CZ164197A3 - Method of detecting spongy-like encephalopathy - Google Patents

Method of detecting spongy-like encephalopathy Download PDF

Info

Publication number
CZ164197A3
CZ164197A3 CZ971641A CZ164197A CZ164197A3 CZ 164197 A3 CZ164197 A3 CZ 164197A3 CZ 971641 A CZ971641 A CZ 971641A CZ 164197 A CZ164197 A CZ 164197A CZ 164197 A3 CZ164197 A3 CZ 164197A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
animal
agent
body fluid
amount
encephalopathy
Prior art date
Application number
CZ971641A
Other languages
Czech (cs)
Inventor
Michael Dawson
Trevor Conrad Martin
Paula Keyes
Verity Jones
Original Assignee
Mini Agriculture & Fisheries
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB9424068A external-priority patent/GB9424068D0/en
Application filed by Mini Agriculture & Fisheries filed Critical Mini Agriculture & Fisheries
Publication of CZ164197A3 publication Critical patent/CZ164197A3/en

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
    • G01N2800/28—Neurological disorders
    • G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
    • G01N2800/2828—Prion diseases

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

A method for detecting the presence of a spongiform encephalopathy (e.g. Bovine Spongiform Encephalopathy) in an animal comprising determining the presence and/or amount of agent (e.g. by 2D-polyacrylamide gel electrophoresis and staining) in a body fluid (e.g. cerebrospinal fluid) of the animal which has a molecular weight of between 35-39 kDa, and a pI of 5.3 and which does not cross-react with antibody raised against apoliprotein E and relating the result of this determination to a control value (e.g. from a known uninfected animal) so as to be able to detect the likely presence of spongiform encephalopathy in the animal.

Description

Oblast techniky . .Technical field. .

Předkládaný vynález se týká metod pro detekci spongiformních encephalopatií u zvířat, a zejmena detekce hovězí spongíformní encefalopatie (BSE) u dobytka.The present invention relates to methods for detecting spongiform encephalopathies in animals, and in particular for the detection of bovine spongiform encephalopathy (BSE) in cattle.

i Dosavadní stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION

Spongíformní encefalopatie jsou třídou chorob, která zahrnuje scrapie u ovcí a Čretzfeld-Jakobovu chořóbu^u lidí.Spongiform encephalopathies are a class of diseases that include scrapie in sheep and Cretzfeld-Jakob's disease in humans.

* í ' F,’ '· .* í 'F,' '·.

BSE jé.hlášení podléhajícífatální neurodegenérat i vhí.. /./ choroba' nacházená u.dobytka. BSE je. velmi důležitá-prol · · · britský farmářský průmysl. ' . ...BSE is a report subject to a fatal neurodegenerate as well as a disease found in an animal. BSE is. a very important-prol · · · British farming industry. '. ...

’ . < i . ·* 1 ' , * ' ΐ -Λ”' , . * ’’ V současnosti' jsou případy BSE identifikovány klinickou .manifestací u zvířat. Případy jsou potvrzeny posmrtnou •/V · F analýzou mozkové tkáně, například histopátologiί, pomocí detekce se scrapie asociovanými vlákny nebo protéiriasa K rezistentního proteinu. . , • v . . · i' 1 · . v ’ . · . . . ‘ . ’· ;'. <i. · * 1 ', *' ΐ - Λ '',. Currently, BSE cases are identified by clinical manifestation in animals. The cases are confirmed by post-mortem / V · F analysis of brain tissue, such as histopathology, by detection of scrapie-associated fibers or protéiriasis of the K resistant protein. . , • v. . · I ' 1 ·. v '. ·. . . '. '·;

Tyto metody mají tu nevýhodu, že vyžadují porážku.. , potenciálně infikovaných zvířat, o kterých se může ukázat, ,že jsou bez onemocnění. Alternativně mohou být klinické .. *These methods have the disadvantage that they require slaughter of potentially infected animals which may prove to be disease-free. Alternatively, they may be clinical .. *

-žnámky nepřítomné, nebo nedětegované, a tak se ponechají infikovaná zvířata ve stádě.- the marks absent or undigested, leaving the infected animals in the herd.

Tak existuje potřeba předsmrtného testu na BSE, který může být použit v diagnóze potenciálně infikovaných zvířat.Thus, there is a need for a premature BSE test that can be used in the diagnosis of potentially infected animals.

-Podstata vynálezuSUMMARY OF THE INVENTION

Předkládaný vynález nyní poskytuje metodu pro detekci .....spongiformní encefalopatie u zvířat.,, která řeší. některé, a v preferovaném provedení všechny, tyto problémy.The present invention now provides a method for detecting spongiform encephalopathy in animals that it solves. some, and in a preferred embodiment all, these problems.

