CZ164297A3 - Method of detecting spongy-like encephalopathy - Google Patents

Method of detecting spongy-like encephalopathy Download PDF

Info

Publication number
CZ164297A3
CZ164297A3 CZ971642A CZ164297A CZ164297A3 CZ 164297 A3 CZ164297 A3 CZ 164297A3 CZ 971642 A CZ971642 A CZ 971642A CZ 164297 A CZ164297 A CZ 164297A CZ 164297 A3 CZ164297 A3 CZ 164297A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
animal
agent
body fluid
amount
spongiform encephalopathy
Prior art date
Application number
CZ971642A
Other languages
Czech (cs)
Inventor
Michael Dawson
Trevor Conrad Martin
Paula Keyes
Verity Jones
Original Assignee
Mini Agriculture & Fisheries
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB9424015A external-priority patent/GB9424015D0/en
Application filed by Mini Agriculture & Fisheries filed Critical Mini Agriculture & Fisheries
Publication of CZ164297A3 publication Critical patent/CZ164297A3/en

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
    • G01N2800/2828—Prion diseases

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

A method for detecting the presence of spongiform encephalopathy in an animal comprising determining the presence and/or amount of agent (e.g. by the use of 2DPAGE, followed by staining and densitometry readings of the stained agent) in a body fluid (e.g. cerebrospinal fluid) of test animal which cross-reacts with antibody raised against apoliprotein E, and has a molecular weight of between 34 and 38 kDa and a pI of between 5.4 and 5.7 comparing the concentration with a control value, and correlating the relationship between the two with the likely presence of spongiform encephalopathy in the animal.

Description

Předkládaný vynález se týká způsobů detekce spongiformních encephalopatií u zvířat, a zejmena detekce hovězí 'spongiformní encefalopatie (BSE) u dobytka.The present invention relates to methods for detecting spongiform encephalopathies in animals, and in particular for the detection of bovine spongiform encephalopathies (BSE) in cattle.

Dosavadní stav techniky . IBACKGROUND OF THE INVENTION. AND

Spongiformní encefalopatie jsou třídou chorob, která zahrnuje scrapie u ovcí a Cretzfeld-Jakobovu chorobu u lidí « , - I» *Spongiform encephalopathies are a class of diseases that include scrapie in sheep and Cretzfeld-Jakob disease in humans «, - I» *

BSE/je„hlášení podléhej ící fatální neurodegenerativní <BSE is a report subject to fatal neurodegenerative <

t. ... . . ·« · w í T' * ’ 'choroba nacházená u dobytka. -BSE>j e velmi .-důležitá; pro;t. .... . · «· W I T '*' finding disease in cattle. -BSE> is very important; for;

britský farmářský průmysl. - ' ' J '· .British farming industry. - '' J ''.

l* ' - V^současnosti jsou případy BSE identifikovány klinickou manifestací u zvířat. Případy jsou potvrzeny posmrtnou /Currently, BSE cases are identified by clinical manifestation in animals. Cases are confirmed after death /

analýzou mozkové tkáně, například histopatologi í',. pomoci detekce se scrapie asociovanými vlákny nebo proteinasa. K .,· •rezistentního proteinů. ·. . . . ./Á·.-:.. ..,./7by analyzing brain tissue such as histopathology. help detect scrapie-associated fibers or proteinase. K., • resistant proteins. ·. . . . ./Á· .-: .. .., ./7

·. -Á.·. -AND.

.Tyto'metody mají tů nevýhoduj že.vyžadují porážku ·· - ' Λ, , , · , i, . ϊ ^potenciálně; infikovaných zvířat, o kterých'Se jnůže'ukázat, že jsou bez onemocnění. Alternativně mohou·.být klinické 1 .. . ....These methods have the disadvantage that they require slaughter. ϊ ^ potentially; infected animals that can be shown to be free of disease. Alternatively, they can .být clinical · 1 ... ....

známky nepřítomné, nebo nedelegované, a' tak se ponechají' infikovaná zvířata ve stádě. L' ·' ' ' ' r· •Λ ' . · , k ' t » '' r h * fi ’ “ .signs absent or undelegated to 'leave' infected animals in the herd. L '·'''' r · • Λ'. ·, K ' t »'' r h * fi''.

Tak 'ěxistuje potřeba předsmrtného testu na BSE, .kterýThus, there is a need for a pre-death test for BSE, which

r. . t • v může být použit v diagnóze potenciálně infikovaných.zvířatr. t • v can be used in the diagnosis of potentially infected animals

Podstata· vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION

Předkládaný vynález nyní poskytuje metodu pro detekci spongiformní encefalopat ie u zvířat, která řeší některé, a v preferovaném provedení všechny, tyto problémy.The present invention now provides a method for detecting spongiform encephalopathies in animals that solve some, and preferably all, of these problems.

