CS274041B1 - Genically recombined bacterial cells escherichia coli - Google Patents
Genically recombined bacterial cells escherichia coli Download PDFInfo
- Publication number
- CS274041B1 CS274041B1 CS77189A CS77189A CS274041B1 CS 274041 B1 CS274041 B1 CS 274041B1 CS 77189 A CS77189 A CS 77189A CS 77189 A CS77189 A CS 77189A CS 274041 B1 CS274041 B1 CS 274041B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- cells
- bacterial cells
- protein
- escherichia coli
- pek17
- Prior art date
Links
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 13
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 title claims abstract description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 241000714266 Bovine leukemia virus Species 0.000 claims description 16
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 claims description 4
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 claims description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 10
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 abstract description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 9
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 abstract description 6
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 abstract description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 abstract 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 abstract 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 abstract 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101000920732 Bovine leukemia virus Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101500007117 Bovine leukemia virus Surface protein Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 101710081103 Cuticular glutathione peroxidase Proteins 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006142 Luria-Bertani Agar Substances 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 101710149086 Nuclease S1 Proteins 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000007435 diagnostic evaluation Methods 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- -1 glycol ester Chemical class 0.000 description 1
- 108010011013 glycoprotein GP51 Proteins 0.000 description 1
- 108091005608 glycosylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035122 glycosylated proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- IZXGZAJMDLJLMF-UHFFFAOYSA-N methylaminomethanol Chemical compound CNCO IZXGZAJMDLJLMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000012743 protein tagging Effects 0.000 description 1
- 238000003156 radioimmunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
1 CS 274 041 B1
Vynález sa týká génovo zrekombinovaných bakteriálnych bunick Escherichla coli produ- kujúcich blelkovinu kódovánu expresným 'plazmidom s nakloňovaným génom pře syntézu obalo-vých i|l ykiipio ti: íntiv virusu leukémie hovřidzloho dobytka /DLV/. < t
Leukóza hovadzieho dobytka je infekčně ochorenie, horizontálně sa šíriace, ktoréholiíiviidciim je IILV. Virusem indukované lymroprolllorotívno ochoronio Jo sprovádzané zmonuiniv krvi i ii Γi kovaných zvierat, čo sa využívalo v diagnostike. Súčasné testy včasnej diag-nostiky rádioimuiwlogickú /R1A/ a imunocnzymatické /ELISA/ sú nepriame a sú založené napřítomnost protilátek proti BLV v sérach infikovaných zvierat /Devare, S.G., Chander, 5., Samagh, B.S., Stephenson, 3.R.: Evalution of radioimmunoprecipitation for the detec-lion of bovine leukomia virus infection in domestic cattle. 3. Immunol. 119. /199/, 277;AJtoner, C., Zajac, V., Bán, 3.: A simple and inexpensive method for detection of BLVInfeeted cattle baued on u inudlfiod ELISA prlnciplo. Zbl. Vet. Med. B. 29, /1902/, 503. V lýchto tostoch antigénmi sú Strukturálně bielkoviny BLV. Producentom virusu sú pře-vážíte embryonálně ovčie obličkové buňky /FLK/ infikované BLV /Van Rer Maaten, M.3., Míl-ie;·, 3.M.: Repllculion of bovine leukomia virus in monolayer coll cultures. Diblio.Hacmatol. 43. /1976/, 360. Virus produkovaný buňkami FLK do rastového média sa z médiakoncentruje a purifikuje centrifugáciou při vysokých obrátkách /centrifúgy firmy Beckman/1’rudukcia virusu FLK buňkami má určitý limit a dlhodobými kultiváclaml sa znižujo. Kul-tnvár.ia hunlnk produkujúcich BI.V je velmi náročná na vybovonlo /termostaty, centrifugy/,na sterilitu a na trvalé a drahé rastové médiá obohacované výživnými telacími sérami.Bielkoviny telacieho séra z rastového média je velmi tažko oddělit od virusu, čo síažujediagnostické vyhodnocovanie vzhladom na to, že ide o přítomné homológne bielkoviny,kloré upňsobujú pseudopozitivitu.
