CS273302B2 - Quick tests for demonstration and determination of hydrogen peroxide and substances reacting during hydrogen peroxide or oxidatively active substances formation - Google Patents
Quick tests for demonstration and determination of hydrogen peroxide and substances reacting during hydrogen peroxide or oxidatively active substances formation Download PDFInfo
- Publication number
- CS273302B2 CS273302B2 CS400977A CS400977A CS273302B2 CS 273302 B2 CS273302 B2 CS 273302B2 CS 400977 A CS400977 A CS 400977A CS 400977 A CS400977 A CS 400977A CS 273302 B2 CS273302 B2 CS 273302B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hydrogen peroxide
- green
- substances
- determination
- tolidine
- Prior art date
Links
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims abstract description 57
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 43
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 239000013543 active substance Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title abstract 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 7
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 6
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 12
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 10
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 5
- CDOUZKKFHVEKRI-UHFFFAOYSA-N 3-bromo-n-[(prop-2-enoylamino)methyl]propanamide Chemical compound BrCCC(=O)NCNC(=O)C=C CDOUZKKFHVEKRI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N N-Lauroylsarcosine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC(O)=O BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 235000019329 dioctyl sodium sulphosuccinate Nutrition 0.000 claims description 4
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 claims description 4
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 claims description 4
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims description 3
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims description 3
- JGBAASVQPMTVHO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroperoxy-2,5-dimethylhexane Chemical compound OOC(C)(C)CCC(C)(C)OO JGBAASVQPMTVHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 2
- BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N morphine Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4O BQJCRHHNABKAKU-KBQPJGBKSA-N 0.000 claims 2
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 229960005181 morphine Drugs 0.000 claims 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 5
- HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N benzidine Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 HFACYLZERDEVSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 38
- NUIURNJTPRWVAP-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dimethylbenzidine Chemical compound C1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=CC=2)=C1 NUIURNJTPRWVAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 24
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 22
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 15
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 11
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 10
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- -1 benzidine series compounds Chemical class 0.000 description 8
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 8
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 7
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 7
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 7
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 7
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 6
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 6
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-UHFFFAOYSA-N 3-cholesterol Natural products C1C=C2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 5
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 5
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 5
- 150000005839 radical cations Chemical class 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 4
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 4
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 4
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 4
- BDZHBJPMMZFUJV-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(diethylamino)phenyl]-n,n-diethylaniline Chemical compound C1=CC(N(CC)CC)=CC=C1C1=CC=C(N(CC)CC)C=C1 BDZHBJPMMZFUJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 3
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 3
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 3
- 235000019646 color tone Nutrition 0.000 description 3
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 3
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- UDJZTGMLYITLIQ-UHFFFAOYSA-N 1-ethenylpyrrolidine Chemical compound C=CN1CCCC1 UDJZTGMLYITLIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MLPVBIWIRCKMJV-UHFFFAOYSA-N 2-ethylaniline Chemical compound CCC1=CC=CC=C1N MLPVBIWIRCKMJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MVFMFJRIUAILRG-UHFFFAOYSA-N 4-[4-amino-3,5-di(propan-2-yl)phenyl]-2,6-di(propan-2-yl)aniline Chemical compound CC(C)C1=C(N)C(C(C)C)=CC(C=2C=C(C(N)=C(C(C)C)C=2)C(C)C)=C1 MVFMFJRIUAILRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N Aniline Chemical compound NC1=CC=CC=C1 PAYRUJLWNCNPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N Citric acid monohydrate Chemical compound O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O YASYEJJMZJALEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PQRTVVJRFXOOGJ-UHFFFAOYSA-N O.O.[Na].[Na].[Na].C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O Chemical compound O.O.[Na].[Na].[Na].C(CC(O)(C(=O)O)CC(=O)O)(=O)O PQRTVVJRFXOOGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700020962 Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N Vinyl acetate Chemical compound CC(=O)OC=C XTXRWKRVRITETP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- AVMNFQHJOOYCAP-UHFFFAOYSA-N acetic acid;propanoic acid Chemical compound CC(O)=O.CCC(O)=O AVMNFQHJOOYCAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K aluminium trichloride Chemical compound Cl[Al](Cl)Cl VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000012954 diazonium Substances 0.000 description 2
- 150000001989 diazonium salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- LELOWRISYMNNSU-UHFFFAOYSA-N hydrogen cyanide Chemical compound N#C LELOWRISYMNNSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920002689 polyvinyl acetate Polymers 0.000 description 2
- 239000011118 polyvinyl acetate Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N silver oxide Chemical compound [O-2].[Ag+].[Ag+] NDVLTYZPCACLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 2
