CS9002047A2

CS9002047A2 - N-(3-fluoro-2-phosphonylmethoxypropyl) derivatives of purine and pyrimidine heterocyclic bases, method of their preparation and application

Info

Publication number: CS9002047A2
Application number: CS902047A
Authority: CS
Inventors: Antonin Rndr Drsc Holy; Jindrich Rndr Jindrich; Erik Prof Dr Declercq; Jan Dr Balzarini
Original assignee: Ustav Organicke Chemie A Bioch
Priority date: 1990-04-24
Filing date: 1990-04-24
Publication date: 1991-11-12
Also published as: EP0454427B1; FI911980A7; SK280313B6; IL98110A0; EP0454427A1; IE911356A1; PT97478B; CZ285420B6; FI911980A0; US5733896A; FI911980L; NO911600L; JPH06206888A; DE69115108T2; DE69115108D1; PT97478A; AU7533091A; JP2937532B2; CA2040982C; ATE131171T1

Description

Předloženy vynález se tyká N-(3-fluor-2-fosfonylmethoxypro-pyl)derivátú purinovych a pyrimidinovych heterocyklickychbaží, jejich způsobů vyroby a použití jako účinných složekléčiv.

Mezi virovými onemocněními se vyznačují zvláštní ne-bezpečností nemoci vyvolané retroviry, jako jsou viry lid-ské imunitní nedostatečnost i (HIV), které působí onemocněníaids. Léčení těchto infekcí je obtížné a ačkoli látky nej-různější struktury, jako jsou sulfátováné polysacharidy,aurintrikarboxylová kyselina, Evansova modů, glycyrrhizin,heparin, tetrahydroimidazoC4,5,1-jk3C1,4 3-benzodiazepin--2(1H)-thi ony, a d., mají význačné účinky v tkáňových kul-turách, pouze modifikovaná analoga nukleosidů a nukleotidů(2',3'-dideoxycyt idin, 21,3'-dideoxy-21 ,31-didehydrothymi-din) se uplatnila v terapii těchto onemocnění u pokusnýchzvířat. Pro terapii onemocnění aids jsou pak z této skupinypoužity zatím pouze 3'-azido-2',3 *-dideoxythymidin (AZT,zidovudin) a 21,3'-dideoxyinosin (ddl).

Jinou důležitou skupinou látek, účinných mezi jinýmitaké proti retrovirům, jsou acyklická nukleotidová analoga,9-(2-fosfonylmethoxyethy1)puriny (Čs.aut.osv. 263951), znichž nejpodrobněji byl studován adeninovy derivát PMEA(Čs. aut. osv. 263952). Na zvířatech byl prokázán jehoúčinek na virus Moloneyho sarkomu, virus leukemie koček,virus imunitní nedostatečnost i opic (SIV), a na tkáňovýchkulturách i na virus HIV (E-DeClercq, Antiviral Res- 12. 1(1989)). U těchto látek je pozoruhodná vysoká specifičnost pro-tivirového účinku v závislosti na chemické struktuře, kteráje citlivá na jakékoli zásahy do postranního řetězce 2-fos-fonylmethoxyethylskupiny. Zavedením alkylskupin, prodlouže-ním či zkrácením řetězce nebo vynecháním kyslíkového atomuvždy dochází ke ztrátě protívirového účinku (A.Holý, E. De-ci ercq, I . Votruba, Nucleotide Analogues as Antiviral Agent s.,ACS Symposium Series No.401, str.51 (1989)). Jedině zavede- & 2 ním hydroxymethylové funkce do polohy 2 tohoto řetězce seproti virový účinek neztrácí, je však zaměřen výhradně protiDNA virům (herpesviry, adenoviry, poxviry atd.)(Čs.aut.osv.233665, 264222) a ztratí se účinek antiretrovirový. Odpoví-dající aminomethyl, alkoxymethyl nebo azidomethylderivátyvšak žádný protivirový účinek nemají, stejně jako látky,v nichž je tatohydroxymethylová skupina nahražena funkcímethylovou (A.Holý, E.DeClercq, I-Votruba, Nucleotide Ana-logues as Antiviral Agents. ACS Symposium Series No.401,str.51 (1989)).

Vynález se týká N-(3-fluor-2-fosfonylmethoxypropy1)-derivátů purinových a pyrimidinových heterocyklických bažíobecného vzorce I b-ch2-ch-ch2f 0CH2P(0)(0H)2 (I) kde B je purin-9-ylový nebo pyrimidin-1-ylový zbytek a ab-solutní konfigurace na uhlíkovém atomu C2 je S, R nebo RSa jejich soli s alkalickými kovy, amoniakem a aminy.

