CS272929B1 - Combined prs 416-plasmid coding thermostable alpha-amylase's increased production in streptomycetes - Google Patents
Combined prs 416-plasmid coding thermostable alpha-amylase's increased production in streptomycetes Download PDFInfo
- Publication number
- CS272929B1 CS272929B1 CS40889A CS40889A CS272929B1 CS 272929 B1 CS272929 B1 CS 272929B1 CS 40889 A CS40889 A CS 40889A CS 40889 A CS40889 A CS 40889A CS 272929 B1 CS272929 B1 CS 272929B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- amylase
- combined
- plasmid
- streptomycetes
- alpha
- Prior art date
Links
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 title abstract description 18
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 title abstract description 18
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 title abstract description 18
- 241001655322 Streptomycetales Species 0.000 title abstract 2
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 4
- 241000203783 Thermomonospora curvata Species 0.000 abstract description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 3
- 241000828254 Streptomyces lividans TK24 Species 0.000 abstract description 2
- 239000004753 textile Substances 0.000 abstract description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 abstract 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 abstract 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 12
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 5
- 101150057950 aph gene Proteins 0.000 description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 241000892502 Streptomyces lividans 1326 Species 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000002361 compost Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Vynález se týká rekombinováného plasmidu pRS41ó kódujícího zvýšenou produkci terTaSftjWTnfc alfa-amylázy ve streptomycetách.
Alfa-amyláza, enzym štěpící alfa-1,4 vazbu glukosového polymeru škrobu je průmyslovým fermentem, je využíván v radě výrob. Jedním z průmyslových odvětví je textilní průmysl, kde zejména termostabilní alfa-amyláza je s výhodou používána při barvení látek.
Gen kódující termostabilní alfa-amylázu ve streptomycetách nebyl dosud klonován. Již dříve byly připraveny geny kódující alfa-amylázu v bacilech.
Podstatou vynálezu je rekombinovaný plasmid pRS416 kódující produkci termostabilní alfa-amylázy streptomycetovou buňkou, charakterizovaný vloženým fragmentem chromozómové DNA kmene Termomonospora curvata o velikosti 8,3kb a restrikční mapou.
Ke konstrukci plasmidu pRS4-l6 byl použit parciální restrikt chromosomové DNA kmene Thermomonospora curvata. Kmen T..-curvata byl získán z Československé sbírky mikroorganismů v Brně, kde je veden pod katalogovým číslem CCM 3352. Tento kmen, který byl izolován z kompostu, produkuje řadu termostabilních enzymů a mezi nimi také termostabilní škrob ztekucující alfa-amylázu. Gen kódující alfa-amylázu je v chromosomu T.--curvata přítomen pouze v jedné kopii.
Při konstrukci plasmidu kódujícího termostabilní alfa-amylázu bylo postupováno následujícím způsobem:
Jako replikon byl použit nízkokopioýplasmid pIJ6l (Thompson et al. 1982), který se replikuje v hostitelské buňce kmene Streptomyces lividans 1326, a jeho deriváty v maximálním počtu 6 až 8 kopií na buňku. 8,3kb insert obsahující tam gen kódující produkci termostabilní alfa-amylázy, byl získán parciálním štěpením chromosomu Thermomonospora curvata, restrikční endonukleázou Sau 3AI. Vysoká produkce termostabilní alfa-amylázy byla zajištěna zesílením přepisu tam genu. Zesíleni přepisu tam genu bylo dosaženo jeho spojením se silným promotorem aph genu přítomného na plasmidu (aph gen kóduje resistenci k neomycinu). aph gen byl Štěpen restrikční endonukleázou BamHI a ligován in vitro s pomocí T4- DNA ligázy s proximální oblastí tam genu, která obsahuje rovněž BamHI zásahové místo. Restrikční endonukleáza štěpí aph gen v protein kódující oblasti aph genu. Obdobně lze využít i další restričkní místo pro restrikční endonukleázu SphI. Klonovaný tam gen má zachován vlastní aktivní promotor, vazebné místo na ribosomy a sekvenci kódující signální peptid, který umožňuje průchod termostabilní alfa-amylázy cytoplasmatickou membránou a sekreci aktivního proteinu do média.
Provedenými delecemi in vitro v 8,3kb klonovaném fragmentu a klonováním do dalších streptomycetových vektorů bylo zjištěno, že tam gen je umístěn v 2,65kb velkém restrikčním fragmentu ohraničeném zásahovými místy pro restrikční endonukleázy BamHi-HindlII. Transkribce tam genu probíhá ve směru BamHI-HindlII.