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WKBALTUBRZPIPZ-UHFFFAOYSA-N 2,6-di(propan-2-yl)aniline Chemical compound CC(C)C1=CC=CC(C(C)C)=C1N WKBALTUBRZPIPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FOYHNROGBXVLLX-UHFFFAOYSA-N 2,6-diethylaniline Chemical compound CCC1=CC=CC(CC)=C1N FOYHNROGBXVLLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CBJYNVXPNFJOLV-UHFFFAOYSA-N 2-ethyl-6-methylaniline;hydrochloride Chemical compound Cl.CCC1=CC=CC(C)=C1N CBJYNVXPNFJOLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVQNHORDCKLWPE-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-3-ethyl-5-methylphenyl)-2-ethyl-6-methylaniline Chemical compound CC1=C(N)C(CC)=CC(C=2C=C(CC)C(N)=C(C)C=2)=C1 GVQNHORDCKLWPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCDLBNQQNRQANR-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-3-methylphenyl)-2,6,6-trimethylcyclohexa-2,4-dien-1-amine Chemical compound CC1(C)C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=CC=2)=C1 UCDLBNQQNRQANR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SAPODVLQBCAODP-UHFFFAOYSA-N 4-(4-aminophenyl)-3-ethylaniline Chemical compound CCC1=CC(N)=CC=C1C1=CC=C(N)C=C1 SAPODVLQBCAODP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QYAOEYOOGAESJY-UHFFFAOYSA-N 4-[4-[di(propan-2-yl)amino]phenyl]-N,N-di(propan-2-yl)aniline Chemical compound C(C)(C)N(C1=CC=C(C=C1)C1=CC=C(N(C(C)C)C(C)C)C=C1)C(C)C QYAOEYOOGAESJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M Bisulfite Chemical compound OS([O-])=O LSNNMFCWUKXFEE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000005749 Copper compound Substances 0.000 description 1
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010008292 L-Amino Acid Oxidase Proteins 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000007070 L-amino-acid oxidase Human genes 0.000 description 1
- 238000005684 Liebig rearrangement reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003047 N-acetyl group Chemical group 0.000 description 1
- 108010092464 Urate Oxidase Proteins 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001792 White test Methods 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DMLAVOWQYNRWNQ-UHFFFAOYSA-N azobenzene Chemical compound C1=CC=CC=C1N=NC1=CC=CC=C1 DMLAVOWQYNRWNQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000011449 brick Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M chloromercury Chemical compound [Hg]Cl RCTYPNKXASFOBE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002303 citric acid monohydrate Drugs 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001879 copper Chemical class 0.000 description 1
- 150000001880 copper compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 description 1
- WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N hydroxylamine hydrochloride Substances Cl.ON WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WCYJQVALWQMJGE-UHFFFAOYSA-M hydroxylammonium chloride Chemical compound [Cl-].O[NH3+] WCYJQVALWQMJGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000012280 lithium aluminium hydride Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 125000002577 pseudohalo group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 229910001923 silver oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- UJMBCXLDXJUMFB-GLCFPVLVSA-K tartrazine Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=NN(C=2C=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)C(=O)C1\N=N\C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 UJMBCXLDXJUMFB-GLCFPVLVSA-K 0.000 description 1
- 239000004149 tartrazine Substances 0.000 description 1
- 229960000943 tartrazine Drugs 0.000 description 1
- 235000012756 tartrazine Nutrition 0.000 description 1
- AGGKEGLBGGJEBZ-UHFFFAOYSA-N tetramethylenedisulfotetramine Chemical compound C1N(S2(=O)=O)CN3S(=O)(=O)N1CN2C3 AGGKEGLBGGJEBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AWDBHOZBRXWRKS-UHFFFAOYSA-N tetrapotassium;iron(6+);hexacyanide Chemical compound [K+].[K+].[K+].[K+].[Fe+6].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-].N#[C-] AWDBHOZBRXWRKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Předmětem vynálezu jsou rychlotesty pro důkaz a stanovení peroxidu vodíku a látek reagujících za tvorby peroxidu vodíku nebo peroxidicky účinných látek.
Reakce peroxidu vodíku s oxidačními indikátory za katalýzy peroxidázou nebo peroxidicky účinných látek za vzniku barevných sloučenin hraje v analytická chemii zvláštní úlohu, nebot dovoluje kromě důkazu vodíku a peroxidáz stanovit řadu látek, které reagují s kyslíkem a oxidázou za vzniku peroxidu vodíku. Dále jsou jako příklady uvedeny některé z těchto látek a v závorkách pak odpovídající oxidázy:
glukóza (glukózooxidáza), galaktóza (galaktooxidáza), L-aminokyseliny (oxidáza L-aminokyselin), cholesterin (cholesterinoxidáza) a kyselina močová (urikáza). Jsou to především látky, jejichž důkaz má velký význam v lékařské diagnostice a v chemii potravin.
Jako reakce pro důkaz peroxidáz přichází v úvahu zejména metoda stanovení hemoglobinu, přičemž se místo peroxidu vodíku mohou jako oxidační prostředek používat také organioké hydroperoxidy.
Shodně se svým velkým významem v lékařské rychlodiagnostice jsou téměř pro všechny shora jmenované reakce popsány tak zvané rychlotesty, které umožňují kvalitativní nebo kvantitativní stanovení jednotlivých reakčních složek. Při tom se používají nasákavé nosiče nebo filmy, které obsahují všechny reagencie a na nich probíhá po styku se zkoumanou kapalinou v případě, že je přítomná látka o kterou jde, barevná reakce. Vzniklé zbarvení se určuje pomocí srovnávacích tabulek barev nebo se měří pomocí remisních fotometrů, takže se z intenzity zbarvení může usuzovat na koncentraci reagující látky.
Jako oxidační indikátory pro tyto rychlotesty je v literatuře a v patentech popsána řada sloučenin, avšak v praxi se jich prosadilo jen několik. Jedná se při tom výlučně o sloučeniny benzidinové řady a sice z těchto opět zejména o o-tolidin. Přes velké rozšíření tohoto indikátoru a jeho nepochybné přednosti oproti jiným známým indikátorům má ale o-tolidin i nedostatky. Za prvé není tato látka v recepturách pro rychlotesty vždy optimálně stálá, což může vést při delším skladování k nežádoucím zbarvením a ztrátám citlivosti. Za druhé není modrozelený radikálový kation, vznikající při reakci indikátoru příliš stálý, nebot přechází relativně snadno další oxidací v hnědý chinondiimin. Reakční zbarvení mají proto vzhledem k hnědému vedlejšímu zbarvení částečně špinavý charakter, přičemž se rychle mění a nelze je proto nejčastěji již krátce po předepsané době odčítání správně vyhodnotit. Při sériových analýzách a pro dokumentaci je toto rozhodujícím nedostatkem. Je sice možné stabilizovat radikálový kation anionickými smáčedly v určitém rozmezí, tyto nejsou ale vždy použitelné, nebot mohou působit destabilizačně na oxidázy při primární reakci.
Nyní bylo s překvapením zjištěno, že se získají rychlotesty shora uvedeného druhu, které jsou trvanlivější a poskytují stálejší radikály barviva, když se místo o-tolidinu použije 3,3', ójS^-tetraalkylbenzidin.