Podle jednoho aspektu předkládaného vynálezu je poskytnuta metoda pro detekci přítomnosti spongiformní * encefalopatie u zvířat, .která zahrnuje určení přítomnosti a/nebo množství agens v tělesných tekutinách zvířete, kdeAccording to one aspect of the present invention, there is provided a method for detecting the presence of spongiform encephalopathy in an animal, comprising determining the presence and / or amount of the agent in the body fluids of the animal, wherein

-1 agens má molekulární hmotnost mezi 35 - 39 kDa, pl přibližněThe 1 agent has a molecular weight between 35-39 kDa, p1 approximately

5,3 a nereaguje zkříženě s protilátkami namířenými prot i apol i.poproteinu E a určeni vztahu tohoto. určení k infekčnímu stavu zvířete.5.3 and does not cross-react with antibodies directed against apol ioprotein E and determine the relationship of this. intended to infect the animal.

Preferovaně je výsledek určení srovnán s kontrolní hodnotou a jejich vztah je korelován s infekčním.stavem ' zvířete.Preferably, the result of the determination is compared to a control value and their relationship is correlated with the animal's infection status.

Preferovaně je metoda využita pro detekci, BSE.Preferably, the method is used for detection, BSE.

Tak objev, Že infekce zvířete spongiformní encefalopat ií fc * | může být korelována s přítomností nebo se- zvýšením < ' koncentrace agens v tělesných tekutinách'tohoto zvířete vytváří základ pro metodu.podle předkládaného vynálezu.Thus the discovery that an animal infection with a spongiform encephalopathy is fc * | it may be correlated with the presence or increase in the concentration of the agent in the body fluids of this animal to form the basis of the method of the present invention.

Apolipoprotein E je cholesteroltransportní protein produkovaný v periferním a centrálním nervovém systému. Jeho přítomnost bud v mnohotných nebo v jednoduchých formách může být kategorizována v mozkomíšním moku (CSF) a séru. Jeho molekulová hmotnost (37 kDa) a pl (asi 5,4 až 5,7) je podobná jako u agens popsaného výše. Nicméně, agens, které je určováno v metodách podle předkládaného.vynálezu ' ’ nereaguje zkříženě s protilátkou proti apolipoproteinu E.Apolipoprotein E is a cholesterol transport protein produced in the peripheral and central nervous systems. Its presence in either multiple or simple forms can be categorized in cerebrospinal fluid (CSF) and serum. Its molecular weight (37 kDa) and pI (about 5.4-5.7) are similar to those described above. However, the agent that is determined in the methods of the present invention does not cross-react with the anti-apolipoprotein E antibody.

Mělo by být zdůrazněno, Že neexistuje požadavek pro přesné určení koncentrace agens, protože stav infekce zvířete spongiformní encefalopatií muže být detegován srovnáním s' kontrolou.It should be emphasized that there is no requirement to accurately determine the concentration of the agent, since the infection status of the animal by spongiform encephalopathy can be detected by comparison with the 'control'.

Kontrolní hodnota může být odvozena od koncentrace agens v různých zvířatech (pro které je infekční stav známý) a která jsou analyzována paralelně s testovaným zvířetem.The control value may be derived from the concentration of the agent in the various animals (for which the infectious condition is known) and which are analyzed in parallel with the test animal.

'Alternativně může být kontrolní hodnota od stejného zvířete , , ·, nebo' j í může'být známý standard. ; ·:.. · · *· . t . .;·· · * . š . ’ . V každém.pří pádě musí být kontrolní hodnota určena za použití stejné· metody, která byla použita pro testování k zvířete nebo za použití odlišné analytické metody.Alternatively, the control value may be from the same animal, or may be a known standard. ; ·: ... t. . ·· · *. š. '. In každém.pří fall control value must be determined using the same method ·, which was used for the test animal or using a different analytical method.

• * · · .• * · ·.

•ř * ’ .• *.

'·;* Výsledky'od kontrolního. zvířete mohou být použity pro, , odvození -standardní kontrolní hodnoty.^nebo pro kalibrování . '' výsledků testovaného zvířete. ’ < , · . ' · \ · ’ - -1fcJ ' * i + p f . ·. . . ' i .Preferovanou tělesnou tekutinou analyzovanou v metodě jie'·; * Results'from checklist. The animal can be used to derive a standard control value or to calibrate. '' test animal results. '<, ·. '· \ ·' - -1fcJ '* i + p f. ·. . . Preferred body fluid analyzed in method j i e

CSF, vzhledem k tomu, že těsný kontakt CSF-s mozkem,znamená, že .neurologické choroby, které produkují změny ve složení . proteinů mozku, mohou být manifestovány v CSF,. Metody pro / extrakci vzorků CSF jsou odborníkům dobře známé. . ' * ' . * '*»CSF, since close contact of CSF-with the brain, means that neurological diseases that produce changes in composition. brain proteins can be manifested in CSF. Methods for / extracting CSF samples are well known to those skilled in the art. . '*'. * '* »

Vynález využívá jakoukoliv metodu pro určení přítomnostiThe present invention utilizes any method for determining presence

Λ * * 5 a/nebo množství agens v tělesné tekutině zvířete, která je ** And / or the amount of agent in the body fluid of the animal that is *

nyní v oboru-známa a jakoukoliv metodu, která se pozdě.j i stane dostupnou.now known in the art and any method that becomes available later.

