CS276439B6 - Pharmaceutical for treating auto-immune diseases - Google Patents

Pharmaceutical for treating auto-immune diseases Download PDF

Info

Publication number
CS276439B6
CS276439B6 CS902689A CS268990A CS276439B6 CS 276439 B6 CS276439 B6 CS 276439B6 CS 902689 A CS902689 A CS 902689A CS 268990 A CS268990 A CS 268990A CS 276439 B6 CS276439 B6 CS 276439B6
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
animals
cells
group
proteoglycan
carbon atoms
Prior art date
Application number
CS902689A
Other languages
English (en)
Other versions
CS268990A3 (en
Inventor
Manuel Dr Modolell
Gerhard Prof Dr Munder
Original Assignee
Max Planck Gesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Max Planck Gesellschaft filed Critical Max Planck Gesellschaft
Publication of CS268990A3 publication Critical patent/CS268990A3/cs
Publication of CS276439B6 publication Critical patent/CS276439B6/cs

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66Phosphorus compounds
    • A61K31/683Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols
    • A61K31/685Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols one of the hydroxy compounds having nitrogen atoms, e.g. phosphatidylserine, lecithin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00Drugs for skeletal disorders
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • A61P37/06Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

Vynález se týká farmaceutického prostředku pro léčbu autoimunologických onemocnění při použiti derivátu lysolecithinu.
Ze zveřejněných NSR patentových přihlášek č. 20 09 342 a 20 09 343, je známo, že je možno užít syntetické deriváty lysolecithinu jako pomocné prostředky pri onemocněních, při nichž se účastní imunologický systém a také ke zvýšení odolnosti. 'Mimoto je známo ze zveřejněné SRN přihlášky č. 26 19 686, že alkyllysofosfolipidy tohoto typu jsou účinné jako protinádorové látky. Mimoto je známo, že po podání lysofosfatidů dochází ke tvorbě aktivovaných buněk, které mohou zvýšit odolnost proti nežádoucím vlivům. Mimoto je ze zveřejněné SRN patentové přihlášky č. 35 30 767 také známo, že je možno syntetické deriváty lysolecithinu užít k léčbě roztroušené sklerózy.
Při všech imunologických reakcích organismu hrají T-lymfocyty hlavní úlohu. Jejich funkce může být rozdělena na dva důležité mechanismy, a to
1. přímá obrana proti cizorodým vlivům, jako jsou například bakterie, viry, parazity a další vlivy, jejichž působením je antigen, takže T-lymfocyty se přímo účastní efektorového mechanismu a
2. řízení imunologické odpovědi tak, aby tato odpověd nebyla nepřiměřeně velká.
V obou případech je pro způsob činnosti T-lymfocytů charakteristická vysoká specifičnost, což znamená, že tyto buňky jsou schopné rozeznat jednotlivý zcela specifický antigen. Avšak před tím, než mohou tyto buňky tuto svou vlastnost prokázat, musí být aktivovány z klidového stavu, což předpokládá proliferaci a diferenciaci.
T-lymfocyty je možno rozdělit na dvě velké podskupiny na bázi určitých struktur mem«j. + ' + brány, které jsou tvořeny bílkoviny , jde tedy o T-buňky CD4 a CD8 . Buňky CD4 se označují jako pomocné nebo indukční T-buňky a mimo jiné jsou zodpovědné za rozeznání cizorodých bílkovin a za počátek Obranné reakce proti antigenům. Buňky CD8 , které se označí jako supresorické nebo jako cytotoxické T-buňky, jsou mimo jiné zodpovědné za rozeznání a destrukci buněk, infikovaných virem.
Nyní bylo zjištěno, že zejména v případě vyšších organismů z řady živočichů se objevují T-buňky, které mají autoreaktivní vlastnosti. To znamená, že tyto T-lymfocyty jsou zaměřeny proti strukturám, které jsou organismu vlastní a jsou tedy vlastně předem programovány k napadení buněk vlastního organismu. Za obvyklých podmínek zůstávají tyto autoreaktivní T-buňky neaktivní vzhledem k regulačnímu působení jiných buněk nebo faktorů, takže dochází k rovnovážnému stavu, kterým je organismus chráněn. Avšak v případě, že se tento rovnovážný stav poruší, může dojít ke vzniku autoimunologického onemocnění. Dojde ke tvorbě autoagresivních buněk nebo autoprotilátek, čímž dojde také k projevům autoimunologického onemocnění. Až dosud neni známo, které antigeny jsou zodpovědné u lidí za vznik těchto příznaků.
Autoimunologická onemocnění byla dříve léčéna látkami, které potlačovaly činnost imunologického systému, jako jsou kortikosteroidy, cyklofosfamidy, cyklosporin A a podobně.
Bylo však prokázáno, že tyto látky nejen působí inhibici celého imunologického systému, avšak mají mimo to významné vedlejší účinky jako potlačení činnosti kostní dřeně, karcinogenitu a také vysokou toxicitu.
Vynález si klade za úkol najít dalši látky, vhodné pro léčbu autoimunologických onemocnění, které by byly prosté svrchu uvedených nevýhod.
V publikaci R. Andreesen a P. Munder, New Trends Lipid Mediators Res. Basel, Karger, 1988, sv. 1, str. 16 až 29 a Immunobiol., 156, 498 až 508/1979 již bylo prokázáno, že alkyllysofosfolipidy mohou působit inhibici nespecifické proliferace lymfocytů.
Nyní bylo neočekávaně zjištěno, že právě proliferace specifických autoreaktivnich T-buněk, zodpovědných za autoimunologické reakce, může být zbrzděna specifickými alkyllysofosfolipidy.