Podle jednoho aspektu předkládaného vynálezu je poskytnut způsob detekce přítomnosti spongiformní encefalopatie u zvířat, který zahrnuje určení přítomnosti a/nebo množství agens v tělesných tekutinách zvířete, kde agens má molekulární hmotnost mezi 35 - 39 kDa, pl přibližněAccording to one aspect of the present invention there is provided a method of detecting the presence of spongiform encephalopathy in an animal, comprising determining the presence and / or amount of the agent in the body fluid of the animal, wherein the agent has a molecular weight between 35-39 kDa, p1

5,3 a nereaguje zkříženě s protilátkami namířenými proti apolipoproteinu E a . určení' vztahu tohoto určení k·'infekčnímu istav.u zvířete.4. *5.3 and does not cross-react with antibodies directed against apolipoprotein E a. determining the relationship of that determination to the infectious animal in the animal. *

Preferovaně je výsledek určení srovnán s kontrolní hodnotou-a jejich vztah je. korelován s infekčním stavem zvířete ,1- * ·» í v - . · „·Preferably, the result of the determination is compared to a control value and their relationship is. correlated with the infection status of the animal, 1 - * · »s in -. · "·

Preferovaně je-meto’da':využitá pro detekci BSE.Preferably meto'da is' used to detect BSE.

< >//ml* - ‘ >rr* íii N'·?*,. Íj, 1·.’ r . J. T í‘- Tak objev/ že infekce1 zvířete spongiformní encef al opat i i může být korelována s přítomností, nebo se zvýšením koncentrace, agens v tělesných tekutinách tohoto zvířete vytváří základ pro způsob podle předkládaného vynálezu.<> // ml * - '> r r * iii N' ·? * ,. Íj, 1 ·. ' r. J. T í'- Thus discovery / infections that one animal spongiform encephalopathies al Abbot II can be correlated with the presence, or increasing the concentration of, an agent in the body fluids of that animal forms the basis for the method of the present invention.

-Apolipoprotein E je -cholesterol transportní protein ro produkovaný v periferním a centrálním nervovém systému. Jeho přítomnost bud v mnohotných nebo v jednoduchých formách může být kategorizována v mozkomíšním moku (CSF) a séru. Jeho-ti molekulová hmotnost (37 kDa) a pl (asi 5,4 až 5,7) je· - je podobná jako u agens popsaného výše. Nicméně, agens, které je určováno v metodách podle předkládaného vynálezu, nereaguje zkříženě s protilátkou proti apolipoproteínu E.-Apolipoprotein E is -cholesterol transport protein ro produced in the peripheral and central nervous system. Its presence in either multiple or simple forms can be categorized in cerebrospinal fluid (CSF) and serum. Its molecular weight (37 kDa) and pI (about 5.4-5.7) is similar to those described above. However, the agent to be determined in the methods of the present invention does not cross-react with the anti-apolipoprotein E antibody.

Mělo by být zdůrazněno, že neexistuje požadavek pro přesné určení koncentrace agens, protože stav infekce zvířete spongiformní encefalopatií muže být detegován srovnáním s kontrolou.It should be emphasized that there is no requirement to accurately determine the concentration of the agent, since the infection status of the animal by spongiform encephalopathy can be detected by comparison with the control.

Kontrolní hodnota může být odvozena od koncentrace agens v různých zvířatech (pro které je infekční stav známý) a . která jsou analyzována paral.elně s testovaným zvířetem.The control value may be derived from the concentration of the agent in the various animals (for which the infectious condition is known) and. which are analyzed in parallel with the test animal.

Alternativně může být kontrolní hodnota od. stejného zvířete J . .. . - ·. 7 ----nebo jí může být známý standard.Alternatively, the control value may be from. of the same animal J. ... - ·. 7 ---- or it may be a known standard.

V každém případě .musí být kontrolní hodnota určena za použití stejné metody, která byla použita pro testování zvířete nebo za použití odlišné analytické metody.In any case, the control value must be determined using the same method used to test the animal or using a different analytical method.

Výsledky od kontrolního zvířete mohou být použity pro odvození standardní’ kontrolní hodnoty, nebo pro kalibrování ”· výsledků testovaného zvířete.Results from a control animal can be used to derive a standard 'control value, or to calibrate' the test animal's results.

Preferovanou tělesnou tekutinou analyzovanou v metodě je CSF, vzhledem k tomu, že těsný kontakt CSF s mozkem znamená, že neurologické choroby, které produkují změny ve složení proteinů mozku, mohou, být manifestovány v CSF.. Metody pro extrakci vzorků CSF jsou odborníkům dobře známé.CSF is the preferred body fluid analyzed in the method, since close CSF contact with the brain means that neurological diseases that produce changes in brain protein composition may be manifested in CSF. Methods for extracting CSF samples are well known to those of skill in the art. .

Vynález využívá jakoukoliv metodu pro určení přítomnosti a/nebo množství agens v tělesné tekutině zvířete, která je nyní v oboru známa a jakoukoliv metodu, která se později stane dostupnou.The invention utilizes any method for determining the presence and / or amount of an agent in an animal body fluid that is now known in the art and any method that will later become available.