Uvedené nedostatky odstraňujú génovo zrekombinované bakteriálně buňky Eschrichiacoli ÚLU pEKJ.7-5 produkujúcc bielkoviny p60 antigénnej špecificity obalového glykopro-teína virusu leukémie hovadzieho dobytka. Buňky sú uložené v zbierke bakteriálnychbuniek Ústavu experimentálněj onkológie SAV v Bratislavě, ul. Čs. armády 21, pod ozna-čením ÚEO pEK17-5.
Buňky ÚEO pEKL7-5 boli získané transformáciou buniek Escherichla cóli kmen TK1046/Wcinstock, G.M., Rhys, C., Berman, M. L., Hampar, B., Jackson, D., Šilhavý, T.3., Wei-semann, 3., Zweig, M.; Open reading frame expression vectors: A generál method forantigen production in Escherichia coli using protein fusions to O-galactosidace. Proč.Nati. Acad. Sci. USA 80, /1983/, 4432, expresným rekombinantným vektorom pORFl, v kto-rom je naklónovaný gén pre syntézu obalových glykoproteínov BLV - gp51 a gp30. Taktopřipravené bakteriálně buňky syntetizujú okrem svojich bielkovín aj novů neglykozylovanúbielkovinu o molekulovej hmotnosti 50 000 až 60 000 daltonov /Ďalej p60/, ktorá je pro-duktem vneseného géna. Imunologické vlastnosti novej bielkoviny boli testované imuno-olcktroforetickou metodou /Western blotting/ so sérami z kráv infikovaných BLV. BuňkamiÚLU pEK17-b produkujúca bielkovina p60 je imunologicky reaktívna so sérami z BLV infi-kovaných zvierat. So sérami neinfikovariých zvierat daná bielkovina nereaguje. Žiadnabielkovina o mol. hmotnosti 60 000 bakteriálnych buniek transformovaných expresným plaz-midom bez génu, ktorý kóduje obalové glýkoproteíny BLV, nereaguje so sérami z BLV infi-kovaných zvierat. Buňky ÚEO pEK17-5 možno množit v štandardných médiách pre bakteriálněbuňky - I.B, M9 /Maniatis, T., Fritch, E.F., Sambrook, 3.; Molecular cloning. A laborato-ry manual. Cold Spring Harbor Laboratory, 1982/. Buňky sa můžu uchovávat zmrazené prl-lí)U°C až -20°C , resp. v agare. Rozmražením sa získajú viabilné buňky, ktoré slúžiaoko zdroj bielkoviny p60. CS 274 040. 01 V odbornej litcratúre týkajúcej sa leukémie hovadzieho dobytka neboli doteraz publi-kované práce o přípravě a'ntigénnych štruktúr cestou rekombinantných bakteriálnych buniek. Příklad fitlopnním plnzmldu pBY3D905-20, ktorý obBahuje prakticky kompletný genóm BLV, re-strikčným enzýmom BglII /Biorad/ sa získá 1224 bp DNA fragment, ktorý reprezentuje U4’.génu BLV kódujúceho obalové glykoproteíny. Tento fragment sa inkubuje s nukleázouresp. Bal 31 a klonuje sa do vektora pORFl otvoreného restrikčným enzýmom BamHI /Biorad/a upraveného tiež nukleázou S^. Týmto rekombinantným plazmidom sa transformovali buňky E.coli kmen MH3000. Rekombinantné plazmidý boli separované z modrých kolonií narastenýchna LB agare obsahujúcich X-gol /5-bróm-4-chlór-3-indolyl-Q-D-galaktozid/ a z červenýchknlónt ( nnriintnných nn Mne Conkoy ngnro. DNA rokombinontných plazmidov boli hybridizova-né s DNA fragmentem kódujúcim obalové glykoproteíny BLV značeným 32P /Amersham/. Restrikčné enzýmy PvuII, Pstl, Smál /Boehringer/ boli použité na určenie orientácie inzertu. DNA z plazmidov so správnou orientáciou inzertu bola transfekovaná do buniek E.colikmen TK1046 a u izolovaných klónov sa sledovala expresía bakteriálnych bielkovín zvý-šením kultivačnej teploty z 30°C na 37°C. Bakteriálně buňky boli Sálej rozrušené ultra- -2-1 -3-1 zvukom a lyžované v pufrí 1.10 mol.l Tris pH 7.0, 2.10 mol.l fenylmetylsulfonyl fluorid /PMSF/ a 2 mg lyzozým a elektroforeticky delené v 10 % polyakrylamidovom géli/Leammli, U.K.: Cleavege of structural proteins during the assembly of the head ofbacteriophage T4. Nátuře 227. /1970/, 680/. Rozdělené bielkoviny boli analyzované meto-dou Western blotting /Towbin, E., Staehelin, T., Gordon, J.: Elektrophoretic transferof proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procodure and sorne appli-cations. Proč. Nati. Acad. Sci, USA 76, /1979/, 4350/ na nitrocelulóze /Amersham/.Testované hovádzie séra a monoklonálne protilátky proti různým epitopom gp51 boli ria-dené 1:200 v puírl /5 \ uušonú mlíčko buz luku, 5.1t)"2 mol.l'1 iris pil II.0, II. 10 2
mol.l'1 NaCl, 2.10'3 mol.l'1 CaCl„, 0.2 % Triton X-100/. Po 24 hod. inkubácii pri 4 °C , -2 -1bola nitroceluloza s naviazanými proteínmi premytá v TEN pufri /1.10 mol.l Tris pH7.0, 1.10'1 mol.l'1 NaCl, 1.10'3 mol.l.'1 EDTA /s 0,05 h Tween 20 a inkubovaná s 125I-značeným proteinem A /Pharmacia/ 2 hod, Po vymytí nitrocelulózy v TEN pufri s 0.05Tweenom 20 sa vysušila a viazaná rádioaktivita sa sledovala na filme /Kodak/. Vysvět-livky používaných triviálnych názvov: Tris = tris /hydroxymetylaminometan; NaCl - chlo-rid sodný; CaC^ = chlorid vápenatý; Triton X-100 = oktylíenolpolyetylénglykolester; EDTA = dvojsodná sol kyseliny etyléndiaminotetraoctovej.
Množstvo bakteriálně produkovanej bielkoviny p60 je za optimálnych podmienok 1 až 4 ‘-iz celkových bakteriálnych bielkovín, čo je množstvo dostatočné na využitie tejto bielko-viny v diagnostiko. 3e vysoko citlivá a Specifická v reakcii s protilátkami proti glyko-proteínu gp51. Získané bakteriálně buňky ÚEO pEK17-5 majú priemyselné využitie pri velmi nízkýchvýrobných nákladoch /kultivácia vo fermentoroch/ ako zdroj bielkoviny p60, ktorá samůže použil v diagnostike zvierat infikovaných BLV, V rádioimunoteste /RIA/ aleboimunoenzymatickom teste /ELISA/ může nahradit virusové bielkoviny a slúžil pře kvanti-tativné a kvalitativně stanovenie cirkulujúcich protilátok proti virusu. Potenciálněje možné využitie týchto buniek resp. izolovanej bielkoviny p60 k vakcinácii zvierat.