Podstatou vynálezu je farmaceutický prostředek pro léčbu autoimunologických onemocnění s výjimkou roztroušené sklerózy, při němž jako účinnou složku obsahuje sloučeniny obecného vzorce I
H2C - 0 - Rj
I (I)
Rj - C - 0 - R2 ) 2 +
H2C - o - P— 0 - CH2 - CH2 - NCCHjJj kde , .
R^ znamená alkylový zbytek o 12 až 18 atomech uhlíku,
R2 znamená alkylový zbytek s obsahem až 8 atomů uhlíku, a
R3 znamená atom vodíku nebo alkylový zbytek o až 3 atomech uhlíku.
Alkylové zbytky ve významu všech tří svrchu uvedených substituentů mohou být rozvětveny, avšak s výhodou mají přímý řetězec. Ve sloučenině obecného vzorce I znamená R^ s výhodou alkylový zbytek o až 3 atomech uhlíku, zejména methyl a/nebo znamená R^ s výhodou atom vodíku. Výhodnými sloučeninami jsou zvláště ty sloučeniny obecného vzorce I, v .nichž R^ znamená n-hexadecyl, R2 · znamená methyl a R^ t znamená atom vodíku (sloučenina II) a sloučeniny obecného vzorce I, v němž R^ znamená n-oktadecyl, R2 znamená methylový zbytek a R^ znamená atom vodiku (sloučenina III).
Výroba sloučenin obecného vzorce I je známa, sloučeniny je možno získat některým ze způsobů, které byly popsány v literatuře, například v publikacích D. Arnold a další, Liebigs Ann. Chem., 709, 234 až 239, 1967 a H. U. Weltzien a O. Westphal, Liebigs Ann. Chem., 709, 240 až 243/1967.
Bylo zjištěno, že uvedené farmaceutické prostředky jsou zvláště vhodné pro léčbu theumatoidní arthritidy. Jde o často se vyskytující onemocnění typu progresivní chronické polyarthritidy, která probíhá plíživě nebo v jednotlivých atakách. Obvykle se objevuje ve třetí až páté dekádě života, přičemž výskyt u žen je přibližně třikrát častější než u mužů. Choroba může vést i k vážným omezením pohyblivosti.
Prostředky podle vynálezu je však možno použít i pro léčbu Hasthimodovy thyreotidy, systemického lupus erythematosus, Goodpastureho syndromu, pemfigu, Basedowovy choroby a myasthenia gravis, dále je možno tímto způsobem léčit odolnost proti inzulínu, hemolytickou anémii a thrombocytopenickou purpuru na autoimunologickém podkladě, progresivní systemickou sklerózu, různá onemocnění pojivových tkání, zhoubnou anémii, idiopathickou Adissonovu nemoc, ty případy neplodnosti, které jsou způsobeny protilátkami proti spermiím, dále některé glomerulonefritidy, bulosní emfidoid, Sjógrensenovu nemoc, ty případy cukrovky, které jsou způsobeny imunitou, zprostředkovanou buňkami a protilátkami proti buňkám ostrův ků, prostředky je možno použít také v případě resistence proti lékům na adrenergním podkladě, v případech chronické aktivní hepatitidy a v případech selhání žláz s vnitřní sekrecí, které bylo vyvoláno protilátkami, specifickými pro uvedené tkáně. Přesto, že je známo, že pro vznik autoimunologického onemocnění je nutná genetická disposice, skutečný proces, jímž tyto choroby vznikají, není znám. Je však pravděpodobné, že určitou roli hrají virové nebo bakteriální infekce.
Jak již bylo shora uvedeno, je ET-18-OCH3 látkou, zvláště vhodnou pro léčbu rheumatoidní arthritidy a ankylosující spodylitidy. Očinek této látky byl zkoušen vyvoláním tohoto onemocnění u myší BALB/c působením proteoglykanu. Na tomto modelu je možno pozorovat velkou příbuznost s lidským onemocněním, i pokud jde o radiografickou analýzu a scintigrafii kostí a také pokud jde o histopatholog.ický obraz kloubů a páteře, jak bylo popsáno v publikacích Glant a další, Arthritis Rheum. 30 (1987), 201 až 212 a Mikecz a další, Arthritis Rheum. 30 (1987), 306 až 318. Arthritis začíná jako polyartikulární synovitus v bilaterálních, malých periferních kloubech a zahrnuje také spondylitis, která se stává progresivní s velkými defekty chrupavky i kostní tkáně v oblasti kloubu. Počáteční zevní příznaky zánětu kloubu jako otok a zčervenání se objevují po třetí nebo čtvrté intraperitoneální injekci proteoglykanu.
Vývoj arthritidy u myší BALB/c závisí na obou typech imunity. Autoprotilátky se však objevují pouze u hyperimunizovaných arthritických zvířat v případě, že rozrušení chrupavky je již více nebo méně zřejmé. Tyto autoprotilátky reagují jak s intaktními (nedegradovanými) i s modifikovanými (chondroitinásou ABC-zpracovanými) proteoglykany chrupavky a je možno pozorovat zkříženou reaktivitu s imunizujícím proteoglykanem, jak bylo popsáno v publikaci Mikecz a další, Arthritis Rheum. 30 (1987), 306 až 318.
Předběžné ošetření ET-18-OCH3 chránil zvířata před vznikem onemocnění nebo v případě, že zvířata byla léčena v průběhu imunizace proteoglykanem, vyvolávajícím zánět kloubů, došlo k výraznému zpoždění vzniku projevů zánětu. Mimoto v případě, že se již vyvinuly klinické příznaky zánětu kloubů, byly tyto příznaky, například červenání a otok méně intenzivní a byl zasažen menší počet periferních kloubů než u neošetřených zvířat.
Při zahájení léčby uvedenou látkou došlo ke snížení koncentrace (auto) protilátek v oběhu a k potlačení jejich tvorby po celou dobu pokusu. Trlymfocyty u zvířat, předem ošetřených uvedenou látkou, neproliférovály za přítomnosti antigenu, užitého k imunizaci a došlo také k podstatnému potlačení nespecifické stimulace T-buněk.