Dále je předmětem vynálezu způsob výroby látek obec-ného vzorce I vyznačený tím, že se N-(3-fluor-2-hydroxypro-pyl)deriváty pyrimidinových a purinových heterocyklickýchbaží obecného vzorce II

B'~CH2-CH-CH2FOH (II)

kde B' je purin-^-ylový nebo pyrimidin-1-ylový zbytek, pří-padně jeho deriváty substituované chránícími 0-alkylskupi-námi nebo na aminoskupinách chránící N-acyl, N-dialkylami-nomethylenskupinou, a absolutní konfigurace na uhlíkovématomu C2 je S, R nebo RS

uvedou do reakce s dialkylestery kyseliny p-toluensul-fonyloxymethylfosfonové obecného vzorce III 4-CH3cóH4S02OCH2P(0)(0R1)2 (III) ή kde R je alkylový (C1-C3), s výhodou 2-propylový zbytek ι,Π,ί7

v přítomnosti 1-5 molárních ekvivalentů (vztaženo nalátky obecného vzorce II) hydridu sodného v dipolárnímaprotickém rozpouštědle, s výhodou v dimethylformamidu, ato při teplotách -30°C až 100°C, po odpaření rozpouštědlase chránící skupina na heterocyklické bázi odstraní metha-nolysou nebo kyselou hydrolysou a látky obecného vzorce IV

0CH2P(0)(OR >2 (IV) kde B má stejný vyznám jako ve vzorci I a R stejný vyznám

jako ve vzorci III isolované nebo deionisované se při teplotě místnostiuvedou do reakce s bromtrimethylsilanem v aprotickém roz- pouštědle, s výhodou v acetonitrilu, po odpaření se směs zpracuje vodou nebo roztoky pufrů a látky obecného vzorce Ise isolují s výhodou ionexovou chromatografií jako volnékyseliny, nebo soli s alkalickými kovy, amoniakem a aminy. Dále je předmětem vynálezu způsob vyroby látky vzorceI, kde B je hypoxanthin-9-yl, vyznačující se tím, že selátka vzorce I, kde B je adenin~9-yl, uvede do reakce s 3-methyIbutylnitritem v 50-80% vodné kyselině octové nebo svodnynf roztokem dusitanu sodného v přítomnosti ekvimolár-ního množství kyseliny octové při teplotě místnosti. Dále je předmětem vynálezu způsob vyroby látky vzorceI, kde B je xanthin-9-yl, vyznačující se tím, že se látkavzorce I, kde B jě guanin-9-yl, uvede do reakce s 3-methyl-butylnitritem v 50-80% vodné kyselině octové nebo s vodnýmroztokem dusitanu sodného v přítomnosti ekvimolárního množ-ství kyseliny octové při teplotě místnosti. Dále je předmětem vynálezu způsob vyroby látky vzorceI, kde B je 2,6-diaminoadenin, vyznačující se tím, že selátka vzorce I, kde B je 2-amino-ó-azidopurin uvede do re-akce s plynným vodíkem v přítomnosti katalysátoru, s výho-dou kovového palladia vyredukovaného na anorganickém nosi-či, a to.ve vodě nebo ve zředěných vodných roztocích orga-nických či minerál ní cB~r kyselin.

co o 4

Konečně je předmětem vynálezu způsob použití látekobecného vzorce I pro potlačení multiplikace virů, zejménaretrovirú, s uplatněním v léčení onemocnění těmito viry vy-volaných.

Pyrimidinové báze v obecném vzorci I jsou uráčil,thymin, cytosin a jejich deriváty obecného vzorce V

(V) o kde R*- může byt vodík, hydroxylamino, hydrazino, alkoxy,amino nebo substituovaná aminoskupina a R^ vodík, halogennebo alkyl (C1 až C4) skupina

či zbytky obecného vzorce VI

kde R'^ má stejný vyznám jako ve vzorci V, R^ je kyslík nebosíra , i jejich 5-aza, 6-aza nebo 3-deaza deriváty.

Purinová báze v látkách obecného vzorce I je adenin,hypoxanthin, guanin, xanthin a jejich 2-aza, 8-aza, 1--deaza, 3-deaza nebo 7-deaza deriváty obecného vzorce VII

kde R~ i R^ jsou vodík, amino, hydrazino, hydroxylamino,azido, substitovaná amino, hydroxy, alkoxy, merkapto,alkylmerkapto, halogen nebo alkylskupina s krátkým (C1-C4) 7 řetězcem a kombinace těchto skupin, a R vodík, hydroxy,a1koxy, merkapto, alky11 h io, amino, substi tuovaná ami nosku-pina nebo halogen, 5

