FI59245B - 9-substituerade 3-aminokarbazolderivat anvaendbara som indikatorer vid maetning av enzymatiska reaktioner - Google Patents
9-substituerade 3-aminokarbazolderivat anvaendbara som indikatorer vid maetning av enzymatiska reaktioner Download PDFInfo
- Publication number
- FI59245B FI59245B FI2287/74A FI228774A FI59245B FI 59245 B FI59245 B FI 59245B FI 2287/74 A FI2287/74 A FI 2287/74A FI 228774 A FI228774 A FI 228774A FI 59245 B FI59245 B FI 59245B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- aminocarbazole
- glucose
- acid
- reaktioner
- indikatorer
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D209/56—Ring systems containing three or more rings
- C07D209/80—[b, c]- or [b, d]-condensed
- C07D209/82—Carbazoles; Hydrogenated carbazoles
- C07D209/88—Carbazoles; Hydrogenated carbazoles with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the ring system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/54—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving glucose or galactose
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/10—Benzidines
- C12Q2326/14—Ortho-Tolidine, i.e. 3,3'-dimethyl-(1,1'-biphenyl-4,4'-diamine)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/807—Apparatus included in process claim, e.g. physical support structures
- Y10S436/81—Tube, bottle, or dipstick
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Indole Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
R5F^1 [B] (11)*CUULUTUSjULKAISU c Q O / ς JBTä lJ 1 1 utlAggninosskrift 3 ' *· ** *> C Faton tti cyonnotty 10 07 1731 *i5vM ^ ' Patent tneddelat ^ v ^ (51) Ky.lk.Wa.3 C 07 D 209/881 G 01 N 31/22 SUOMI —FINLAND (21) P»M««lh«iwmu*-P««n«n»ekninf 2287/71» (22) H*k«mltpilvi — Afw6knlnfad«| 30.07-71* (23) AlkupWvt—GlkiglMtadai 30.07-71* (41) Tulkit lutklMkal — BIMt 02.02.75
Patentti. J. rekl.frlh.mtu. NttUWk..p«c« |. k««U,ulkteun pvm.- no fl1
Patent* och regtcf ratyralaan ' Anattkin utltgd och «Ukriftm publicw-ad 31 · 03 · Ö1 (32)(33)(31) Pyydetty «uoik«u( —Begird prloritut 01.08.73
Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) P 2338932 Λ (71) Boehringer Mannheim GmbH., Mannheim-Waldhof, Saksan Liittotasavalta- , Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (72) Wolfgang Werner, Mannheim-Vogelstang, Peter Vogel, Weinheim,
Hugo Tiedemann, Mannheim-Wallstadt, Werner Giithlein, Mannheim-Neckarau, Saksan Liittotasavalta-FSrbundsrepubliken Tyskland(DE) (7*0 Berggren Oy Ab (5*0 9-substituoidut 3-aminokarbatsolijohdannaiset, joita käytetään entsymaat-tisten toteamisreaktioiden indikaattorina - 9~substituerade 3-aminokarb-azolderivat användbara som indikatorer vid mätning av enzymatiska reaktioner
Glukoosi on kehonnesteissä jo kauan määritetty kvantitatiivisesti käyttäen entsymaattista toteamisx’eaktiota, jossa glukoosi glukoosi-oksidaasin ja ilman hapen avulla hapetetaan glukonihapoksi. Tässä reaktiossa vapautuva vetyperoksidi reagoi peroksidaasin välityksellä mahdollisimman värittömän kromogeenin kanssa. Tällöin kehittyneen väriaineen ekatinktio toimii tutkittavassa nesteessä esiintyvän glukoosin määrän mittana. Koska koeputkessa ja kyvetissä suoritettuja reaktioita voidaan käyttää hyväksi vain kalliiden laitteiden ja koulutetun henkilökunnan avulla, on viime vuosina kehitetty koe-tusliuskoja, jotka sisältävät tarvittavat reagenssit valmiina oikeissa suhteissa ja jotka kehittävät värireaktion reagenssien kantajaan välittömästi sen jälkeen kun liuskaa on kostutettu tutkittavalla nesteellä. Tällaiset koetusliuskat voivat olla imukykyistä kantaja-ainetta kuten esim. suodatinpaperia, mutta on myös mahdollista länsi-saksalaisen patentin n:o 1 598 153 mukaan asettaa reagenssit vettä imemättömille kalvoille. Tällaiset koetuskalvot voidaan pyyhkiä puhtaaksi ja sopivat sen vuoksi erikoisesti sameitten nesteiden kuten esim. veren tutkimiseen.
2 59245
Viimeaikoina on alettu parantaa koetusliuskojen vain puoleksi kvantitatiivista tulkintaa väritaulujen avulla sillä tavalla, että koetus liukojen värinmuutos tapahtuneen toteamisreaktion jälkeen mitataan optisesti. Tätä varten on kehitetty verraten yksinkertaisia heijastuskerroinfotometrejä, jotka tekevät mahdolliseksi koetuskal-vojen kvantitatiivisen tulkinnan.