Bylo také zjištěno, že působení alkyllysofosfolipidů je možno dosáhnout inhibice autoreaktivních T-buněk bez ohledu na to, zda jde o buňky CD4 nebo CD8 , přičemž k této * inhibici zřejmě dochází rozrušením metabolismu fosfatidylcholinu v buňce. Je také možno se zmínit o tom, že tato porucha je specifická pouze pro aktivované T-buňky. Neaktivované T-buňky tímto způsobem nejsou ovlivněny. Vzhledem k tomu, že proliferace autoreaktivních T-buněk je základním předpokladem jejich agresivity, je tímto způsobem možno dosáhnout úplného potlačení jejich nežádoucího působení.
Vynález bude osvětlen v souvislosti s připojenými výkresy, kde na obr. 1 je graficky znázorněna inhibice proliferace autoreaktivních CD4+ buněk různými látkami v závislosti na jejich koncentraci, na obr. 2 je znázorněno graficky totéž co na obr. 1 v závislosti na době pokusu, na obr. 3 je provedeno totéž grafické znázornění jako na obr. 1 pro inhibici proliferace buněk CTLLl, na obr. 4 je graficky znázorněna tvorba T-lymfocytů (inkorporace cholinu) za přítomnosti ET-18-OCH3 v závislosti na stavu aktivace buněk, na obr. 5 je graficky znázorněna degradace fosfatidylcholinu buňkami T-AR17 za přítomnosti ET-18-OCH3, na obr. 6 je provedeno grafické znázornění, analogické obr. 5 pro neaktivované T-buňky, na obr. 7 je graficky znázorněna stimulace lymfocytů imunizovaných myší BALB/ /c, skupiny 2-5, na obr. 8 je graficky znázorněna koncentrace protilátek v séru u zvířat skupiny 4, imunizovaných proteoglykanem z chrupavky kloubu skotu (BAC-PG), na obr. 9 je graficky znázorněn účinek ET-18-OCH3 na koncentraci protilátek v séru myší BALB/c skupiny 5, imunizovaných stejným způsobem, na obr. 10 je graficky znázorněna koncentrace protilátek u zvířat ze skupiny 7, imunizovaných proteoglykanem z chrupavky lidského osteofytu (HYAC-PG), na obr. 11 je grafické znázornění provedeno analogicky jako na obr. 7 pro myši ze skupin 6 až 9, na obr. 12 je grafický znázorněn účinek ET-18-OCH3 na koncentraci protilátek u myší BALB/c skupiny 8, imunizovaných HYAC-PG a na obr. 13 je graficky znázorněna koncentrace protilátek v séru u myší BALB/c, předem ošetřených ET-18-OCH3 a pak imunizovaných HYAC-PG.
Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady.
Příklad 1
Autoreaktivní CD4+ T-lymfocyty, použité při těchto zkouškách, jsou zodpovědné za vznik experimentálního autoimunního zánětu kloubů u krys, tzv. adjuvantní arthritidy.
Tyto lymfocyty byly izolovány způsobem podle publikace J, Holoshitz a další, Science,
219, 56 až 58/1983. Proliferace byla vyvolána antigenem PPD (čištěný derivát bílkoviny z tuberkulosních bakterií).
Dále byla provedena zkouška proliferace buněk CD4+ působením alkyllysofosfolipidů za přítomnosti antigenu.
x 10^ T-lymfocytů (AR 17) bylo pěstováno 48 hodin v prostředí RPMI 1640 s 10 % fetálního telecího séra a 1 g antigenu. Jako buňky citlivé na antigen se současně pěstují ozářené (30 Gy) thymocyty v množství 1 χ 106. Po uvedené době se ke kultuře přidá v
0,5 yUCi H-thymidinu a po dalších 6 hodinách se měří členění thymidinu do DNA buněk.
Získané výsledky jsou znázorněny na obr, 1. Je zřejmé, že proliferace AR 17-buněk, vyvolaná tímto způsobem, byla inhibována l-oktadecyl-2-methylglycero-3-fosfocholinem, který bude dále uváděn jako ET-I8-OCH3.
Příklad 2
Buňky AR 17, které byly izolovány stejně jako v příkladu 1, byly stimulovány k proliferaci přidáním růstového faktoru (IL-2). Inhibice této proliferace byla potom vyvolána působením alkyllysofosfolipidů. Zkouška byla provedena následujícím způsobem:
o x 10 T-lymfocytů AR 17 bylo pěstováno 24 až 48 hodin v prostředí RPMI s 10 í fetálního telecího séra a 10 % supernatantu kultury slezinných buněk (IL-2), stimulováných Con A. Po této době bylo ke kultuře přidáno 0,5 yUCi H-thymidinu a po dalších 6 hodinách bylo měřeno včlenění thymidinu do DNA buněk.
Získané výsledky jsou znázorněny na obr. 2. Je zřejmé, že i v tomto případě působí sloučenina ET-18-OCH2 výraznou inhibici proliferace.
Příklad 3
Cytotoxické T-lymfocyty (CTLL^) byly izolovány způsobem podle publikace Μ. M. Simon a další, Eur. J. Immunol., 16, 1269 až 1276/1986 a inhibice proliferace této buněčné linie byla sledována působením alkyllysofosfolipidů.Buněčná linie obsahovala autoreaktivní . + 3 buňky CD8 . Při provádění zkoušky byly pěstováno 1 x 10 T-lymfocytu (CTLL-1) 48 hodin v prostředí RPMI 1640 s 10 % fetálního telecího séra a 10 % supernatantu kultury slezin3 ných buněk, stimulovaných Con A, (112). Po této době bylo přidáno 0,5 ^uCi H-thymidinu a po dalších 6 hodinách bylo měřeno včlenění thymidinu do DNA buněk.
Získané výsledky jsou znázorněny ná obr. 3 v procentech ve srovnání s kontrolními pokusy. Jak je z výkresu zřejmé, působí význačnou inhibici proliferace uvedených buněk nejen sloučenina ET-18-0H, ale také sloučenina ET-18-OCHg.
Příklad 4
Bylo sledováno včleňování radioaktivně značeného cholinu do fosfatidylcholinu a tímto způsobem byla stanovena schopnost nové tvorby buněk. V tomto případě bylo pěstováno 1 x 10® T-lymfocytů po udanou dobu v prostředí DMEM bez cholinu (Dulbeccova modifikace Eaglova prostředí) s 10 % fetálního telecího séra a 10 % supernatantu kultury slezinných buněk, stimulovaných Con A (IL 2) a s 0,51·Ci ^^C-cholinu. Fosfolipidy buněk byly extrahovány, odděleny chromatografii na tenké vrstvě a byla měřena radioaktivita fosfotidylcholinu.
CS 276439 B>6‘