Pro přípravu látek obecného vzorce I je výhodný postuppodle vynálezu, který je založen na zavedení fosfonomethy-lové skupiny na volnou hydroxylovou skupinu N-(3-fluor-2--hydroxypropy1)derivátú heterocyklických baží obecnéhovzorce II- Tyto látky jsou dobře dostupné např- alkylacíheterocyklických baží fluormethyloxiranem (PV 2048-90). Abybyly vyloučeny vedlejší reakce při zavádění fosfororganic-kého synthonu, je výhodné u těch látek vzorce II, které ob-sahují basickou aminoskupinu (např- cytosin, adenin, guaninapod.) tuto funkci chránit vhodnou chránící skupinou, např-aroylací (benzoylací), převedením na amidinovou funkci apod- (A.Holý,I.Rosenberg, H-Dvořáková,Collect.Czech.Chem.Commun. 54, 2470 (1989)). K tomu účelu je možné užít např.postup vypracovaný pro specifickou N-benzoylaci (G-S-Ti,B.L.Gaffney, R.A.Jones, J.Am.Chem.Soc. 104, 1316 (1982)). Připravené chráněné deriváty obecného vzorce II se pakkondensují s činidlem obecného vzorce III v přítomnosti hy-dridu sodného, a to nejvýhodněji v dimethylformamidu. Re-akce probíhá nejlépe při použití 3 až 3.5 molárních ekviva-lentů hydridu vztaženo na látku vzorce II. Alkylační činid-lo obecného vzorce III je odvozeno na dříve popsaném prin-cipu (A.Holý, I-Rosenberg: Collect-Czech.ChemComun. 47.3447 ( 1 982 ) ; A - F. K1 uge , Org . Syn 64. 80. ' (Ί 985 )') j. esterověvázaná skupina může být alkyl nebo aralkyl. Protože však seza uvedených reakčních podmínek látky vzorce III mohou (po-dobně jako neutrální estery fosforečných a fosfonových ky-selin) chovat jako alkylační činidla, je nejvýhodnější uží-vat estery s nízkou alkylační schopností, jako jsou např. 2,2-dimethylpropy1 nebo 2-propylester snadno dostupný např-podle následujícího postupu: ke směsi 96 g di(2-propyl)fos-fitu a 23 g paraformaldehydu se za míchání přidá 8-4 mltriethylaminu a směs se zahřívá pod zpětným chladičem s 6 chlorkalciovým uzávěrem při 100°C do úplného rozpuštění pa-raformaldehydu a ještě 1 h navíc. K tomu se po ochlazenípřidá 500 ml acetonitrilu, 121:.5 g p-toluensulfonylchloridua za míchání 90 ml triethylaminu a 1 g 4-dimethylaminopyri-dinu. Směs se míchá 24 h, ochladí ledem a přidá se postupně400 ml 0.4 M trxethylamoniumhydrogenkarbonátu. Míchá se 24h, ve vakuu se odpaří acetonitri1 při teplotě max. 40°C asměs se extrahuje etherem (3 x 200 ml). Etherový extrakt sesuší síranem sodným, filtruje, odpaří ve vakuu a zbytek v200 ml benzenu se filtruje přes sloupec silikagelu (500 ml)v benzenu. Sloupec se vymývá benzenem do odstranění neči-stot s vyšším Rp (TLC v chloroformu na destičkách silikage-lu) a produkt se vymyje ethylacetátem. Po odpaření rozpouš-tědla ve vakuu se zbylý olej míchá s 300 ml petroletheru dozkrystalování, odsaje se, promyje petroletherem a suší vevakuu. Získá se 140 g di(2-propy1)esteru kyseliny p-toluen-sul fonyloxymethyl fosfonové, b-t. 37,5°C. Pro C. .Ho-,P0.S(350.4) vypočteno 47.98% C, 6.61% H, 8-86% P, 9.15% S; na-lezeno 48.15%C, 6-80% H, 9-02% p, 9.24% S.

Reakce látek III s anionty látek II probíhá dobře přinízké teplotě (~1Q°C až 0°C), ale může být provedena i přiteplotě zvýšené. Ke zpracování reakční směsi se doporučujenejprve odstranit chránící skupinu z heterocyklické báze, pokud je použita a isolovat diestery obecného vzorce IV bu3chromatografií na silikagelu nebo na ionexu. Di(2-propy1)-estery jsou za podmínek deionisace stálé i ve zředěném vod-ném amoniaku. Po vysušení se látky vzorce IV podrobí reakcis bromtrimethylsilanem nebo jodtrimethylsilanem v dimethyl-formamidu, chlorovaných uhlovodících nebo s výhodou v ace-tonitrilu. Tato reakce probíhá vesměs hladce při teplotěmístnosti. Po odpaření směsi a kodestilaci zbytku s vodouse surové látky obecného vzorce I čistí nejsnáze ionexovouchromatografií a uchovávají se s výhodou jako ve vodě dobřerozpustné a stálé alkalické soli·

Tabulka 1. Protivirový účinek látek obecného vzorce I ΜΙ·.·»·’ >

CO

X r-l J> B «-<x. to

=t CM— I >

O in xυtu

I

. >I—I

X ε X. tm >

X υ >

N > >

CO > > s> o m cmu i . F-l > ε tox

I > tn x n5 O -x10 -<υ eυ ·χε tmΛ π5

X ρ Ό

►J ο ΓΟΙΟ (Μ Ο ΟΟ Ο10 10A Α γο ο

CM Ο Ο 10 Α Ο Ο ιο Α ο Γχ

CM Ο

CM 10 ΓΟCM ν-

Ο Ο10 CM

Ο 10Ο CM Ο I 10 Ο Ο

CM Α Ο Ο γο γο

ΓΟ CJ Ο Ο

CM

Zs ο ο

CM Ο ο 10 Α ο ο Ο θ' <Μ Ο

CM CM CMA Α Ο Οο ο CM CMΑ Α Ο ο ο ο CM CMA Α Ο ο

CM ΪΧ

I Ο 1 α ο ο

CM Α Α

I Ο- ι

C ·♦—4

C 0) Ό θ' ι

C • γΜ

C <ΰ ο ο

+J

C π5

X 0 α >, χ

X

I θ' ι

C •ιΗ

X Ρ

C (ι

X

IX

Adeq'in-9-y 1 2.0 14-2 7.2 — — — — — — — — — — — — — — _ a^Dávka, kvérá vyvolá 50% potlačení cytopathogenního účinku viruHIV-1 v Π7-4 buňkách· ^Dávka, která snižuje viabilitu PIT-4buněk na/polovinu; Poměr CD/eD^q