Preferovaně je přítomnost a/nebo množství-agens v tělesné tekutině zví.fet.e určena„za použit í polyakry-lamidov-é- gelové - elektroforesy (PAGE) pro separaci agens, majících jak molekulovou hmotnost mezi 35 - 39 kDa tak pí přibližně 5,3, od jiných materiálů v tělesné tekutině, a potom barvením gelu a provedením densitometrického měření v oblasti’gelu, která obsahuje agens tak, aby se určila přítomnost a/nebo množství přítomného agens.Preferably the presence and / or amount - the agent in a body fluid zví.fet.e designated "s using polyacrylic lamidov-E- gel - electrophoresis (PAGE) separation agents having both a molecular weight between 35-39 kDa and a pI of about 5.3, from other materials in the body fluid, and then dyeing the gel and performing densitometric measurements in the region of the gel containing the agent to determine the presence and / or amount of the agent present.

Preferovaně je PAGE dvourozměrná polyakryl.amidová gelová elektroforeza (2DPAGE) a barveni je barvení stříbrem.·, j .;Preferably, the PAGE is a two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2DPAGE) and the staining is silver staining.

• 1·. F '• 1 ·. F '

Preferovaně je chybění zkřížené reaktivity meziTagens a. agens anti-apolipoprotein E protilátky potvrzeno použitím ' I * - ’ protilátky namířené proti apolipoproteinu E. Na imunogenu založené techniky pro měření zkřížené reaktivity jsou v oboru dobře známé, např.' ELISA nebo Western blotting.Preferably, the lack of cross-reactivity between the T agent and the anti-apolipoprotein E antibody agent is confirmed using an 'I * -' antibody directed against apolipoprotein E. Immunogen-based techniques for measuring cross-reactivity are well known in the art, e.g. ELISA or Western blotting.

. 1 · . , t - - a · * ·’ '.· ’ ·/ ·· • ,. , . · - *·• 1 i» . - · · , ‘ · ·-7 ’ ’V alternativním provedení ..vynálezu mohou být tyto.. 1 ·. , t - - and · * · ''. · '· / ·· •,. ,. · - * · • 1 i ». In an alternative embodiment of the invention, these may be.

r·...:.· -i. , · · · - í · - ! ; · u- 1 . ... , , · · 4 · · imunogenní techniky použity jak pro iděntifikaci agens, takr · ...:. · -i. , · · · - í · - ! ; · U- 1 . Immunogenic techniques used to identify agents as well

L . ·> » X ·. ί· ... . I í pro hodnocení jeho koncentrace. Toho může být dosaženo / ..,'’. 4 ‘ ‘ ''* ’- namířením, prot i látek proti agens, nebo Syntetickému peptidu odvozenému z jeho sekvence. ,L · X ». ί · .... It is also used to evaluate its concentration. This can be accomplished by / .. ''. 4 m ‘'' * ´ - by targeting, against agents against an agent, or a synthetic peptide derived from its sequence. ,

.....i - - Λ·-...... ' * ....... ' r‘'..... i - - Λ · -...... '* .......' r ''

Tak vynález poskytuje metody-pro detekci- přítomnosti . spongiformní encefalopatie u testovaných zvířat, které mohou ' vyřešit mnoho, a v preferované formě všechny, problémů předchozích metod.. Rovnováha mezi spolehlivostí testu a jeho snadným použitím bude závislá na přesné metodě analýzy . 1 .Thus, the invention provides methods for detecting the presence. spongiform encephalopathies in test animals that can solve many, and in a preferred form, all of the problems of the prior art. The balance between the reliability of the test and its ease of use will depend on the exact method of analysis. 1 .

agens, která bude vybrána v metodě podle předkládaného vynálezu. Nicméně, předsmrtná diagnosa BSEu dobytka otevírá možnost pro masové testování stád, a tak redukci pravděpodobnosti porážky ne i nf ikovaných zvířat,, nebo . promeškání porážky infikovaných.an agent to be selected in the method of the present invention. However, the pre-mortem diagnosis of BSEu cattle opens the possibility for mass testing of herds, thus reducing the likelihood of slaughter of uninfected animals, or. missing the slaughter of the infected.

Metoda podle předkládaného vynálezu bude nyní popsána, pouze pro názornost, prostřednictvím následujících příkladůThe method of the present invention will now be described, by way of illustration only, by way of the following examples

I a obrázků. Jiná provedení spadající do rozsahu vynálezu budou odborníkům zřejmá ve světle těchto příkladů.I and pictures. Other embodiments within the scope of the invention will be apparent to those skilled in the art in light of these examples.