Získané výsledky jsou uvedeny na obr. 4. Přerušovaná čára znázorňuje včlenění cholinu do nestimulovaných T-buněk, nepřerušovaná čára znázorňuje včlenění do stimulovaných CD4+ T-buněk (AR 17). Výsledky jsou uvedeny v procentech ve srovnání s kontrolní hodnotou. Je zřejmé, že zcela neočekávaně způsobuje ET-I8-OCH3 pouze inhibici tvorby aktivovaných autoreaktivních AR 17 T-buněk, zatímco neaktivované T-lymfocyty, které se neúčastní autoimunologické reakce zůstávají působením této sloučeniny zcela neovlivněny.
Příklad 5
Složení alifatických kyselin ve fosfatidylcholinu je obnovováno působením fosfolipázy A jako deacylačního enzymu a acyltransferázy, jako reacylačního enzymu. Aby bylo možno - 14 sledovat tento metabolismus, byly T-bunky předem inkubovány s kyselinou C-olejovou, takže včleněním této kyseliny byl fosfatidylcholin radioaktivně značen.
Potom byla sledována schopnost rozkladu fosfatidylcholinu buňkami T- AR 17 přidáním různých alkyllysofosfolipidů. 1 χ 106 T-lymfocytů bylo pěstováno v prostředí DMEM s 1 % fetálního telecího séra a s 0,1 yUCi 14C-olejové kyseliny 4 hodiny. Potom byly značené buňky dále pěstovány v přítomnosti různých alkyllysofosfolipidů 24 a 48 hodin v prostředí DMEM s 10 % fetálního telecího séra a 10 % supernatantu kultury Con A-stimulovaných slezinných buněk (IL 2). Byly extrahovány fosfolipidy buněk, které potom byly děleny chromatograf ií na tenké vrstvě s následným množením radioaktivity pro pásy fosfatidylcholinu.
Na obr. 5 jsou znázorněny získané výsledky v procentech ve srovnání s kontrolou.
Je zřejmé, že buňky, inkubované s ET-I8-OCH3 rychle ztrácejí radioaktivitu, což znamená rychlou ztrátu fosfatidylcholinu. Jak je zřejmé z obr. 6, tento účinek se netýká neaktivovaných buněk.
Příklad 6
Indukce primární arthritidy
Proteoglykan z lidských chondrofytů, rozložený chondroitinázou ABC, ekvivalentní s proteoglykanem z nezralé lidské kloubní chrupavky (HYAC) byl užit k imunizaci myších samic BALB/c ve stáří 5 až 6 týdnů (Charles River Colony, Montreal, Quebec) způsobem podle publikací Glant a další, Arthritis Rheum. 30 (1987) , 201 až 212;Mikecz a další, Arthritis Rheum. 30 (1987), 306 až 318. Bylo podáno vždy 100 yUm uvedeného proteoglykanu ve 100 yUl fyziologického roztoku s fosfátovým pufrem (PBS) o pH 7,2 a úplný Freundův pomocný prostředek ve formě emulze 1 : 1 s PBS. Injekce byla ještě třikrát opakována při použití neúplného Frenudova pomocného prostředku ve dnech 9, 35 a 65. Kontrolní myši byly imunizovány proteoglykanem ze skotu (BAC-PG), který nezpůsobuje zánět kloubů nebo pouze PBS a pomocným prostředkem bez obsahu proteoglykanu.
Skupiny, užité pro tento pokus jsou shrnuty v tabulce 1. Původně bylo ve skupině 9 předem ošetřeno 10 zvířat sloučeninou ET-I8-OCH3 a tato zvířata potom byla imunizována proteoglykanem z lidských chondrofytů, ve skupině 6 byla imunizovaná, neošetřená zvířata, ve skupině 7 byla zvířata imunizovaná, neošetřená, avšak krmená mlékem a ve skupině 8 byla imunizovaná zvířata, krmená mlékem, v němž byla rozpuštěna sloučenina ET-I8-OCH3.
Zvířata ze skupiny 4 a 5 byla imunizována BAC-PG a byla nebo nebyla ošetřena ET-18-OCHj, 15 myší v dalších třech skupinách bylo užito jako negativní kontroly. Každá ze skupin obsahovala 5 až 10 samic kmene BALB/c ve stáří 5 až 6 týdnů na začátku pokusu. Ošetření bylo prováděno sloučeninou ET-I8-OCH3, rozpuštěnou v mléce s nízkým obsahem tuku při použití jícnové sondy po dobu 12 týdnů, a to 25 mg/kg 6 týdnů a 20 mg/kg 6 týdnů. Dávka byla snížena vzhledem k tomu, že myši měly stále horši tělesný stav od konce druhého týdne léčení a nakonec uhynulo větší množství zvířat, 4 zvířata ze skupiny 9 a 2 zvířata ze skupiny 8 ve třetím a čtvrtém týdnu. Zvířatům s výjimkou skupiny 9 byla podávána sloučenina ET-ie-OCH^ v pátém až sedmnáctém týdnu pokusu, potom byla zvířata zabita.
Každá doba, uváděná v pokuse a v jednotlivých výkresech je počítána ode dne podání první injekce.
Vzorky séra, zkoušky na protilátky
Vzorky séra byly odebírány z retroorbitální žilní pleteně ve dnech 1, 9, 19, 27, 35, 44, 55, 65, 77, 85, 97 a 112. Séra byla skladována při teplotě -20 *C až do konečného odběru ve dni 122, potom byl současně stanoven a srovnáván titr protilátek ve třinácti vzorcích séra od každého zvířete.
Protilátky séra byly měřeny radioimunologicky při použití proteoglykanů z chrupavky,
125 a to I-značeného z materiálu lidských novorozenců, rozštěpeného chondroitinázou ABC 125 a I-značeného z myší, a to intaktního nebo rozštěpeného stejnou chondroitinázou. Každé sérum bylo vyšetřováno v ředění 1 : 100, 1 : 500 a 1 : 2 500 a v případě potřeby i 1 :
: 12 500 podle shora uvedené publikace Mikecz a další, a podle publikace Glant a další, Biochem. J. 234, 31 - 41. 100 ^ul zředěného séra bylo inkubováno se značením proteoglykanem (10 000 impulsů za minutu v objemu 50 yul) celkem 4 hodiny při teplotě místnosti.
Po inkubaci bylo přidáno 25 ^ul Staphylococcus aureus s obsahem bílkoviny A (5 %) a po inkubaci 30 minut při teplotě 37 ’C byla po odstředění stanovena radioaktivita usazeniny počítačem (Beckman).
Zkoušky na reaktivitu lymfocytů
Byla stanovena odpověd splenocytů na konkavalin A (con A, mitogen pro myši T-buňky) a na antigeny typu proteoglykanů z chrupavky (BAC-PG a HYAC-PG) shora uvedeným způsobem. Stimulace lymfocytů byla vyjádřena ve formě indexu, který je vyjádřen poměrem impulsů za minutu pro stimulované kultury v hodnotě pro nestimulované kultury.