Claims (1)
- I i Cti 274 041 01 » P I? Π η Μ E T VYNÁLEZU Génuvo zrekoinbinovarié bakteriálně buňky Escherichia coli ÚEO pEK17-5 produkujúcubielkovinu péO antigénnej špecificity obalového glykoproteínu virusu leukémie hovád-zieho dobytka,
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS77189A CS274041B1 (en) | 1989-02-06 | 1989-02-06 | Genically recombined bacterial cells escherichia coli |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS77189A CS274041B1 (en) | 1989-02-06 | 1989-02-06 | Genically recombined bacterial cells escherichia coli |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS77189A1 CS77189A1 (en) | 1990-08-14 |
| CS274041B1 true CS274041B1 (en) | 1991-04-11 |
Family
ID=5340454
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS77189A CS274041B1 (en) | 1989-02-06 | 1989-02-06 | Genically recombined bacterial cells escherichia coli |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS274041B1 (cs) |
-
1989
- 1989-02-06 CS CS77189A patent/CS274041B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS77189A1 (en) | 1990-08-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Holt et al. | Streptococcus mutans genes that code for extracellular proteins in Escherichia coli K-12 | |
| Thole et al. | Use of recombinant antigens expressed in Escherichia coli K-12 to map B-cell and T-cell epitopes on the immunodominant 65-kilodalton protein of Mycobacterium bovis BCG | |
| US5037753A (en) | Feline t-lymphotropic lentivirus | |
| US5118602A (en) | Feline T-lymphotropic lentivirus assay | |
| JP3883569B2 (ja) | 呼吸器多核体ウイルスプロテインｇのペプチド断片、免疫原的薬剤、それを含む医薬組成物、および製造法 | |
| CN1020752C (zh) | 后天性免疫缺乏综合征(爱滋病)疫苗 | |
| Heeg et al. | Vaccination of class I major histocompatibility complex (MHC)‐restricted murine CD8+ cytotoxic T lymphocytes towards soluble antigens: immunostimulating‐ovalbumin complexes enter the class I MHC‐restricted antigen pathway and allow sensitization against the immunodominant peptide | |
| Barbacid et al. | Avian reticuloendotheliosis viruses: evolutionary linkage with mammalian type C retroviruses | |
| Sato et al. | Identification of the region including the epitope for a monoclonal antibody which can neutralize human parvovirus B19 | |
| Kim et al. | Rapid diagnosis of scrub typhus by a passive hemagglutination assay using recombinant 56-kilodalton polypeptides | |
| CN110093360B (zh) | 一种表达Fc片段的狂犬病病毒G蛋白的融合蛋白及其制备方法 | |
| US4691009A (en) | Hybrid proteins produced by an ultrahigh prokaryotic expression system | |
| CN111925452B (zh) | 猪肺炎支原体基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用 | |
| JPS62239992A (ja) | 免疫学的に反応性のウイルス蛋白質の発現 | |
| Okuda et al. | Enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of canine Leptospira antibodies using recombinant OmpL1 protein | |
| Atkinson et al. | Use of bacterial trpE fusion vectors to express and characterize the bovine immunodeficiency-like virus core protein | |
| CS274041B1 (en) | Genically recombined bacterial cells escherichia coli | |
| Encinas et al. | Antibody recognition of the glycoprotein g of viral haemorrhagic septicemia virus (VHSV) purified in large amounts from insect larvae | |
| Burkala et al. | Recombinant Jembrana disease virus proteins as antigens for the detection of antibody to bovine lentiviruses | |
| Müller et al. | Cloning of mglB, the structural gene for the galactose-binding protein of Salmonella typhimurium and Escherichia coli | |
| Bloom et al. | Molecular comparisons of in vivo-and in vitro-derived strains of Aleutian disease of mink parvovirus | |
| JPH02503196A (ja) | ブルセラ・アボルタスに対するワクチン | |
| CN112094354B (zh) | 副鸡禽杆菌基因工程亚单位疫苗、其制备方法及应用 | |
| RU2085586C1 (ru) | Полипептид 1106, предназначенный для определения антител к вирусу иммунодефицита человека первого типа, фрагмент днк н 1106, кодирующий полипептид 1106, рекомбинантная плазмидная днк рн 1106, кодирующая полипептид 1106, штамм бактерий escherichia coli - продуцент полипептида 1106 | |
| JP3425164B2 (ja) | ヒトヘルペスウィルス６型タンパク質ｐ１００、対応するＤＮＡ配列、それらの製造および使用 |