Tabulka 2. Účinek látek vzorce I na vývoj nádoru indukovanéhovirem MSV u novorozených NMRI myší. Látka i B Dávka (mg/kg/den) Střední denvzniku nádoru Střední dobapřežití (dny) 1 Adenin-9-y1 20 >13 - 5 7-5 14.4 : / 1 5.8 10.9. 2 Guanin-9-y1 20 >13 10 5 8-5 12.5 1 5.2 11.7 IX Adenin-9-yl 20 >13 - 5 10.1 17-2 1 6- 1 14.7 Kontrola 0 5.3 11.6

8 Příklad 1. Κ suspensi 6 g 9-(RS)-(3-fluor-2-hydroxypropy1)-adeninu ve 160 ml pyridinu se přidá 24 ml chlortrimethylsi-lanu, směs se míchá 1 h při teplotě místnosti, přidá se18.5 ml benzoylchloridu a míchá se 2 h při teplotě místnos-ti. Pak se ochladí ledem, přikape 30 ml ledové vody násle-dované 66 ml konc. vodného amoniaku a míchá se 30 min zachlazení ledem. Odpaří se ve vakuu a zbytek krystaluje zvody. Odsaje se, promyje vodou, acetonem, etherem a suší vevakuu nad oxidem fosforečným při 15 Pa.Získá se 7.5 g (84$$>9-(RS)- (3-f 1 uor-2-hydroxypropy 1 ) -N1^-benzoy laděn i nu, t -1 .197°C, Rp.-0.35 (TLC, Silufol UV254, chloroform-methanol,9:1). Pro c15H14FN5O3 (331,3) vypočteno 54-38J»C, 4.26$$ H,5.73$$ F, 21-14$$ N; nalezeno 54.62$$ C, 4.46$S H, 6.04$$ F,23-67$$ N. 13C-NMR Spektrum.· 45.91 d, CHgN, 3JCF=8-0; 67-51d, CH(OH), 2Jcf=19.2: 85-08 d, CHgF, 1JCF=1Ó9.1.

Tento produkt se kodestiluje dimethylformamidem (2x25ml) při 40°C/15 Pa, rozpustí v 80 ml dimethylformámidu,ochladí na 0°C, přidá se 2.8 g 60$S disperse hydridu sodnéhov parafinu a míchá se 30 min. Pak se přidá roztok 9.1 gdi(2-propy1)esteru kyseliny p-toluensulfonyloxymethylfos-fonové v 20 ml dimethylformamidu a míchá se 16 h při 80°Cza vyloučení přístupu vlhkosti. Odpaří se při 40°C/15Pa,zbytek kodestiluje za týchž podmínek toluenem (2x25 ml) apřidá se 200 ml 0.1 M methoxidu sodného v methanolu. Směsse ponechá stát 20 h při teplotě místnosti, neutrálisuje sepřidáním katexu v H+-formě (např.Dowexu 50), alkalisujezpět přidáním triethylaminu, zfiltruje, promyje methanolem(200 ml) a filtrát se odpaří ve vakuu. Zbytek se v 50 mlvody vnese na sloupec téhož ionexu (200 ml), promyvá se 20$$vodným methanolem a detekuje se UV-absorbce eluátu při 254nm. Po poklesu UV-absorbce na původní hodnotu se sloupecvymyje 1 1 zředěného (1:10) vodného roztoku amoniaku (vý-sledná koncentrace 2-2-5$$ váhových) a eluát se odpaří vevakuu· Odparek se kodest i luje ethano1em (2x50 ml) a sušípři 15 Pa nad oxidem fosforečným 24 h. K odparku se přidá 9 150 ml acetonitrilu a 15 ml bromtrimethylsilanu, roztok seponechá stát 24 h při teplotě místnosti a odpaří ve vakuu.Ke zbytku se přidá 100 ml vody, po 30 min se neutrálisujekonc. vodným amoniakem a odpaří ve vakuu. Zbytek se vnese v50 ml vody na sloupec katexu v H+-formě (např.Dowexu 50)(200 ml) a opakuje se předchozí postup deionisace. Amonia-kální e.luát se odpaří a zbytek v 50 ml vody vnese na slou-pec 200 ml středně bazického anexu (např. Dowexu 1X2).Sloupec se promyje vodou (400 ml) a potom se promyvá pos-tupně 0.5 M kyselinou octovou (1 1) a 1 M kyselinou octo- vou; průběh eluce se sleduje měřením UV-absorbce eluátu při254 nm. Produkt se získá z eluátu 1 M kyselinou octovou,odpaří se ve vakuu a ze zbytku se kyselina octová odstraníkodestilací vodou. Produkt se rozpustí ve vroucí vodě (100ml), filtruje za horka, zahustí ve vakuu na objem ca 20 mla přidá se 100 ml ethanolu a 100 ml etheru. Ponechá se státv lednici 24 h. odsaje, promyje etherem a suší ve vakuu.Získá se 2,5 g 9-(RS)-(3-f1uor-2-phosphonylmethoxypropy1)-adeninu, t.t. 265°C- Pro C^H.,3FN504P (305-3) vypočteno35.40S5C, 4.29%H, 6.22% F, 22-95% N, 10.17% P; nalezeno35.69% C, 4.57% H, 7-25% F, 22.84% N, 9.71% P. 13C-NHRSpektrum: 43-12 d, CHgN, 'J>JCF=ó - 8 77-47 dd, CH, 2JCF = 19-0,3JpC = n .0; 82.32 d, CH2F, 1JCp = Í67..3; 68-37 d, GHgP, 1jPC =149.8. Elektroforetická pohyblivost (vztaž. na uridin-31-fosfát) při pH 7.5: 0-88. Příklad 2. K suspensi 5.9 g 1 -(RS)-(3-fluor-2-hydroxypro-pyl)cytosinu ve 180 ml pyridinu se přidá 27 ml chlortrimet-hylsilanu a směs se dále zpracuje podle Příkladu 1. Získáse 10 g 1 -(RS)-(3-fluor-2-hydroxypropy1)-N -benzoylcytosi-nu, t.t. 205°C. Rp =0-42 (TLC, Silufol UV-254· chloroform-methanol, 9:1). Pro C14H14FN3C>2 (291-3) vypočteno 57-72%C,4.84% H, 6.52% F, 14-43% N; nalezeno 58-29% C, 4-63% H,6.32% F, 14.19% N. 13C-NMR Spektrum: 45.91 d, CH N, "'JCp =8.0; 67.51 d, CH(OH), =19.2; 85.08 d, CH_F, =169.1. 10