Stanovení rozsahu arthritidy
Končetiny všech myší, imunizovaných i neimunizovaných byly denně prohlíženy k zaznamenání zánětlivých změn na kloubech, které byly hodnoceny podle publikace Gent a další, Arthritis Rheum. 30 (1987), 201 až 212. Byly hodnoceny otoky a červenání jako první klinické příznaky zánětu a zduření (průměr) kolena, lokte, kotníku, zápěstí a také dorso-volární tlouštka předních tlapek.
Klinické a histologické zkoušky
Před pokusem byl stanoven počet červených a bílých krvinek i jejich diferenciální počet, stejné hodnoty byly opakovány v týdnu 11, tj. po ošetření, trvajícím 6 týdnů a na konci pokusu v den 122.
Končetiny, ocasy, bederní páteř a jednotlivé orgány byly testovány, kosti byly odvápněny a připraveny k výrobě řezů pro histologické účely.
Výsledky
Skupiny 1, 2 a 3 (neimunizované kontrolní myši bez zánětu kloubů)
Tyto myši BALB/c ve skupinách po pěti nebyly imunizovány proteoglykanem jako antigenem, avšak zvířatům ve skupině 2 a 3 byla podána ve formě emulze směs fyziologického roztoku chloridu sodného a Preundova pomocného prostředku, jak je uvedeno v tabulce I. U žádného z těchto zvířat nedošlo ke tvorbě protilátek včetně proteoglykanů a kolagenu typu II a nevyvinut se zánět kloubů.
Zvířata ze skupiny 3 ztratila na váze a byla mírně chudokrevná (Tabulka II) pravděpodobně vzhledem k odběru krve, jinak však byla zdravá. Pouze došlo k poklesu stimulace lym7 focytů vlivem mitogenu T-buněk (con A), jak je zřejmé z obr. 7.
Skupiny 4 a 5 (zvířata, imunizovaná proteoglykany, které nevyvolávají záněty kloubů)
Tato zvířata byla imunizována proteoglykany z chrupavky kloubů skotu (BAC,, avšak pouze zvířatům ze skupiny 5 byla podávána sloučenina ET-lň-OCH^, jak je zřejmé z tabulky I. Jak bylo možno očekávat, u žádného ze zvířat ze skupin 4 a 5 se nevyvinul zánět kloubů.
Zvířata ze skupiny 4 produkovala běžné protilátky proti použitému proteoglykamu, titr protilátek se stále zvyšoval až do zkřížené reaktivity, avšak tyto protilátky se neúčastní vývoje choroby a nejde o stejné protilátky jako proti HYAC, jak je zřejmé z obr.
8. Odpověd lymfocytů ve formě stimulačního indexu podle svrchu uvedené publikace Mikecze a dalších, byla zřetelně zvýšena za přítomnosti proteoglykanů BAC a současně HYAC, jak je zřejmé z obr. 7.
Zvířata ze skupiny 5 produkovala menší množství protilátek proti proteoglykanům ze skotu nebo lidského původu, autoprotilátky proti proteoglykanům myší chrupavky nebylo možno prokázat ani při zředění séra pouze 1 : 100, jak je zřejmé z obr. 9. Protilátky v séru byly potlačeny působením ET-I8-OCH3 v průběhu 2 týdnů, toto potlačení bylo výraznější pro dávku 25 mg/kg/den než pro dávku 20 mg/kg/den. Produkce antilátek se však přesto zvyšovala v průběhu celého období léčby, jak je zřejmé z obr. 9. Stimulace lymfocytů proteoglykanem nebo con A byla jasně potlačena, a to i po přerušení léčby sloučeninou ET-I8-OCH3, jak je zřejmé z obr. 7.
Skupiny 6 a 7 (zvířata, imunizovaná HYAC, avšak neošetřená ET-I8-OCH3)
Zvířata v těchto dvou skupinách byla imunizována a byly provedeny zkoušky podle publikací Glant a další, Arthritis Rheum., 30 (1987), 201 až 212 a Mikecz a další,
Arthritis Rheum. 30 (1987), 306 až 318. Nebylo možno prokázat žádný rozdíl mezi zvířaty ze skupin 6 a 7, přičemž v druhé skupině bylo denně podáváno mléko bez sloučeniny ET-I8-OCH3. Zvířata produkovala protilátky proti proteoglykamin HYAC a velké množství autoprotilátek proti proteoglykanům myší chrupavky. U všech zvířat se vyvinut zánět kloubů po třetí nebo bezprostředně po čtvrté intraperitoneální injekci proteoglykanů HYAC, jak je zřejmé z obr. 10, tento zánět byl progresivní a vedl ke vzniku deformit a ankyloz periferních kloubů, jak bylo popsáno v publikaci Glant a další. Arthritis Rheum., 30 (1987), 201 až 212. Proliferace splenocytů těchto zvířat in vitro je shrnuta na obr. 11, z něhož je zřejmá charakteristická stimulace lymfocytů za přítomnosti proteoglykanových antigenu a con A.
Skupina 8 (zvířata, imunizovaná HYAC a ošetřená ET-I8-OCH3) šest zvířat ve skupině 8 bylo imunizováno proteoglykany HYAC stejně jako zvířata ze skupin 6 a 7, avšak tato zvířata byla ošetřena podáváním ET-I8-OCH3 po dobu 12 týdnů. Vzhledem k tomu, že se stav zvířat zhoršoval a dvě zvířata uhynula ve 3. a 5. týdnu léčby, bylo nutno snížit dávku ET-I8-OCH3 z původní dávky 25 na dávku 20 mg/kg/den od 6. týdne léčby, jak je zřejmé z obr. 12. Po snížení dávky se stav zvířat zlepšil. U tří ze čtyř zvířat se vyvinul zánět kloubů, avšak ke vzniku zánětu došlo později a všechny klinické příznaky byly mírnější (rudnutí a otok, vyjádřený jako průměr kotníku), také počet zasažených kloubů byl menší než u skupin 4 a 5.
U zvířat této skupiny a ve všech dalších skupinách, jimž byla podávána účinná látka, bylo možno pozorovat větší anemii než u neošetřených zvířat, jak je zřejmé z tabulky IX. Toto pozorování může být založeno na přímém účinku sloučeniny ET-I8-OCH3 na buňky kostní dřeně, může však také jít o nepřímý účinek, způsobený celkově zhoršeným stavem, například snížením tělesné hmotnosti. Slabá anemie však byla pozorována u všech myší, zřejmě v důCS 276439 B6 sledku častých odběrů krve. Další laboratorní zkoušky, jako proteinurie (nebyla prokázána) , počet a direfenciální počet bílých krvinek nevykazovaly žádný rozdíl u ošetřených a neošetřených zvířat.