Koetuskalvoja kehitettäessä ilmeni, että toteamisreaktiot ovat suhteellisen voimakkaasti lämpötilasta riippuvia, niin että oli tuskin mahdollista saada toistettavia tuloksia lämpötilaolosuhteita huomioon-; ottamatta. Erikoisen häiritsevänä tämä ominaisuus esiintyy heijas- tuskerroinfotometrissä, koska mittausvalonsäde nopeasti aiheuttaa I reaktiovyöhykkeen voimakkaan lämpenemisen.
(
Koetusfilmien kromogeenina on tähän saakka käytetty hapetusindikaat-' torien o-tolidiini ja 3-amino-9-etyylikarbatsoli-seosta. Tämä seos on osoittautunut sopivaksi erittäin edullisen, punaisesta vihreään ulottuvan värinmuutoksensa vuoksi, mutta sen haittana on edellä mainittu voimakas lämpötilasta riippuvuus.
Tähän mennessä ei tiiviistä tutkimustyöstä, huolimatta olla ylipäänsä löydetty mitään sellaisia indikaattoreja, jotka aikaansaisivat lämpötilasta riippumatta toistettavia väriarvoja. Sen sijaan esiintyi riippuen reaktiolämpötilasta ja siitä lämpötilasta, jossa koetus-liuskat tarkastettiin, värinpoikkeamia, jotka osaksi huomattavasti väärensivät tuloksia. Lämpötilanmuutoksien, jollaisia esiintyy heijastuskerroinfotometrissä suoritetuissa määrityksissä, vuoksi ovat koetuskalvot glukoosin määräämiseksi veressä tähän saakka olleet mainituista syistä käyttökelvottomia.
Suomalaisesta patentista 55 185 (pat.hak.n:o 295/73) on tunnettua, että 9-( y-aminopropyyli)-3-aminokarbatsoli on sellainen indikaattori entsymaattista glukoosin toteamista varten, joka yhdessä muiden hapetusindikaattorien, erikoisesti o-tolidiinin kanssa aikaansaa laajoissa rajoissa lämpötilasta riippumattomia ja toistettavia väriarvoja glukoosipitoisuutta vastaten. Toisaalta tähän indikaattoriin eivät vaikuta virtsassa vakituisesti esiintyvät aineosat, kuten esim. asetetikkahappo tai askorbiinihappo, niin että tätä indikaattoria sisältävät koetuspaperit ovat erittäin sopivia käytettäväksi virtsan taudinmääritystutkimuksiin.
3 59245
Nyt on ilmennyt, että myös aineet, joilla on kaava I* I ^ /Ri <cv„-?-n^h Y 2 jossa X merkitsee vety- tai halogeeniatomia, Y happiatomia tai kahta vetyatomia, ja R^ vetyatomia, alempaa alkyyliryhmää, joka mahdollisesti voi olla substituoitu hydroksiryhmällä, tai aminoryhmää, ja n lukua 1 tai 2, jolloin siinä tapauksessa, että ne merkitsee lukua 2, symbolit X, Y, R^ ja eivät samanaikaisesti saa olla vetyato-me j a, sekä niiden suolat orgaanisten ja epäorgaanisten happojen kanssa ovat erittäin sopivia käytettäväksi glukoosintoteamiseen tarkoitettuihin koetusliuskoihin.
Koetusliuskojen tai koetuskalvojen valmistus kaavan 1' mukaisia yhdisteitä käytettäessä tapahtuu samoin kuin suomalaisessa patentissa 55 185 (pat.hak.n:o 295/73) on selostettu, minkä yhteydessä myös siinä ilmoitettuja ainekoostumuksia voidaan käyttää.
Keksinnön mukaisia indikaattoreja voidaan myös käyttää yhdessä o-tolidiinin kanssa, ilman että siitä aiheutuisi enempää häiriöalttiutta koetuspapereissa. Tämä yhdistelmä johtaa usein parempiin väriporrastuksiin. Määritettäessä glukoosia veressä tai veriheras-sa saadaan tällöin käytetystä indikaattorista I* riippuen keltaisesta punaiseen ulottuvia värisävyjä (glukoosipitoisuuden ollessa pieni); suuremmilla glukoosipitoisuuksilla tulevat o-tolidiiniradikaalin sinisestä vihreään ulottuvat värit esille.
Paitsi aikaisemmassa patentista mainitut fosfaatti- ja sitraatti-puskurit tulevat myös vähemmän käytetyt puskurit, kuten esim. 3,3-dimetyyliglutaraatti, mellitaatti ja etyleenidiamiinitetraetikka-happo sekä niinsanotut Good-puskurit kysymykseen, mikäli ne ovat pH-alueella 4,5-7 toimivia.
Yleisen kaavan 1' mukaiset yhdisteet ovat uusia, ja niitä valmistetaan sinänsä tunnetulla tavalla siten, että 11 59245
a) yleisen kaavan II
X'T^'| fnrH f11»
H
jossa X merkitsee samaa kuin edellä,
mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan yleisen kaavan III
Z -(CH2)n-y-<!1 (III) Y R2 jossa Y, n, R^ ja R2 merkitsevät samaa kuin edellä ja Z esittää reaktiokykyistä ryhmää, mukaisen yhdisteen kanssa, tai
b) yleisen kaavan IV
ΎΊγίΓΊ αν)
(CH2)n-C-Z
Y
jossa X, Y, Z ja n merkitsevät samaa kuin edellä, mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan V
^R1 H-N^ 1 (V) ^R2 jossa R1 ja R2 merkitsevät samaa kuin edellä, mukaisten yhdisteiden kanssa, jolloin reaktiojakson mielivaltaisessa vaiheessa karbatsolirenkaan 3-asemaan liitetään nitroryhmä, joka sen jälkeen pelkistetään ami-noryhmäksi, ja näin saadut yhdisteet I» haluttaessa muutetaan orgaanisten tai epäorgaanisten happojen avulla suoloiksi.