Příklady provedení vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Příklad: Identifikace BSE u dobytkaExample: Identification of BSE in cattle

Příprava vzorku: Byly shromážděny CSF vzorky od.BSE pozitivního dobytka a od BSE negativního dobytka. V-každém, případě byla diagnosa potvrzena posmrtnou histopatologii a elektronovou mikroskopií. CSF vzorky byly odebrány punkcí cisterna magna po,smrti. a byly koncentrovány 10 - 15 krát.. Objemy CSF obsahuj ící- 40 pg celkového proteinu byly smíseny' v,poměru 4:1 s denaturačním roztokem (1 g dodecylsulfátu· sodného (SDS) a 0,2.32 g dithiotreitolu v 10 ml vody) a byly zahřátý na 95 °C po 5 minut. Pak byly vzorky pulzně centrifugovány.Sample preparation: CSF samples were collected from BSE positive cattle and BSE negative cattle. In each case, the diagnosis was confirmed by post-mortem histopathology and electron microscopy. CSF samples were collected by puncture of the cistern magna after death. CSF volumes containing 40 µg of total protein were mixed 4: 1 with denaturing solution (1 g sodium dodecyl sulfate (SDS) and 0.2.32 g dithiotreitol in 10 ml water). and were heated to 95 ° C for 5 minutes. The samples were then pulsed by centrifugation.

Elektroforeza: Připravené vzorky byly 2D elektroforezováný za použití Millipore Investigator 2D elektroforetického systému podle metody v manuálu; Izoelektrické zaměření prvního rozměru bylo provedeno 26 cm závitových skleněných tubách s vnitřním průměrem 1 mm v pH gradientu 3 - 10 pro 18000 volthodin po předchozím zaměření gelu po t hodinu, při 1500 V. Druhý rozměr SDS7PAGE byl proveden za použití 1 mm tenkých' gelů velkého formátu ,· (23 cm x _23_._cm) s. 1.2,5%. akrylamidem a,nestohovaným-ge-lem.Electrophoresis: The prepared samples were 2D electrophoresed using a Millipore Investigator 2D electrophoresis system according to the method in the manual; The isoelectric measurement of the first dimension was performed with 26 cm threaded glass tubes with an internal diameter of 1 mm in a pH gradient of 3-10 for 18000 volt hours after previous gel targeting for t hour, at 1500 V. The second dimension SDS7PAGE was performed using 1 mm thin gels format, · (23 cm x _23 _._ cm) p. 1.2.5%. acrylamide and, non-stacked geel.

Barvení á analýza obrazu: 2D gely byly barveny stříbrem podle Millipore manuálu. Gely byly snímány pomocí Omnimedia scanner XRS a analyzovány za použití Bioimage, software a ’ ' i . . Λ ·. kStaining and image analysis: 2D gels were stained with silver according to the Millipore manual. The gels were scanned with the Omnimedia XRS scanner and analyzed using Bioimage, software and 'i'. . Λ ·. to

Invěsťigáťor Database programu (Millipore) zapoužití sunSPARC station počítače.Database Designer (Millipore) using sunSPARC station computer.

Potvrzení identity agens: 2D gely byly elektroblótovány do:Immobilon-P membrán přes noc při 30 V za použití Bio, RAd T Trans Blot buňky. Bloty byly blokovány za použití Tween/80* ’ρο 1 hodinu a potom inkubovány po 90 minut s ;ovčím.;<.· ' antisérem, obsahuj ícím polyklonální proti látku namířenou proti apel ipopróteinu E.‘ Vazba ovčích proti látek byla detegována za použití králičího anti-ovčího.IgG a detekčního systému křenové*peroxidasy. ' ' ... Srovnání BSEýnegat ivního^ a BSE pozitivního dobytka:, Srovnání barvených gelů od. typicky BSE pozi t ivní Ch ;a typ-ícky . J ’ r -' ' - - 'T L · ' - “ , ' * .. · .Agent identity confirmation: 2D gels were electroblotted into : Immobilon-P membranes overnight at 30 V using a Bio, RAd T Trans Blot cell. The blots were blocked using Tween / 80 for 1 hour and then incubated for 90 minutes with sheep antiserum containing a polyclonal anti-apoprotein E. Binding of sheep anti-substances was detected using rabbit anti-sheep IgG and a horseradish peroxidase detection system. Comparison of BSE-negative and BSE-positive cattle: Comparison of stained gels from < tb &gt; typically BSE positive Ch 2 and typ. J 'r -''--' T L · '-', '* .. ·.