Koncentrace protilátek proti proteoglykanům HYAC a proti myším chrupavkám byla snížena až potlačena od druhého týdne léčby, avšak potom se opět zvyšovala i přes použití vyšší dávky 25 mg/kg/den sloučeniny ET-18-OCH3, jak je zřejmé z obr. 12. Na druhé straně proliferace T-lymfocytů, a to jak stimulovaná antigenem, tak nespecifická (con A) byla potlačena stejně u všech ošetřených zvířat, jak je zřejmé z obr. 11.
Skupina 9 (předběžné ošetření ET-18-OCH3 před imunizací proteoglykanem, vyvolávajícím zánět kloubů)
Zvířata (původně 10 zvířat) této skupiny byla předběžně ošetřena podáním sloučenin ET-18-OCH3 dva týdny před první injekcí antigenu. Naneštěstí uhynula 4 zvířata z této skupiny v průběhu prvních 6 týdnů pokusů,, takže použitá dávka byla pravděpodobně příliš vysoká pro myši BALB/c. Avšak pro srovnání nebyla dávka účinné látky snížena až do té doby, kdy uhynula dvě zvířata ze skupiny 8, jak bylo uvedeno shora.
Klinické parametry a celkový stav zvířat odpovídal skupině 8 s tím rozdílem, že se nevyvinul zánět kloubů, histopathologické vyhodnoceni dosud nebylo provedeno. Stimulace lymfocytů lidským proteoglykanem, nebo proteoglykanem skotu a con A byla stejná jako pro skupinu 8, došlo tedy k podstatnému potlačení specifické i nespecifické odpovědi T-lymfocytů. Mimoto došlo později k produkci protilátek, protilátky bylo možno prokázat v protiséru obvykle až po čtvrté injekci antigenu.
Závěry • Ošetřením myší BALB/c sloučeniny ET-18-OCH3 je možno potlačit projevy akutního zánětu a utlumit progresivitu chronického zánětu kloubů, který byl vyvolán proteoglykanem. Předběžné podání této látky chrání myši před vznikem zánětu, pravděpodobně potlačením imunologické odpovědi, zprostředkované T-buňkami. Produkce (auto) protilátek byla podstatně potlačena. Tento účinek je stálý přibližně po dobu 3 až 4 týdnů při podávání uvedené látky perorálně, potom se tvorba protilátek obnoví na základě zatím neznámého mechanismu.
TABULKA 1
Pokusné skupiny, imunizace a léčba myší BALB/c
skupi- počet typ imuni- protilátky proti klinický stav léčba ET-18-OCH3
na č. zvířat zace HYAC-PG myší-PG
1 5 - - - bez zánětu -
2 5 NaCl - - bez zánětu rozpouštědlo
3 5 NaCl - - bez zánětu +
4 5 BAC-PG + + bez zánětu rozpouštědlo
5 6 BAC-PG + + bez zánětu +
6 5 HYAC-PG + + zánět kloubů -
7 6 HYAC-PG + + zánět kloubů rozpouštědlo
8 6 HYAC-PG + + mírný a pozdní zánět kloubů +
9 10 HYAC-PG + + bez zánětu předběžné ošetření
Imunizační látky byly podávány jako emulze v chloridu sodném a Freundově pomocném
prostředku.
HYAC-PG = proteoglykan z lidských chronrofytů
BAC-PG = proteoglykan z chrupavky skotu
NaCl = roztok s fosfátovým pufrem o pH 7,4 (0,01 M PO^ v 0,14 M NaCl) rozpouštědlo = mléko, které bylo užito také k rozpuštění ET-ie-OCH^.
TABULKA II
Srovnání tělesné hmotnosti, počtu červených krvinek a průměru kotníků u myší se zánětem kloubů a bez zánětu ve dnech 1, 71 a 122 skupí- den tělesná hmotnost počet červených krvinek průměr kotníků na č. pokusu (g) (x lO^^ul) v mm
6-7
1 19,9 + 2,7 9,13 + 0,62 3,16 + 0,05
71 27,2 + 1,2 8,78 + 0,49 3,14 + 0,05
122 27,4 + 1,6 8,02 + 0,32 3,16 + 0,07
1 19,6 + 2,6 9,26 + 0,51 3,13 + 0,13
71 24,2 + 1,4 8,04 + 0,66 3,18 + 0,08
122 24,8 + 0,0 6,43 + 0,60 3,16 + 0,13
1 19,2 + 2,7 9,18 + 0,26 3,17 + 0,05
71 25,2 + 3,4 8,75 + 0,19 3,64 + 0,12
122 24,9 + 3,9 7,92 + 0,28 3,71 + 0,24
Tabulka II - pokračování skupi- den * tělesná hmotnost počet červených krvinek průměr kotníků
na č. pokusu (g) (x 106 yUl) v mm
8 1 19,2 + 1,6 8,72 + 0,24 3,17 + 0,04
71 22,6 + 3,1 6,25 + 0,21 3,19 + 0,08
122 21,4 + 4,3 5,38 + 0,32 3,32 + 0,18
9 1 17,8 + 2,9 8,22 + 0,24 3,16 + 0,04
71 19,1 + 1,9 7,95 + 0,19 3,16 + 0,05
122 23,4 + 3,7 6,42 + 0,73 3,17 + 0,07
PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (4)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Farmaceutický prostředek pro léčbu autoimunologických onemocnění s výjimkou roztroušené sklerózy, vyznačující se tím, že jako účinnou složku obsahuje sloučeniny obecného vzorce I
    H0C - 0 - R,
    I
    R3 - C - 0 - R2 1 !
    H2C- 0 - P - 0 -CH2- CH2- N(CH3)j o
    (I) kde
    R-^ znamená alkylový zbytek o 12 až 18 atomech uhlíku,
    R2 znamená alkylový zbytek s obsahem až 8 atomů uhlíku, a
    Rg znamená atom vodíku nebo alkylový zbytek o až 3 atomech uhlíku.
  2. 2. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeniny obecného vzorce I, kde R2 znamená alkylový zbytek o až 3 atomech uhlíku a R^ a R^ mají význam, uvedený v bodu 1.
  3. 3. Farmaceutický prostředek podle nároků 1 nebo 2, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu vzorce II h2c
    HC h2c o - (ch2)15 - ch3
    O - CH3 o
    O - P - O (II) +
    CH2 - CHg - N(CH3)3
    O
  4. 4. Farmaceutický prostředek podle nároků 1 nebo 2, vyznačující se tím, že obsahuje sloučeninu vzorce III
    HgC - 0 - (CH2)17 - CH3
    HC - 0 - CH3
    O
    H2C - 0 - P - O - CH2 o“ (III)
    CH2 -N(CH3)3
CS902689A 1989-06-02 1990-05-31 Pharmaceutical for treating auto-immune diseases CS276439B6 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE3918082A DE3918082A1 (de) 1989-06-02 1989-06-02 Mittel gegen autoimmunerkrankungen