Halogeeniatomeina tulevat fluori, kloori, bromi ja jodi kyseeseen, sopivimmin kuitenkin kloori.
Alemmat alkyyliryhmät sisältävät 1-4 hiiliatomia.
5 59245
Yleisen kaavan II mukaisten yhdisteiden reaktio yleisen kaavan III mukaisten yhdisteiden kanssa suoritetaan tehottomassa liuottimessa, kuten esim. tolueenissa, vahvojen emästen (esim. natriumamidin) läsnäollessa. Yleisten kaavojen IV ja V mukaisten yhdisteiden välisissä reaktioissa on tarkoituksenmukaista käyttää jälkimmäisten yhdisteiden ylimäärää, niin että liuottimien käyttö tulee tarpeettomaksi.
Reaktiokykyiset ryhmät Z ovat halogenideja, erikoisesti klorideja ja bromideja, sekä alkyylisulfonaatteja, tosylaatteja, brosylaatte-ja tai alempia, 1-3 hiiliatomia sisältäviä alkoksiryhmiä.
Reaktion mielivaltaisessa vaiheessa suoritettava nitraus saadaan aikaan tavallisilla nitrausvälineillä edullisesti jääetikassa ja typpihapossa. Nitroryhmä voidaan sen jälkeen pelkistää katalyyttisestä, esimerkiksi Raney-nikkelin avulla, aminoryhmäksi.
Kaavan 1' mukaiset yhdisteet muutetaan yleensä hapoilla yksinkertaisiksi tai kaksoissuoloiksi.
Happoina tulevat kyseeseen esimerkiksi seuraavat: Suolahappo, rikki happo, fosforihappo, bromivetyhappo, boorihappo, etikkahappo, oksaalihappo, maitohappo, sitruunahappo, omenahappo, bentsoehappo, malonihappo, maleiinihappo, meripihkahappo, voihappo, propionihappo.
Seuraavat esimerkit selventävät keksintöä.
Esimerkki 1 9- (karbamidometyy li) -3-aniinokarbatsoli 29,83 g (0,1 moolia) 9-(karbetoksimetyyli)-3-nitrokarbatsolia hydra-taan vedyllä 375 ml:ssa 6-normaalista, 10 ml Raney-nikkeliä sisältävää ammoniakin metanoliliuosta neljän tunnin ajan lämpötilassa 50°C ja 10 atm. paineessa. Kun katalyytti on erotettu suodattamalla ja liuotin haihdutettu tyhjössä, saadaan 27,3 g kirkkaanruskeita kiteitä. Kolminkertainen uudelleenkiteyttäminen isopropanolista antaa tulokseksi 8,23 g (34,3 % teoreettisesta) puhdasta 9-(karbami-dometyyli)-3-aminokarbatsolia beige-värisinä kiteinä (sulamispiste 22G-222°C); emäliuoksista voidaan saada lisää tuote-eriä.
Kokonaissaanto noin 50 % teoreettisesta.
6 59245 Lähtöaineena käytettyä nitrokarbatsoliesteriä saadaan seuraavasti: 50,6 g (0,2 moolia) 9-(karbetoksimetyyli)-karbatsolia (sp. 97°C) liuotetaan 200 ml:aan jääetikkaa sekoittimella, jäähdyttimellä, tiputussuppilolla ja lämpömittarilla varustetussa 500 ml:n kolmi-kaulapullossa, ja liuos lämmitetään öljyhauteella lämpötilaan 80°C. Sen jälkeen esterin etikkahappoiseen liuokseen tiputetaan hämmentäen lämpötilassa 80°C seos, jossa on 13,2 ml 65 %:sta typpihappoa (n.
0,2 moolia) ja 40 ml jääetikkaa, ja liuosta hämmennetään edelleen 30 minuuttia. Huoneenlämpötilaan jäähdytyksen jälkeen reaktioseos kaadetaan 1 litraan vettä, muodostuneet kiteet suodatetaan erilleen, pestään hyvin vedellä ja tummanvihreä raakatuote kiteytetään uudelleen asetonista. Saadaan 25,8 g (4l,l % teor.) 9~(karbetoksimetyyli )-3-nitrokarbatsolia keltaisina kiteinä, joiden sp. on 163°C. Emäliuoksesta voidaan erottaa lisää tuotetta.
Esimerkki 2 9~(g-dimetyyliaminoetyyli)-5-aminokarbatsoli 1 litran ravistuskojeessa hydrataan 25 g (0,0725 moolia) 9-(g-dimetyyliaminoetyyli )-3-nitrokarbatsolia 200 ml:ssa 4,2-normaalista, n. 17 g Raney-nikkeliä sisältävää ammoniakin metanoliliuosta kolme tuntia 16 minuuttia lämpötilassa 23-25°C· Kun katalyytti on erotettu suodattamalla ja pesty metanolilla, saadaan suodoksen haihdutuksen jälkeen 12,75 g öljymäistä tuotetta. Tämä liuotetaan isopropa-noliin ja liuokseen lisätään tiputtamalla eetteristä suolahappoa jäällä jäähdyttäen. Muodostunut dihydrokloridi suodatetaan erilleen ja kuivataan kuivauskaapissa lämpötilassa 60°C. Saadaan 16,25 g 9-(g-dimetyyliaminoetyyli)-3-aminokarbatsolia dihydrokloridina. Etanolista suoritetun uudelleenkiteyttämisen jälkeen erotetaan 12,4 g (50,8 % teor.) värittömiä kiteitä, joiden sp. on 248°C (hajoaa).
Lähtöaineena käytettyä nitrokarbatsolijohdannaista saadaan seuraavasti:
Sekoittimella, lämpömittarilla, jäähauteella ja tiputussuppilolla varustettuun 500 ml:n kolmikaulapulloon viedään 23,7 g (0,1 moolia) 9~(g-dimetyyliaminoetyyli)-karbatsolia (valmistettuna kirjoituksen: 0. Eisleb, Ber. dtsch. chem. Ges. 7_4, 1433/19^+1 mukaan) 100 ml:ssa jääetikkaa ja seokseen tiputetaan lämpötilassa 15-20°C liuos, joka sisältää 8,28 ml (0,2 moolia) vedetöntä typpihappoa 50 ml:ssa jääetikkaa. Reaktioseosta hämmennetään edelleen tunnin ajan lämpötilassa 20-25°C ja kaadetaan sen jälkeen 500 ml:aan jäävettä. Saostuneet vihreät kiteet suodatetaan erilleen, pestään hyvin vedellä ja kuiva- 7 59245 taan kuivauskaapissa lämpötilassa 80°C. Saanto 32,4 g (94 % teor.); sp. 190°C (hajoaa).
Esimerkki 3 9~(6-dimetyyliaminoetyyli)-6-kloori-3-aminokarbatsoli 38 g (0,1 moolia) 9~(β-dimetyyliaminoetyyli)-6-kloori-3-nitrokarbatso lia hydrataan 1 litrassa metanolia, johon on lisätty 30 ml Raney-nikkeliä, kolmen tunnin ajan lämpötilassa l8-23°C ja normaalipaineessa. Kun laskettu vetymäärä on imeytynyt, hydraus lopetetaan ja käsittelyä jatketaan. Raakatuote liuotetaan 200 ml:aan metanolia, liuokseen kaadetaan sitä jäähdyttäen 150 ml 6-normaalista eetteristä suolahappoa ja dihydrokloridin saostuminen saatetaan täydelliseksi lisäämällä eetteriä. Suola liuotetaan veteen, liuosta käsitellään kolme kertaa hiilellä samalla lämmittäen ja kirkastunut liuos suodatetaan erilleen. Kun suodosta on haihdutettu, jäännös liuotetaan metanoliin ja dihydrokloridi saatetaan kiteytymään lisäämällä eetteriä. Suodatuksen ja kuivauksen jälkeen saadaan 30,1 g (80,1 % teor.) 9-(β-dimetyyliaminoetyyli)-6-kloori-3-aminokarbatsolia di-hydrokloridina, sp. 280°C (hajoaa).
Lähtöaineena käytettyä nitroyhdistettä valmistetaan seuraavasti:
Sekoittimella, jäähdyttimellä, lämpömittarilla, Claisen-kolonnilla, tiputussuppilolla ja kalsiumkloridiputkella varustetussa 500 ml:n kolmikaulapullossa suspendoidaan 10 g (0,24 moolia) natriumamidia 100 ml:aan kuivaa tolueenia, liuos lämmitetään lämpötilaan 90°C, siihen lisätään ensin 48 g (0,24 moolia) 3-kloorikarbatsolia (valmistettu saattamalla 1 mooli karbatsolia ja 1,3 moolia sulfuryyliklo-ridia reagoimaan keskenään kloroformissa; tuotos 40 % teoreettisesta), ja sitten tiputtamalla 30 minuutin aikana 26,8 g (0,25 moolia) β-di-metyyliaminoetyylikloridia samalla hämmentäen, ja seosta keitetään viisi tuntia paluuvirtausta käyttäen. Seoksen jäähdyttyä siihen tiputetaan varovasti 30 ml vettä, tolueenikerros erotetaan, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan. Saadaan 65 g ruskeaa öljyä. Tyhjössä suoritetun tislauksen jälkeen saadaan 59,6 g (91,5 % teor.) 9-( β-dimetyyliaminoetyyli)-6-kloorikarbatsolia keltaisena öljynä, jonka kiehumispiste on 198-201°C.
54,4 g (0,2 moolia) saatua karbatsoliyhdistettä liuotetaan 250 ml:aan jääetikkaa ja liuokseen tiputetaan 50 minuutin aikana liuos, s 59245 joka sisältää 16,6 ml (0,4 moolia) typpihappoa (d = 1,51) 100 ml:ssa jääetikkaa, pitäen liuos jäähdytettynä lämpötilaan 5-10?C. Kun seosta on hämmennetty 1 tunti lämpötilassa 0°C, muodostunut nitro-yhdiste suodatetaan erilleen, pestään 2 x 50 ml :11a eetteriä, ja raakatuote kiteytetään uudelleen metanoli/vesi- (2:1) tai asetoni/ vesi- (1:0,7) seoksesta. Saadaan 40,3 g (53,1 % teor.) 9-(e-di-metyyliaminoetyyli)-6-kloori-3-nitrokarbatsolia keltaisina kiteinä, joiden sp. 217°C (hajoaa). Emäliuoksesta voidaan saada vielä lisää tuotetta.
Esimerkki 4 9-(E-karbohydratsidoetyyli)-3-aminokarbatsoli Jäähdyttimellä ja lämpöhauteella varustettuun 100 ml:n pyöreään keittopulloon viedään 2,68 g (0,01 moolia) 9-(β-karbometoksietyyli)- 3-aminokarbatsolia sekä 50 ml hydratsiinihydraattia ja seosta keitetään 2,5 tuntia paluuvirtausta käyttäen. Sen jälkeen hydratsii-nihydraatin ylimäärä tislataan pois ja jäännös kiteytetään uudelleen isopropanolista. Saadaan 2 g (74,5 % teor.) 9-(g-karbohydratsido-etyyli)-3-aminokarbatsolia, sp. 172-174°C.
Lähtöaineena käytettyä 3-aminokarbatsolia saadaan seuraavasti:
Sekoittimellä, jäähdyttimellä, lämpömittarilla ja kaasunjohtoputkel-la varustetussa 1 litran kolmikaulapullossa suspendoidaan 100 g (0,46 moolia) 9~(B-syaanietyyli)-karbatsolia 1 litraan metanolia, ja suspensioon johdetaan 12 tunnin ajan kuivaa kloorivetyä, jolloin tapahtuu nitriilin täydellinen liukeneminen ammoniumkloridin samalla saostuessa. Tämä suodatetaan erilleen ja suodokseen lisätään 500 ml vettä. Saostuneet kiteet suodatetaan erilleen ja pestään klori-dittomaksi vedellä. Saadaan 105,7 g (92,4 % teor.) 9-(β-karbometok-sietyyli)-karbatsolia värittöminä kiteinä, joiden sp. on 64-66°G.
68,25 g (0,27 moolia) metyyliesteriä liuotetaan 360 ml:aan jääetikkaa sekoitt imellä, jäähdyttimellä, lämpömittarilla ja tiputussuppi-lolla varustetussa 1 litran kolmikaulapullossa, jonka jälkeen liuokseen tiputetaan 30 minuutin aikana liuos, joka sisältää 22,5 ml 65 $:sta typpihappoa ^5 ml:ssa jääetikkaa, siten, ettei lämpötilaa 30°C ylitetä. Seosta hämmennetään edelleen 30 minuutin ajan lämpötilassa 20°C, ja seos kaadetaan sen jälkeen 2 litraan vettä. Vihreät kiteet suodatetaan erilleen ja pestään vedellä sekä eetterillä. Saadaan 71,65 g (89,2 % teor.) 9-(β-karbometoksietyyli)-3-nitro- 9 59245 karbatsolia kirkkaanvihreinä kiteinä, joiden sp. 125-126°C.
52 g (0,174 moolia) saatua nitroesteriä hydrataan sen jälkeen 2 litran sekoituslaitteessa seoksessa, joka käsittää 500 ml absoluuttista metanolia, 1 litran 4-normaalista ammoniakin metanoliliuosta ja 30 ml Raney-nikkeliä, neljä tuntia 20 minuuttia lämpötilassa 25°C. Katalyytin erilleensuodattamisen, haihdutuksen ja kuivauksen jälkeen saadaan 45 g aminoesteriä.
Raakatuote kiteytetään uudelleen isopropanolista. Saadaan 38,6 g (82,6 % teor.) kiteistä 9~(3- karbamidoetyyli ) -3-aminokarbatso-lia, jonka sp. 132-134°C.
Esimerkki 5 9-(B-hydroksietyyliaminokarbonyylietyyli)-3-aminokarbatsoli Jäähdyttimellä ja lämpöhauteella varustettuun 50 ml:n pyöreään keittopulloon viedään 2,68 g (0,01 moolia) 9~(β-karbometoksietyyli)- 3-aminokarbatsolia (valmistettu esimerkin 4 mukaan) ja 20 ml etanoli-amiinia, ja seosta kuumennetaan paluuvirtausta käyttäen. Sen jälkeen tislataan etanoliamiinin ylimäärä pois höyrysuihkuimulaittees-sa ja jäännös liuotetaan metanoliin. Kun liuokseen on lisätty meta-nolista suolahappoa, muodostuneet kiteet suodatetaan erilleen ja pestään eetterillä. Saadaan 2,44 g (73,2 % teor.) 9~(β-hydroksi-etyyliaminokarbonyylietyyli)-3-aminokarbatsolia hydrokloridina, jonka sp. on 217-2l8°C.
Esimerkki 6 9—(Y-dimetyyliaminopropyyli)-3-aminokarbatsoli
Karbatsolista ja γ-dimetyyliaminopropyylikloridista saadaan yhdenmukaisesti esimerkin 3 kanssa 9~(y -dimetyyliaminopropyyli)-karbatso-lia. _/Saanto 70,5 % teoreettisesta, kellertävää öljyä, kp. 200-210°C_1_7. Tämän yhdisteen nitraus antaa tulokseksi 62,5 % teoreettisesta okranväristä 9—(y -dimetyyliaminopropyyli)-3-nitro-karbatsolia, sp. 196-207°C. Tämä välituote hydrataan Raney-nikkelil-lä ammoniakin metanoliuoksen läsnäollessa lämpötilassa 25-30°C, ja vapaa emäs muutetaan dihydrokloridiksi. Saanto 76,4 % teoreettisesta 9-(y-dimetyyliaminopropyyli)-3-aminokarbatsolia värittöminä kiteinä, joiden sp. on 245°C (hajoaa).
10 59245
Esimerkki 7 9-(γ-dimetyyliaminopropyyli)-6-kloori-3-aminokarbatsoli 3-kloorikarbatsolista ja γ-dimetyyliaminopropyylikloridista saadaan yhdenmukaisesti esimerkin 3 kanssa 9“(ydimetyyliaminopropyyli)-3-kloorikarbatsolia. /Saanto 74,2$ teoreettisesta, keltaista öljyä, kp.^ 240-245^^7 Yhdisteen nitraus antaa tulokseksi 67,3 % (teor.) keltaista 9~(γ-dimetyyliaminopropyyli)-6-kloori-3-nitrokarbatsoiia, jonka sp. 219°C. Hydraus Raney-nikkelillä metanolissa sekä muuttaminen dihydrokloridiksi tuottaa 73,6 % (teor.) 9-(Y-dimetyyliamino-propyyli)-6-kloori-3-aminokarbatsolia kellertävinä kiteinä, joiden sp. 276°C (hajoaa).
Esimerkki 8
Koetuspaperi glukoosin toteamiseksi virtsassa
Suodatuspaperi kostutetaan seuraavan koostumuksen omaavalla liuoksella ja kuivataan lämpötilassa 50°C.
1,2-m sitraattipuskuria, pH 5 50,0 ml 9-(γ-dimetyyliaminopropyyli)-6-kloori-3- aminokarbatsoli-dihydrokloridia 0,75 g
Glukoosioksidaasia (104 U/mg) 0,25 g
Peroksidaasia (63 U/mg) 0,05 g
Vettä ad. 100,0 ml
Koetuspaperi reagoi glukoosipitoisen virtsan kanssa esiintyvien värisävyjen ulottuessa punaoranssista mustanpunaiseen. Eri alkuperää olevat virtsat samoin kuin saman glukoosiväkevyyden omaavat aset-etikkahappopitoiset virtsat eivät osoita mitään merkittävää värisävyn poikkeamaa.
Esimerkki 9
Jos esimerkin 8 aineseoksessa käytetään indikaattorina 0,02 moolia jompaakumpaa seuraavista indikaattoreista, saadaan koetuspapereita, joilla on olennaisesti samat ominaisuudet ainoastaan reaktiovärien ollessa erilaisia: 9-(6 -dimetyyliaminoetyyli)-6-kloori-3-aminokarbatsoli-dihydrokloridi (väriporrastus okrasta seepian kautta mustaan) 9-(B-dimetyyliaminoetyyli)-3-aminokarbatsoli-dihydrokloridi (Väriporrastus keltaisesta seepian kautta mustaan).
11 59245
Esimerkki ΙΟ
Suodatuspaperi kostutetaan seuraavan koostumuksen omaavalla liuoksella ja kuivataan lämpötilassa 50°C.
1-m sitraattipuskuria, pH 6 50,0 ml 9-(g-dimetyyliaminoetyyli)-3-aminokarbatsoli-dihydrokloridia 1}0 g o-tolidiinia 0,¾ g
Glukoosioksidaasia (10¾ U/mg) 0,3 g
Peroksidaasia (63 U/mg) 0,06 g
Natriumlauryylisulfaattia 0,1 g
Etanolia 33,0 ml
Vettä ad 100,0 ml
Glukoosipitoisten virtsojen vaikutuksesta koetuspaperi värjääntyy värisävyporrastuksen ulottuessa keltaisesta oliivinruskean kautta vihreään. Eri alkuperää olevat virtsat samoin kuin saman glukoosi-väkevyyden omaavat asetetikkahappopitoiset virtsat eivät osoita mitään merkittäviä värisävyn väripoikkeamia.
Esimerkki 11
Koetuskalvo glukoosin toteamiseksi veressä
Aineosat:
Polyvinyyliasetaattipropionaattidispersiota ^5,0 g
Natriumalginaatin 1,85 $:sta liuosta 0,5-m fosfaattipuskurissa, jonka pH 5,5 35,0 g
Natriumnonyylisulfaattia liuotettuna 5,0 ml:aan vettä 0,75 g
Glukoosioksidaasia (62,7 U/mg) ^ liuotettuna 10 ml:aan 0,189 g
Peroksidaasia (68,8 U/mg) j vettä 0,235 g o-tolidiinia liuotettuna 2,5 ml:aan asetonia 0,600 g 9-/T6-hydroksietyyli)-aminokarbonyylietyyli7-3~ aminokarbatsoli-hydrokloridia liuotettuna 2,0 ml:aan vettä 0,035 g
Aineosat sekoitetaan hyvin, seosta sivellään PVC-kalvolle 300 ^um paksuksi kerrokseksi ja päällystettä kuivataan 35 minuuttia lämpötilassa 60°C. Kun glukoosipitoista verta tiputetaan kalvolle ja se pyyhitään pois minuutin kuluttua, ilmestyvät kaksi minuuttia sen jälkeen seuraavat lämpötilasta riippumattomat reaktiovärit: 12 59245 60 mg? glukoosia - ruskehtavan punainen 120 mg? glukoosia - ruskeanpunainen l80 mg? glukoosia - tummanoliivinvärinen 240 mg? glukoosia ja enemmän - vihreä värisyvyyden kasvaessa.
Kuviossa 1 on esitetty kaupallisella heijastusfotometrillä lämpötiloissa 20°C ja 35°C mitatut kalibrointikäyrät.
Esimerkki 12
Esimerkin 11 mukaan valmistetut koetuskalvot, joiden aineseokset 9-_/TB-hydroks ie tyyli )-aminokarbonyy lietyyliT-^-aminokarbatsoli-hydrokloridin sijasta sisältävät 0,025 g 9-(g-karbamidoetyyli)-3-ami-nokarbatsolia (A) tai 0,034 g 9-(β-dimetyyliaminoetyyli)-3-amino-karbatsoli-dihydrokloridia (B), reagoivat glukoosipitoisen veren kanssa lämpötilasta riippumatta värjäytyen seuraavasti:
mg? glukoosia A B
60 ruskehtavan punainen beige-värinen 120 oliivinvärinen vihertävän beige 180 ruskehtavan vihreä kellertävän vihreä 240 ja enemmän vihreä värisyvyyden kasvaessa
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2338932A DE2338932C3 (de) | 1973-08-01 | 1973-08-01 | 9-Substituierte 3-Aminocarbazol-Derivate, Verfahren zu ihrer Herstellung sowie deren Verwendung als Indikator für enzymatische Nachweisreaktionen |
| DE2338932 | 1973-08-01 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI228774A FI228774A (fi) | 1975-02-02 |
| FI59245B true FI59245B (fi) | 1981-03-31 |
| FI59245C FI59245C (fi) | 1981-07-10 |
Family
ID=5888551
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI2287/74A FI59245C (fi) | 1973-08-01 | 1974-07-30 | 9-substituerade 3-aminokarbazolderivat anvaendbara som indikatorer vid maetning av enzymatiska reaktioner |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US3975398A (fi) |
| JP (3) | JPS5046192A (fi) |
| AT (1) | AT337174B (fi) |
| BE (1) | BE818332R (fi) |
| CA (1) | CA1032544A (fi) |
| CH (2) | CH589624A5 (fi) |
| DD (1) | DD112833A6 (fi) |
| FI (1) | FI59245C (fi) |
| FR (1) | FR2239461B2 (fi) |
| GB (1) | GB1418598A (fi) |
| HU (1) | HU169456B (fi) |
| IE (1) | IE39641B1 (fi) |
| IT (1) | IT1051364B (fi) |
| NL (1) | NL159659B (fi) |
| SE (2) | SE405969B (fi) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2815926A1 (de) * | 1978-04-13 | 1979-10-18 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neue carbazolyl-(4)-oxy-propanolamin-derivate, verfahren zu ihrer herstellung und diese verbindungen enthaltende arzneimittel |
| JPS6033479B2 (ja) * | 1980-07-30 | 1985-08-02 | 協和醗酵工業株式会社 | 過酸化水素の定量方法 |
| US4394444A (en) * | 1982-06-21 | 1983-07-19 | Miles Laboratories, Inc. | Cofactor indicator compositions |
| US4935346A (en) * | 1986-08-13 | 1990-06-19 | Lifescan, Inc. | Minimum procedure system for the determination of analytes |
| GB9008108D0 (en) * | 1990-04-10 | 1990-06-06 | Bayer Ag | Cycloalkano(b)dihydroindoles and-indolesulphonamides substituted by heterocycles |
| CA2186412A1 (en) * | 1995-10-31 | 1997-05-01 | Katherine S. Takaki | Ethylamino carbazole melatonergic agents |
| US6458326B1 (en) | 1999-11-24 | 2002-10-01 | Home Diagnostics, Inc. | Protective test strip platform |
| US6525330B2 (en) | 2001-02-28 | 2003-02-25 | Home Diagnostics, Inc. | Method of strip insertion detection |
| US6562625B2 (en) | 2001-02-28 | 2003-05-13 | Home Diagnostics, Inc. | Distinguishing test types through spectral analysis |
| US6541266B2 (en) | 2001-02-28 | 2003-04-01 | Home Diagnostics, Inc. | Method for determining concentration of an analyte in a test strip |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2205733C3 (de) * | 1972-02-08 | 1974-07-18 | Boehringer Mannheim Gmbh | 9-(gamma-Ami nopropyl)-3-aminocarbazol |
-
1974
- 1974-07-10 US US05/487,338 patent/US3975398A/en not_active Expired - Lifetime
- 1974-07-22 CA CA205,363A patent/CA1032544A/en not_active Expired
- 1974-07-26 DD DD180161A patent/DD112833A6/xx unknown
- 1974-07-26 IE IE1588/74A patent/IE39641B1/en unknown
- 1974-07-26 SE SE7409707A patent/SE405969B/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-07-29 GB GB3340274A patent/GB1418598A/en not_active Expired
- 1974-07-29 CH CH1042274A patent/CH589624A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-07-29 CH CH113077A patent/CH599155A5/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-07-30 FI FI2287/74A patent/FI59245C/fi active
- 1974-07-30 HU HUBO1510A patent/HU169456B/hu unknown
- 1974-07-30 IT IT25739/74A patent/IT1051364B/it active
- 1974-07-30 NL NL7410218.A patent/NL159659B/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-07-31 FR FR7426565A patent/FR2239461B2/fr not_active Expired
- 1974-07-31 AT AT628574A patent/AT337174B/de active
- 1974-07-31 BE BE147152A patent/BE818332R/xx not_active IP Right Cessation
- 1974-08-01 JP JP49088606A patent/JPS5046192A/ja active Pending
-
1977
- 1977-02-07 SE SE7701314A patent/SE436803B/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-11-08 JP JP13403977A patent/JPS5366785A/ja active Granted
-
1980
- 1980-03-12 JP JP3045480A patent/JPS55153766A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SE436803B (sv) | 1985-01-21 |
| AT337174B (de) | 1977-06-10 |
| FI59245C (fi) | 1981-07-10 |
| DD112833A6 (fi) | 1975-05-12 |
| NL159659B (nl) | 1979-03-15 |
| JPS5046192A (fi) | 1975-04-24 |
| IE39641L (en) | 1975-02-01 |
| JPS5715699B2 (fi) | 1982-04-01 |
| CH589624A5 (fi) | 1977-07-15 |
| CA1032544A (en) | 1978-06-06 |
| HU169456B (fi) | 1976-11-28 |
| SE7701314L (sv) | 1977-02-07 |
| US3975398A (en) | 1976-08-17 |
| FR2239461A2 (fi) | 1975-02-28 |
| CH599155A5 (fi) | 1978-05-12 |
| BE818332R (fr) | 1975-01-31 |
| ATA628574A (de) | 1976-10-15 |
| SE405969B (sv) | 1979-01-15 |
| IE39641B1 (en) | 1978-11-22 |
| FI228774A (fi) | 1975-02-02 |
| SE7409707L (fi) | 1975-02-03 |
| IT1051364B (it) | 1981-04-21 |
| NL7410218A (nl) | 1975-02-04 |
| GB1418598A (en) | 1975-12-24 |
| JPS55153766A (en) | 1980-11-29 |
| FR2239461B2 (fi) | 1978-06-30 |
| JPS5366785A (en) | 1978-06-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU781213B2 (en) | 8-(anilino)-1-naphthalenesulfonate analogs and their use in analyte detection assays | |
| US4385114A (en) | Oxidation indicators comprising 3,3',5,5'-tetraalkylbenzidine compounds | |
| WO1999001447A1 (fr) | Derives de diaminorhodamine | |
| FI59245B (fi) | 9-substituerade 3-aminokarbazolderivat anvaendbara som indikatorer vid maetning av enzymatiska reaktioner | |
| HUT71703A (en) | Method for determining analite with pqq-depending dehydrogenase | |
| JPS5813398A (ja) | 過酸化水素もしくは過酸化水素を形成する基質またはペルオキシダ−ゼもしくはペルオキシダ−ゼのように作用する物質を検出するための剤および方法 | |
| US3822285A (en) | 9-(ypsilon-aminopropyl)-3-aminocarbazole | |
| EP0038205B1 (en) | Method for determination of peroxide and test reagent therefor | |
| US4396714A (en) | N-Sulfoalkylaniline derivatives | |
| US5378634A (en) | Labelling color for detecting methamphetamine | |
| JP2701090B2 (ja) | 被酸化性呈色試薬 | |
| JPS63246356A (ja) | 新規な尿素誘導体及びこれを発色成分として用いる測定法 | |
| US3988208A (en) | 9-Substituted 3-aminocarbazole compounds and test strip indicator compositions | |
| US3947377A (en) | Stabilized indicator compositions containing 9-γ-aminopropyl)-3-aminocarbazole | |
| US4737466A (en) | N-acyldihydroresorufin derivatives, processes for their preparation, reagents containing them and the use thereof for determining hydrogen peroxide, peroxidate-acting compounds or peroxidase | |
| JPH07117545B2 (ja) | 検査試料中のリチウム検定のための比色法と試薬 | |
| US4711963A (en) | 4-amino-2-methyl-3-phenyl-1-(2,4,6-trichlorophenyl)-3-pyrazolin-5-one | |
| JPH0770462A (ja) | 水溶性メチレンビスジアルキルアニリン誘導体及びその塩類並びにそれらを用いた過酸化物質定量用組成物 | |
| JPS62234070A (ja) | アミノアンチピリン誘導体及びその使用法 | |
| US5194389A (en) | Naphthol derivatives, processes for their production and their use | |
| JPH0244519B2 (fi) | ||
| JPS631939B2 (fi) | ||
| JPH05262716A (ja) | 被酸化性呈色試薬 | |
| EP0404526A1 (en) | Oxidizable color producing reagent | |
| CS273302B2 (en) | Quick tests for demonstration and determination of hydrogen peroxide and substances reacting during hydrogen peroxide or oxidatively active substances formation |