BSE negativních vzorků je ukázáno na Obr.la á Óbř. lb.· Jak’ • ’ < · · r · je vidět, počet stříbrně zbarvených skvrn v oblasti' '· ý korespondující agens, ma.j ícímu přibl ižnou molekulovou, hmotnost 34 - 38 kĎa, a pl okolo 5,4 -'5,7 >(značený .ApoBSE negative samples are shown in FIG. As can be seen, the number of silver-stained spots in the region corresponding to an agent having an approximate molecular weight of 34-38 kPa and a pl of about 5.4- 5.7> (labeled .Apo

E)·, je vyšší- u-BSE pozitivních vzorků. Tyto skvrny ív oblasi značeného ApoE byly shledány jako zkříženě reaktivní s anti-apolipoprotein A.protilátkou. Nicméně, ’2 -'3 skvrny, molekulové hmotnosti 3.5 - 39 kDa a pI 5,3 (šipka v. každém gelu), korespondující jednomu nebo více agens, které nereagovaly zkříženě s touto protilátkou, nebyly detegovatelné v BSE negativních vzorcích, ale byly přítomny v jasně detegovatelném množství- v BSE pozitivních vzorcích.E) · is higher- u-BSE positive samples. These spots in the ApoE-labeled region were found to be cross-reactive with the anti-apolipoprotein A. antibody. However, '2-3-spots, molecular weight 3.5-39 kDa and pI 5.3 (arrow in each gel), corresponding to one or more agents that did not cross-react with this antibody, were not detectable in BSE negative samples but were present in a clearly detectable amount in BSE positive samples.

Za použití velkého počtu vzorků tělesých tekutin od různých vzorků dobytka bylo shledáno, že agens bylo důsledně přítomno v detegovatelném množství u BSE pozitivních zvířat, ale nebylo detegovatelné u BSE negativních zvířat, což ukazuje’, že přítomnost a/nebo množství tohoto agens může být použita pro detekci pravděpodobné přítomnosti BSE,v potenciálně infikovaných zvířatech..Using a large number of body fluid samples from different cattle samples, it was found that the agent was consistently present in a detectable amount in BSE positive animals, but was not detectable in BSE negative animals, indicating that the presence and / or amount of this agent can be used. to detect the likely presence of BSE in potentially infected animals.

V.IN.

Ví“· 'rVSHe knows '' rVS

O <77 σO <77 σ

o tx tO'o tx tO '

OC změněný listOC changed sheet

PATENTOVÉ NA KOKYCOCTENT PATENT

1. Způsob určení infekčního stavu spongiformní encefalopatie u zvířat, vyznačující, se tím, Že zahrnuje určení přítomnosti a/nebó množství agens v tělesných tekutinách zvířete, které:What is claimed is: 1. A method of determining an infectious condition of spongiform encephalopathy in an animal comprising: determining the presence and / or amount of an agent in an animal's body fluid which:

(a) je možné získat z mozkomíšního moku zvířete s pozitivním infekčním stavem (b) má, molekulovou hmotnost mezi 35 a 39 kDa, . (c). má plpřibližně 5,3, _ ' -.(a) it is possible to obtain from a cerebrospinal fluid of an animal having a positive infectious condition; (b) has a molecular weight between 35 and 39 kDa; (C). it has about 5.3%.

(d) nereaguj,e zkříženě s protilátkou námi fenou prot i- = apolipoproteinů E, a který zahrnuje.-stanovení vztahu výsledku k infekčnímu stavu zvířete.(d) do not cross-react with the antibody by an anti-apolipoprotein E female, and which comprises determining a result of the animal's infection status.

2. Způsob podle nároku 1, v y z n a č u j í c i s é t í m, že je výsledek určení, srovnán s kontrolní, hodnotou á vztah mezi těmito dvěma je „korelován, s .infekčním stavem zvířete... ’2. A method according to claim 1, wherein the result of the determination is compared to a control value and the relationship between the two is &quot; correlated &quot;

3. Způsob podle nároku 1 nebo nároku 2, vyznačující se tím, že *· spongiformní encefalopatíí je hovězí spongiformní encefalopatie. ’ ,The method of claim 1 or claim 2, wherein the spongiform encephalopathy is bovine spongiform encephalopathy. ’,

4. Způsob podle jakéhokoliv z předcházejících nároků., vyznačující·' s e t í m, že je tělesnou tekutinou analyzovanou v metodě mozkomíšní mok.A method according to any of the preceding claims, characterized in that it is a body fluid analyzed in the cerebrospinal fluid method.

Claims (11)