Preferovaně je přítomnost a/nebo množství agens v -tělesné tekutině zvířete určena za použití polyakrylamidové gelové elektrofořezy (PAGE) pro separací agens, majících jak . molekulovou hmotnost mezi 35 - 39 kDa tak pl přibližně 5,3 od jiných materiálů v tělesné tekutině, a potom barvením gelu a provedením denzitometrického měřeni v oblasti gelu, která obsahuje agens tak, aby se určila přítomnost a/nebo množství přítomného agens. ‘Preferably, the presence and / or amount of the agent in the body fluid of the animal is determined using polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) to separate agents having both. a molecular weight between 35-39 kDa and pI1 of approximately 5.3 from other materials in the body fluid, and then dyeing the gel and performing densitometric measurements in the gel region that contains the agent to determine the presence and / or amount of the agent present. ‘

Preferovaně je PAGE dvourozměrná polyakrylamidová gelová elek.trofořesa :(2DPAGE) a barvení je. barv.ení·. stříbrem.Preferably, the PAGE is a two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis : (2DPAGE) and stained. coloring ·. with silver.

» J 1 ·, <» J 1 ·, <

’ . · J . * 1 .· Λ ·'. · J. * 1 · · ·

Preferovaně je.chybění zkřížené reaktivity.mezi'agens' a agens ánti^apolipopřotein E protilátky potvrzeno použitím ’ * r · fc protilátky namířené proti apolipoproteinú E. Na imunogenu založené techniky pro měření zkří žené .reakt i vity j sou >v oboru dobře známé, např., ELISA nebo -Western -blotting. ' .· , V .alternativním provedení vynálezu mohou’být tyto,-.· imuriogenní techniky použity jak pro’ identifikaci.agens, tak.Preferably je.chybění cross reaktivity.mezi'agens 'agent and anti-apolipoprotein E antibody confirmed using' * r · Fc antibody directed against apolipoprotein E. The immunogen-based techniques for measurement of woman zkří .reakt i vity j sou> known in the art , e.g., ELISA or -Western -blotting. In an alternative embodiment of the invention, these imuriogenic techniques can be used to identify both agents and agents.

-· ·. ( ” r ' r Λ i , τ pro hodnocení jeho koncentrace. Toho může být dosaženo' namířením protilátek proti agens, nebo syntetickému peptidů odvozenému z 'jerio sekvence.- · ·. ( 'R' r Λ i, τ to evaluate its concentration. This can be achieved by targeting antibodies to the agent, or synthetic peptides derived from the 'jerio sequence'.

λ * t .λ * t.

Tak. .vynález poskytuje způsoby detekce přítomnosti spongif.ormní encefalopatie u testovaných zvířat, které mohou vyřešit mnoho, a v preferované formě všechny, problému předchozích metod, Rovnováha mezi spolehlivostí testu a jeho snadným použitím'bude závislá na přesné metodě .analýzy agens, která bude vybrána v metodě podle předkládaného vynálezu. Nicméně, předsmrtná diagnosa BSEu dobytka otevírá možnost pro masové testování stád., a -takJredukcL. pravděpodobnosti porážky neinfikovaných zvířat nebo promeškání porážky infikovaných.So. The invention provides methods for detecting the presence of spongiform encephalopathy in test animals which can solve many, and in a preferred form, all of the problems of the foregoing methods. The balance between test reliability and ease of use will depend on the exact reagent analysis method to be selected. in the method of the present invention. However, the pre-mortem diagnosis of BSEu cattle opens up the possibility for mass testing of herds, and thus reduction. the probability of the slaughter of uninfected animals or the absence of slaughter of the infected.

Způsob podle předkládaného vynálezu bude nyní popsán pouze pro názornost, prostřednictvím následujících příkladů a obrázků. Jiná provedení, spadající do rozsahu vynálezu, .budou odborníkům zřejmá ve světle těchto příkladů.The method of the present invention will now be described, by way of illustration only, by way of the following examples and figures. Other embodiments within the scope of the invention will be apparent to those skilled in the art in light of these examples.

Příklady provedení vynálezu . , . ’ ' .· . . · ... /. . *.DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION. ,. ’'. ·. . · ... /. . *.