Tento produkt se kodestiluje di methyl formámidem (2x25ml) při 40°C/15 Pa, rozpustí v 100 ml di methy1formamidu,ochladí na 0°C, přidá se 3-8 g 60% disperse hydridu sodnéhov parafinu a míchá se 30 min. Pak se přidá roztok 11.6 gdi(2-propyl)esteru kyseliny p-toluensulfonyloxymethy1fosfo-nové v 20 ml dimethylformamidu a míchá se 16 h při 80°C za vyloučení; přístupu‘vlhkosti . Další zpracování směsi,, reakcedeionisovaného meziproduktu s bromtrimethylsilanem a násle-dující zpracování a deionisace se provedou podle Příkladu1. Amoniakální eluát se odpaří a zbytek v 50 ml vody vnesena sloupec 200 ml středně bazického anexu (např.DowexulX2).Sloupec se promyje vodou (400 ml) a potom se promývá 0.5 Mkyselinou octovou; průběh eluce se sleduje měřením UV-ab-sorbce eluátu při 254 nm. UV-Absorbující eluát se odpaří vevakuu a ze zbytku se kyselina octová odstraní kodestilacívodou. Produkt se čistí preparátivní kapalinovou chromato-grafií na sloupci 300 ml C18-si1ikagelu ve vodě. Produkt serozpustí ve vroucí vodě (100 ml), filtruje za horka, zahus-tí ve vakuu na objem ca 20 ml a přidá se 100 ml ethanolu a100 ml etheru. Ponechá se stát v lednici 24 h. odsaje, pro-myje etherem a suší ve vakuu. Získá se 2,0 g 1-(RS)-(3--fluor-2-phosphonylmethoxypropy1)cytosinu, t-t- 219°C· ProCQH13FN305P (281-3) vypočteno 34-1ó%0, 4-66% H,

6·76% F nalezeno 34.63% C, 5.00% H, 6.70% F,13C-NMR Spektrum: 49-42 d, CH N,

14.94% N 15.47% N.3 11.04% P;11.15% P- JCF=7’1 78-04 dd, CH, 2Jcp=18.5, 3Jpc=11-4; 82-78 d,CH2F,1JCP=167.2; 67-70 d, CH2P, 1Jpr=153.9- Elektroforetická po-hyblivost (vztaž. na uridin-3'-fosfát) při pH 7.5; 0.95. Příklad 3. K suspensi 4.7 g 9-(RS)-(3-fluor-2-hydroxypro-pyl)guaninu v 120 ml pyridinu se přidá 17 ml chlortrimet-hylsilanu a po 1 h míchání 13 ml benzoylchloridu. Po 2 h sesměs rozloží při 0°C 20 ml vody a 45 ml konc. vodného amo-niaku a zpracuje podle Příkladu 1. Získá se .7.2 g 9-(RS)-(3-fluor-2-hydroxypropyl)-N^-benzoylguaninu, t-t. 178°C. 1 1

Rp =0.20 (TL.C, Sil u.fo 1 UV254c chloroforrn-methanol , 9:1). Pro 15H14FN503 (331-3) vypočteno 54.38SSC, 4-26¾ H, 5-73¾ F,21-14¾ N; nalezeno 54.82¾ C, 5.07¾ H, 5-71¾ F 21.29¾ N. 13 C-NPIR Spektrum: 45-73 d, CH N, ^αρ= 19-5; 85-04 d ch2f, CF" '^CF-168 - 5 - 67.54 d. CH(OH)

Tento produkt se kodestiluje dimethylformamidem (2x25ml) při4o°c/ 15 Pa, rozpust í v 80 ml di methyl formami du, 'ochladí na -20°C, přidá se 2.4 g 60¾ disperse hydridu sod-ného v parafinu a roztok 7-7 g di(2-propyl)esteru kyselinyp-1o 1uensu1fony1oxymethy1fosfonové v 20 ml dimethylformami -du a míchá se 16 h při 70°C za vyloučení přístupu vlhkosti.Další zpracování směsi, reakce deionisovaného meziproduktus bromtrimethyIsilanem a následující zpracování a deioni-sace se provedou podle Příkladu 1. Amoniakální eluát se od-paří a zbytek v 50 ml vody vnese na sloupec 120 ml středněbazického anexu (např. Dowexu 1X2). Sloupec se promyje vo-dou (400 ml) a potom se promyvá 0-5 H kyselinou octovou;průběh eluce se sleduje měřením UV-absorbce eluátu při 254nm- UV-Absorbující eluát se odpaří ve vakuu a ze zbytku sekyselina octová odstraní kodestilací vodou. Produkt se kry-staluje z vody. Získá se 2.3 g 9-(RS)-(3-fluor-2-phospho~Pro C9H13F’N5°5P 9.6ÓSP;10.20¾Pdd. CH. - 2Jcf=19.0, 3J£67.96 d, CH2P, 1Jpc=150-1 PC* nalezeno 34.00¾ C,13- MMr, r.______ netaj e do 300 °C 4.08¾ H, 5.91¾ 3 · 75¾ H, 5.60¾ 42 - 22 d, ch2n. .3; 82. .05 d,CH2 , 21.87¾ N,jCF=8-3; 77.·'Jcf=166-8j

Elektroforetioká pohyblivost (vztaž. na uridin-3‘-fosfát) při pH 7.5: 0.92. Příklad 4. 1< suspensi 4-7 g 9-(RS)-(3-f1uor-2-hydroxypro-i pyl)-2-amino-6-azidopurinu v 60 ml pyridinu se přidá 8.5 ml ch1ortrimethy1si 1anu a po 1 h míchání 6-5 ml benzoy1chlori -du- Po 2 h se směs rozloží při O°C 10 ml vody a 24 ml konc.vodného amoniaku a. zpracuje podle Příkladu 1 - Získá se 3.6g 9-(RS)-(3-f íuor-2-hydroxypropy1)-2-benzoylamino-ó-azido- 1 2 g 9-(RS) - (3~ f1uor-2- hydroxypropy 1 )-2-benzoyl am ino-6-azi do-purinu, t-t- 198°C- Rp=0 - 30(TLC, Silufol chloroform -methano 1, 9:1). Pro clSH13FNgO2 (356.3) vypočteno 50.56%C,3.68% H, 5-33% F, 31.45% N; nalezeno 50.42% C, 4.08% H, 5.32% F, 31.25% N.

Tento produkt se kodestiluje dimethylformamidem (2x25ml ) při 40°C/15 Pa, rozpustí v 40. ml dimethyl formámidu,ochladí na -20°C, přidá se 1.1 g 60% disperse hydridu sod-ného v parafinu a roztok 3.8 g di(2-propyl)esteru kyselinyp-toluensulfony 1oxymethylfosfonové v 10 ml dimethylformami-du a míchá se 16 h při teplotě místnosti a za vyloučenípřístupu vlhkosti. Další zpracování směsi, reakce deioniso-vaného meziproduktu s bromtrimethylsilanem (80 ml acetonit-rilu a 8 ml bromtrimethylsilanu), následující zpracování adeionisace se provedou podle Příkladu 1. Sloupec katexu seeluuje vodou. Po vymytí solí se produkt eluuje se značnouretencí. Frakce obsahující produkt se odpaří ve vakuu a od-parek se krystaluje z vody. Získá se 2.4 g 9~(RS)-(3-fluor-2-phosphony1 methoxypropy1)-2-amino-6-azidopurinu , netaje do260°C. Pro (346-3) vypočteno 31-21%C, 3-49% H, 5.49% F, .32.36% N, 8.96% P; nalezeno 31.56% C, 3.70% H,5.62% F, 32.56% N, 9.21% P- Elektroforetická pohyblivost(vztaž. na urid i n-3'- fosfát) při pH 7.5: 0.92. Příklad 5. K suspensi 9-(RS)-(3-fluor-2-phosphonylmethoxy-propyl)-3-deazaadeninu (9 mmol) v 50 ml pyridinu se přidá 7ml chlortrimethylsilanu a po 1 h 5-5 ml benzoylchloridu. Podalších 2 h se směs rozloží při 0°C postupně přidáním 7 mlvody a 18 ml konc.vodného amoniaku a po 30 min při 0°C seodpaří ve vakuu a kodestiluje ethanolem. Zbytek se chroma-tografuje na sloupci 200 ml silikagelu v chloroformu, pro-dukt se získá elucí směsí chloroform-methanol (95:5). Od-pařením ve vakuu se získá 1,60 g 9-(RS)-(3-f1uor-2-phospho-nylmethoxypropyl )-N‘~-benzoy 1 -3-deazaadeninu (amorfní pěna)Pp=0-12 (TLC, Silufol UV254, chloroform-methanol, 9:1). 13 K tomuto produktu se přidá roztok 2 g di(2-propyllesterukyseliny p-1o 1uensulfony1oxymethy1fosfonové v 10 ml dimet-hy1 formám idu, ochladí se na -15°C a přidá se 600 mg 60%disperse hydridu sodného v parafinu. Směs se míchá 16 h přiteplotě místnosti a za vyloučení přístupu vlhkosti. Dalšízpracování směsi, reakce deionisovaného meziproduktu sbromt r i met hy 1si Lanem ( 50 ml acetonitrilu a 5 ml bromt ri.met -hylsilanu), následující zpracování a deionisace se provedoupodle Příkladu 1. Sloupec katexu se eluuje vodou. Po vymytísolí se produkt eluuje zředěným vodným amoniakem. Frakceobsahující produkt se odpaří ve vakuu a odparek se čistípreparátivní chromatografií na C18-si1ikage1u(eluce vodou).Získá se 0.50 g 9--( RS)-(3-f 1 uor-2-phosphony 1 met hoxypropy 1 )--2-amino-ó-azidopurinu, netaje do 260°C. Pro C qh14FN404P(304-3) vypočteno 39.47% C, 4-64% H, 6.24% F, 18-42% N,10-20% P; nalezeno 39-80% C, 4.67% H, 6.38% F, 18.67% N,10.50% P. Elektroforetická pohyblivost (vztaž. na uridin--3'-fosfát) při pH 7.5; 0-78. Příklad 6. K suspensi 200 mg 9-(RS)-(3-fluor-2-phosphony1 -methoxypropy1)adeninu v 20 ml 80% vodné kyseliny octové sepřidá 2 ml 3-methylbutylni tri tu a směs se ponechá stát přiteplotě místnost i .24 h- Odpaří se ve vakuu, zbytek se kode-stiluje vodou (4x20 ml) a vnese na sloupec 150 ml katexu vH^-formě (např.Dowexu 50). Sloupec se eluuje vodou a průběheluce se sleduje měřením 0V-absorbce eluátu při 254 nm. UV~Absorbující eluát produktu se odpaří ve vakuu, zbytek sekodestiluje ethanolem (2x25 ml) a odsaje s etherem. Získáse 100 mg 9-(RS)-(3-f1uor-2-phosphony1methoxypropy1)hypo-xanthinu, netaje do 260°C. Pro ΟφΗ12ΡΝ405Ρ (306-3) vypoč-teno 35-29% C, 3.95% H, 6-20% F, 18-30% N, 10.13% P; nale-zeno 35.15% C, 4.12% H, 6.43% F, 18-70% N, 9.87% P. Elek-troforetická pohyblivost (vztaž. na uridin-3'~fosfát) připH 7.5: 0.83. 14 Příklad 7- Suspense 200 mg 9-(RS)-(3-f1uor-2-phosphony1met-hoxypropyl)guaninu ve směsi 20 ml 80% vodné kyseliny octovéa 2 ml 3-methylbutylni tri tu se ponechá stát 24 h při tep-lotě místnosti a dále zpracuje podle Příkladu 5. Získá se100 mg 9-(RS)-(3-f1uor-2-phosphony1 methoxypropy1)xanthi nu,netaje do 26O°C- Pro HgFN^O^P (322-3) vypočteno 33-54% C, 3 ."75% H, 5.90% F, 17-39% N, 9,63% P; nalezeno 33-65% C3.90% H, 5-77% F, 17-56% N, 9.40% P- Elektroforetická po-hyblivost (vztaž. na uridin-31-fosfát) při pH 7-5: 0.78. Příklad 8. K suspensi 200 mg 9-(RS)-(3-fluor-2-phosphonyl-methoxypropy1)-2-amino-ó-azidopurinu v 50 ml 80% kyselinyoctové se přidá 200 rng 10% Pd/C katalysátoru (palladium naaktivním uhlí) a směs se míchá v atmosféře vodíku při at-mosférickém tlaku 24 h- Zfiltruje se, promyje vodou, fil-trát se odpaří ve vakuu a zbytek kodestiluje vodou (3x20ml). Surový produkt se čistí chromatografií na sloupci C18silikagelu ve vodě a produkt se po odpaření rozpustí vhorké vodě, přidá se pětinásobný objem ethanolu a ether dovzniku zákalu. Po krystalisaci v lednici se produkt odsaje,promyje etherem a suší ve vakuu. Získá se 100 mg 9-(RS)-(3-fluor-2-phosphonylmethoxypropyl)-2,ó-diaminopurinu. Netajedo 260°C. Pro C9hi4FN604P (320--3) vypočteno 33-75% C, 4-41%H, 5.93% F, 26.24% N, 9.69% P; nalezeno 33.65% C, 3.95% H,5-79% F, 26.56% N, 9-42% P. Elektroforetická pohyblivost(vztaž. na uridin-3'-fosfát) při pH 7-5; 0.70.

Claims

ΌZ7 > ° o < c. fá κ> Ό X °. -. a o cn on PATENTOVÉ NÁROKY 5 1. N-/3-Fluor-2-fosfonylmetoxypropyl/deriváty purinových a pyrami- dových heterocyklických bází obecného vzorce I B-CH9-CH/OH/CH2F /1/ “ ÍHJH2P(íJ)/0H/2 kde 8 je substituovaný pirimidin 1-ylový zbytek pyrimidinovéheterocyklické báze obecného vzorce II

/11/ kde R je vodík, hydroxylamino, hydrazino,2 nebo substituovaná aminoskupina a R vodíkalkyl /C1 až C4/ skupina nebo V obecného vzorce III alkoxy, aminohalogen nebo

/111/ 2 3 kde R má stejný význam jako ve vzorci II, Rnebo síra, i jejich 5-a za, 6-aza nebo 3-deazasubstituovaný purin-9-ylový, či purin-7-ylovýnové heterocyklické báze obecného vzorce IV

je kyslíkderiváty, nebozbytek puri- /IV/ -Μ- 4 5 kde R i R jsou vodík, amino, hydrazino, hydroxylaminoazido, substitované aminu, hydroxy, alkoxy, merkapto,alkylmerkapto, halogen nebo alkylskupina s krátkým /C1 - C4/řetězcem a kombinace těchto skupin, R& vodík, hydroxy,alkoxy, merkapto, alkylthio, amino, substituovaná aminosku-pina nebo halogen, X, Y a Z jsou -N= nebo CH = skupinaa absolutní konfigurace na uhlíkovém atomu Γ2 je 5, R neboRS a jejich soli s alkalickými kovy, amoniakem a aminy.
2. Způsob výroby látek obecného vzorce I vyznačený tím, že se N-(3-fluor-2-hydroxypropyl)deriváty pyrimidinových a pu-r i nových heterocyklických bází obecného vzorce V B -CH„-CH-CH0F2 { 2 OH /V/ kde zbytek B má tentýž význam jako v bodu 1, případně zahr-nuje jeho deriváty substituované chránícími O-alkylskupinaminebo na aminoskupinách chránící N-acyl, N-dialkylaminomethylen-skupinou , uvedou do reakce s dialkylestery kyseliny p-toluen-su1fonyloxymethy1fosfonové obecného vzorce VI 4-ch3c6h4sq2och2p(o)(or7)2 /VI/ kde R? je alkylový (C1 - C3), s výhodou 2-propylový zbytekv přítomnosti 1-5 molárních ekvivalentů (vztaženo na látky obecného vzorce II) hydridu sodného v dipólárním a p r o -tickém rozpouštědle, s výhodou v di me t hy 1 f or rnainidu , a topři teplotách -50°C až 100°C, po odpaření rozpouštědla sechránící skupina na héterocyklické bázi odstraní, m e t h a η o 1 y -sou nebo kyselou h y d r o 1y s o u a látky obecného vzorce VI I B-CH„-CH-CHOF 1 7 OCH P(O)(OR ) /VII/ kde B má stejný význam jako ve vzorci I a R stejný významjako ve vzorci VI isolované nebo deionisované se při teplotě místnosti uve-dou do reakce s bromtrimethylsilanem v aprotickém rozpou-štědle, s výhodou v acetonitrilu, po odpaření se směs zpra-cuje vodou nebo roztoky pufru a látky obecného vzorce Ise isolují s výhodou ionexovou chromátografií jako volné ky-seliny, nebo soli s alkalickými kovy, amoniakem a aminy. Body 3 až 6 zůstávají nezměněny. Celoslovenská akademie věd

1 7 isolované nebo deionisované se při teplotě místnosti uvedou do reálie ·& bromtrimethylsi lanem v aprotickém roz- pouštědle, s výhodou v acetonitri 1u, po odpaření se směs zpracuje vodou nebo roztoky pufrú a látky obecného vzorce I se isolkfj^í s výhodou ionedsovou chromatograf i í jako volné * kyseliny, nebo soli s alkalickými kovy, amoniakem a aminy. *
3. Způsob vyroby látky vzorce I, kde B je hypoxanthin~?-y1,vyznačeny tím, že se látka vzorce I, kde B je adenin-9-yl,uvede do reakce s 3-methylbutylnitritem v 50-80% vodné ky-selině octové nebo svodným roztokem dusitanu sodného vpřítomnosti ekvimolárního množství kyseliny octové při tep-lotě místnost i.
4. Způsob vyroby látky vzorce I, kde B je xanthin-9-y1, vy-značeny tím, že se látka vzorce I, kde B je guanin-9-yl,uvede do reakce s 3-methylbutylnitritem v 50-80% vodné ky-selině octové nebo s vodným roztokem dusitanu sodného vpřítomnosti ekvimolárního množství kyseliny octové při tep-lotě místnost i.
5. Způsob vyroby látky vzorce I, kde B je 2,6-diaminoaden-in, vyznačeny tím, že se látka vzorce I, kde B je 2-amino--6-azidopurin uvede do reakce s plynnym vodíkem v přítom-nosti katalysátoru, s výhodou kovového palladia vyredukova-ného na anorganickém nosiči, a to ve vodě nebo ve zředěnýchvodných roztocích organických či minerálních kyselin.
6. Způsob použití látek obecného vzorce I pro potlačení mu-ltiplikace virů, zejména retrovirů, s uplatněním v léčeníonemocnění těmito viry vyvolaných. * κ·