PATENTOVÉ NÁROKY li Způsob detekce spongiformní encefalopatie u zvířat, vyznačující-se tím,že zahrnuje určení přítomnosti a/nebo množství· agens v tělesných tekutinách zvířete, kde toto agens má molekulovou hmotnost mezi 35 a 39 kDa, pl přibližně 5,3 a které nereaguje zkříženě s protilátkou namířenou proti.· apolipoproteinu E a>která zahrnuje stanovení vztahu výsledku k'infekčnímu stavu zvířete.” - ' ·'·.A method for detecting spongiform encephalopathy in an animal comprising determining the presence and / or amount of an agent in an animal's body fluid, said agent having a molecular weight of between 35 and 39 kDa, a pI of about 5.3 and which does not respond cross-linked to an antibody directed against apolipoprotein E and> which includes determining the relationship of the result to the infectious state of the animal. < ·· . . · ty s · i’ *<··. . · you are' * 2.. Způsob podle nároku l,vyz,načují-cí se tím, že ,je výsledek určení srovnán š kontrolní hodnotou, a vztah ) mezi těmito dvěma je korelován s.infekčním stavem zvířete.The method according to claim 1, characterized in that the result of the determination is compared to a control value, and the relationship between the two is correlated with the infectious state of the animal. »»» 3. Způsob podle nároku 1 nebo nároku 2,’. ' . · ‘' v y. z n a ů u j- í ; c - í s e -t. í: m, že ‘ '·’,··.· .The method of claim 1 or claim 2, '. '. · ‘'Y. from us; c - e with e -t. : '· ’, ··. ·. kde spongiformní encefalopatií je hovězí, sponig.if ořmní encefalopatie.where spongiform encephalopathy is bovine, sponig.if cerebral encephalopathy. ť . ’ ' •-^- - ··· ··· · , . , ’Ť. ´ '• - ^ - - ··· ··· ·,. , ' 4.' ' '· - ',' 'i4. ' '' · - '' 4. Způsob podle jakéhokoliv z předcházej ících nároků.;A method according to any of the preceding claims .; vyznačující se t í m, že tělesnou tekutinou analyzovanou v metodě je mozkomíšní í mok. · . i .J f t Icharacterized in that the body fluid analyzed in the method is cerebrospinal fluid. ·. i .J f t I 5. Způsob podle jakéhokoliv z předcházejících nároků, v y z n. a č . u. j. í c í se t ..í m., že __.. . , je přítomnost a/nebo množství agens v.tělesné tekutině zvířete určena za použití polyakrylamidové gelové e1ektrofořezy (PAGE) pro separaci agens, majících jak molekulovou hmotnost mezi 35 a 39 kDa tak pl 5,3, od jiného materiálu v tělesné tekutině, a pak za použití.barvení gelu a provedení denzitometrického měření v oblasti gelu, která obsahuje agens tak, aby se určila přítomnost.a/nebo množství přítomného agens.Method according to any one of the preceding claims, characterized in that no. wherein the __ ... , the presence and / or amount of the agent in the animal body fluid is determined using polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) to separate agents having both a molecular weight between 35 and 39 kDa and p1 5.3 from other material in the body fluid, and then using gel staining and performing a densitometric measurement in the region of the gel containing the agent to determine the presence and / or amount of the agent present. ' * ' . . . > f ’ * » :·.·· * - “ · · • -* * ' · ··*·.«· 4 .. . -» “ f y '*'. . . > f ’*»: ·. · · - - - - - - - .. .. .. .. .. .. .. .. - »“ f y 5. Způsob podle jakéhokoliv z předcházejících nároků, vyznačující se tím.že je přítomnost a/nebo množství agens v tělesné tekutině zvířete určena za použití polyakrylamidové gelové el ektrof ořezy _(.PAGE) pro separaci agens , ..ma j.í c i-ch jak. molekulovou hmotnost mezi 35 a 39 kDa tak pí 5,3, od jiného materiálu v tělesné tekutině, a pak za použití barvení gelu a provedení denzitometrického měření v oblasti gelu, která obsahuje agens tak, aby se určila přítomnost a/nebo množstv přítomného agens.Method according to any one of the preceding claims, characterized in that the presence and / or amount of the agent in the body fluid of the animal is determined using a polyacrylamide gel electrophor (PAGE) for separating the agent, among others. -ch how. a molecular weight between 35 and 39 kDa and a pI of 5.3, from another material in the body fluid, and then using gel staining and performing densitometric measurements in the gel region containing the agent to determine the presence and / or amount of agent present. 6. * Způsob'podle nároku 5, .v y z n. a. č .u j* ř c í’ . s e ·' ' - > .-. .. . - . ... ·> , t í m, žé PAGE je dvourozměrná polyakrylamidová gelová elektroforeza. ·6. A method as claimed in claim 5. with e · '' -> .-. ... -. PAGE is a two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis. · 6. Způsob podle nároku 5, v y z n a č u j í c í se t í m, že.PAGE je dvourozměrná polyakrylamidová.gelová elektroforeza. - . '* ' i · A * · · ·; ’ ř · !' ..· , 1 '4 I-' . 4 . - ί · i' - -v, -· ' ·. * * ř ; ; ·, .6. The method of claim 5, wherein the PAGE is a two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis. -. '*' i · A * · · ·; 'ř ·!' .. ·, 1 '4 I - '. 4 . - ί · i '- -v, - ·' ·. * * ř ; ; ·,. 7. ,,Způsob podle “nároku 5 nebo nároku 6 , ·. . . A "method according to" claim 5 or claim 6; . . vyznačuj ící s, e characterized in that e t ί,m, že ’ t ί, m that ’ barvení je barvení stříbrem.·. dyeing is silver dyeing. * 1 ' '· . <?' ' t 7! * 1 '' ·. <? '' t 7! ,.*·· ' í 8. Způsob podlé jakéhokoliv ž * 8. A method according to any one of the preceding claims i Jb . · ~ ’ FV . * l ' / předcházej ících'nároků,  i Jb. · ~ 'FV. * l '/ Preventing claims vyznačuj í cí s/e characterized by s t í m, že that
