vinná, jablečná, citrónová, glukonová, askorbová, nikotinová, isoni kot i nová, methansulfonová, ethansulfonová, ethandisulfonová, 2-hydroxyethansulfonová, benzensuifonová, p-toluensulfonová, naftalenmonosulfonová a naftalendisulfonová a laurylsírová kyselina. Solí s fysiologicky nevhodnými kyselinami, například pikrátů, se může používat k izolaci a/ nebo k čištění sloučenin obecného vzorce I.

Na druhé straně se sloučeniny obecného vzorce I reakcí se zásadou mohou převádět na své fysiologicky vhodné soli ko• · ·· · · · · · · 9 9 · ···· ·· · · 999 99 9 • · · · · «··· • ·· ·· · · 9 9 vové nebo amoniové. Jakožto soli přicházejí v úvahu zvláště soli sodné, draselné, hořečnaté, vápenaté a amoniové, dále substituované amoniové soli, například dimethylamoniové, diethy1amoniové, diisopropylamoniové, monoethanolamoniové, diethanolamoniové, nebo diisopropylamoniové, cyklohexylamoniové, dicyklohexylamoniové, dibenzylethylendiamoniové, dále například soli s argininem nebo s lysinem.

Vynález objasňují, nijak však neomezují následující příklady praktického provedení. Teploty se uvádějí vždy ve stupo nich Celsia, teplotou místnosti se míní teplota 22 C. Výraz zpracování obvyklým způsobem” v následujících příkladech praktického provedení znamená:

Popřípadě se přidává voda, popřípadě podle konstituce konečného produktu se hodnota pH nastavuje na 2 až 10, reakční směs se extrahuje ethylacetátem nebo dichlormethanem, provádí se oddělení organické fáze a její vysušení síranem sodným, filtrace, odpaření a čištění chromatografií na silikagelu a/ nebo krystalizaci. Hodnoty Rf jsou na silikagelu: eluční činidlo: systém ethylacetát/meethanol 9=1.

RT je retenční doba (v minutách) při HPLC v následujících systémech :

[A]

sloupec:	YMC ODS A RP 5Cis (250 x 4, 6 mm)
eluční činidlo	A =	0,1% TFA	ve	vodě
eluční činidlo	B:	0,1 % TFA	v	aceton i tr i 1u,
průtok:		1 ml/min
gradient		0 až 50 %	B	/30 min
[ B3
jako [A] grád i ent [Cl		5 až 50 %	B	/30 min
jako [A]
gradient		10 až 50 5	ί B	/30 min

• · • »··

4

Hmotová spektrometrie (MS):

El (elektronová rázová ionizace M⁺

FAB (bombardování rychlými atomy) (M+H)⁺

ESI ( elektrosprejová ionizace) (M+H)⁺

Výrazem DMPP pryskyřice se míní 4-(2',4'-dimethoxyfenylhydroxymethyl)fenoxypryskyřice, která umožňuje například syntézu peptidů chráněných na postranním řetězci; výraz TCP pryskyřice znamená tri ty1chloridpo1ystyrenovou pryskyřici.

Příklady provedení_vynálezu

Příklad 1

a)

Přidá se 0,2 mmol anhydridu jantarové kyseliny do roztoku 0,1 mmol cyklo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys) (A) [při prav ite1 něho cyklizací (H-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(Z)-Arg(Pbf)Gly-OH na cyklo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys( Z) a selektivním odstraněním skupiny Z hydrogenolýzou] v 5 ml dimethylformamidu. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti po dobu pěti hodin a po obvyklém zpracování se získá cyklo-íArg(Pbf)Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(-Su)) (B).

b)

Rozpustí se 1 ekvivalent cysteaminhydrochloridu a 1 ekvivalent trifenylmethanolu v ledové kyselině octové při teploo tě 60 C a zpracovává se za míchání 1,1 ekvivalentu eheterátu fluoridu boritého. Reakční směs se míchá po dobu jedné hodiny a zpracováním obvyklým způsobem se získá Trt-cysteaminhydrochl or i d (C).