Příklad:.'Identifikace BSE', u dobytka rExample: 'BSE identification', cattle r

Příprava vzorku: Byly shromážděny CSF vzorky od BSE pozitivního dobytka ,a-od BSE negativního dobytka. V každém případě byla diagnóza.potvrzena posmrtnouhi stopatologií a) elektronovou mikroskop!í.CSF vzorky byly-odebrány punkcí cisterna magňa po smrti a byly koncentrovány ‘10 -,.15 krát . . Objemy CSF obsahující 40 pg celkového proteinu byly smíseny v poměru 4:1 s denaturačním roztokem (lg dodecylsulfátu sodného (SDS) a 0.232g dithiotreitólu v 10 ml vody) a byly zahřátý na 95 °C po·5 minut. Pak byly vzorky pulzně centr i fugovány. ! *Sample preparation: CSF samples from BSE positive cattle, and from BSE negative cattle were collected. In each case, the diagnosis was confirmed by post mortem stopathology and a) electron microscopy. The CSF samples were collected by puncture of the cistern after death and were concentrated 10-10 times. . CSF volumes containing 40 µg total protein were mixed 4: 1 with denaturing solution (1g sodium dodecyl sulfate (SDS) and 0.232g dithiotreitol in 10ml water) and heated to 95 ° C for 5 minutes. The samples were then pulsed and pulsed. ! *

Elektroforeza: Připravené vzorky byly 2D - . ;Electrophoresis: Prepared samples were 2D -. ;

elektroforezovány za použití Millipore Investigator 2D elektroforetického systému podle metody v manuálu. Iso-elektrické zaměření prvního rozměru bylo provedeno 26 cm závitových skleněných tubách s vnitřním'průměrem 1 mm v pH. gradientu 3-10 pro 18000 volthodin po předchozím zaměření gelu po 1 hodinu při 150Ó V. Druhý rozměr SDS-PAGEelectrophoresed using a Millipore Investigator 2D electrophoretic system according to the method in the manual. The iso-electric measurement of the first dimension was made with 26 cm threaded glass tubes with an internal diameter of 1 mm at pH. Gradient 3-10 for 18000 volt hours after previous gel targeting for 1 hour at 150 ° V. Second dimension SDS-PAGE

......byj proveden...z.a. použití 1 mm .t.enký-ch-gel.ů-Atelkého- formátu (23 cm x 23 cm) s 12,5% akrylamidem a nestohovaným gelem....... be executed ... z.a. using a 1 mm thick thin gel (23 cm x 23 cm) with 12.5% acrylamide and a non-stacked gel.

Barvení a analýza obrazu: 2D gely byly barveny stříbrem t ·· podle Millipore manuálu. Gely byly snímány pomoci Omnimedia scanner XRS a analyzovány ža použití Bioimage software a . Investigator Database programu (Millipore) za' použití sunSPARC station počítače, ‘ ' ·.Staining and image analysis: 2D gels were stained with t ·· silver according to the Millipore manual. The gels were scanned using the Omnimedia XRS scanner and analyzed using Bioimage software. Investigator Database program (Millipore) using 'using a sunSPARC station computer,''·.

. - · ri Potvrzení identity agens: 2D gely byly;elektroblotóvány , λ-/- do/Immobi lon-P; membrán přes noc-při. 30 . V za: použití íBiořRAd. - · ri Agent confirmation: 2D gels were electroblotted, λ - / - to / Immobilon-P; overnight membranes. 30. V for: s use of Bio Rad

Trans Blot buňky. Bloty byly blokovány za použití Tween 80 : po? 1 hodinu a potom -inkubovány po 90 minut s ovčím >Trans Blot cells. Blots were blocked using Tween 80: po? 1 hour and then incubated for 90 minutes with sheep &gt;.

‘ antisérem, obsahujícím polyklonální protilátku namířenou , r proti apolipoproteinu E. Vazba ovčích protilátek byla detekována za použití králičího anti-ovčího IgG a detekčního systému-křenové peroxidasy. . ..'Antiserum containing polyclonal antibody raised r against apolipoprotein E. Bound sheep antibodies were detected using rabbit anti-sheep IgG and detection system-horseradish peroxidase. . ..

ft* · ’ ·. ' ,ft * · ’·. ',

j. ft · . ' · \ ' · 1. i· ..j. ft ·. 'I' ..

Srovnání BSE negativního a BSE pozitivního dobytka:. , Srovnání barvených gelů od typicky BSE pozitivních a typicky , BSE negativních vzorků je ukázáno na Obr.la a Obr. lb. Jak je vidět, počet stříbrně zbarvených skvrn v oblasti ;Comparison of BSE negative and BSE positive cattle :. A comparison of stained gels from typically BSE positive and typically BSE negative samples is shown in Fig. 1a and Fig. 1. lb. As can be seen, the number of silver-colored spots in the area;

korespondující agens majícího přibližnou molekulovou hmotnost 34 - 38 kDa, a pl· okolo 5,4 - 5,7(značený Apo E) je vyšší u BSE pozitivních1 vzorkůí Tyto; skvrny v oblási značeného Apo E byly shledány jako zkříženě reaktivní s anti-apolipoprotein A protilátkou. Nicméně, 2 - 3 skvrny, molekulové hmotnosti 35 - 39 kDa a pl 5,3 (šipka v,každém gelu), korespondující jednomu nebo více agens, které,’ nereagovaly zkříženě s touto protilátkou, nebyly de-tegovatelné v BSE negativních vzorcích, ale byly přítomny __v, jasně,, detegovat e 1 ném množ.s.tví. .v. _B.SE. _p_o_z_i t i vní ch^vzorc í ch.the corresponding agent having an approximate molecular weight of 34-38 kDa, and a pI of about 5.4-5.7 (labeled Apo E) is higher for BSE positive 1 samples of These ; spots in the Apo E-labeled region were found to be cross-reactive with anti-apolipoprotein A antibody. However, 2-3 spots, 35-39 kDa molecular weight and p1 5.3 (arrow in, each gel), corresponding to one or more agents that did not cross-react with this antibody, were not detectable in BSE negative samples, but they were present, clearly, to detect a multiplicity. .in. _B.SE. From the other formulas.