je chybění zkřížené reaktivity mezi agens a ( anti-apólipoprotein E protilátkou potvrzeno použitím, proti látky .namířené proti apoíipoproteinu E.the lack of cross-reactivity between the agent and ( anti-apo-lipoprotein E antibody is confirmed by the use of anti-apoipoprotein E). 7. Způsob podle nároku 5 nebo nároku,6,. . .The method of claim 5 or claim 6. . . v y z n a č u j í c í s e tím, že barvení je barvení stříbrem. characterized in that the dyeing is silver dyeing. 8, Způsob podle jakéhokoliv z předcházejících nároků, v/y z n a č u j í c í s e t i m., že je chybění zkřížené reaktivity-mezi. agens.. a ( ; ..... 4 anti-apolipoprotein E protilátkou potvrzeno použitím protilátky.namířené proti apolipoproteinu E. '8. The method according to any one of the preceding claims, characterized in that there is a lack of cross-reactivity. and agents .. (; 4 ..... anti-apolipoprotein E antibody confirmed using protilátky.namířené against apolipoprotein E. ' 9. Způsob podle jakéhokoliv z nároků 1 až 4, ‘A method according to any one of claims 1 to 4, ‘ ...',. . , . .... ',. . ,. . v yz n a č u j í c í. s e t í m, že protilátky jsou namí řené. prot i agens , nebo syntet-i ckěmu peptidu odvozenému od jeho sekvence, a přítomnost a/nebo ' ' změněný list množství agens v tělesné tekutině zvířete je určena za použití těchto protilátek. ----- - --------------10. Způsob podle jakéhokoliv z nároků 2 až 9, vyznačující se tím, že je kontrolní hodnota určena stejnou hodnotou jako je použita r. pro zvíře, ale za použití dalšího zvířete, pro které je znám jeho infekční stav....... wherein the antibodies are directed. an agent, or a synthetic peptide derived from its sequence, and the presence and / or altered sheet of the amount of agent in the body fluid of the animal is determined using these antibodies. ----- - -------------- 10. Method according to any one of claims 2 to 9, characterized in that the control value is determined by the same value as used for the animal, but using another animal for which its infectious condition is known. 9. Způsob podle jakéhokoliv z nároků 1 až 4, vyznačující se tím,:Method according to any one of claims 1 to 4, characterized in that: že protilátky jsou namířené proti.agens, nebo syntetickému peptidu odvozenému od jeho sekvence, a přítomnost a/nebo množství agens v tělesné tekutině zvířete je určena za.1 použití těchto protilátek.that the antibodies are directed against the agent, or a synthetic peptide derived from its sequence, and the presence and / or amount of the agent in the body fluid of the animal is determined using such antibodies. 10. Způsob podle jakéhokoliv z nároku 2 až 9, , vyznačující sé t i m, že je kontrolní hodnota určena stejnou hodnotou*jako je použita J . Á r , . .... pro zvíře,., a_l_e_z.a_.použ.i t í dal jeho infekční (stav.Method according to any one of claims 2 to 9, characterized in that the control value is determined by the same value * as J is used. Á r ,. ... for the animal,., a_l_e_z.a_.p use.it gave its infectious ( status 11. Způsob detekce přítomnost encefalopatie u zvířat jak jA method for detecting the presence of encephalopathy in an animal as i t.t. Í.íh.o.'.z.v_í.ř.ě.te.,..._p.r.o_-k-teré j.e znám_________ spongiformní zde v podstatě popsán dříve.It is known that the spongiform is essentially described hereinbefore. * ' .v změněný list* '.v changed sheet 11. Způsob detekce přítomnosti spongiformní ,eňcéfálopátie u zvířat jak je zde v.podstatě popsán dříve. , . 4 . · ‘ .11. A method for detecting the presence of spongiform, non-perfalopathies in an animal as substantially described herein before. ,. 4 . · '. .'·» jfi .. . r ‘ ΐ , < A.·-· ‘ J - · ' ·, - , ·,< '»’ ť . * · · » I ·· * . 12.. Agens, které: , ' . / i 1 (a) je možné získat z mozkomíšního moku zvířete s pozitivním infekčním stavem spongiformní. éncefalopatie (b) má molekulovou hmotnost mezi 35 a.39 kDa, (c) .má pl přibližně 5,3, a .. »Jfi ... r 'ΐ, < A . · - ·' J - · '·, -, ·, <'»'ť. * I ·· *. 12 .. Agents that: ''. / I 1 (a) can be obtained from the cerebrospinal fluid of positive animals spongiform infection status. Encephalopathy (b) has a molecular weight of between 35 and 39 kDa, (c) has a pI of about 5.3, and. . „ \ ((d) nereaguje zkříženě, s protilátkou namířenou .proti/1 .'Λ apolipoproteinu E.. "\ ((D) does not crossreact with the antibody directed .Therefore / 1 .'Λ apolipoprotein E. •i ř ' · ... , i 1 * , 1 : # * 13. Agens podle nároku 12 pro použiti v metodě určení ;• and R '· ..., i 1 * 1: # * 13. An agent according to claim 12 for use in the method of determination; infekčního stavu spongiformní encefalopatie zvířete.1' . 14.Protilátka namířená proti agens podle nároku 12, nebo proti syntetickému peptidů odvozenému od jeho sekvence.infectious state of animal spongiform encephalopathy. 1 '. An antibody directed against the agent of claim 12, or a synthetic peptide derived from its sequence. I * -IJI * -IJ
CZ971641A 1994-11-29 1995-11-28 Method of detecting spongy-like encephalopathy CZ164197A3 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB9424068A GB9424068D0 (en) 1994-11-29 1994-11-29 Spongiform encephalopathy detection methods
GBGB9424768.1A GB9424768D0 (en) 1994-11-29 1994-12-07 Spongiform encephalopathy detection methods
PCT/GB1995/002767 WO1996017250A1 (en) 1994-11-29 1995-11-28 Spongiform encephalopathy detection methods