Reakcí “B s C“ v dichlormethanu za přidání EDCI hydrochloridu se po zpracování obvyklým způsobem získá cyklo-íArg(Pbf)Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys(N^ -CO-CH2CH2CO-NH-CH3CH3-S-Trt)). Po

Φ φ φ φ • ΦΦ φφφ · · φ ♦ φ · · φ φ φφφ φ · · · ·····«· φφ φφφ φφ φ • · · · · · φ φ φ φ • ΦΦ φ φφ φφ φ* ·· odstranění chránících skupin se získá cyklo-(Arg-Gly-Asp-DPhe-Lys(N -CO-CH3CH3CO-NH-CH2CH2-SH)); RT [B3 18,3; FAB 763.

Podobně reakcí C s cyklo-(Arg(Pbf)-G1y-Asp(OBut)-D-PheLys( N -Su)-Gly) a odstraněním chránících skupin se získá cyklo-( Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys( N* -CO-CH2CH2CO-NH-CH2CH2-SH)Gly).

Příklad 2

a)

Přidá se 1,2 ekvivalentu akryolylchloridu při teplotě e

C do suspenze 10 mmol 6-aminohexanové kyseliny a 1,8 ekvivalentu hydroxidu vápenatého ve vodě. Reakční směs se zfiltruje a obvyklým zpracováním se získá 6-akrylamidohexanová kyše lina ( D ) .

b)

Roztok 10 mmol D a 1 ekvivalentu n-hydroxysukciniraidu

O v 50 ml dichlormethanu se zpracovává při teplotě 0 C 1,2 ekvivalenty EDCI hydrochloridu a reakční směs se míchá po dobu jedné hodiny. Přidá se 10 ju 1 ledové kyseliny octové a obvyklým zpracováním směsi se získá HOBT 6-akrylamidohexanoát (E”).

c)

Reakcí A s E v dimethylformamidu se po zpracování obvyklým způsobem získá cyklo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Lys( N CO-( CH2)ε-NH-C0-CH=CH3)) · Po odstranění chránících skupin se získá cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys( N^ -CO-(CH₂)5-NH-C0-CH=CH2)>: RT [Al 22,8; ESI 771.

Podobně se získá cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys( N -C0-(CH2)s-NH-CO-CH=CH₂)Gly).

• fl • fl • ··· • fl ··

Příklad 3

a)

Přidá ss 2 mmol E, rozpuštěného ve směsi ethanolu a o

chloroformu, při teplotě O C do roztoku 10 mmol 6-aminohexanové kyseliny ve vodném fosforečnanu sodném jakožto pufru (hodnota pH 8). Směs se zfiltruje a obvyklým zpracováním se získá 6-(6-akrylamidohexanoylamido)hexanová kyselina (“F)

b)

Reakcí “A s F v dimethylformamidu za přidání EDCI hydrochloridu se obvyklým zpracováním získá cyklo-(Arg(Pbf)-GlyAsp(OBut)-D-Phe-Lys(N - CO-( CH₂) 5 - NH-CO-( C‘H₂ ) 5 - NH-CO-CH=CH₂)) . Po odstranění chránících skupin se získá cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ř-CO-(CH₂)s-NH-CO-(CH₂)5 -NH-CO-CH=CH₂)) .

RT [CJ 23,5; ESI 884.

Podobně se získá cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^é-CO-(CH₂)s-NH-CO-( CH₂)5 -NH-CO-CH=CH₂)Gl y) .

Příklad 4

a)

Kopulací 6-akrylam i dohexanové kyseliny na systém [2-(2aminoethoxy)ethoxy3octová kysel ina-pryskyřice TCP za přidání HOBt a TBTU v NMP se získá systém (2-[2-(6-akrylamidohexanoylamido)ethoxy]ethoxy)octová kysel ina-pryskyřice DMPP. Pryskyřice se promyje systémem dichlormethan/kyselina octová/trif1uorethanol (6:3:1) a tak se získá í2-[2-( 6-akry1amidohexanoylami do)ethoxy]ethoxy)octová kyselina (G).

· ···· · >

·· ·· • · · · • ·· · ·· ··· ·· · • · · · ·· · ···

b)

Reakcí G s A“ v dimethylformamidu za přidání EDCI hydrochloridu se obvyklým zpracováním získá cyklo-(Arg(Pbf)-GlyAsp(OBut)-D-Phe-Lys(N - CO-CH₂- 0-CH3CH3- O-CH2CH3-NH-CO-(CH₃)5 MH-C0-CH=CH2))· Po odstranění chránících skupin se získá cyklo-( Arg - G1 y-Asp-D-Phe - Lysí H -CO-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-CO(ch₂)5-nh-co-ch=ch2)); rt ící 22,5: esi 916.

Podobně se získá cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N -CO-CH2-OCH2 CH2 - 0 - CH2 CH₃ - ΜΗ - CO - ( CH₂) 5 - NH - CO - CH = CH2 ) - G1 y ) .

Podobně se reakcí í2-[2-(2-í2-[2-(6-akry1araidohexanoy1arai do)ethoxy]ethoxy)acetylam i do)ethoxy]ethoxy)octové kyše1 i ny

s A získá cyklo-( Arg( Pbf)-G1y-AspíOBut)-D-Phe-LysíN -(C0CH2-0-CH2CH2-0-CH₂CH2-NH)2-C0-(CH2)5-NH-C0-CH=CH2))- Po odstranění chránících skupin se získá cyklo-(Arg-G1y-Asp-D-Phe LysíN^ -(C0-CH2-0-CH₂CH2-0-CH2CH2-NH)2-C0-(CH2)5-NH-C0-CH=CH2)5 : RT [Cl 22,75; ESI 1061.

Podobně se získá cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ -CO-CH3-OCH2CH2-0-CH₃CH2-NH)2-C0-(CH₂)5-NH-C0-CH=CH2)-Gly).

Příklad 5

Podobně jako podle příkladu 1 se reakcí (G)-cyklopept i dů cyk.Io-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Val-Lys) cykio-(Arg(Pbf)-G!y-Asp(OBut)-D-Trp-Lys) cyk!o-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Tyr-Lys) cyk!o-(Arg(Pbf)-Giy-Asp(OBuí}-D-Phe-D-Lys) cyk!o-(Arg(Pbf)-GIy-Asp(OBut)-D-Phe-Cys) »· ·· cyklo-(Arg(Pbf)-Giy-Asp(OBut)-D-Phe-Dab) cyklo-{Arg (Pbf)-Gly-Asp (O B ut)-D-T rp-D-Cys) cyklo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Tyr-D-Cys) cyklo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Phe-D-Lys) cyklo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Trp-D-Lys) cyklo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Tyr-D-Lys) cyHo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Phe-D-Cys) cyklo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Phe-Dab) cyklo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Trp-D-Cys) cyklo-{Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-Tyr-D-Cys) cyk:lo-(Arg(Pbf)-Gly>Asp(OBut)-D-Trp-Om) cyk,lo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Tyr-Om) cyk;lo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Om) cyk,Io-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Trp-D-Orn) cyRlo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Tyr-D-Orn) cyMo-(Arg(Pbf}-GIy-Asp(OBut)-D-Phe-D-Om) cyklo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Trp-Dab) cyklo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Tyr-Dab) cyk:Io-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBirt)-D-Trp-Dap) cyklo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Tyr-Dap) cyk;lo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-Dap) cyk;lo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Trp-D-Dap) cyklo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Tyr-D-Dap) cykfo-(Arg(Pbf)-Gly-Asp(OBut)-D-Phe-D-Dap)

a) s anhydridem jantarové kyseliny, b) s C a c) po odstranění chránících skupin získají následující sloučeniny:

cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys(N^E-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Lys(N^E-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys(N^E-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH2-SH)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Lys(N^E-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cykJo-(Arg-GJy-Asp-D-Phe-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyRlo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D3b(N^r-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyk]o-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyklo-{Arg-Gly-Asp-Phe-D-Lys(N^E-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-Trp-D-Lys(N^E-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Lys(N^E-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyk!o-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) • 4

44 44 • · · 4 4 4 • · · · 4 4 4 *

4 «44 44 4

4 4 4 4 4 4

44 44 cyklo-(Arg-Gly-Asp-Phe-Dab(N^r-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cy^klo-(Arg-Gly-Asp-Trp-D-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cy^klo-(Arg-GIy-Asp-Tyr-D-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyk|o-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Om(N^s-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Om(N^s-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cy^klo-(Arg-G!y-Asp-D-Phe-Orn(N^s-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyKlo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Om(N⁵-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyk;lo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Om(N⁵-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyk;lo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Om(N^s-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dab(N^Y-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyk|o-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Dab(N^Y-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dap(N^p-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyk|o-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Dap(N^p-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyk[o-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Dap(N^p-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyk|o-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Dap(N^p-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Dap(N^p-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cykIo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Dap(N^p-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)).

Podobně jako podle příkladu 2 se reakcí ( G)-cyklopept i dů

a) s E“ a b) po odstranění chránících skupin získají následující sloučeniny:

cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val-Lys(N^E-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyk;lo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Lys(N‘-CO-(CH2)rNH-CO-CH«CH2)) cyk,ío-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Lys(N⁶-CO-(CH₂)5-NH-CO-CH~CH2)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Lys(N^E-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyk!o-{Arg-Gly-Asp-D-Phe-Cys(S-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyklo-ÍArg-Gly-Asp-D-Phe-Dabí^-CCHCHaVNH-CO-CHsCHJ) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Cys(S-CO-{CH₂)5-NH-CO-CH=CH₂)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-D-Cys(S-CO-{CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyklo-(Arg-G!y-Asp-Phe-D-Lys(N'-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyklo-(Arg-Gíy-Asp-Trp-D-Lys(N^E-CO-(CH₂)5-NH-CO-CH=CH₂)) cyi4o-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Lys(N^e-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-Phe-D-Cys(S-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂-SH)) cyk!o-(Arg-Gly-Asp-Phe-Dab(N⁷-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cykio-(Arg-Gly-Asp-Trp-D-Cys(S-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH2)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-Tyr-D-Cys(S-CO-(CH₂)5-NH-CO-CH=CH₂))

0 0

0 0 0 0

0· 0

0 • 000 0 • 0 0·

00 « 0 0 0 « 0 · ·0 0

0 0 0

00 cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Om(N^s-co-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Om(N^s-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyŘlo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Om(N⁵-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Om(N⁶-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyklo-(Arg-GIy-Asp-D-Tyr-D-Om(N⁵-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyklo-(Arg-GIy-Asp-D-Phe-D-Om(N⁵-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cik,lo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dab(N^T-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) c^k.lo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Dab(N^z-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyk.lo-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-Dap(N^p-CO-(CH2)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Tyr-Dap(N^p-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Dap(N^p-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cykio-(Arg-Gly-Asp-D-Trp-D-Dap(N^p-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)) cyklo-(Arg-GIy-Asp'D-Tyr-D-Dap(N^p-CO-(CH₂)₅-NH-CO'CH=CH₂)) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-D-Dap(N^p-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂)).

Test buněčné adhese

Zkoumá se adheze myšších MC3T3 H1 osteoblastových kultur in vitro na RGD peptidem povlečené povrchy. V průběhu testu se naočkovává 50 000 buněk/cm³, inkubuje se v prostředí prostém séra při teplotě 37 C za 95% vlhkosti ovzduší po dobu jedné hodiny a stanovuje se podíl ulpělých buněk.

Mírou (%) ulpělých buněk se rozumí poměr ulpělé buňky/ naočkované buňky x 100. Dále se uvádí peptid: míra ulpělých buněk [%1 cyklo- (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (řf-CO- (CH₂) ₅-NH-CO-CH=CH₂) ) :

11.3;

cyklo- (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (řř-CO- (CH₂) ₅-NH-C0- (CH₂) ₅NH-C0-CH=CH₂) ) : 92.4;

cyklo- (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (^-CO-CHs-O-C^C^-O-CHsCH;,NH-CO-(CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂) ) : 109.0;

cyklo- (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (N®-CO-CH₂CH₂CO-NH-CH₂CH₂SH) ) : 86.2;

cyklo- (Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys (lSf-CO-CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₂CH₂NH)₂-C0- (CH₂)₅-NH-CO-CH=CH₂) ) : 110.5.

• ·

9 • · · 9999 9 4

9

Průmyslová využitelnost

Derivát cyklopeptidu jako inhibitor integrinů vhodný pro výrobu farmaceutických prostředků zvláště pro profylaxi a ošetřování implantáty navozených potíží, osteolytických nemocí, trombózy, trombózy, srdečního infarktu a arterosklerózy.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY η/ %>ο$~

Derivát cyklopeptidu obecného vzorce I

R - Q -X ( I) kde znamená

R cyk1o-(Arg-Gly-Asp-Z), přičemž Z je vázán v postranním řetězci na Q, nebo pokud Q chybí, na X,

Q chybí nebo znamená _ [CO-R^NH-] _m, - [NH-R^CO-]_m,

- [CO-R^CO-k, - (CO-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-)_n,

- (NH-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-CO-) _n,

- (NH-CH2CH2-O-CH2CH2-O-CH2-CO-) _{n n}ebo

- (CO-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-) _n- [CO-R¹-NH-]_m,

X skupinu -CO-CH=CHa, -CO-C(CH3)=CHa , -NH-CH=CH2,

-NH-C(CH3)=CHa nebo -NH-(CH₂)_P-SR¹⁰,

Z na sobě nezávisle zbytek aminokyseliny nebo zbytek dipeptidu nebo tripeptidu, přičemž aminokyseliny jsou na sobě nezávisle voleny ze souboru zahrnujícího Ala, Asn, Asp, Arg, Cys, Gin, Glu, Gly, His, Homo-Phe, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Phg, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val a M, přičemž tyto aminokyseliny jsou popřípadě derivatizovány a aminokyselinové zbytky jsou navzájem vázány peptidovým způsobem prostřednictvím of-aminoskupin nebo g-karboxylových skupin.

a skupina M je obsažena vždy, • ·«· ···· ·· · ···· · · · * ······ ·· ··· ·· · • ···· ····

M skupinu NH(R^S)-CH(R³)-COOH,

R¹ chybí nebo znamená skupinu R², R⁹, R²-R⁹-R² nebo fenylenovou skupinu, která je nesubstituována nebo má jeden nebo dva substituenty R⁵, přičemž řetězce R⁵ jsou vždy na sobě nezávislé,

R² skupinu alkylenovou s 1 až 10 atomy uhlíku, přičemž jedna nebo dvě methylenové skupiny jsou popřípadě nahrazeny atomem síry, skupinou -CH=CH- nebo -C=C-,

R³ skupinu -R⁵-R⁴, -R^e-R⁴ nebo -R⁷-R⁴,

R⁴ skupinu OH, NH2, SH nebo COOH,

R⁵ skupinu alkylenovou s 1 až 6 atomy uhlíku,

R° skupinu alkylenfenylenovou se 7 až 14 atomy uhlíku,

R⁷ skupinu alkylenfenylalkylenovou s 8 až 15 atomy uhlíku,

R^s atom vodíku nebo skupinu A nebo alkylenfenylovou se 7 až 12 atomy uhlíku,

R⁹ skupinu cykloalkylenovou se 3 až 7 atomy uhlíku,

R^w atom vodíku nebo skupinu chránící atom síry,

A skupinu alkylovou s 1 až 6 atomy uhlíku,

Hal atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu, man na sobě nezávisle O, 1, 2 nebo 3,

P 1,2 nebo 3, • · • · • · • · • · · · • · « • · 4 » ·· přičemž pokud jde o zbytky opticky aktivních aminokyselin a derivátu aminokyselin, jsou zahrnuty D a L formy a jeho soli.
2. Derivát cyklopeptidu podle nároku 1 obecného vzorce I, kterým je

a) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N-CO-CHzCHsCO-NH-CH3CH3-SH)),

b) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^£ -CO-CH2CH2CO-NH-CH2CH2SH)Gly)

c) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys(N^ -CO-(CH2)ε-NH-CO-CH=CH2)):

d) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Lys( N^ř -CO-(CH2)ε-NH-CO-(CH₂)εNH-CO-CH=CH₂))·

e) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-LysíN^ž -CO-CH3-O-CH2CH2-O-CH2CH2nh-co-(ch2)s-nh-co-ch=ch3));

f) cyklo-(Arg-Gly-Asp-D-Phe-LysíN^ -(CO-CH2-O-CH2CH2-0-CH2CH2 nh)2-co-(CH2)5-nh-co-ch=ch₂));

a jeho fyziologicky přijatelné soli.
3. Způsob přípravy derivátu cyklopeptidu podle nároku 1 obecného vzorce I, kde jednotlivé symboly mají v nároku 1 uvedený význam a jeho solí, vyznačuj ící se t i m , že

a) pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I, kde Q chybí nebo znamená skupinu -[CO-R¹-NH-,

-(CO-CH2-0-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-)_n nebo -(CO-CH2-0-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-)_n-[CO-R¹-NH-]m,

X skupinu -C0-CH=CH2 nebo -CO-C(CH3)=CH2 a R má shora uvedený význam

i) se sloučenina obecného vzorce II • · * • · · · · *

R-H (II) kde R má shora uvedený význam, nechává reagovat se sloučeninou obecného vzorce III

L-Q-X (III) kde

Q chybí nebo znamená skupinu -[CO-R¹-NH-]m,

-(CO-CH2-O-CH2CH3-O-CH2CH2-NH-)_n nebo -(CO-CH3-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-)_n-tCO-R¹-NH-]_m,

X znamená skupinu -CO-CH=CH2 nebo -CO-C(CH3)= CH2 a L znamená atom chloru, bromu, jodu nebo volnou nebo rektivní funkčně obměněnou hydroxylovou skupinu, nebo i i) se sloučenina obecného vzorce IV

R-Q-H (IV) kde

Q chybí nebo znamená skupinu -[CO-R¹-NH-lm,

-(CO-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-)_n nebo -(CO-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NH-)_n-tCO-R¹-NH-]_m a

R má shora uvedený význam, nechává reagovat se sloučeninou obecného vzorce V

L-X (V) kde znamená

X skupinu -CO-CH=CH2 nebo -CO-C(CH₃)=CH₂ a L atom chloru, bromu, jodu nebo volnou nebo rektivní funkčně obměněnou hydroxylovou skupinu, nebo

b) pro přípravu sloučeniny obecného vzorce I, kde

Q chybí nebo znamená skupinu -tNH-R¹-CO-lm nebo

-[CO-R¹-CO-lm. -(NH-CH2-CH2-O-CH3CH2-O-CH2-CO-)_n nebo • · • · • 4 * · ♦ · · • ···♦ · ·· · ·· ·· ··· ·· ·

-(NH-CHa-O-CH3CH3-O-CH3CH3-CO-)_η ,

X skupinu -NH-CH=CHa nebo -NH-C(CH₃)=CHa nebo

-NH-(CHa)p-SR¹⁰

R¹⁰ skupinu chránící atom síry a

R má shora uvedený význam,

i) se sloučenina obecného vzorce VI

R-L (VI) kde znamená

L atom chloru, bromu, jodu nebo volnou nebo rektivní funkčně obměněnou hydroxylovou skupinu a

R má shora uvedený význam, nechává reagovat se sloučeninou obecného vzorce VII

H-Q-X (VII) kde

Q chybí nebo znamená skupinu -[NH-R¹- CO-]_m nebo -(NH-CHa-0-CH3CH3-O-CH2CH3-CO-)_n nebo -(NH-CHa CHa-0-CHa CH₂-0-CHa-CO-)η,

X znamená skupinu -NH-CH=CHa nebo -NH-C(CH3)=CHa nebo -NH-(CHa)p-SR¹⁰

R^to znamená skupinu chránící atom síry nebo i i) se sloučenina obecného vzorce VIII

R-Q-L (VIII) kde

Q chybí nebo znamená skupinu -[NH-R¹-CO-Im nebo

-[CO-R¹-CO-Im, -(NH-CHa-O-CH3CH3-O-CH3CH3-CO-)_n nebo -(NH-CH3CH3-O-CH3CH3-O-CH3-CO-)_n,

L znamená atom chloru, bromu, jodu nebo volnou nebo rektivní funkčně obměněnou hydroxylovou skupinu a • · · * * · · ····· ···· ···· ·· ·· ··· ·· · • · · · · ···· • ·· · · · · 9 9

R má shora uvedený význam, nechává reagovat se sloučeninou obecného vzorce IX

H-X (IX) kde znamená

X skupinu -NH-CH=CH2 nebo -NH-C( CH₃)=CH₂ nebo -NH-(CHa)p-SR¹⁰ a

R¹⁰ skupinu chránící atom síry, nebo

c) se sloučenina obecného vzorce I uvolňuje ze svých funkčních derivátů zpracováním solvolyzačním nebo hydrogeno1yzačnim činidlem, a/nebo se zásaditá sloučenina nebo kyselá sloučenina obecného vzorce I převádí na svoji sůl zpracováním kyselinou nebo zásadou.
4. Derivát cyklopeptidu podle nároku 1 obecného vzorce I pro kovalentní vazbu prostřednictvím funkční skupiny symbolu X na biokompatibilni povrchy.
5. Derivát cyklopeptidu podle nároku 4 obecného vzorce I jakožto integri nový inhibitor pro selektivní obohacování buněk na implantátech.
6. Derivát cyklopeptidu podle nároku 4 nebo 5 obecného vzorce I jakožto integrinový inhibitor pro ošetřování poruch, způsobených implantáty, defektů, zánětů, osteolytických poruch, jako je osteoporóza, trombózy, srdečního infarktu a arteriosklerózy a pro urychlení integračního procesu implantátu nebo biokompatibilniho povrchu do tkáně.
7.

Použití derivátu cyklopeptidu podle nároku 6 obecného • · • · • ·
8.

vzorce
9.

vzorce vzorce I pro výrobu léčiv k ošetřování poruch, způsobených implantáty, defektů, zánětů, osteolytických poruch, jako je osteoporóza, trombózy, srdečního infarktu a arteriosklerózy a pro urychlení integračního procesu implantátu nebo biokompatibilního povrchu do tkáně.

Použití derivátu cyklopeptidu podle nároku 1 obecného I pro kovalentní vázání na biokompatibilni povrchy.

Použití derivátu cyklopeptidu podle nároku 1 obecného I v afi ni tni chromatografií.