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS268990A3 CS268990A3 (en) 1992-01-15
CS276439B6 true CS276439B6 (en) 1992-05-13

Family

ID=6381972

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS902689A CS276439B6 (en) 1989-06-02 1990-05-31 Pharmaceutical for treating auto-immune diseases

Country Status (14)

Country Link
US (1) US5266564A (cs)
EP (1) EP0474712B1 (cs)
JP (1) JP2977894B2 (cs)
AT (1) ATE94757T1 (cs)
AU (1) AU5670690A (cs)
CA (1) CA2056421C (cs)
CS (1) CS276439B6 (cs)
DE (2) DE3918082A1 (cs)
DK (1) DK0474712T3 (cs)
ES (1) ES2060173T3 (cs)
GR (1) GR1001195B (cs)
IE (1) IE64039B1 (cs)
WO (1) WO1990014829A1 (cs)
ZA (1) ZA904196B (cs)

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3941009A1 (de) * 1989-12-12 1991-06-13 Medmark Pharma Gmbh Eliminierung von aktivierten lymphozyten
NZ536216A (en) * 1996-02-09 2006-08-31 Abbott Biotech Ltd Use of an isolated antibody D2E7 for the treatment of a disorder in which TNF(alpha) activity is detrimental
EP1140112B1 (en) 1998-12-21 2005-03-09 Inkeysa, S.A. Etherlysophospholipids for the treatment of chronic inflammatory diseases
SE9902155L (sv) * 1999-06-09 2000-12-10 Bjoern Rydevik Serum antibodies
JP2002228764A (ja) * 2001-02-02 2002-08-14 Fuji Photo Film Co Ltd 透光性シート体検出装置
CA2668919C (en) * 2006-11-10 2015-11-03 Alphaptose Gmbh Oral dosage form comprising tri-substituted glycerol compounds
ES2393762T3 (es) 2006-11-10 2012-12-27 Alphaptose Gmbh Procedimientos y composiciones para detectar miméticos de ligandos de receptores
DK2089401T3 (da) * 2006-11-10 2012-09-17 Radioprotect Alphaptose Ug Haftungsbeschraenkt & Co Kg Anvendelse af trisubstituerede glycerolforbindelser til behandling af strålingsskader
EP2120873B1 (en) * 2006-12-20 2012-06-27 Alphaptose Gmbh Topical dosage form comprising tri-substituted glycerol compounds
HRP20130551T1 (xx) 2007-03-28 2013-07-31 Aker Biomarine As Biouäśinkovite smjese kril ulja
US8697138B2 (en) 2007-03-28 2014-04-15 Aker Biomarine As Methods of using krill oil to treat risk factors for cardiovascular, metabolic, and inflammatory disorders
CA2839075A1 (en) * 2007-08-29 2009-03-05 Aker Biomarine Asa A new method for making krill meal
US20100226977A1 (en) * 2007-08-29 2010-09-09 Aker Biomarine Asa Low viscosity phospholipid compositions
US8372812B2 (en) * 2009-02-26 2013-02-12 Aker Biomarine Asa Phospholipid and protein tablets
WO2013156630A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Alphaptose Gmbh S-enantiomer of a tri-substituted glycerol compound
AU2014203179C1 (en) 2013-06-14 2017-05-04 Aker Biomarine Antarctic As Lipid extraction processes
GB201400431D0 (en) 2014-01-10 2014-02-26 Aker Biomarine As Phospholipid compositions and their preparation
ES2937960T3 (es) 2015-02-11 2023-04-03 Aker Biomarine Antarctic As Proceso de extracción de lípidos
NZ735362A (en) 2015-02-11 2019-01-25 Aker Biomarine Antarctic As Lipid compositions