Podstata vynálezu, který se týká rychlotestů pr.ó důkaz a stanovení peroxidu vodíku a látek, reagujících za tvorby peroxidu vodíku nebo peroxidicky účinných látek, sestávající z nasákavého nosiče nebo nabobtnávajícího filmu ze syntetické hmoty, impregnovaného impregnačním roztokem, který na 100 ml obsahuje 0,01 až 0,5 g peroxidázy, popřípadě 0,1 až 2 g hydr oper oxidu, do 20 g pufru, například nebo morfolinetansulfonového, do 5 g smáčedla, například dioktylnatríiunšulfojantaranu, lauroylsarkosinu, polyoxyethylensorbitanmonolauratu, do 15 g aktivátoru například 2,5-dimethylhexan-2,5-dihydroperoxidu a 0,1 až 1 g chromogenu spočívá v tom, že jako účinnou chromogenní látku obsahují 3,3', 5,5z-tetraalkylbenzidin obecného vzorce I
CS 273 302 B2 /1/ if >.·
ve kterém R^, Rg, R-j a R^ jsou stejné nebo různé a znamenají nižší alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, s výhodou 1 až 4 atomy uhlíku a s přímým nebo rozvětveným řetězcem.
Předmětem vynálezu podle tohoto tedy jsou rychlotesty k důkazu a stanovení peroxidu vodíku a látek, které reagují za tvorby peroxidu vodíku nebo peroxidicky účinných látek sestávajících z nasákavého nosiče nebo nabobtnávajíoího filmu ze syntetické hmoty, které obsahují bučí peroxidicky účinnou látku nebo hydroperoxid a ohromogen, reagující za vzniku zbarvení s hydroperoxidem nebo peroxidicky účinnou látkou, jakož popřípadě i pufr, smáčedlo, zahušíovaoí prostředek a aktivátory, jejiohž podstata spočívá v tom, že jako účinnou ohromogenní látku obsahují 3,3*, 5,5*-tetraalkylbenzidin obecného vzorce I
/1/ ve kterém R^, Rg, R^ a R^ jsou stejné nebo různé a znamenají nižší alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, s výhodou 1 až 4 atomy uhlíku a přímým nebo rozvětveným řetězcem.
Způsob výroby sloučenin obecného vzorce I je znám, avšak blíže je až dosud charakterizován pouze 3-3*, 5-5z-tetrametylbenzidin (V.R. Holland et al. Tetrahedron 30, 3299-3302 (1974)) a 3,3', 5,5z-tetraetylbenzidin (R. Stroh et al. Angew. Chem. 69. 124— -131 (1957))· Výroba tetrametylbenzidinu podle V.R. Hollanda et al. loo. cit., se prováděla o sobě známým způsobem redukcí známého 2,2', 6,6z-tetrametylazobenzenu zinkovým prachem a následujícím benzidinovým přesmykem.
Až dosud nepopsané sloučeniny 3,3'-diraetyl-5,5'-dietylbenzidin a 3,3', 5,5'-tetraisopropylbenzidin se mohou vyrobit například podle Strohá et al. loo. cit., z o-tolidinu a etylenu, popřípadě z benzldinu a propylenu.
Další způsoby, které by měly být principiálně přístupné i pro ještě nepopsané vyšší alkylderiváty jsou následující:
CS 273 302 B2
a) oxidace 2,6-dialkylanilinu alkalickým ferrikyanidem (arová. V.R. Holland, loc.cit. )
G. Schulz, Ber. dtsch., chem.· Ges. 17. 476-478 (1884)?
B. Haselbaoh, Helv. chem. Acta. 53. 1526-1543 (1970).
b) oxidace 2,6-dialkylanilinu kysličníkem stříbrným (srovn. B. Ortiz et al., J. Org. Chem. 3Z, 2748-2750 (1972)).
c) redukce 2,6-diaIkylnitrobenzenu lithiuraaluminiumhydridem (srovn. R.R. Nystrom a
H. C. Brown, J. Amer. chem. Soc. 70. 3738-3740 (1948)).
d) reakce 2,6-dialkylbenzendiazoniových solí s amoniakálním roztokem jednomocné mědi (srovn. D. Vorlander a R, Mayer, Liebigs Ann. Chem. 320, 122-144 (1902)).
Další redukce tímto způsobem získaného azobenzenu na hydrazobenzeny a jejich (zčásti okamžitý) benzidinový přesmyk se provádí známými metodami (například Houben-Weyl X/2, 705-724 a X/1, 839-848).
Zásadní schopnost 3,3*, S^-tetrametyrbenzidinu, kterou lze očekávat na základě struktury pro důkaz okultního krvácení ve stolici a moči je popsána v uvedené práoi V.R. Ilollanda et al., přičemž jako přednost je vyzdvižena nižší kanoerogenita oproti tolidinu. Neočekávaně větší stálost aminu a jeho radikálového kationtů v rychlostech není ale Hollandem popsána, neboť tento neprovedl odpovídající pokusy. Pro takové pokusy nevznikl také žádný popud, neboť využivatel rychlotestů nemanipuloval přímo s činidly a otázka kanoerogenity tedy pro něho nehraje prakticky žádnou roli.
Sloučeniny obecného vzorce I jsou popsány také pro rychlotesty důkazu halogenidů. popřípadě pseudohalogenidů v tělesných tekutinách (Can. Pat. Nr. 818 344). Tyto rychlotesty obsahují ještě sloučeniny dvojmocné mědi, které reagují s halogenidy za vzniku halogenidů jednomocné mědi a volných halogenů, které oxidují bezidinové sloučeniny.
Tato oxidace vede zřejmě.ke stejným barevným radikálovým kationtům jako oxidace hydroperoxidy katalyzovaná peroxidázou. V uvedeném patentu je z četných nárokovaných derivátů výhodný o-tolidin (3,3'-dimetylbenzidin), z čehož lze učinit závěr, že tetraalkylbenzidiny jsou pro rychlotesty méně vhodné.
Větší stálost sloučenin obecného vzorce I a jejich radikálových kationtů je dále potud překvapující, že vlivem tlaku elektronů přídavných alkylovýoh skupin by bylo možné spíše očekávat zvýšenou oxidovatelnost a tím i další reakci na hnědý chinondiimin.