Na výkresu je uvedena restrikční mapa plasmidu podle vynálezu. Šrafovaná část představuje vložený fragment chromosomu Thermomonospora curvata s genem kódujícím produkci termostabilní alfa-amylázy (křížkované). Z vektorové molekuly plasmidu pIJ561 (slabá čára) je znázorněna jen část v těsné blízkosti insertu. Šipka ukazuje směr transkribce tam genu.
Molekulová hmotnost sekretované termostabilní alfa-amylázy je 62 000 g/Mol a enzym má teplotní optimum 67 °C, vydrží však krátké zahřátí až na 90 °C.
Dosud nebyl izolován a klonován žádný gen kódující termostabilní alfa-amylázu ve streptomycetách.
Rekombinovaný plasmid pRS4l6 je uchován v buňkách kmene Streptomyces lividans TK24 v Československé sbírce mikroorganismů University J. E. Purkyně v Brně pod číslem
Claims (1)
- Hekombinovaný plasmid pRS4l6 kódující produkci termostabilní alfa-atnylázy, charakterizovaný vloženým fragmentem chromosomové DNA kmene Therraomonospora curvata o velikosti 8,3kb a restrikční mapou,
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS40889A CS272929B1 (en) | 1989-01-23 | 1989-01-23 | Combined prs 416-plasmid coding thermostable alpha-amylase's increased production in streptomycetes |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS40889A CS272929B1 (en) | 1989-01-23 | 1989-01-23 | Combined prs 416-plasmid coding thermostable alpha-amylase's increased production in streptomycetes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS40889A1 CS40889A1 (en) | 1990-06-13 |
| CS272929B1 true CS272929B1 (en) | 1991-02-12 |
Family
ID=5336083
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS40889A CS272929B1 (en) | 1989-01-23 | 1989-01-23 | Combined prs 416-plasmid coding thermostable alpha-amylase's increased production in streptomycetes |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS272929B1 (cs) |
-
1989
- 1989-01-23 CS CS40889A patent/CS272929B1/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS40889A1 (en) | 1990-06-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Collmer et al. | Cloning and expression of a Thermomonospora YX endocellulase gene in E. coli | |
| JP3210315B2 (ja) | プロテアーゼ欠損 | |
| Gilbert et al. | Production and secretion of proteins by streptomycetes | |
| Manoil et al. | A simple screen for permissive sites in proteins: analysis of Escherichia coli lac permease | |
| Nagahari et al. | Secretion into the culture medium of a foreign gene product from Escherichia coli: use of the ompF gene for secretion of human beta‐endorphin. | |
| Kodaira et al. | The dnaX gene encodes the DNA polymerase III holoenzyme τ subunit, precursor of the γ subunit, the dnaZ gene product | |
| Beguin et al. | Identification of the endoglucanase encoded by the celB gene of Clostridium thermocellum | |
| JPH0829091B2 (ja) | ハイブリッドｐｍａ配列の製造方法及び該方法に使用するベクター | |
| GB2133408A (en) | Method for improving the production of proteins in bacillus | |
| US5232841A (en) | Expression vectors containing a bacillus brevis signal sequence | |
| CN109071615A (zh) | 用于在微生物中产生蛋白质的工程化核糖体启动子 | |
| Parro et al. | Effect of glucose on agarase overproduction by Streptomyces | |
| Hazlewood et al. | Endoglucanase E, produced at high level in Escherichia coli as a lacZ′ fusion protein, is part of the Clostridium thermocellum cellulosome | |
| Cheah et al. | Secretion of eukaryotic growth hormones in Escherichia coli is influenced by the sequence of the mature proteins | |
| EP0654084A1 (en) | Molecular cloning of the genes reponsible for collagenase production from clostridium histolyticum | |
| Milton et al. | In vitro mutagenesis and overexpression of the Escherichia coli trpA gene and the partial characterization of the resultant tryptophan synthase mutant alpha-subunits. | |
| EP0133756A2 (en) | Vector for expression of polypeptides | |
| US5294542A (en) | Residual protease-III | |
| US6100063A (en) | Procaryotic cell comprising at least two copies of a gene | |
| Rowland et al. | The effect of signal sequences on the efficiency of secretion of a heterologous phosphotriesterase by Streptomyces lividans | |
| Brusilow | Proton leakiness caused by cloned genes for the F0 sector of the proton-translocating ATPase of Escherichia coli: requirement for F1 genes | |
| CS272929B1 (en) | Combined prs 416-plasmid coding thermostable alpha-amylase's increased production in streptomycetes | |
| JPH0669377B2 (ja) | Ｄｎａ塩基配列およびベクタ− | |
| US5643791A (en) | Characterization and structure of an endodglucanase gene of Cellulomonas fimi | |
| Cadenas et al. | Expression of Streptomyces genes encoding extracellular enzymes in Brevibacterium lactofermentum: secretion proceeds by removal of the same leader peptide as in Streptomyces lividans |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20010123 |