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2009343C3 (de) * 1970-02-27 1980-10-23 Max-Planck-Gesellschaft Zur Foerderung Der Wissenschaften E.V., 3400 Goettingen Verwendung von Lysolecithinen als immunologische Adjuvantien
DE2009342C3 (de) * 1970-02-27 1980-12-18 Max-Planck-Gesellschaft Zur Foerderung Der Wissenschaften E.V., 3400 Goettingen Verwendung von Glycerin-alkyläther-(l)-phosphorsäure-(3)-monocholinestern
DE2619686C2 (de) * 1976-05-04 1986-08-07 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V., 3400 Göttingen Verwendung eines Lysolecithins zur Tumorbehandlung
CH670763A5 (cs) * 1985-08-02 1989-07-14 Seuref Ag
DE3530767A1 (de) * 1985-08-28 1987-03-12 Max Planck Gesellschaft Mittel gegen multiple sklerose

Also Published As

Publication number Publication date
ATE94757T1 (de) 1993-10-15
JP2977894B2 (ja) 1999-11-15
ES2060173T3 (es) 1994-11-16
WO1990014829A1 (de) 1990-12-13
DE3918082C2 (cs) 1992-02-06
JPH04507096A (ja) 1992-12-10
IE64039B1 (en) 1995-06-28
ZA904196B (en) 1991-03-27
DE59002863D1 (de) 1993-10-28
CA2056421C (en) 2000-10-10
DK0474712T3 (da) 1993-11-29
GR1001195B (el) 1993-06-07
US5266564A (en) 1993-11-30
CS268990A3 (en) 1992-01-15
AU5670690A (en) 1991-01-07
EP0474712B1 (de) 1993-09-22
GR900100406A (en) 1991-11-15
IE901987L (en) 1990-12-02
DE3918082A1 (de) 1991-01-24
CA2056421A1 (en) 1990-12-03
EP0474712A1 (de) 1992-03-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS276439B6 (en) Pharmaceutical for treating auto-immune diseases
Macdermott et al. Alterations of the immune system in ulcerative colitis and Crohn's disease
Wofsy et al. Reversal of advanced murine lupus in NZB/NZW F1 mice by treatment with monoclonal antibody to L3T4.
Kita et al. Probucol prevents the progression of atherosclerosis in Watanabe heritable hyperlipidemic rabbit, an animal model for familial hypercholesterolemia.
Voorthuis et al. Suppression of experimental allergic encephalomyelitis by intraventricular administration of interferon‐gamma in Lewis rats
Fallon et al. Immune-dependent chemotherapy of schistosomiasis
Winn et al. Acute destruction by humoral antibody of rat skin grafted to mice: the role of complement and polymorphonuclear leukocytes
HU210813A9 (en) Enhancement of the down-regulation of autoimmune diseases by oral administration of autoantigens
EP0251134B1 (en) Compositions for preventing graft rejection
US4778788A (en) Agent against multiple sclerosis
US7608246B2 (en) Apolipoprotein E as an adjuvant for lipid antigens
AU665764B2 (en) Methods and compositions for the prevention, diagnosis, and treatment of inflammatory serosal disease and related conditions
CA2265631A1 (en) Therapeutic formulations containing venom or venom anti-serum either alone or in combination for the therapeutic prophylaxis and therapy of neoplasms
RU2083210C1 (ru) Средство для профилактической, поддерживающей и восстановительной терапии развивающихся при старении и/или под воздействием патогенных факторов патологий, связанных с дистрофическим и дегенеративными изменениями органов и тканей
Bräuer et al. Changes of immunoregulatory properties and induction of autoimmune reactivity to cartilage in rabbits with antigen-induced arthritis
Internationalis Bacteriology, immunology
Du Clos THE SUPPRESSOR CELL IN NEONATALLY INDUCED TOLERANCE.
Dion Septic shock, the second messenger system and the complement system
CHARLES Immunologic Tissue Injury Mediated by Neutrophilic Leukocytes1
Koopman et al. Suzanne M. Michalek, Jerry R. McGhee, Dawn E. Colwell, Shane I. Williamson, Thomas A. Brown, David M. Spalding
Smiley The immune response in rheumatoid synovitis
Weltzin Intracellular Calcium and Protein Kinase C Regulate Nonspecific Cell-Mediated Cytotoxicity by Mouse Lymphocytes (Calmodulin)
Cutler Serum-mediated interactions between Bacteroides gingivalis and polymorphonuclear leukocytes
Noor Immunosuppression in Atlantic salmon by an extracellular protein of Aeromonas salmonicida
Ginsburg et al. Prostaglandins and Their Modification by Anti-Inflammatory Agents

Legal Events

Date Code Title Description
IF00 In force as of 2000-06-30 in czech republic
MM4A Patent lapsed due to non-payment of fee

Effective date: 20080531