Tetraalkylbenzidiny podle vynálezu se mohou použít ve všech případech, ve kterých byl až dosud používán o-tolidin, přičemž se mohou eventuálně trochu modifikovat známé receptury. Popřípadě se mohou pro stabilizaci barvy použitá anionická smáěedla nahradit méně aktivními nebo úplně vynechat. Tak se mohou použít například tetraalkylbenzidiny v testovacích papírcích pro důkaz glukózy v moči, krve v moči, chole3terinu v 3éru, peroxidu vodíku v mléce nebo testovacích filmech pro stanovení glukózy v krvi a séru a v mnoha jiných testech. Všechny tyto testy se vyznačují tím, že barevné reakce jsou jasnější, stálejší a zčásti lépe odstupňovány než při použití o-tolidinu, neboť modrozelená až zelená zbarvení radikálových kationtů tetraalkylbenzidinů nejsou -zašpiněna podíly hnědého chinondiiminu.
U rychlotestů, popsaných v následujících příkladech vystupují do popředí zejména vlastnosti tetraalkylbenzidinů podle vynálezu, přičemž jednotliví zástupci třídy sloučenin mohou mít popřípadě ještě obzvláště výhodné účinky: tak se ukazuje zvýšoná stálost tetraalkylbenzidinů podle vzorce I oproti o-tolidinu zejména při skladování testovacích papírků pro důkaz krve v moči. Zvýšená stálost radikálových kationtů vede u testovacích filmů pro stanovení glukózy k tomu, že měření se může
CS 273 302 B2 provádět v relativně dlouhém časovém období. Použití tetraalkylbenzidinu při testu glukózy v moěi vede k testovacím papírkům, u kterýoh reakční zbarvení zůstává po celé dny téměř nezměněno, oož má obzvláštní význam pro časně diagnózy, při kterých diagnostici posílají použité testovací papírky do centrálních míst k vyhodnocování. Na dalších příkladech má být vynález blíže vysvětlen:
Příklad 1
Testovací papírek pro důkaz krve v moěi
Filtrační papír (Sohleider a Schull č. 23SL) se Impregnuje následujícími roztoky a usuší se při 40 °0:
Roztok 1
1,2 molární oitrátový pufr o pH 5,25 35,P ml etylendiaminotetraootová kyselina, dvojsodná sůl 0,1 g dioktylnatriumsulfojantaran 0,5 g
2,5-dimetylhexan-2,5-dihydroperoxid (asi 70%ní) 1,6 g trlmorfolid kyseliny fosforečné 12,7 g etanol 30,0 ml destilovaná voda ad 100,0 ml
Roztok 2
3,3*, 5,5*-tetrametylbenzidin fenantridin toluen
0,3 g 0,2 g ad 100,0 ml
Získá se bílý testovací papírek, který se při namočení do moči, obsahující krev asi po 5 až 20 vteřinách zbarví modrozeleně. Jestliže jsou erytrocyty intaktní, tak jsou papírky modrozeleně tečkované. Jestliže dojde k hemolýze, nebo jestliže se nachází předem volný hemoglobin v moči, tak se papírky zbarví rovnoměrně modrozeleně. CitliO vost se pohybuje asi okolo 5 erytrooytů/mm nebo odpovídajícího množství hemoglobinu. Nižší počet intaktníoh erytrooytů může za určitých okolností vyvolat ještě jednotlivé modrozelené body na testovacím papírku. Citlivost vůči hemoglobinu odpovídá citlivosti hemoglobinu.
Po třídenním teplotním zatížení při 60 °C jsou testovací papírky zcela slabě nažloutle zbarveny, jejich citlivost zůstala v podstatě stejná, pouze reakční doby se prodloužily asi na 60 až 90 vteřin. Testovací papírek stejného složení s o-tolidinem namísto tetrametylbenzidinu je po stejném zatížení žlutohnědě zbarven, citlivost se pohybuje asi okolo 20 erytrooytů/mn?.
Papírky se stejnou citlivostí a stabilitou, které pouze o něco pomaleji a s čistou zelenou barvou reagují se získají při použití ekvimolárních množství 3,3*, 5,5*-tetraetylbenzidinu, 3,3*-dimetyl-5,5*-dietylbenzidinu nebo 3,3*, 5,5*-tetraisopropylbenzidinu.
CS 273 302 B2
Příklad 2
Testovací papírek pro stanovení krve v moci
Jestliže se v receptuře z příkladu 1 nahradí dioktylnatriumsulfojantaran stejným množstvím lauroylsarkozinu něho se zoela vynechá povrohově aktivní prostředek, tak se získají testovací papírky, které jsou sice o n§oo móné citlivé než v příkladě 1, které jsou ale vždy ještě citlivější než odpovídající papírky s o-tolidinem. Barevné reakce s mocí, která obsahuje 50 heraolyzovanýoh erytrooytů/mm^ jsou shrnuty v dole uvedené tabulce.
tetraraetylbenzidin o-tolidin bez smáčedla slabě zelené slabě šedohnědé lauroylsarkozin zelené slabě hnědozelené
Příklad 3
Testovací papírek pro důkaz glukózy v moči
Filtrační papír (Schleioher a Schull 597 NF) se Impregnují roztoky následujícího složení a usuší při 50 °0:
Roztok 1
| Glukózooxidáza (70 U/mg) | 222 mg |
| peroxidáza (70 U/mg) | 28 mg |
| morfolinoetansulfonový pufr (pH 5, 1,0 mj | 50 ml |
| tartrazin | 80 mg |
| polyvinylpyrrolidon | 300 mg |
| destilovaná voda | ad 100 ml |
| Roztok 2 | |
| 3,3', 5,5 z-tetrametylbenzidin | 600 mg |
| etanol | ad 100 ml |
Stejným způsobem se vyrobí testovací papírky, které obsahují ekvimolární množství 3,3\ 5,5'-tetraetylbenzidinu popřípadě o-tolidinu. Reakční zbarvení těchto testovacích papírků s močemi, obsahujícími glukózu asi po 60 až 120 vteřinách po namočení jsou shrnuty v níže uvedené tabulce, U tetrametylbenzidinu zůstanou tato zbarvení asi 10 až 15 minut konstantní, při usušení dostanou spíše namodralý charakter a v této formě zůstanou stálé po oelé dny. Zbarvení s tetraetylbenzidinem zblednou poněkud při sušení aniž by se měnila hodnota zbarvení a jsou potom po oelé dny stálá'.