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ164197A3 true CZ164197A3 (en) 1997-11-12

Family

ID=26306060

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ971641A CZ164197A3 (en) 1994-11-29 1995-11-28 Method of detecting spongy-like encephalopathy

Country Status (11)

Country Link
EP (1) EP0795133A1 (en)
AU (1) AU3932995A (en)
CA (1) CA2205228A1 (en)
CZ (1) CZ164197A3 (en)
FI (1) FI972254A (en)
GB (1) GB2308658B (en)
HU (1) HUT77339A (en)
NO (1) NO972340D0 (en)
NZ (1) NZ295722A (en)
SK (1) SK67797A3 (en)
WO (1) WO1996017250A1 (en)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2319607A (en) * 1996-11-23 1998-05-27 Electrophoretics International Detection of prion proteins in mononuclear cells
GB9701045D0 (en) * 1997-01-18 1997-03-05 Narang Harash K Diagnosis of neuro-degenerative disorders
WO1999040439A1 (en) * 1998-02-06 1999-08-12 Harash Kumar Narang Diagnosis of neuro-degenerative disorders

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4892814A (en) * 1987-06-22 1990-01-09 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method for distinguishing Creutzfeldt-Jakob disease from other dementias

Also Published As

Publication number Publication date
CA2205228A1 (en) 1996-06-06
FI972254A0 (en) 1997-05-28
SK67797A3 (en) 2000-02-14
HUT77339A (en) 1998-03-30
WO1996017250A1 (en) 1996-06-06
NZ295722A (en) 1999-03-29
NO972340L (en) 1997-05-22
GB2308658A (en) 1997-07-02
NO972340D0 (en) 1997-05-22
GB9708654D0 (en) 1997-06-18
FI972254A (en) 1997-07-28
EP0795133A1 (en) 1997-09-17
GB2308658B (en) 1998-11-18
AU3932995A (en) 1996-06-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
MURRAY et al. Cross-linking analysis of the ryanodine receptor and α 1-dihydropyridine receptor in rabbit skeletal muscle triads
Grauballe et al. Optimized enzyme‐linked immunosorbent assay for detection of human and bovine rotavirus in stools: Comparison with electron‐microscopy, immunoelectro‐osmophoresis, and fluorescent antibody techniques
US11933792B2 (en) Markers for renal disease
US20230221337A1 (en) Method for testing aggravation risk of person infected with novel coronavirus, test kit therefor, companion diagnostic drug and aggravation risk marker thereof
Ogasawara et al. Formation of albumin dimers induced by exposure to peroxides in human plasma: a possible biomarker for oxidative stress
JP2022033286A (en) Hemoglobin measurement reagent, measurement kit, and measurement method
Bhagwat et al. N‐formyl‐l‐aspartate: A novel sperm chemoattractant identified in ovulatory phase oviductal fluid using a microfluidic chip
CZ164197A3 (en) Method of detecting spongy-like encephalopathy
CZ164297A3 (en) Method of detecting spongy-like encephalopathy
Murata et al. Validation of a newly generated oxytocin antibody for enzyme-linked immunosorbent assays
CN115184620B (en) Quantum dot fluorescence detection test strip and kit for PLA2R antibody and application of quantum dot fluorescence detection test strip and kit
Zhang et al. Proteome analysis of a plasma membrane‐enriched fraction at the placental feto‐maternal barrier
KR101396300B1 (en) Biomarkers for diagnosing the addiction of ethylbenzene
EP3835788A1 (en) Method for immunologically detecting mycoplasma pneumoniae
Newton et al. Presence of the major progesterone-induced proteins of the sheep endometrium in fetal fluids
WO2024181457A1 (en) Method for immunologically measuring hemoglobin using deglycosylated haptoglobin
EP4033247A1 (en) Multi-species immunoassays for detecting antibodies anti-sars-cov-2 using protein a for detection of captured antibodies
AU2017204520B2 (en) Markers for renal disease
Gravel Protein blotting
KR20100026084A (en) Sensitive methods to diagnose malaria

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic