CZ127295A3 - Pharmaceutical preparation exhibiting modulation effect on malignant tumors and the use thereof - Google Patents

Pharmaceutical preparation exhibiting modulation effect on malignant tumors and the use thereof Download PDF

Info

Publication number
CZ127295A3
CZ127295A3 CZ951272A CZ127295A CZ127295A3 CZ 127295 A3 CZ127295 A3 CZ 127295A3 CZ 951272 A CZ951272 A CZ 951272A CZ 127295 A CZ127295 A CZ 127295A CZ 127295 A3 CZ127295 A3 CZ 127295A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
day
mice
total
mouse
protease
Prior art date
Application number
CZ951272A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ283972B6 (cs
Inventor
Frantisek Mudr Trnka
Miroslav Ing Csc Rybak
Roman Ing Marek
Ladislav Ing Vavra
Original Assignee
Frantisek Mudr Trnka
Rybak Miroslav
Roman Ing Marek
Ladislav Ing Vavra
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Frantisek Mudr Trnka, Rybak Miroslav, Roman Ing Marek, Ladislav Ing Vavra filed Critical Frantisek Mudr Trnka
Priority to CZ951272A priority Critical patent/CZ283972B6/cs
Priority to CA002176771A priority patent/CA2176771C/en
Priority to US08/649,184 priority patent/US5858357A/en
Priority to EP96107917A priority patent/EP0743070A3/de
Publication of CZ127295A3 publication Critical patent/CZ127295A3/cs
Publication of CZ283972B6 publication Critical patent/CZ283972B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4826—Trypsin (3.4.21.4) Chymotrypsin (3.4.21.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4853—Kallikrein (3.4.21.34 or 3.4.21.35)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/486—Elastase (3.4.21.36 or 3.4.21.37)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/55—Protease inhibitors
    • A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Description

Qblagtr, techniky.
Vynález se týká enzymatických organoprepsrátS z proenzymů proteáz a amylázy, které jsou použít©!né k íarmakologickému ovlivnéní biologické odpovědi organizmu při jeho interakci se zhoubnými nádory. Tyto prostředky. >w využitelné v humánní a veterinární medicíně.
Dosavadní stav techniky
Současná onkologická terapie využívá především eradikačnich metod typu chirurgie a akt· i not© rapi e v© snase o likvidaci nebo alespoň redukci primárního nádoru. Při tom se předpokládá, že zbývající, latentní nádorovou populaci zvládne přirozený imunitní dohled organizmu sám. Tento základní terapeutický přístup je modiíikován adjuvantní a v poslední době i neadjuvantní formou chemoterapie. Užívaná terapeutická kombinace je pak kompromisem mezi žádoucím terapeutickým a nežádoucím imunosupresivním účinkem všech uvedených metod a samostatným kancerogenním účinkem aktinoterapie i chemoterapie. Pro úplnost je nutno uvést ještě terapii hormony, která však metodicky spadá pod chemoterapii i s uvedenými nežádoucími, t.j. imunosupresivními a kancerogenními účinky. Výsledný příznivý eíekt uvedené kombinované léčby tak předpokládá výraznou imunotoleranci organizmu jak na probíhající onemocnění, tak na léčbu. Tato však není pravidlem ani častým úkazem. Navazující nebo současně probíhající terapeutická snaha o imunomodulaci imunoterapií zákonitě selhává díky pokročilosti onemocnění a tkáňového katabolismu. V soutěži o oprávněnou účast na onkologické terapii prodělává v současné době renesanci enzymová terapie, sahající svými historickými kořeny do první dekády našeho století /Beard, Chadto et Windus, London 1911/. Na něho navazují práce Freunda a Kaminera /Freund E., Kaminer G. , Springerverlag, Wien 1925; Freund E. , Med. Wschr., 12, 1934/ a Christianiho / Christiani A., Krebsíorsch., 1938, 47, 176/. Na teoretické a experimentální poznatky zmíněných autorů navázali později klinickými studiemi Wolí a Benitezová, Volí a Ransberger / Woll M. ,
Ransberger K.:Enzymtherapie. autoři prokázali selektivní
Maudrich, Wien 1970/» Tito onkolytický účinek živočišných a rostlinných hydroláz (proteáz) a účast enzymů různé provenience v potenciaci onkolytického účinku. Tito autoři zjistili též enterální resorpci hydroláz i glykosidáz (amyláz) a položili tak základ k perorální terapii známé řady WOBE-MUGOS. Systémová enzymoterapie je založena na klinickém využití experimentálně získaných dat o účincích aktivních proteáz. Jsou to : systémový protizánětlivý úfiinek a vliv na íibrinolysu, stimulace tvorby cytokinů (TNF-alfa, II 2,6), stimulace aktivity polymorfonukleárních leukocytů a makroíágového systému. Z lokálních protinádorových účinků je to selektivní onkolytický vliv na omezení adhezivních molekul buněčných nádorových membrán a spolu se systémovou íibrinolytickou aktivitou zamezení tvorby metastáz. Pro úplnost je nutné se ještě zmínit o práci Yoneda a spol. /Yoneda T. a spol., Cancer Res. 1994, 54, 2509/, kteří podáním částečně puriíikovaného extraktu vepřových pankreatů myším s lidským spinocelulárním kožním nádorem prokázali jeho pozitivní vliv na anorexii, ztrátu váhy, vývoj kachexie a dobu přežívání. Autoři účinný íaktor pankreatu částečně puriíikovali, aniž by definovali povahu účinné složky.
Při použití aktivních proteáz k terapii je nutno mít na zřeteli několik okolností, které účinek této terapie limitují:
a) Pankreatické proteázy jsou v krevním oběhu a intersticiálních prostorech rychle inaktivovány přítomnými pólyvalentími inhibitory (alíal-inhibitorem proteáz, antitrombinem III, Cl-inhibitorem a inhibitorem chymotrypsinu) . Možnost disociace komplexu alía2-Makroglobulin-proteáza v přítomnosti substrátu s velkou aíinitou pro proteázu byla prokázána pro mnohé proteolytické systémy (na př. alíaS-MGplasmin-íibrin), nicméně v systému alía2-MG-trypsin-receP tor pro trypsin buněčné stěny nádorové buttky je dosud ve stadiu teoretických úvah. Za výhodu vazby inhibitoi—pr©t®á.= za lze považovat snížení antigenicity cizorodé proteázy v důsledku tvorby komplexu.
b) Trypsin-like proteázy podobně jako i dalěí proteázy (na př. lysozomální katepsin B) mohou zvyěovat invazivnost nádorových buněk destrukcí přilehlých tkání hostitele. /Koivanen Ε., Int. J. Cancer 1991, 47 (4), 592/
c) Trypsin může zasahovat do systému krevních proteáz, které jsou vzájemně propojeny aktivačními a inhibičními mechanismy (trypsin zasahuje do koagulačně-íibrinolytického systému nežádoucím způsobem, přímo uvolňuje kininy - mediátory zánětu a bolesti z plazmatických kininogenů, atd.).
Egdgtata, vynálezy
Předmětem předloženého vynálezu je farmaceutický prostředek s modulačním účinkem na zhoubné nádory, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje
a) proenzymy proteáz a
b) amylázy v poměru od 1:100 až 100:1 v jednotkách enzymatické aktivity.
Jako proenzymy proteáz může obsahovat jednu nebo více eložek ze skupiny zahrnující
- trypsinogen
- chymotrypsinogen
- proelastázu a
- prekallikrein .
V prostředku podle vynálzu může být amyláza původu lidského, zvířecího, bakteriálního eventuelně rostlinného a proenzym proteáz může být původu lidského nebo zvířecího.
Farmaceutický prostředek může obsahovat jako dalěí složku polyvalentní inhibitor proteáz, například aprotinin.
Konečné se vynález týká použití kombinace proenzymů proteáz a amyláz pro výrobu léčiv s modulačním účinkem na zhoubné nádory.
Teoretickým východiskem pro ovlivnění nádorových buněk je ryze biologický přístup ke kancerogenezi i §naž® o ovlivnění nádorů. Maligní nádor je chápán jako ektopické těhotenství, vznikající z uvízlých primordiálních gonocytů v průběhu embryonální migrace do základu gonád. Toto ektopické těhotenství v nesprávném místě a stejným dílem i v opačném (samčím) pohlaví pozbývá tak zákonitě regulačních mechanismů, které fyziologickému těhotenství náležejí. Jde předevěím o regulační vliv embrya na trofoblast, který je pojímán jako analog maligních tumorů. Jako jedinečná fyziologická kvalita existující v přírodě, trofoblast invaduje, metastazuje a nekonečně roste, pokud je embryo defektní nebo když embryo chybí (molární syndromy, komplikovaná molla nebo choriokarcinom). Bylo zjištěno, že v době ukončení organogeneze, v tzv. kritické periodě embryo ovlivňuje a zastavuje proliferaci trofoblastu. Dochází k di4 íerenciaci troíoblastu, vzniku syntitiotroíoblastu a vymizeni do té doby překotných mitoz. Jestliže embryo chybí nebo je malformované, k diferenciaci a ubrzdění troíoblastu nedochází. Vzniká tak již zmíněný choriokarcinom, který je chápán jako ideový model vzniku všech malignit. Ve snaze o ovlivnění a napodobení embryologické regulace bylo používáno embryonálních výtažků, z nichž nejúčinnější byly pankreatické výtažky novorozených jehňat, telat a selat. Později bylo použito směsi dvou enzymů - trypsinu a amylázy. Dosáhlo se určitých výsledků v ovlivnění troíoblastu avšak tato metoda nebyla vůbec reprodukovatelná. /Beard, Chadt© ©t Vindus, London 1911/
Navrhovaný způsob podle vynálezu, tedy použití proenzymů proteáz, především trypsinogenu a amylázy se vyznačuje, proti dříve používané enzymoterapii několika znaky :
1. aplikace aktivních proteáz pro zmíněné účely je považována za nefyziologickou zátěž organizmu a
2. aplikace proenzymů proteáz, jako zdroje aktivní proteázy in šitu (tumoru), je íyziologičtější než aplikace aktivních proteáz.
3. Organizmus je v menší míře vystaven nebezpečí iniciace nežádoucích pochodů jako je zásah do kallikrein-kinin-kininásového systému, aktivace koagulačního a fibrinolytického systému vedoucí k diseminované intravaskulární koagulaci, možnost napadení tkání aktivními proteázami (na př. tlustého střeva) je při použití proenzymů proteáz zanedbatelná.
4. Interakce s inhibitory, spojená často s nevratnou inaktivací proteázy a tvorba cirkulujících komplexů enzym-inhibitor je v případě použití proenzymů proteáz minimální.
Na základě více ukazatelů byl vytvořen model mechanizmu účinku založený na předpokladu. že k aktivaci proenzymfl na účinný enzym dochází na povrchu nádorové buňky účinkem aktivátorů přítomných v maligní buňce a nepřítomných v buňce zdravé. Přítomnost těchto aktivátorů byla prokázána u řady různých nádorových buněk. Zmíněný předpoklad o mechanizmu účinků je podporován nálezem, že inhibitory proteáz jsou přítomny na buňkách benigních nádorů, nikoli však na buňkách maligních /Bohe H.,Bohe Μ., Lindstrom Μ., Ohlsson K., J. Clin. Pathol.
nespecifické proteázy jako pravděpodobnost Štěpení bílkovinných řetězců buněčné stěny v sousedství bazických aminokyselin argininu, lysinu a histidinu. Amyláza, která je nezbytnou součástí prostředku podle předloženého vynálezu, doplňuje účinek proteáz štěpením cukerné složky povrchových glykoproteinů maligní buňky. Proteázy tento účinek usnadňují.
1990, 43, 901/. U vysoce je trypsin je
Pochody aktivace a účinku proteáz se odehrávají na povrchu a v těsné blízkosti nádorové buňky. Vzhledem k intaktnosti proenzymů proteáz nebudou přispívat na zvýšení invazivitiy nádorové buňky jako aktivní proteázy.
Některé pokusy byly provedeny s vysoce puriíikovanými enzymy (trypsinogenem a amylázou) a srovnáním s povahou pankreatických extraktů používaných Yonedou a spol. je průkazné, že tyto fenomény nejsou totožné a nález japonských autorů nároky původců vynálezu nijak neomezuje. Použitím proenzymů na místě aktivních proteáz lze organizmu zajistit in vivo podmínky pro možnost uplatněni zásahu proteáz pozorovaný in vitro (onkolysa, snížení počtu adhezivních molekul, zvýšení imunogennosti nádoru a potlačení tvorby metastáz). Účinek proteáz je přitom klíčový, účinek amylázy doplňující. Tímto způsobem lze organizmu připravit podmínky pro finální doléčení vlastním imunitním systémem. Z téchto příčin modulační zásah mftže být úspéSný jen nepředcházela-li výrazná cytostatická a imunosupr@si.vni léčba.
Příklady provedeni vynálezu
Metody
Následující metody a materiály byly použity v příkladech, uvedených níže, jestliže není jinak uvedeno.
MySi
Samičky mySÍ Ce?Bl« váhy cca 24 <3 byly umístěny v plastikových akváriích, krmeny dietou DOS 2b a napájeny vodou ad libitum.
Proenzymy proteáz a amyláza alfa-Amyláza (EC USA) byl vysoce
Trypsinogen (EC 3.4.21.4) z hovězích pankreatft (SIGMA Co, USA) byl preparát vysoce puriíikovaný (15000 BAEE (benzoyl-Arg-ethylester) jednotek/mg bílkoviny po aktivaci na trypsin a obsahující 430 BAEE jednotek/mg bílkoviny aktivního trypsinu).
Obsah bílkovin : 97 SS.
Trypsinogen z vepřových pankreatft částečně puriíikovaný byl připraven kyselou extrakcí a vysolováním sulfátem amonným. /Mansíeld a spol. Organopreparáty 1958/
3.2.1.1) z vepřových pankreatft (SIGMA Co, puriíikovaný enzym, 2x krystalizován, 790 jednotek/mg bílkoviny /E2S0 1* roztoku/.
Extrakt pankreatických enzymů byl připraven z čerstvých vepřových pankreatft extrakcí fyziologickým roztokem a dále purifikován na karboxymety1-celúloze. Hlavními podíly byly trypsinogen a alfa-amyláza, jejichž poměr byl pro aplikaci na mySích upravován přídavkem puriíikovaného trypsinogenu nebo amylázy.
Všechny preparáty určené pro aplikaci myším byly rozpouštěny, respektive ředěny fysiologickým roztokem NaCl.
Definice aktivity proteáz a jejich proenzymft a metody jejich stanovení
Trypsinogen hovězí (SIGMA Co, USA) je výrobcem deklarován na základě BAEE jednotek (1 BAEE jednotka je definovaná jako Az53 = 0,001/min s BAEE jako substrátem při pH 7,6 a 25°C, reakční objem 3,2 ml, dráha paprsku 1 cm). Vlastní hodnocení aktivity trypsinogenu (trypsinu) bylo prováděno za použití syntetických chromogennich substrátů, které jsou peptidickou obdobou substrátů přirozených (-p-nitroanilidy). Hydrolyzou odštěpený p-nitroanilin je mírou aktivity a jeho množství je stanoveno spektrofotometricky při 405 nm/min a vyjádřeno v nkat/ml podle vztahu:
A4oe x V x ředěni 1000
Hnkit — ~———————— x — e x v 60 kde V je objem směsi při měření, v je objem vzorku, e je extinkční mólární koeficient (10,4) pro p—nitroanilin.
Teplota při stanovení 25 °C, pH 7,6 Tris-Ca pufru. Byl zjištěn vzájemný vztah obou způsobů určeni aktivity a vyjádřen graficky. Obsah bílkovin byl stanoven spektrofotometricky (Azeo) a specifická aktivita (stupeň čistoty) byl vyjádřen jako poměr mezi aktivitou a obsahem bílkovin. Tato hodnota plně charakterizuje preparát z hlediska relativní čistoty enzymu.
Trypsin byl stanoven pomocí Z-Gly-Pro-Arg-p-nitroanilidu. Chymotrypsin byl stanoven pomocí Glt-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilidu /-p-NA/. Elastássa byla stanovena pomocí Glt-Ala-Ala-Ala-p-NA a kallikrein pomocí NO-Pro-Phe-Arg- -p-NA. Aprotinin byl stanoven jako inhibitor trypsinu pomocí Z-Gly-Pro-Arg-p-NA.
Jelikož trypsinogen je základní složkou každého preparátu (kompozice) a aktivní trypsin aktivuje všechny ostatní pankreatické proenzymy proteáz přítomné v preparátu, je jejich stanovení provedeno po aktivaci trypsinogenu enteropeptidázou. /Borgstrom A. a spol., Scand. J. Gastroenterol. 1993, 28 /5/, 455/
Definice aktivity amyláz a jejich metoda stanovení
Komerční alía-amyláza (SIGMA Co, USA) je definována na základě uvolňování maltozy ze škrobu (1 jednotka uvolni 1 mg maltozy ze škrobu za 3 min při pH 6,9 a 20 °C). Amyláza (alía-amyláza) byla stanovena pomocí komerčního tabletového testu (Slovakoíarma Hlohovec, SR) používaného pro stanovení alía-amylázy v krevním séru a biologických tekutinách v klinických laboratořích. Tableta obsahuje síťovaný škrob s kovalentně vázanou barvou, aktivátor a puír. Hydrolyzou nerozpustného barevného škrobu přechází tento do formy rozpustné a je stanoven spektroíotometricky při 620 nm a vyjádřen v nkat/ml ev. nkat/mg. Závislost mezi absorbancí a aktivitou je odečítána z grafu. Postup je podle návodu výrobce.
Experimentálně byl zjištěn vztah mezi oběma způsoby vyjádření aktivity amylázy a vyjádřen graficky. Vysoce puriíikovaná amyláza byla použita jako standard.
li
Indukce nádore metyIcholantrenem
Nádory byly u myší uměle vyvolány metylcholantrgngm, který byl podáván rozpuštěný v olivovém oleji (100 ml metylcholantrenu se za stálého míchání rozpustí v 50 ml olivového oleje). Aplikován byl subkutánně v dávce 0,2 ml olejové substance na myS (tj. 400 μςτ metylcholantrenu na myš) . Aplikace byla opakována 3 dny po sobě do stejného místa na pravém boku, každá myS obdržela tedy celkovou dávku
1,2 mg metylcholantrenu. Při aplikaci se první nádory objeví při subkutánním podáni za 5 - 6 týdnů po aplikaci metylcholantrenu.
Vyvolání melanomu transplantací buněk melanomu B16
- namnožení nádorových buněk
Transplantované nádorové buňky byly namnoženy ve formě ascitu v břiSní dutině. Desátý den po intraperitoneální transplantaci 2 x 10® nádorových buněk byl ascites odebrán do Henksova roztoku, buňky spočítány a naředěny na koncentraci 2 x 10® ascitických buněk na 0,2 ml suspenze.
- transplantace a rozvoj nádoru a metastáz
Suspenze v koncentraci 2 x 10® ascitických buněk na 0,2 ml suspenze ascitických buněk byla transplantována intradermálně na levý bok mySi. Desátý den po transplantaci melanomu B16 byly myši uvedeny do pentobarbitalové narkózy a narostlé nádory vyoperovány. Desátý den pro excizi nádorů byl zvolen na základě předchozích pokusů, kdy byla testována metastatická aktivita melanomu B15 (při vynětí primárního nádoru desátý den po transplantaci ascitických buněk všechny myši uhynou v průběhu 5 týdnů na metastáze).
Příklad
Ovlivnění primárního nádoru a doby přežití
V rámci tohoto pokusu byla použita skupina myší, u kterých byl nádor indukován aplikací metylcholantrenu subkutánně v dávce 0,2 ml olejové směsi na myš t.j. 400 metylcholantrenu. Aplikace byla opakována po tři dny po sobě do stejného místa na pravém boku, takže každá myš obdržela celkovou dávku 1,2 ug metylcholantrenu. Nádory se objevily mezi 37. až 44. dnem po aplikaci metylcholantrenu. 45. den po první aplikaci metylcholantrenu byla skupina myší rozdělena do tří skupin léčených myší po deseti a jedné kontrolní skupině v počtu 8 myší. Kontrolní skupině byl aplikován fyziologický roztok na místo sledovaných kompozic ve stejných časových intervalech (24 hod.) a stejných objemech (0,1 ml).
Testovaná léčebná látka byla dodávána v zamraženém stavu jako substance označená A a B (specifikace viz níže). Obě látky byly těsně před podáním rozmraženy a smíchány v poměru 1:1. Testovaná látka byla aplikována pokusným myším subkutánně na místo co nejvzdálenější od indukovaného tumoru v dávce 0,1 ml na myš v časových intervalech 24 hodin. Kontrolní skupině byl aplikován fyziologický roztok ve stejném množství a stejných časových intervalech jako u pokusných skupin.
V přikladu 1 bylo použito celkem 38 myší,které byly rozděleny do 4 skupin:
př. 1.1. 10 myší - aplikace směsi roztoků A + B v základním ředění. Látka A byla amyláza v koncentraci
133.3jednotek SIGMA/ml, látka B byl trypsinogen v koncentraci 15000 BAEE jednotek/ml (792 nkat/ Z-Gly-Pro-Arg-p-nitroani1id) př4. 1.2 10 myší - aplikace směsi roztoků A + B v ředění lOx koncentrovanějším než základní.
př. 1.3 10 myší - aplikace směsi roztoků A + B v ředění 30x koncentrovanějším než základní.
př.1.4 8 myší - kontrolní skupina, aplikován stejným způsobem a ve stejném objemu fyziologický roztok.
Dvakrát týdně byla měřena velikost nádorů. Přežívání myší bylo sledováno každý den po dobu 100 dní.
Výsledky jsou uvedeny v následujících tabulkách a grafech :
Tab.1: Růst nádorů indukovaných metylcholantrenem při aplikaci léčebných látek A+B a u kontrolní skupiny.
růst nádorů indukovaných metylcholantrenem den
-r koncentrace aplikovaných látek A + B I
pokus u i I 1 -1 3 I I kontrola
1 Př. 1 1.1 1 Ί př. 1.2 1 př. 1. př. 1 .4
1 1 N ι 1 1 v 1 I 1 N 1 1 1 v 1 I 1 1 N | r V I I N 1 ( V
1 1 1 9 (10) 1 1 | 6,3 | 10 I I (10) 1 i 1 10,8 | I I 7 (10)| 1 14,0 | 1 00 00 10,5
5 1 lio (10) I 1 1 I 44,2 1 10 I 1 (10) 1 1 1 39,1 | I I ίο (ίο)| 1 39,1 | I 8 (8) | I 34,5
8 1 lio (10) I 1 1 I 39,1 | 10 I I (10) ι 1 1 33,9 | I I io (íol 1 34,4 | I I 8 (8) [ I 62,9
12 1 110 (10) 1 1 1 I 50,7 | 10 I I (10) 1 1 1 47,6 | I I 9 (10)| 1 40,3 | I 1 8 (8) | I 67,4
15 1 lio (10) 1 1 1 1 56,0 | 10 1 I (10) 1 1 1 43,8 | I 1 8 (10)1 1 51,3 | I 1 8 (8) ! I 80,3
17 1 lio (10) | 1 1 1 31,9 | 10 I I (10) 1 1 1 23,9 | I I 8 (10)| 1 38,8 | I 1 8 (8) | I 87,1
19 1 110 (10) I 1 1 I 35,5 | 10 I I (10) 1 1 1 40,6 | I 1 8 (10)| 1 74,0 | I I 8 (8) i 80,8
22 1 i 10 (10) I 1 1 1 48,0 | 10 I I (10) 1 1 1 66,2 | I I 8 (10)| 1 66,9 | I 8 (8) | 1 98,6
26 1 110 (10) I 1 1 1 36,7 | 10 I I (10) 1 1 1 57,9 | I I 8 (10)| 1 94,6 | I 1 8 (8) | I 88,5
29 110 (10) I 1 1 1 62,1 | 10 (10) 1 1 1 50,3 | I I 8 (10)| 1 97,6 | 1 1 8 (8) i 106,0
33 1 110 (10) 1 1 1 74,3 | 10 (10) 1 Γ I 63,5 | 8 (10)| -[ 83,6 | 8 (8) i 114, 6
Tab.1:Pokračování růst nádorů indukovaných metylcholantrenem den pokusu koncentrace aplikovaných látek A + B
Př. 1.1
Př. 1.2
Př. 1.3 kontrola př. 1.4 —“1N ! v (10)1113,0 (10) (10) (10) (10) (9) (9) (8) (8) (6) (4) (4)
130,0
120,8
160,7
204,8
205,1
254, 8
289,9
301,9
429, 8
234,0
262,5 (10)|105,1 (10) (10) (10) (10) (10) (9) (8) (7) (4) (3) (3)
148,6
108,2
168. 8
196,3
277,6
276,7
328,0
424,3
471,0
337,7
384,7 (10)I150,1 (10) (9) (9) (9) (9) (9) (9) (9) (8) (8) (6)
155,9
102,4
126.5
163,2
183,7
213,5
273,5
391,7
443, 2
428,3
489,8 (8)|184,0 (7) i 174,0 (7)|201,1
I (7)|253,1
I (6)|365,0
I (5))388,3
I (4))251,3
I (3))328,0
I (3))332,0
I o (0)I í (0)i i (0)[ 15
Tab.1:Pokračování
1 den růst nádorů indukovaných metylcholantrenem
koncentrace aplikovaných látek A + B
pokusu 1 kontrola
př. 1.1 Př. 1.2 1 Pf 1 . 1.3 Př. 1.4
1 N V 1 N V 1 N 1 V N | V
78 4 (4)(400,5 1 3 (3)|461, I 3 | 2 I (4)(656,5 I 0(0)! - 1
82 1 3 (3)(565,0 I 1 3 (3)(494, I 3 1 3 I 1 (4)|836,0 I 1 0 (0)I - I
85 1 3 (3)(871,7 I 1 2 (2)|963, I 1 0 | 2 1 1 (3)(565,0 1 1 0 (0)I 1
89 1 3 (3)|l232 I 1 1 (l)|l575 I 1 1 2 I 1 (3)1600,5 I 1 0 (0)1 - I
92 1 2 (3)11567 I 1 0 (1)1 I 1 1 2 I 1 (3)|727,5 I 1 0(0)! - |
96 1 0 (0)1 - I 1 0 (0)1 I 1 1 2 I 1 (3)|790,0 1 1 0 (0)1 -
99 1 0 (0)1 ! 1 0 (0)1 - 1 1 1 1 1 1 (2)ΙΐΙΟ,Ο 1 1 0 O
celkem 1 1
uhynu- 10 10 1 8 8
lo 1 1
celkem 1 1
přeži- 0 0 1 2 0
lo _ _ 1 1 _ _1
N V - průměrný objem nádoru x (y) : x - počet měřitelných nádorů, y - počet myší ve skupině
Tab.2: Úhyn myší β nádory indukovanými metylcholantrenem úhyn myší s nádory indukovanými metylcholantrenem den koncentrace aplikovaných látek A + B pokusu
Př. 1.1
Př. 1.2
Př. 1.3 kontrola př. 1.4 %
celkem %
celkem %
celkem
10,0
10, 0
20,0
10,0
20,0 celkem
12,5
37,5
50, 0
62,5
30,0
20,0
75, 0
30,0
40, 0
60,0
60,0
70,0
87,5
100.0
40,0
Tab.2: Pokračování
1- — úhyn mySí s nádory indukovanými metylcholantren©® _
den koncentrace aplikovaných látek A + B
xonirexa
pokusu Př. 1.1 Př. 1.2 Př. 1.3 př.1.4 | _1
N % N % N X N 1 X |
celkem celkem celkem c©lkem
78 - - - - 2 60,0
82 1 70,0 - - - -
85 - - 1 80,0 1 70,0
88 - - 1 90,0 - -
94 1 80,0 - - - -
95 1 90,0 - - - -
96 1 100,0 1 100,0 - -
97 1 80,0
uhynulo 10 100,0 10 100,0 8 80,0 8 100,0 |
přežilo L 0 L o o 0 L o o 2 _ 20,0 1 0 1 0,0 1 1
Obr. 1. Grafické vyjádření tabulky 2.
Procento hynutí myší s induk. nádory »w >» o
'>k □
c >» x:
ZJ o
c
Φ o
o k_
Q.
ředění 1 ředění 2 -θ- ředění 3 * kontroly
Metylcholantren byl aplikován subkutánně 50 myším, nádor byl indukován u 38, t j . u 76*. Aplikace byla provedena na myších, u kterých se objevily nádory mezi 37. - 44. dnem po aplikaci první dávky metylcholantrenu. Myši s nádory byly náhodně rozděleny na 3 testované a 1 kontrolní skupinu. Průměrná velikost nádoru na začátku testu byla 10,4 mm2„
Příklad 1.1 - účinek koncentrace 1 látek A+B
Skupinu tvořilo 10 myší. Ve srovnání s kontrolní skupinou byl růst nádorů opožděn (tab.l). Zatímco u kontrol průměrná velikost nádoru přesáhla hodnotu 100 29. den pokusu, u testované skupiny byla tato hodnota naměřena až
36. den, tj. se 7denním zpožděním. Průměrná hodnota velikosti nádoru 200 byla zjištěna 43.den u kontrolní a 50. den u pokusné skupiny - opět se 7denním zpožděním. Ještě významnější rozdíl než ve velikosti nádoru byl pozorován v přežívání myší pokusné a kontrolní skupiny (tab.2). 57. den pokusu, kdy uhynulo 50* myší kontrolní skupiny, přežívalo 90* myší pokusné skupiny. Všechny myši kontrolní skupiny uhynuly do 67.dne pokusu (pokusných myší přežívalo tento den ještě 60*). Poslední myš s aplikací preparátu uhynula 96.den, tj. o 29 dní později.
Příklad 1.2 - účinek koncentrace 2 látek A+B
Skupinu tvořilo 10 myší. Ve srovnání s kontrolní skupinou byl růst nádorů opožděn (tab.l). Zatímco u kontrol průměrná velikost nádoru přesáhla hodnotu 100 29. den pokusu, u pokusné skupiny byla tato hodnota naměřena až 36. den, tj. se 7denním zpožděním. Průměrná hodnota velikosti nádoru 200 byla zjištěna 43.den u kontrolní a 50. den u pokusné skupiny - opět se 7denním zpožděním. Koncentrace léčebných látek A+B ovlivnilo růst nádorů se stejným výsledkem jako koncentrace 1.
Ještě významnější pozorován v přežívání roždí1 než ve myší pokusné velikosti nádoru a kontrolní skupiny (tab.2). 57. den skupiny,přežívalo kontrolní skupiny pokusu, kdy uhynulo 50* myší kontrolní 90* myší pokusné skupiny. Všechny myši uhynuly do 67.dne pokusu (pokusných myší přežívalo tento den ještě 70*). Poslední myš s aí preparátu uhynula 96.den, tj. o 29 dní později.
Příklad 1.3 - účinek koncentrace ”3 látek A+B
Skupinu tvořilo 10 myší. Ve srovnání s kontrolní skupinou byl růst nádorů opožděn (tab.l). Zatímco u kontrol průměrná velikost nádoru přesáhla hodnotu ÍOO 29. den pokusu, u pokusné skupiny byla tato hodnota naměřena až 36. den, tj. se 7denním zpožděním. Průměrná hodnota velikosti nádoru 200 byla zjištěna 43.den u kontrolní a 57. den u pokusné skupiny - tj. se 14dennim zpožděním.
Ještě významnější rozdíl než ve velikosti nádoru byl pozorován v přežívání myší pokusné a kontrolní skupiny (tab.2). 57. den pokusu, kdy uhynulo 50* myší kontrolní skupiny, přežívalo 90* myší pokusné skupiny. Všechny myši kontrolní skupiny uhynuly do 67.dne pokusu (pokusných myší přežívalo tento den ještě 80*). 100 dní přežily 2 myší, tj. 20* z celkového počtu sledovaných.
Ředění 3 léčebných látek A+B bylo nejúčinnější. Dvě myši byly vyléčeny úplně - u jedné došlo po 51 dnech k relapsu, druhá byla zdravá ještě 100.den, kdy bylo sledování pokusů ukončeno.
ZÁVĚR
Ze získaných výsledků vyplývá, že podávání testovaných látek A + B výrazně ovlivňuje přežití inbrednlch myší Ce^Ble s chemicky indukovaným nádorem. Zatímco kontrolní myši zcela vyhynuly do 67.dne, z pokusné skupiny č. 3 (nejvyšší koncentrace podávané dní. Vliv množství déle než 100 ze srovnání látky) přežívalo 20* myši účinné látky je patrný výsledků jednotlivých skupin. Nejlepší výsledek prokazovala skupina s nejvyšším množstvím podané látky (př. 1.3).
Přiklad 2
Ovlivnění vzniku a vývoje metastáz a doby přežití.
Látky byly aplikovány na linii myší Ce^Ble a nádoru melanomu B16, který je pro danou linii syngenni (tzn., že neexistuje při transplantacích imunologická bariéra) a má vysokou metastatickou aktivitu.
Transplantované nádorové buňky byly namnoženy ve formě ascitu v břišní dutině. Desátý den po intraperitoneální transplantaci 2 x 10® nádorových buněk byl ascites odebrán do Hanksova roztoku, buňky spočítány a naředěny na koncentraci 2 x 10® ascitických buněk na 0,2 ml suspsnze. Suspenze ascitických buněk byla transplantována intradermálně na levý bok myši. Desátý den po transplantaci melanomu B16 byly myši uvedeny do pentobarbitalové narkózy a narostlé nádory vyoperovány. Desátý den pro excizi nádorů byl zvolen na základě předchozích pokusů, kdy byla testována metastatická aktivita melanomu B16 (při vynětí primárního nádoru desátý den po transplantaci ascitických buněk všechny myši uhynou v průběhu 5 týdnů v důsledku vzniku metastáz).
a temperovány. v příkl. 1.1) . Testované látky byly skladovány v zamraženém stavu při -20°C. Látky byly rozmraženy těsně před podáním
Látky A a B” (specifikace stejná jak© byly smíchány v poměru 1:1, látka C (specifikace viz níže) byla podávána jako taková. Testované látky byly aplikovány pokusným myším subkutánně na míst© e© nejvzdálenější od primárního tumoru, v dávce 0,1 nebo 0,05 ml na myš v časových intervalech 24 nebo 48 hodin. Kontrolním skupinám byly aplikovány samotné látky A” e B nebo fyziologický roztok ve stejném množství a stejných časových intervalech jako u pokusných skupin.
Přežívání myší bylo sledováno každý den po dobu 100 dní. Uhynulé myši byly označeny, uchovávány ve formalínu do provedení pitvy (stanovení příčiny exitu a průkazu metastáz).
Označeni látky A i B je obdobné jako v příkladu 1 Látka C je částečně purifikovaný extrakt pankreatu. Jeho amylolytická aktivita a obsah trypsinogenu jsou stejné, jak© ve směsi A+B. Mimo to obsahuje jisté množství chymotrypsinogenu.
Příklad 2.1
Pokusnou skupinu tvořilo byla aplikována subkutánně v
intervalech 24 hodin. 22. den
z celkového počtu), 25. den
z celkového počtu), 28. den
z celkového počtu), 36. den
z celkového počtu) a 42. den
z celkového počtu). 100 dní
myší. Léčebná látka A+B
množství 0,1 ml v časových
>okusu pokusu uhynuly 2 uhynula myši 1 myš (20 (10 X %
pokusu uhynula 1 myš CIO %
pokusu uhynula 1 myš CIO %
pokusu uhynula 1 myš (10 %
přežily 4 myši. t j . 40 %
z celkového počtu 10 sledovaných.
Příklad 2.2
Pokusnou skupinu tvořilo 10 myší. Léčebná látka A+B byla aplikována subkutánně v množství 0,1 ml v časových intervalech 48 hodin. 22.den pokusu uhynula 1 myš (10 X z celkového počtu), 34. den pokusu uhynula 1 myš (10 % z celkového počtu), 38. den pokusu uhynula 1 myš (10 X z celkového počtu) a 40. den pokusu uhynula 1 myš (10 X z celkového počtu). 100 dní přežilo 6 myší, tj. 60 * z celkového počtu 10 sledovaných.
Příklad 2.3
Pokusnou skupinu tvořilo 10 myší. Léčebná látka A+B byla aplikována subkutánné v množství 0,05 ml v časových intervalech 48 hodin. 12.den pokusu uhynula 1 myš (10 * z celkového počtu), 16. den pokusu uhynula 1 myš (10 % z celkového počtu), 23. den pokusu uhynuly 2 myši (20 X z celkového počtu), 28.den pokusu uhynula 1 myš (10 * z celkového počtu), 33. den pokusu uhynula 1 myš (10 % z celkového počtu),
35. den uhynula 1 myš (10 X z celkového počtu) a 39. den uhynula rovněž 1 myš (10 as z celkového počtu). 100 dní přežily 2 myši, tj. 20 as z celkového počtu 10 sledovaných.
Příklad 2.4 - základní kontrolní skupina
Kontrolní Bkupinu tvořilo 6 myší. Byl aplikován pouze samotný fyziologický roztok subkutánně v množství 0,1 ml v časových intervalech 48 hodin. 17.den pokusu uhynula 1 myš (16,6 as z celkového počtu), 19. den pokusu uhynuly 2 myši (33,2 as z celkového počtu), 23., 29. a 34.den pokusu uhynula 1 myš (tj. pokaždé 16,6 as z celkového počtu). 100 dní nepřežila žádná myš, tj. uhynulo celých 100 % z celkového počtu 6 sledovaných.
Příklad 2.5 - první kontrolní skupina
Pokusnou skupinu tvořilo 10 myší. Byla aplikována pouze samotná látka A subkutánně v množství 0,05 ml v časových intervalech 48 hodin. 24.den pokusu uhynula 1 myš (10 ss z celkového počtu), 25. den pokusu uhynula 1 myš (10 SS z celkového počtu), 27. den pokusu uhynula 1 myš (10 Ss z celkového počtu), 33. den pokusu uhynula z celkového počtu), 35. den pokusu uhynula z celkového počtu), 37. den uhynula 1 myš (10 SS z celkového počtu), 39. den pokusu uhynula 1 myš (10 SS z celkového počtu) a 47. den pokusu uhynula 1 myš (10 SS z celkového počtu). 100 dni přežily 2 myši, t j. 20 ss z celkového počtu 10 sledovaných.
myš (10 % 1 myš (10 ss
Přiklad 2.6 - druhá kontrolní skupina
Pokusnou skupinu tvořilo 10 myší. Byla aplikována pouze samotná látka B subkutánně v množství 0,05 ml v časových in tervalech 48 hodin. 23.den pokusu uhynuly 2 myši (20 Ss z (10 ss z (10 ss z (10 SS z celkového počtu), 25. celkového počtu), 26. celkového počtu), 30. celkového počtu), 31.
den pokusu uhynula i myš den pokusu uhynula 1 myš den pokusu uhynula 1 myš z celkového počtu), 34.den pokusu uhynula 1 z celkového počtu) a 50. den pokusu uhynula 1 z celkového počtu). 100 dní přežily 2 myši, z celkového počtu 10 sledovaných.
1 myš (10
myš (10
myš (10
t j . 20
Příklad 2.7
Pokusnou skupinu tvořilo 10 myší. Byla aplikována látka C subkutánně v množství 0,1 ml v časových intervalech 48 hodin. 36.den pokusu uhynula 1 myš (10 X z celkového počtu),
38. den pokusu uhynula 1 myš (10 as z celko- vého počtu),
42. den pokusu uhynula 1 myš (10 X z celkového počtu) a 43. den pokusu uhynula 1 myš (10 % z celkového počtu). 100 dní přežilo 6 myší, tj. 60 * z celkového počtu 10 sledovaných.
Příklad 2.8 - třetí kontrolní skupina
Kontrolní skupinu tvořilo 14 myší. Byl aplikován pouze samotný fyziologický roztok subkutánně v množství 0,1 ml v časových intervalech 48 hodin. 5. den pokusu uhynula 1 myš (7.1 as z celkového počtu), 15. den pokusu uhynuly 2 myši (14.3 as z celkového počtu), 19. den pokusu uhynula 1 myš (7.1 as z celkového počtu), 20., 21., 22., 23., 27.., a 29. den pokusu uhynuly po 1 myši (po 7.1 as z celkového počtu), 30. den pokusu uhynuly 2 myši (14.3 as z celkového počtu), a 31. a 32. den pokusu uhynula 1 myš (tj. pokaždé 7,1 as z celkového počtu). 100 dní nepřežila žádná myš, t j. uhynulo celých 100 as z celkového počtu 14 sledovaných.
Příklad 2.9 - kontrolní skupina
Kontrolní skupinu tvořilo 14 myší. Bylo sledováno pouze přežívání po excizi melanomu B16. Nádor byl vyoperován
10. den po intradermální transplantaci 2 . 10® ascitických buněk.
Přežívání myší viz tabulka Č.4.
100 dní nepřežila žádná myš, t j. 0 as.
Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce 3 a 4.
Tabulka 3: Výsledky příkladů 2.1 - 2.Θ
Příkl
č.
2.1
2. 2
2.3
2.4 počet myší aplikovaná látka typ
A+B
A+B
A+B íyz.
roz.
exity i-r přežil dávka (ml) čas.
int. (hod) celk.
denpočet
100 dní přežitých
0,1
0,1
0,05
0,1
22-2 25-1
28-1 36-1 ' 42-1
22-1
34-1
38-1
40-1
12-1
16-1
23-2
28-1
33-1
35-1
39-1
17-1
19-2
Tabulka 3: Pokračování Výsledky příkladů 2.1 - 2.8
1 Příkl. — počet mySi — aplikovaná látka — exity • přeži1© 100 dní % Přeži- tých
typ dávka (ml) čas. int. (hod) celk. den- počet
č.
23-1
29-1
35-1
2.5 10 A 0,05 48 8 24-1 2 20
26-1
27-1
33-1
35-1
37-1
39-1
47-1
1 2.6 | 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1_1 10 1 B 1 1 i 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1_L 0,05 | 1 1 1 I 1 1 1 48 1 1 1 1 1 1 1 L 8 I 1 1 1 1 1 1 t 23-2 | 25- 1 | 26- 1 | 30- 1 | 31- 1 I 34-1 | 50-1 | 1 2 1 20 i 1 ! I 1 1 í
2.7 1 1 10 1 1 c 1 1 0,1 1 1 48 1 1 4 1 1 1 1 36-1 | 6 1 1 ! so
1 1 1 1 1 1 38-1 | !
Tabulka 3: Pokračování Výsledky příkladů 2.1 - 2.8
Příkl.
č.
počet myší ap1ikovaná 1átka
2.8 typ dávka (ml) čas. int. (hod) exity
1-Γ
Ipřežilo S celk.
den- 1100 dni itýoh počet | |
42- 1
43- 1 íyz.
roz.
0,1
5-1
15-2
19- 1
20- 1
21-1
22-1
23-1
27-1
29- 1
30- 2
31- 1
32- 1
- 30 Tab. 4: Úhyn kontrolních mySÍ na metastázy po excizi primár.
nádoru
1- 1 den 1 pokusu 1 počet ex ΊΊ procento |
uhynulých 1 přežívajících i 1
1 5 1 7,14 i 92,86 | I
1 15 2 21,43 78,57 i I
1 19 1 28,57 1 71,43 | i
1 20 1 35,71 1 64,29 I 1
1 21 1 42,86 s 57/14 i
1 22 1 50,00 50,00 i 1
1 23 1 57,14 1 42,86 | 1
1 27 1 64,29 1 35,71 | |
1 29 1 71,43 1 28,57 | 1
I 30 2 85,71 1 14,29 1 I
1 31 . 1 92,86 1 7,14 | I
1 32 1 100,00 1 ο,οο |
I celkem z 14 ImySí ex 1_ 14 100,00 1—l o o * o
ZÁVĚR
Z výsledků vyplývá, že látky A + B i látka ”C inhibují vznik metastáz melanomu B16. V případě kombinac© látek A + B se ukázala jako vhodnější dávka 0,2 ml/2 Dg a časový interval 48 hodin, kdy přežilo 60 % pokusných myší déle než 100 dní, zatímco kontrolní skupina 2.5 vyhynula na metastázy do 35.dne pokusu a druhá rozšířená kontrolní skupina 2.9 vyhynula do 32. dne pokusu.
Vzhledem k tomu, že melanom B16 je agresivní metastazující nádor na inbredních myších Ce^Bia, jsou získané výsledky za použití amylázy + trypsxnogenu a pankreatickáho extraktu pozitivní a látky jsou perspektivní pro svůj protinádorový efekt.

Claims (8)

  1. PATENTOVÉ NÁSOKY
    Farmaceutický prostředek s modulačním účinkem na zhoubná nádory a jeho použiti
    1. Farmaceutický prostředek s modulačním účinkem na zhoubné nádory, vyznačující se tím, že obsahuje
    a) proenzym proteáz
    b) amylázu v poměru od 1:100 až 100:1 v jednotkách enzymatické aktivity.
  2. 2. Farmaceutický prostředek podle nároku 1 , vyznačující se tím, že jako proenzym proteáz obsahuje jednu nebo více složek ze skupiny zahrnující - trypsinogen
    - chymotrypsinogen
    - proeiastázu a
    - prekallikrein .
  3. 3. Farmaceutický prostředek podle nároku 1 a2, vyznačující se tím, že proteáza j© přítomna ve své neaktivované formě.
  4. 4. Farmaceutický prostředek podle nároků 1 až 3 , vyznačující se tím, že amyláza je původu lidského, zvířecího, bakteriálního eventuelně rostlinného.
  5. 5. Farmaceutický prostředek podle nároků 1 až 4 , vyznačující se tím, že proenzym proteáz je původu lidského nebo zvířecího.
    '53
  6. 6. Farmaceutický prostředek podle nároků 1 až 5 , vyznačující se tím, že obsahuje jako další složku polyvalentní inhibitor proteáz, například aprotinin.
  7. 7. Farmaceutický prostředek podle nároků 1 až 6 , vyznačující se tím, že je použita kombinace proenzymů proteáz a amyláz pro výrobu léčiv s modulačním účinkem na zhoubné nádory.
  8. 8. Farmaceutický prostředek podle nároků 1 až 6 , vy zn ač uj íc i se t ím , že je použita kombinace proenzymů proteáz a amyláz pro výrobu léčiv s účinkem zvýšeni imunogennosti zhoubného nádoru.
CZ951272A 1995-05-17 1995-05-17 Farmaceutický prostředek s modulačním účinkem na zhoubné nádory a jeho použití CZ283972B6 (cs)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ951272A CZ283972B6 (cs) 1995-05-17 1995-05-17 Farmaceutický prostředek s modulačním účinkem na zhoubné nádory a jeho použití
CA002176771A CA2176771C (en) 1995-05-17 1996-05-16 Pharmaceutical preparation with modulatory effect on malign tumours and its usage
US08/649,184 US5858357A (en) 1995-05-17 1996-05-17 Pharmaceutical composition containing an isolated protease proenzyme, amylase, and aprotinin
EP96107917A EP0743070A3 (de) 1995-05-17 1996-05-17 Verwendung von Protease-Proenzymen und Amylasen als Wirkstoffe in pharmazeutischen Mitteln zur Krebstherapie sowie ihre Herstellung

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ951272A CZ283972B6 (cs) 1995-05-17 1995-05-17 Farmaceutický prostředek s modulačním účinkem na zhoubné nádory a jeho použití

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ127295A3 true CZ127295A3 (en) 1996-12-11
CZ283972B6 CZ283972B6 (cs) 1998-07-15

Family

ID=5463046

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ951272A CZ283972B6 (cs) 1995-05-17 1995-05-17 Farmaceutický prostředek s modulačním účinkem na zhoubné nádory a jeho použití

Country Status (4)

Country Link
US (1) US5858357A (cs)
EP (1) EP0743070A3 (cs)
CA (1) CA2176771C (cs)
CZ (1) CZ283972B6 (cs)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ307195B6 (cs) * 2013-11-18 2018-03-14 František Trnka Farmaceutická kompozice obsahující směs proenzymů a enzymů

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6642011B2 (en) * 1998-04-15 2003-11-04 Genencor International, Inc. Human protease and use of such protease for pharmaceutical applications and for reducing the allergenicity of non-human proteins
US6858598B1 (en) 1998-12-23 2005-02-22 G. D. Searle & Co. Method of using a matrix metalloproteinase inhibitor and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia
US6833373B1 (en) 1998-12-23 2004-12-21 G.D. Searle & Co. Method of using an integrin antagonist and one or more antineoplastic agents as a combination therapy in the treatment of neoplasia
ES2178517B1 (es) * 1999-05-31 2004-09-16 Universidad De Salamanca Procedimiento para el estudio de la activacion funcional de leucocitos, plaquetas y otras celulas.
WO2003080110A1 (es) * 2002-03-22 2003-10-02 Suarez Mendoza Ramon Liquido topico destructor de tejido patogeno
US7153504B2 (en) * 2004-07-30 2006-12-26 Can Technologies, Inc. Stabilized pancreas product
AU2010310887B9 (en) * 2009-10-22 2015-10-08 Propanc Pty Ltd A pharmaceutical composition for treating cancer comprising trypsinogen and/or chymotrypsinogen and an active agent selected from a selenium compound, a vanilloid compound and a cytoplasmic glycolysis reduction agent
MY196737A (en) * 2015-11-12 2023-05-03 Propanc Pty Ltd Proenzyme composition
NZ744845A (en) * 2016-01-29 2023-04-28 Propanc Pty Ltd Cancer treatment
JP7004665B2 (ja) * 2016-04-12 2022-02-04 プロパンク・ピーティーワイ・リミテッド 癌治療用の前酵素の組成物
US9943387B2 (en) 2016-06-29 2018-04-17 International Business Machines Corporation Unmanned aerial vehicle-based system for livestock parasite amelioration

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3956483A (en) * 1968-10-24 1976-05-11 Wilson Pharmaceutical & Chemical Corporation Preparing pancreatin
US4514388A (en) * 1983-03-22 1985-04-30 Psaledakis Nicholas G Proteolytic enzymes in the zymogen form to treat sarcoma cells
JPH01186820A (ja) * 1988-01-19 1989-07-26 Teijin Ltd 悪性腫瘍治療剤
DE3830924A1 (de) * 1988-09-12 1990-03-15 Knoll Ag Verwendung von fibrinolytika zur kombinationsbehandlung von tumoren
ATE119780T1 (de) * 1989-10-06 1995-04-15 Mucos Emulsions Gmbh Katabolische enzyme zur induktion des tumornekrose-faktors (tnf).
AT402367B (de) * 1990-10-11 1997-04-25 Immuno Ag Pharmazeutische zubereitung auf basis von lys-plasminogen

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ307195B6 (cs) * 2013-11-18 2018-03-14 František Trnka Farmaceutická kompozice obsahující směs proenzymů a enzymů
US11185587B2 (en) 2013-11-18 2021-11-30 Frantisek Trnka Pharmaceutical composition containing a mixture of proenzymes and enzymes

Also Published As

Publication number Publication date
CA2176771A1 (en) 1996-11-18
EP0743070A2 (de) 1996-11-20
CZ283972B6 (cs) 1998-07-15
CA2176771C (en) 2002-02-12
EP0743070A3 (de) 1998-03-11
US5858357A (en) 1999-01-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Maurer Bromelain: biochemistry, pharmacology and medical use
US7569547B2 (en) Inhibiting furin with polybasic peptides
US7135547B2 (en) Peptide conjugated anti-cancer prodrugs
US5972636A (en) ATP-dependent protease and use of inhibitors for same in the treatment of cachexia and muscle wasting
US7485626B2 (en) Combinations of enzyme inhibitor-containing preparations and the use thereof
AU748870B2 (en) Method of inhibiting membrane-type matrix metalloproteinase
CZ127295A3 (en) Pharmaceutical preparation exhibiting modulation effect on malignant tumors and the use thereof
KR20130050923A (ko) 위 내성 효소 제약 조성물
WO2021042777A1 (zh) 一种治疗肿瘤的多组分凝胶缓释药物组合物
Erdos et al. Inactivation and potentiation of the effects of bradykinin
Møller-Kristensen et al. Burn injury reveals altered phenotype in mannan-binding lectin-deficient mice
ES2251953T3 (es) Uso de desmopresina en la preparacion de un medicamento inhibidor de la diseminacion metastasica durante la cirugia del cancer.
Schmid et al. Protease-antiprotease interactions and the rationale for therapeutic protease inhibitors
WO2018220537A1 (en) Adjuvant supplement for oncological patients
Dive et al. Dosing and scheduling influence the antitumor efficacy of a phosphinic peptide inhibitor of matrix metalloproteinases
CA2406128A1 (en) Methods and compositions for treating neoplasms
US6214824B1 (en) Use of amiloride for treating cancer
Karakiulakis et al. Basement membrane collagen-degrading activity from a malignant tumor is inhibited by anthracycline antibiotics
Larauche et al. Effect of dietary nitric oxide on gastric mucosal mast cells in absence or presence of an experimental gastritis in rats
Alur et al. Inhibition of a model protease—pyroglutamate aminopeptidase by a natural oligosaccharide gum from Hakea gibbosa
CN110496128B (zh) 利培酮或帕潘立酮在制备治疗弥漫性大b细胞淋巴瘤的药物中的应用
WO2024144461A1 (en) Serine protease inhibitory effects of health supplements in human cancerus cell lines
JPH03503644A (ja) ヘパリン含有製剤
JP3227673B2 (ja) 膵炎予防治療薬
RU2093166C1 (ru) Ранозаживляющее средство &#34;коллагеназа кк&#34; широкого спектра действия

Legal Events

Date Code Title Description
IF00 In force as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20000517