Ji t Ji t

Za použití velkého počtu vzorků télesých tekutin od různých vzorků dobytka bylo shledáno, že agens bylo důsledně přítomno v detegovatelném množství u BSE pozitivních zvířat, žale nebylo detegovatelné u BSE negativních zvířat, což ukazuje, Ze přítomnost a/nebo množství tohoto agens může být použita pro detekci pravděpodobné přítomnosti BSe v potenciálně infikovaných zvířatech.Using a large number of body fluid samples from different cattle samples, it was found that the agent was consistently present in a detectable amount in BSE positive animals, but was not detectable in BSE negative animals, indicating that the presence and / or amount of this agent can be used for detecting the likely presence of BSe in potentially infected animals.

Claims (14)

1. Způsob detekce spongiformní encefalopatie u zvířat, vyznačující se tím, že 'zahrnuje určení přítomnosti a/nebo množství agens v tělesných tekutinách zvířéte, kde toto agens má molekulovou hmotnost mezi 35 a 39 kDa, pl přibližně 5,3 a které nereaguje zkříženě s protilátkou namířenou proti apolipoproteinů E a který zahrnuje stanovení vztahu výsledku k infekčnímu stavu zvířete.CLAIMS 1. A method for detecting spongiform encephalopathy in an animal comprising determining the presence and / or amount of an agent in an animal body fluid, said agent having a molecular weight between 35 and 39 kDa, p1 of about 5.3 and which does not cross-react with an antibody directed against apolipoproteins E and which comprises determining the relationship of the result to the infectious condition of the animal. Ί , * · *' V · · ‘ ‘ ' t . ··. : „ ·. ,; · .·, ·.' > 2. Způsob podle nároku' 1v' y z' n á č U j í' c í ' ’s e t í m, že je výsledek·, určení srovnán s kontrolní hodnotou -a vztah mezi.těmito dvěma je korelován s infekčním, stavem zvířete. · 1 1Ί, * · * 'V · ·''' t. ··. : "·. , ; · · · · · 2. A method according to claim 1, wherein the result of the determination is compared with a control value and the relationship between the two is correlated with the infectious state of the animal. . · 1 1 3. Způsob podle nároku 1 nebo nároku 2, •vy.'z n a. č u j í c í se t í m, žě spongiformní ’ ji encef al opat i í je hovězí spongiformní encef alopatie ’ ‘ - J , - I A method according to claim 1 or claim 2, characterized in that the spongiform encephalopathy is provided with a bovine spongiform encephalopathy 'J 4. Způsob podle jakéhokoliv z předcházejících nároků, .Method according to any one of the preceding claims,. vyznačující se t í m,, že .. .characterized in that. .. .tělesnou tekutinou analyzovanou v metodě je mozkomíšní mok.The body fluid analyzed in the method is cerebrospinal fluid. ...... A - - ’ ' r 4 -i , « ' · < .*·'·...... A - - '' r 4 -i, '' · <. * · '· 5. Způsob podle jakéhokoliv z předcházejících nároků, v y z n a č u j í - c: í s e t í m,. že přítomnost a/nebo množství agens v tělesné tekutině ' ' ·· . ’ zvířete je určena za použití polyakrylamidové gelové elektroforezy (PAGE) pro separaci agens, majících jak molekulovou hmotnost mezi 35 a 39 kDa a pl 5,3 od jiného materiálu v tělesné tekutině, a pak za použití barvení gelu a provedení dénzitometrického měřeni v oblasti gelu, která obsahuje agens.. tak, _a_by se urči la^pří tomnos-t—a/nebo.-množství přítomného agens.A method according to any one of the preceding claims, characterized in that: that the presence and / or amount of the agent in a body fluid is provided. The animal is determined using polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) to separate agents having both a molecular weight between 35 and 39 kDa and a p1 of 5.3 from other material in body fluid, and then using gel staining and performing densitometric measurement in the gel region which contains the agent, so as to determine the presence and / or amount of the agent present. 6. Způsob podle nároku 5, vyznačující. se tím, že.PAGE je dvourozměrná polyakrylamidová gelová ěléktrofóreza.Method according to claim 5, characterized by: The method of claim 1, wherein the PAGE is a two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis. 7. Způsob podle nároku 5 nebo nároku 6, vyznačuj ící se t í m, že barvení je barvení stříbrem.The method of claim 5 or claim 6, wherein the dyeing is silver dyeing. 1 J ' i , ' . 4 - : , .· r, · '«lf «r ·,. ’8, Způsob podle· jakéhokoliv, z předcházejících nároků,. 1 J 'i,'. 4 - : ,. · R, · lf «r · ,. Method according to any one of the preceding claims. v y. z. n a č. u j i c í se tím, 1 - -že chybění, zkřížené reaktivity mezi agens a anti-apolipoprotein E protilátkou je potvrzeno použitím ’ -'protilátky namířené proti apolipoproteínu E. .v y. characterized in that the lack of cross-reactivity between the agent and the anti-apolipoprotein E antibody is confirmed by the use of an anti-apolipoprotein E antibody. '9. Způsob podle jakéhokoliv, z nároků.1 až 4, - , .