Zbarvení získaná 3 o-tolidinem začnou již po 5 až 10 minutách žloutnout a blednout a jsou po usušení během 2 až 4 hodin vždy podle koncentrace glukózy zcela vybledlá· nebo slabě olivověhnědá.
CS 273 302 B2
| mg % glukóza | o-tolidin | tetrametylbenzidin | t e tra etylbenz idin |
| 0 | žluté | žluté | žluté |
| 50 | světle zelené | světle zelené | světle zelené |
| 100 | zelené | modrozelené | středně zelené |
| 250 | modrozelené | zelenomodré | zelené |
| 500 | zelenomodré | modročorné | tmavozelené |
| 1000 | olivově černé | černé | hluboce zelené |
| Testovací papírky, | které obsahují | ekvimolární množství 3,3 | z-dimetyl-5,5'-dietylbenz: |
dinu. chovají se s ohledem na charakter a stálost reakčních barev prakticky tak jako papírky s tetraetylbenzidinem.
Příklad 4
Testovací papírky pro důkaz peroxidu vodíku
Piltrační papír byl impregnován následujícími roztoky a usušen při 40 °C..
Roztok 1
| trojsodná sůl kyseliny citrónové, dihydrát | 225 mg |
| kyselina citrónová, monchydrát | 175 mg |
| peroxidáza (70 U/mg) | 50 mg |
| natriumalginat | 150 mg |
| polyoxyetylen3orhitanmonolaurat (Tween 20) | 1300 mg |
| směsný polymer vinylpyrolidinu s vinylacetátem | 375 mg |
| destilovaná voda | ad 100 mg |
Roztok 2
3,3*, 5»5*-tetrametylbenzidin 500 mg aceton ad 100 ml
Takto vyrobený testovací papírek dává s peroxidem vodíku ve vodných roztocích, například mléce, modrozelené reakčni zbarvení aš do koncentrace 0,1 mg %.
Příklad 5
Testovací papírek pro důkaz cholesterinu a esterů cholesterinu v séru
Piltrační papír (Schleicher a Schull 597 NP Ind.) se impregnuje roztoky následujícího složení a usuší se při 40 °C:
Roztok 1 molární citranový pufr pH 7 cholesterinoxidáza (60 U/mg) cholesteriesteráza (18 U/mg)
20,0 ml
0,1 g 0,25 g
OS 273 302 B2 peroxidáza (70 U/mg) destilovaná voda
Roztok 2
3,3', 5,5“tetraraetylbenzidin polyetylenoktylfenoleter (Triton X 100) metylenchlorid
0,05 ε ad 100,0 ml
0,28 g
0,5 g ad 100,0 ml
Takto získané testovací papírky reagují se séry, které obsahují cholesterin a/nebo cholesterinester, za vzniku zelených barevných tónů, jejichž intenzita odpovídá koncentraci cholesterinu. Odpovídající testovací papírky, které obsahují místo tetrametylbenzidinu o-tolidin, reagují rovněž za vzniku zelených barevných tónů, které jsou ale méně intenzívní.
Příklad 6
Testovací film pro stanovení nižších obsahů glukózy v krvi nebo séru
Komponenty disperze polyvinylacetátpropionanu (Propiofan 70 D) 45,0 g
1,85%ní roztok natriumalginátu v 0,5 m fosforečnanovém pufru o pH 5,5 ' 35,0 g natriumnonylsíran rozpuštěný v 5,0 ml vody 0,75 g glukózooxidáza (62,7 U/mg)·) 0,189 g y rozpuštěné , i v 10 ml vody peroxidáza (68,8 U/mg) 0,235 g
3,3', 5,5-tetrametylbenzidin rozpuštěný v 5 ml acetonu 0,68 g
Složky se dobře promísí, natřou se v tlouštce vrstvy 200 /U na fólii a 35 minut se suší při 60 °C. Nakapání krve obsahující glukózu a jejím otření po 1 minutě poskytuje po dalších 2 minutách, při rozmezí obsahu glukózy od 5 až asi do 100 mg %, modrozelené reakční zbarvení stoupající intenzity, které se může změřit běžně prodávaným remisním fotometrem. Následující tabulka ukazuje kinetiku vývoje zbarvení při 60 mg % glukózy ve srovnání s testovacím filmem, ve kterém je místo tetrametylbenzidinu obsaženo 500 mg o-tolidinu. Jestliže se testovací film zahřívá 12 dní na 50 °C, tak nelze zjistit prakticky žádné zbarvení. Testovací film s o-tolidinem je naproti tomu silně žlutohnědě zbarven.
čas (min) 1 23 5 10 intenzita tetrametylbenzidinu (TMB) 88 87 intenzita o-tolidinu 73 68
CS 273 302 B2
| glukóza | o-tolidin | tetrametylbenzidin | tetraetylbenzidin |
| 0 | žluté | žluté | žluté |
| 50 | světle zelené | světle zelené | světle zelené |
| 100 | zelené | modrozelené | středně zelené |
| 250 | modrozelené | zelenomodré | zelené |
| 500 | zelenomodré | modročerné | tmavozelené |
| 1000 | olivově černé | černé | hluboce zelené |
Testovací papírky, které obsahují ekvimolární množství 3,3z-dimetyl-5,5z-dietylbenzidinu chovají se s ohledem na charakter a stálost reakčnich barev prakticky tak jako papírky s tetraetylbenzidinem.
Příklad 4
Testovací papírky pro důkaz peroxidu vodíku
Filtrační papír byl impregnován následujícími roztoky a usušen při 40 °C..
Roztok 1
| trojsodná sůl kyseliny citrónové, dihydrát | 225 mg |
| kyselina citrónová, monohydrát | 175 mg |
| peroxidáza (70 U/mg) | 50 mg |
| natriumalginat | 150 mg |
| polyoxyetylensorbitanmonolaurat (Tween 20) | 1300 mg |
| směsný polymer vinylpyrolidinu s vinylacetátem | 375 mg |
| destilovaná voda | ad 100 mg |
Roztok 2
3,3Z, 5,5z-tetrametylbenzidin 500 mg aceton ad 100 ml
Takto vyrobený testovací papírek dává s peroxidem vodíku ve vodných roztocích, například mléce, modrozelené reakční zbarvení až do koncentrace 0,1 mg %.
Pří-klad 5
Testovací papírek pro důkaz cholesterinu a esterů oholesterinu v séru
Filtrační papír (Sohleioher a Schull 597 NF Ind.) se impregnuje roztoky následujícího složení a usuší se při 40 °Cs
Roztok 1 molární citranový pufr pH 7 cholesterinoxidáza (60 U/mg) cholesteriesteráza (18 U/mg)
20,0 ml 0,1 g
0,25 g
CS 273 302 B2 peroxidáza (70 N/mg) destilovaná voda
Roztok 2
3,3', 5,5,-tetrametyl'benzidin polyetylehoktylfenoleter (Triton X 100) metylenchlorid
0,05 g ad 100,0 ml
0,28 g
0,5 g ad 100,0 ml
Takto získané testovací papírky reagují se séry, které obsahují oholesterin a/nebo cholesterinester, za vzniku zelených barevných tónů, jejichž intenzita odpovídá koncentraci oholesterinu. Odpovídající testovací papírky, které obsahují místo tetrametylbenzidinu o-tolidin, reagují rovněž za vzniku zelených barevných tónů, které jsou ale Sieně intenzívní.
Příklad 6
Testovací film pro stanovení nižších obsahů glukózy v krvi nebo séru
Komponenty disperze polyvinylacetátpropionanu (Propiofan 70 D) 45,0 g
1,85%ní roztok natriumalginátu v 0,5 m fosforeonanovém pufru o pH 5,5 35,0 g natriumnonylsíran rozpuštěný v 5,0 ml vody 0,75 g glukózooxidáza (62,7 U/mg)y - 0,189 g y rozpuštěné , r ( v 10 ml vody peroxidáza (68,8 U/mg) J 0,235 g
3,3', 5,5*-tetrametylbenzidin rozpuštěný v 5 ml acetonu 0,68 g
Složky se dobře promísí, natřou se v tlouštce vrstvy 200 /U na fólii a 35 minut se suší při 60 °C. Nakapání krve obsahující glukózu a jejím otření po 1 minutě poskytuje po dalších 2 minutách, při rozmezí obsahu glukózy od 5 až asi do 100 mg %, modrozelené reakční zbarvení stoupající intenzity, které se může změřit běžně prodávaným remisním fotometrem. Následující tabulka ukazuje kinetiku vývoje zbarvení při 60 mg % glukózy ve srovnání s testovacím filmem, ve kterém je místo tetrametylbenzidinu obsaženo 500 mg o-tolidinu. Jestliže se testovací film zahřívá 12 dní na 50 °C, tak nelze zjistit prakticky žádné zbarvení. Testovací film s o-tolidinem je naproti tomu silně žlutohnědě zbarven.
čas (min) 1 2 3 5 10 intenzita tetrametylbenzidinu (TMB) 88 intenzita o-tolidinu 73
CS 273 302 B2
Příklad 7
Testovací film pro stanovení normálního a zvýšeného obsahu glukózy v krvi a séru
Testovací film se vyrobí podle příkladu 6, tento obsahuje dodatečně 0,050 g 9-(^-ami nopropyl)-3-aminokarbazoldihydrochloridu. Nakapání krve, obsahující glukózu a její setření po 1 minutě poskytuje po další minutě následující reakční zbarvení:
mg % glukózy - okrové
120 mg. % glukózy - olivové
180 mg % glukózy - modrozelené s proměnnou hloubkou zbarvení
Tyto barvy se samy o sobě nemění při dvoudenním uchovávání v atmosféře laboratoře.
U analogického testovacího filmu, který obsahuje 0,600 g o-tolidinu a 0,025 g 9-(^-aminopropyl)-3-aminokarbazoldihydrochloridu se mění modrozelené zbarvení směrem k žlutozeleným tónům.
Dobu trvání stálosti barvy při obsahu 150 mg % glukózy, měřeno na reflomatu ukazuje následující tabulka doba (hod) 0 1 2 4 8 24
TMB 61 62 62 62 62 62 o-tolidin 51 52 51 50 47 ' 42
Jestliže se testovací film zahřívá 12 dní na 50 °C, tak nelze zjistit prakticky žádné zbarvení a vyhodnocení pomocí srovnávacích barev je nesporně možné. Testovací proužky, obsahující o-tolidin jsou naproti tomu silně žlutohnědě zbarveny a srovnání s barevnou škálou již není možné.
V následujících příkladech je popsána výroba dvou až dosud neznámých sloučenin obecného vzorce I.
Příklad 8
3,3 *-dimetyl-5,5'-dietylbenzidin
Varianta I
Ve dvoulitrové tříhrdlé baňce s michadlem a kapací nálevkou a teploměrem se suspenduje 96,5 g (0,564 mol) 2-metyl-6-etylanilinhydrochloridu ve směsi se 79,5 ml koncentro vahé kyseliny solné (d = 1,18) a 350 ml vody a za dobrého chlazení ledem se při 0 až 3 °C přikape roztok 39 g dusitanu sodného ve 150 ml vody během 30 minut za míchání. Potom se míchá ještě asi 1 hodinu při 0 až 3 °C a roztok diazoniové soli se zředí pří davkem 600 ml ledové vody.
Mezitím se v 6ti litrové tříhrdlé bance s michadlem, kapací nálevkou a teploměrem (Y-kusem) rozpustí 210 g síranu měďnatého v 900 ml vody a doplní 363 ml koncentrovaného amoniaku (d = 0,88). Potom ae rozpustí 90 g hydroxylamoniumchloridu ve 150 ml vody a za chlazení ledem se přikape roztok 95 g hydroxidu draselného v 72 ml vody. Tento dobře ochlazený roztok se přidá při 10až 15 °C pod dusíkem během 15 minut k míchanému roztoku tetraminu měďnatého, přičemž vznikne světlemodrý komplex soli
CS 273 302 B2 jednomocné mědi. Za chlazení ledem, mohutného míchání a pod dusíkem se nyní při 12 až 15 °C přikape během 1,5 hodiny ochlazený roztok diazoniové soli (kapací nálevka je opatřena zaváděcí trubkou, která ohnutím ve tvaru U dosahuje pod povrch, roztoku soli mědi). Po ukončeném přidávání se míchá ještě jednu hodinu, potom se reakční roztok vytřepe 3 4 x 200 ml eteru. Spojené eterická roztoky se protřepou 3 x 50 ml 25%ního sodného louhu, 2 x 100 ml‘vody, 3 x 100 ml 2N kyseliny solné a 2 x 100 ml vody. Získá se 55,4 g azosloučeniny ve formě červeného oleje. Chromatografické dělení na křemelině (výška náplně 100 cm, průměr sloupce 4,8 cm) se směsí chloroformu s ligroinem 1 : 4 (množství křemeliny 1,5 kg, průměr 0,063 až 0,2 mm) dává 33,7 g čistého 2,2'-dimetyl-ójó^-dietylazobenzenu ve formě červeného oleje. Tento se rozpustí v 1,6 litru dietyleteru, přidá se 330 ml etanolu, potom roztok 135 g amoniumohloridu v 1,5 litru vody a za mohutného míchání se po částech přidá při 22 °C 300 g zinkového prachu. To 5ti hodinovém míchání je redukce ukončena. Téměř úplně se oddělí odbarvená, «
organická fáze a vodná vrstva se protřepe třikrát vždy 250 ml eteru. Spojené eterioké extrakty se potom doplní 210 ml 3N kyseliny sírové a míchají. Při tom se vytvoří síran ve formě bezbarvé, nejdříve lepivé sraženiny. Po přídavku 200 ml etanolu se získá 30,5 g 3,3,-dimetyl-5,5,-dietylbenzidinsíranu ve formě bezbarvých, krystalů. Tento produkt se vnese do 150 ml vroucí vody, za míchání se ochladí na teplotu místnosti, doplní se 200 ml 21Í louhu sodného a extrahuje se 4 x 100 ml chloroformu. Spojené chloroformové extrakty se usuší nad síranem sodným a zahustí. Zbytek 22,5 g světlehnědých krystalů. Tento surový produkt se překrystaluje ze směsi metanolu s vodou. Získá se 23 g = 30,4 % přibarvených krystalů, t.t. 69 až 70 °G.
Dihydr o chlorid . 2HC1 taje při 289 až 291 °C (rozklad).
Varianta II
1,5 g hliníku a 0,1 g chloridu, rtutného se zahřívá se 75 g anilinu v autoklávu na 300 °C, přičemž se hliník rozpustí za vývoje vodíku. Po ochlazení se přidá 92 g o-tolidinu a 4,5 g bezvodého chloridu hlinitého. Potom se zahřeje na teplotu 280 až 300 °C a vtlačí se etylen s tlakem 200 atm. Asi po 3 hodinách je pohlcování etylenu ukončeno. Potom se ochladí a reakční hinota se vytřepe se zředěným louhem sodným. Z organické fáze se ve vakuu oddestiluje 2-etylanilin a 2,6-dietylanilin (až asi 120°/10 mm).
Zbytek se vícekráte překrystaluje ze zředěné kyseliny solné. Získá se dihydrochloriď 3,3 z-dimetyl-5,5'-dietylbenzidinu.
T.t. 288 až 292 °C (rozklad).
Příklad 9
3,3 ', 5,5*-tetraisopropylbenzidin
Roztok 100 g 2,6-diisopropylanilinu ve 1280 ml vody a 102 ml koncentrované kyseliny solné (d = 1,18) se zahřívá na 90 °C a potom se rychle přikape k 97 °C horkému roztoku, sestávajícímu z hexakyanoželezitanu draselného v 5100 ml vody a 143 g hydroxidu sodného. V důsledku vzniklé volné kyseliny kyanovodíkové se pracuje za použití dobře odtahujícího odtahu. Vzniklá červeně zbarvená suspense se míchá ještě 15 minut, ochladí se a vytřepe 6 x 300 ml eteru. Eterická extrakty se usuší nad síranem sodným, odsají a zahustí. Získá se 97 g azosloučeniny ve formě červeného oleje. Chromatografické dělení na křemelinovém sloupci (výška náplně 110 cm., průměr sloupce 8 om)
CS 273 302 B2 se směsí chloroformu s ligroinem 1 : 4 (množství křemeliny 1,5 kg, průměr 0,05 až 0,2 mm) poskytne 32,45 g cihlově červených krystalů. T.t. 134 až 136 °C.
Azosloučenina se rozpustí v 500 ml ledové kyseliny octové, přidá se 150 g prachového zinku a 30 minut se zahřívá za míchání pod zpětným tokem. Potom se odsaje přebytečný zinkový prášek a rozpouštědlo se ve vakuu zahustí. Získá se 17,5 g bezbarvých krystalů, tyto se smíchávají se 150 ml vody, přidá se 150 ml 2N louhu sodného a protřepe se třikrát vždy se 150-ml chloroformu. Při tom se získá 12,4 g surového 3,3', 5,5*-tetra isopropylbenzidinu; tento se doplní 90 ml acetanhydridu, krátce se povaří a přebytečný acetanhydrid se odpaří na rotačním odpařovači. Zbytek se rozpustí ve 20 ml isopropanolu, přidá se 180 ml ligroinu a vzniklé krystaly se odsají. Získaná N,N*-diacetylsloučenina se ještě jednou překrystaluje ze směsi'isopropanolu s ligroinem 2 ; 1. Izoluje se 7,6 g bezbarvých krystalů, t.t. 366 °C. Tyto se pro odštěpení N-acetylskupin zahřívají ve směsi, sestávající ze 180 ml ledové kyseliny octové a 50 ml koncentrované kyseliny solné v autoklávu 6 hodin na 130 až 140 °C.
Potom se reakční roztok zahustí, zbytek se doplní 200 ml 2N sodného a uvolněná báze se extrahuje 4 x 50 ml chloroformu. Chloroformové extrakty se usuší nad síranem sodným, odsají .a zahustí. Při tom se získá 3,3', 5,5z-tetraisopropylbenzidin ve formě nahnědlého oleje.
Claims (1)
- Rychlotesty pro důkaz a stanovení peroxidu vodíku a látek, reagujících za tvorby peroxidu vodíku nebo peroxidicky účinných látek, sestávající z nasákavého nosiče nabobtnávajícího filmu ze syntetické hmoty, impregnovaného impregnačním roztokem, který na 100 ml obsahuje 0,01 až 0,5 g peroxidázy, popřípadě 0,1 až 2 g hydroperoxidu, do 20 g pufru, například citrátového nebo morf olinethansulf onového, do 5 g smáčedla, například dioktylnatriumsulfojantaranu, lauroylsarkosinu, polyoxyethylensorbitanmonolauratu, do 15 g aktivátoru například 2,5-dimethylhexan-2,5-dihydroperoxidu a 0,1 až 1 g chromogenu, vyznačující se tím, že jako účinnou chromogenní látku obsahují 3,3', 5,5r-tetraalkylbenzidin obecného vzorce I.ve kterém R^, Rg» R-j a R^ jsou stejné nebo různé a znamenají nižší alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, s výhodou 1 až 4 atomy uhlíku a přímým nebo rozvětveným řetězcem.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS400977A CS273302B2 (en) | 1974-12-21 | 1977-06-17 | Quick tests for demonstration and determination of hydrogen peroxide and substances reacting during hydrogen peroxide or oxidatively active substances formation |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2460903A DE2460903C3 (de) | 1974-12-21 | 1974-12-21 | Neue 3,3',5,5'-Tetraalkylbenzidine |
| CS862275A CS273301B2 (en) | 1974-12-21 | 1975-12-17 | 3,3,5,5-tetramethylbenzidine and 3,3,5,5-tetraethylbenzidine as oxidizing indicators during speeds |
| CS400977A CS273302B2 (en) | 1974-12-21 | 1977-06-17 | Quick tests for demonstration and determination of hydrogen peroxide and substances reacting during hydrogen peroxide or oxidatively active substances formation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS400977A2 CS400977A2 (en) | 1990-08-14 |
| CS273302B2 true CS273302B2 (en) | 1991-03-12 |
Family
ID=25746596
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS400977A CS273302B2 (en) | 1974-12-21 | 1977-06-17 | Quick tests for demonstration and determination of hydrogen peroxide and substances reacting during hydrogen peroxide or oxidatively active substances formation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS273302B2 (cs) |
-
1977
- 1977-06-17 CS CS400977A patent/CS273302B2/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS400977A2 (en) | 1990-08-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4385114A (en) | Oxidation indicators comprising 3,3',5,5'-tetraalkylbenzidine compounds | |
| JP2922003B2 (ja) | 過酸化活性物質の検定のための組成物、用具及び方法の改良 | |
| AU781213B2 (en) | 8-(anilino)-1-naphthalenesulfonate analogs and their use in analyte detection assays | |
| FI63637B (fi) | Stabiliserade snabbdiagnostiska medel innehaollande oxideringsindikatorer | |
| US4071317A (en) | Test composition and device for determining peroxidatively active substances and process for preparing same | |
| JP3878702B2 (ja) | 被検体の光度測定のための安定なカツプリング色素 | |
| JP2928649B2 (ja) | 過酸化活性物質の検定のための組成物、用具及び方法 | |
| JPS583679B2 (ja) | タイエキチユウノ カサンカセイサヨウブツシツオ ケンシユツスルタメノ シケンヘン | |
| US3558435A (en) | Diagnostic agents for use in the determination of hydroperoxides and of peroxidate-active substances and methods for manufacturing and using the same | |
| US3627698A (en) | Hydroperoxide diagnostic agents containing a chromogen indicator | |
| MXPA96006509A (en) | Stainless coloring colorant for anali photometric determination | |
| JPS5813398A (ja) | 過酸化水素もしくは過酸化水素を形成する基質またはペルオキシダ−ゼもしくはペルオキシダ−ゼのように作用する物質を検出するための剤および方法 | |
| AU592440B2 (en) | New derivatives as redox indicators, and the use thereof | |
| EP0038205B1 (en) | Method for determination of peroxide and test reagent therefor | |
| EP0184437B1 (en) | Color-forming couplers and their use in the analytical determination of hydrogen peroxide or other analytes | |
| JPS6310775A (ja) | ２−ヒドラゾノ−４，６−ジニトロベンズチアゾロン | |
| US4396714A (en) | N-Sulfoalkylaniline derivatives | |
| FI59245B (fi) | 9-substituerade 3-aminokarbazolderivat anvaendbara som indikatorer vid maetning av enzymatiska reaktioner | |
| CS273302B2 (en) | Quick tests for demonstration and determination of hydrogen peroxide and substances reacting during hydrogen peroxide or oxidatively active substances formation | |
| US5106753A (en) | Method for determining manganese level in blood using a porphyrin composition | |
| US4894472A (en) | Dicyanoethylaryl derivatives and process for their preparation | |
| JP2516381B2 (ja) | 過酸化水素の定量方法及びその定量用試薬 | |
| US5264622A (en) | Water-soluble methylenebis(dialkylaniline) derivatives and application thereof | |
| US3947377A (en) | Stabilized indicator compositions containing 9-γ-aminopropyl)-3-aminocarbazole | |
| EP0255708B1 (en) | Indicator composition and method for the preparation thereof |