·.. - v y z n a č u j í c í s .e .. tím,;. 4 ..'9. Method according to any one of claims 1 to 4, characterized in that the method is as follows: 4 .. že protilátky, jsou namířené proti, agens., nebo syntetickému' , peptidů odvozenému od jeho sekvence, a přítomnost a/nebo množství'agens v tělesné tekutině zvířete je určeno za použití těchto protilátek.that the antibodies are directed against an "agent" or synthetic peptide derived from its sequence, and the presence and / or amount of the agent in the body fluid of the animal is determined using these antibodies. ' , ' ' ' . . .... v·-.. .. - . ,- .. · · , -γ -- .','''. . .... v · - .. .. -. , - .. · ·, -γ -. 10. Způsob podle jakéhokoliv z nároků 2 až 9, vyznačující setím,.Method according to any one of claims 2 to 9, characterized by sowing. že je kontrolní hodnota určena stejnou hodnotou jako je použita pro zvíře, ale za použití dalšího zvířete, pro které, je znám jeho infekční stav. .that the control value is determined by the same value as that used for the animal but using another animal for which its infectious condition is known. . v ' , íl. Způsob-detekce přítomnosti spongiformní ’ encefalopatie u zvířat jak je zde v podstatě popsán dříve.v ', clay. A method for detecting the presence of spongiform encephalopathy in an animal as essentially described herein before. 1ψ ÍVÍ~ ' ι změněný list1ψVÍ ~ ~ ι changed sheet Τ3 33 <-3 33 < < < T3 T3 o O í— and- X X O O O O l 4^ l 4 ^ ω ω 2 2 c- C- ΟΊ; ΟΊ; < OO < OO Λ Λ σ o czx σ O czx - M - M o< o < O O o O □ □ f— F- c rvn C rvn LO' LO ' O O ; >—* ; > - * < -s <-s ΞΓ cz> ΞΓ com> ·. cn ·. cn * * '-V· '-IN·
Ρ at ent o v é— nárokyEnt at ent o v nároky nároky claims 1. Způsob pro určení infekčního stavu spongiformní encefalopatie u zvířat, vyznačující se tím, že zahrnuje určení.přítomnosti a/nebo množství agens v tělesných tekutinách zvířete, které:A method for determining an infectious condition of spongiform encephalopathy in an animal, comprising determining the presence and / or amount of an agent in an animal's body fluid which: (a) je možné získat z mozkomíšního moku zvířete s pozitivním infekčním stavem (b) má molekulovou hmotnost mezi 35 a 39 kDa, . , , (c) má pí- přibližně 5,3, , ' ’ ' - - - · ,(dj nereaguje zkříženě ,'s proti látkou namířenou prot i . , apol ipoproteinu·· E, ' ' .(a) it is possible to obtain from a cerebrospinal fluid of an animal with a positive infectious condition; (b) it has a molecular weight between 35 and 39 kDa; , (c) has a pI of approximately 5.3, '´' - - - ·, (dj does not cross-react with the anti-substance directed against the β-apoprotein ·· E, ''. á který zahrnuje stanovení vztahu výsledku k infekčnímu stavu zvířete. . . ' , ' · ,and which comprises determining the relationship of the result to the infectious condition of the animal. . . ',' ·, 2. Způsob podle nároku í,v y z n a č u j ící se tím, že je výsledek.určení srovnán; s kontrolní hodnotou a vztah ' mez i.těmi to-dvěma je‘korelován s infekčním-stavem zvířefe. 1 ' ‘2. A method according to claim 1, wherein the result of the determination is compared; with a control value and the relationship between the two is correlated with the infectious state of the animal. 1 '' 7 ·. '· ' »'7 ·. '·' »' 3. Způsob podle nároku 1 nebo nároku 2, .v. y. z n. a.č u j í..c í...... s -e t í m, - —.......The method of claim 1 or claim 2, v. y. z n. a.č u jí..c í ...... s -e t m - --....... že spongiformní éncefalopatií, je hovězí _sp.pngiformní.; , encefalopat ie. ' .that spongiform encephalopathy is bovine _sp.png uniform .; , encephalopat ie. '. 4.; Způsob podle jakéhokoliv z předcházejících nároků, v y z n a č u j í c ί , ’s e tím, že tělesnou tekutinou analyzovanou ve způsobu je mozkomísní změněný list - - · mok. - - .4 .; Method according to any one of the preceding claims, characterized in that the body fluid analyzed in the method is a cerebrospinal fluid altered sheet. - -. 5. Způsob podle jakéhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím,Method according to any one of the preceding claims, characterized in that Že přítomnost a/nebo množství agens v tělesné tekutině < zvířete je určena za použití polyakrylamidové gelové « n.That the presence and / or amount of the agent in the body fluid of the animal is determined using a polyacrylamide gel. elektroforezy (PAGE) pro separaci agens majících jak j ' molekulovou hmotnost mezi 35 a 39 kDa tak.pl ,5,3, od jiného materiálu v tělesné tekutině, a pak za použití barvení gelu a provedení denzitometrického měření voblasti gelu, která obsahuje' agens tak, aby.se určila přítomnost a/nebo mnóžství ?·/ - /-přítomného agens .: :?· / .. A · . ' ' ' , ' ' ' ř . 'i ·- .1 · · . .·.electrophoresis (PAGE) for separating agents having both a molecular weight between 35 and 39 kDa and p1, 5.3, from another material in a body fluid, and then using gel staining and performing densitometric measurements in the gel area containing the agent so as to determine the presence and / or amount of the? / - /-present agent. ::? · / .. And ·. ''',''' r. 'i · - .1 · ·. . ·. • v <• v < 6. Způsob podle nároku 5, -v yz.načující se >. t í m, Ze. PAGE je dvourozměrná polyakrylamidová gelová k ·.,» 'elektroforeza.A method according to claim 5, characterized in that it is>. that. PAGE is a two-dimensional polyacrylamide gel to ·., » 'Electrophoresis. - k ' .- k '. ' . ’ ' ' *''. ’'' * ' 7. Způsob podle nároku 5 nebo nároku 6, , , ., .A method according to claim 5 or claim 6. ’ ! - / ....... ' .. ‘ · ΐ ./ v y z n a č u j í c í s >e t í m·, že barvení 'je , * barvení .stříbrem. * '..,..·.’! The dyeing process is that the dyeing is a silver dyeing. *. v. , ' ? . , , -w.. 'ů =* .· .*·* . » . . .v., '? . ,, -w .. 'ů = *. ·. * · *. ». . . 8. Způsob podle jakéhokoliv z předcházejících nároků, u v y z ,n a č u ,'j í c í ..se tím, .... , .. - -, ...... - ..A method according to any one of the preceding claims, characterized in that the method is as follows: > že chybění zkřížené' reaktivity mezi agens a ' ' 1 . Λ anti-apolipoprotein E proti látkou'je potvrzeno použi tím r ř protilátky namířené proti apoiipoproteinu E.> that there is a lack of cross-reactivity between the agent and the ' 1 '. Anti-apolipoprotein E against the substance is confirmed by the use of antibodies directed against apoipoprotein E. 9. Způsob podle jakéhokoliv z nároků 1 až 4, <, v y z, n a č, ύ j í c í s e . t í m, ' ' změněný list-·—.A method according to any one of claims 1 to 4, characterized in that the process is carried out. t m, '' modified sheet - · -. že protilátky jsou namířené proti agens, nebo syntetickému peptidu odvozenému^ od j_eho sekvence,. a_ .přEtomnos t^a/nebo množství agens v tělesné tekutině zvířete je určeno.za použití těchto, proti látek.that the antibodies are directed against an agent or synthetic peptide derived from its sequence. The presence and / or amount of agents in the body fluid of the animal is determined by the use of these agents. 10. Způsob podle jakéhokoliv z nároků 2 aí 9,, , vyznačující se tím, že‘kontrolní hodnota je určena stejnou hodnotou jako-je použitá' pro zvíře, ale za použití dalšího zvířete; pro které je znám jeho infekční stav. , 'The method of any one of claims 2 to 9, wherein the control value is determined by the same value as that used for the animal but using another animal; for which his infectious condition is known. , ' 11. Způsob detekce přítomnosti spongiformní · c „ . .. · k- - . f .11. A method for detecting the presence of spongiform cc. .. · k- -. f. encefalopatie u zvířat jak je zde v podstatě popsán dříve..encephalopathy in animals as essentially described herein earlier. 12. Agens , které:12. Agents which: ‘ (a) je možné získat z mozkomíšního.moku zvířete s pozitivním infekčním stavem spongiformní'(A) it is possible to obtain from the cerebrospinal fluid of an animal with a positive infectious condition spongiform - encefalopatie ' . . , . , ’ M ‘ 9 J 1 (b) má· molekul ovou. hmotnost-mezi 35’a .39 kDa, (c) má'pí přibližně 5,3, a ř : ' (d) nereaguje zkříženě s protilátkou namířenou proti , ‘ apolipoproteinu Ε.,- encephalopathy '. . ,. , ' M ' 9 J 1 (b) has a molecular. 35'a-weight between .39 kDa, (c) má'pí about 5.3, and R '(d) does not crossreact with antibodies directed against' apolipoprotein Ε., 13. ’Agens*podle nároku 12 pro použití ve způsobu určení infekčního stavu spongiformní encefalopatie.zvířete.‘The agent of claim 12 for use in a method for determining an infectious condition of spongiform encephalopathy.animal. .. , s 1'.., s 1 ' 14. Proti látka’namířená proti agens podle nároku 12, nebo proti syntetickému peptidu odvozenému od jeho sekvence:The anti-agent against the agent of claim 12 or the synthetic peptide derived from its sequence:
CZ971642A 1994-11-29 1995-11-28 Method of detecting spongy-like encephalopathy CZ164297A3 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9424015A GB9424015D0 (en) 1994-11-29 1994-11-29 Spongiform encepmalopathy detection methods
GBGB9424769.9A GB9424769D0 (en) 1994-11-29 1994-12-07 Spongiform encephalopathy detection methods
PCT/GB1995/002766 WO1996017249A1 (en) 1994-11-29 1995-11-28 Spongiform encephalopathy detection methods

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ164297A3 true CZ164297A3 (en) 1997-11-12

Family

ID=26306057

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ971642A CZ164297A3 (en) 1994-11-29 1995-11-28 Method of detecting spongy-like encephalopathy

Country Status (11)

Country Link
EP (1) EP0795132A1 (en)
AU (1) AU3932895A (en)
CA (1) CA2205179A1 (en)
CZ (1) CZ164297A3 (en)
FI (1) FI972253A (en)
GB (1) GB2308659B (en)
HU (1) HUT77340A (en)
NO (1) NO972339D0 (en)
NZ (1) NZ295721A (en)
SK (1) SK67897A3 (en)
WO (1) WO1996017249A1 (en)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ335290A (en) 1996-10-15 2001-08-31 D Gen Ltd Diagnosis an typing of spongiform encephalopathy (or bovine spongiform encephalopathy (BSE))
GB2355074A (en) * 1996-10-15 2001-04-11 Imperial College Method for predicting susceptibility to bovine spongiform encephalopathy
GB9701045D0 (en) * 1997-01-18 1997-03-05 Narang Harash K Diagnosis of neuro-degenerative disorders
CA2286279C (en) * 1998-02-06 2009-05-12 Harash Kumar Narang Diagnosis of neuro-degenerative disorders
FR2827047B1 (en) * 2001-07-03 2003-09-26 Apoh Technollgies Sa PROCESS FOR SEPARATION AND / OR DETECTION AND / OR IDENTIFICATION AND / OR QUANTIFICATION OF PRION PROTEINS

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4892814A (en) * 1987-06-22 1990-01-09 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method for distinguishing Creutzfeldt-Jakob disease from other dementias

Also Published As

Publication number Publication date
SK67897A3 (en) 2000-02-14
FI972253A0 (en) 1997-05-28
WO1996017249A1 (en) 1996-06-06
NO972339L (en) 1997-05-22
NZ295721A (en) 1999-03-29
NO972339D0 (en) 1997-05-22
EP0795132A1 (en) 1997-09-17
HUT77340A (en) 1998-03-30
FI972253A (en) 1997-07-28
GB9708663D0 (en) 1997-06-18
CA2205179A1 (en) 1996-06-06
AU3932895A (en) 1996-06-19
GB2308659A (en) 1997-07-02
GB2308659B (en) 1998-11-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11933792B2 (en) Markers for renal disease
SK9492001A3 (en) Method and kit for extracting prion protein
US10041954B2 (en) Biomarker for psychiatric and neurological disorders
CZ164297A3 (en) Method of detecting spongy-like encephalopathy
Miller III et al. Immunological detection of DNA-protein complexes induced by chromate
CZ164197A3 (en) Method of detecting spongy-like encephalopathy
WO1998026293A9 (en) Methods of detecting transmissible spongiform encephalopathies by detecting 14-3-3 protein isoforms
WO1998026293A1 (en) Methods of detecting transmissible spongiform encephalopathies by detecting 14-3-3 protein isoforms
AU2017204520B2 (en) Markers for renal disease
US20040175775A1 (en) Method of detecting PrPsc in eye fluid
Cobb et al. Use of indirect immunofluorescence and western blotting to assess the role of circulating antimyocardial antibodies in dogs with dilated cardiomyopathy
ITMI20001474A1 (en) PROCEDIMOENTO FOR THE DOSAGE OF TOXINS DSP OF THE DINOPHYSISTOSSINE AND YESSOTTOSSINE GROUP
KR20230118916A (en) Sensitizer and measurement method for immunochromatography measurement
BG64291B1 (en) Method and kit for extracting prion protein
MXPA01006875A (en) Method and kit for extracting prion protein

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic