CS272562B1 - Industrial strain of fungi cia viceps purfurea (br.)tul.88-ep/1988 for elymoclavine preparation - Google Patents
Industrial strain of fungi cia viceps purfurea (br.)tul.88-ep/1988 for elymoclavine preparation Download PDFInfo
- Publication number
- CS272562B1 CS272562B1 CS305488A CS305488A CS272562B1 CS 272562 B1 CS272562 B1 CS 272562B1 CS 305488 A CS305488 A CS 305488A CS 305488 A CS305488 A CS 305488A CS 272562 B1 CS272562 B1 CS 272562B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- strain
- elymoclavine
- medium
- tul
- preparation
- Prior art date
Links
- DAVNRFCJMIONPO-UHFFFAOYSA-N elymoclavine Natural products C1=CC(C2C=C(CO)CN(C2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 DAVNRFCJMIONPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 20
- IAOSEBXZNXDPEE-UKRRQHHQSA-N elymoclavine Chemical compound C1=CC=C2[C@H]3C=C(CO)CN(C)[C@@H]3CC3=CN=C1[C]32 IAOSEBXZNXDPEE-UKRRQHHQSA-N 0.000 title claims abstract 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 8
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 4
- 241000221751 Claviceps purpurea Species 0.000 claims description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical class N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical class [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 claims 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 12
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 abstract description 10
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 7
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 7
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 abstract description 6
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 abstract 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 19
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 13
- DAVNRFCJMIONPO-UKRRQHHQSA-N Elymoclavine Chemical compound C1=CC([C@H]2C=C(CO)CN([C@@H]2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 DAVNRFCJMIONPO-UKRRQHHQSA-N 0.000 description 10
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 8
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 8
- 239000007739 pm medium Substances 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 4
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 206010028400 Mutagenic effect Diseases 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 2
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 2
- 231100000243 mutagenic effect Toxicity 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- XJOOMMHNYOJWCZ-UHFFFAOYSA-N Agroclavine Natural products C1=CC(C2C=C(C)CN(C2C2)C)=C3C2=CNC3=C1 XJOOMMHNYOJWCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000393427 Cepaea hortensis Species 0.000 description 1
- 241000124232 Claviceps fusiformis Species 0.000 description 1
- 241000237369 Helix pomatia Species 0.000 description 1
- IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N L-cysteine hydrochloride Chemical compound Cl.SC[C@H](N)C(O)=O IFQSXNOEEPCSLW-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- YSEXMKHXIOCEJA-FVFQAYNVSA-N Nicergoline Chemical compound C([C@@H]1C[C@]2([C@H](N(C)C1)CC=1C3=C2C=CC=C3N(C)C=1)OC)OC(=O)C1=CN=CC(Br)=C1 YSEXMKHXIOCEJA-FVFQAYNVSA-N 0.000 description 1
- HDKDEPNNJHUYAT-UHFFFAOYSA-N [O-][N+](=O)NC(/N)=N/CN=O Chemical compound [O-][N+](=O)NC(/N)=N/CN=O HDKDEPNNJHUYAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UPKBEIIDYOMDQW-UKRRQHHQSA-N agroclavine Chemical compound C1=CC=C2[C@H]3C=C(C)CN(C)[C@@H]3CC3=CN=C1[C]32 UPKBEIIDYOMDQW-UKRRQHHQSA-N 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000018842 conidium formation Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 229960003133 ergot alkaloid Drugs 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000012499 inoculation medium Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229960003642 nicergoline Drugs 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000001054 red pigment Substances 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
SeSení spadá do oblasti farmakologického průmyslu. Týká se nového průmyslového kmene, který v podmínkách kultivace na kapalných médiích produkuje za dobu kratší než dříve popsané kmeny vysoké koncentrace alkaloidu elymoklaviau o dostačující čistotě při vyloučení prodúkoe exooelulárních polysaoharidů a koaidií. Účelem řeSení jé urychlení a zefektivnění fermentační produkce elymoklavinu.Sowing falls within the pharmacological field industry. It concerns a new industrial strain that under cultivation conditions on liquid media over time shorter than the previously described high concentration strains elymoclavium alkaloid is sufficient purity with the exclusion of exooellular polysaoharides and coaidias. Purpose solutions to speed up and streamline fermentation production of elymoclavine.
Description
Vynález se týká průmyslového kmene houby Claviceps purpurea (Fr.)Tul. pro přípravu elymoklavinu. .The invention relates to an industrial strain of the fungus Claviceps purpurea (Fr.) Tul. for the preparation of elymoclavine. .
Alkaloid elymoklavin obecného vzorce IThe alkaloid elymoclavine of formula I
(I) se stal významnou farmaceutickou surovinou pro přípravu semisyntetických derivátů námelových alkaloidů, využívaných jako léčiva, například. Nicergolinu (US Pat. 2835675).(I) has become an important pharmaceutical raw material for the preparation of semisynthetic derivatives of ergot alkaloids used as medicaments, for example. Nicergoline (US Pat. 2835675).
Elymoklavin se vyrábí převážně submersní fermentací pomocí průmyslových kmenů Claviceps purpurea a Claviceps fusiformis.Elymoclavine is produced mainly by submerged fermentation using the industrial strains Claviceps purpurea and Claviceps fusiformis.
Nevýhodami dosud využívaných, kmenů je pomalý nástup produkce, kdy ekonomicky zajímavých koncentrací alkaloidu je dosahováno až 21, den kultivace, dále tvorba doprovodného alkaloidu agroklavinu, který je nutno následnou separací od elymoklavinu odstraňovat, a také produkce exocelulárních glukanů a konidií, které vyvolávají tvorbu emulsí a tak snižují filtravatelnost fermentační tekutiny a komplikují extrakci alkaloidů.The disadvantages of the strains used so far are the slow onset of production, when economically interesting concentrations of alkaloid are reached up to 21 days of cultivation, the formation of the accompanying alkaloid agroclavine, which must be removed by subsequent separation from elymoclavin, and the production of exocellular glucans and conidia. thus reducing the filterability of the fermentation broth and complicating the extraction of alkaloids.
Uvedené nevýhody odstraňuje kmen Claviceps purpurea (Er.)Tul. 88-EP podle vynálezu, který se vyznačuje rychlým nástupem produkce elymoklavinu při submersní kultivaci. Již 16. den fermentaoe produkuje průměrně 2 500 mg elymoklavinu/L· média o čistotě cca 90 %. Přitom se netvoří nežádoucí konidie ani exocelulární glukany.These disadvantages are eliminated by the strain Claviceps purpurea (Er.) Tul. 88-EP according to the invention, which is characterized by a rapid onset of elymoclavin production in submerged culture. Already on day 16, fermentation produces an average of 2,500 mg elymoclavine / L · medium with a purity of about 90%. No unwanted conidia or exocellular glucans are formed.
Vzorky nového kmene jsou uloženy ve sbírce mikroorganismů Mikrobiologického ústavu ČSAV v Praze pod označením Claviceps purpurea pod číslem 88-EP/1988.Samples of the new strain are stored in the collection of microorganisms of the Institute of Microbiology of the Czechoslovak Academy of Sciences in Prague under the designation Claviceps purpurea under number 88-EP / 1988.
Charakteristika nového kmene Claviceps purpurea (Fr.)Tul. 88-EP:Characteristics of the new strain Claviceps purpurea (Fr.) Tul. 88-EP:
Nárůst kultury kmene na tuhém agarovém médiu NL 829 (viz Tabulka 2) (Maier a kol., Planta Medica 40, 104, 1980) je souvislý, slabě zvrásnělý. Mycelium kmene je šedivé až šedobílé. Po delší době kultivace produkuje do půdy hnědočervený pigment. Kolonie kmene v UV světle tmavěmodře fluoreskují. Kmen nesporuluje na pevném ani kapalném médiu. V kapalném médiu tvoří ojedinělé blastospory a arthospory. Mycelium submersní kultury kmene je převážně sfaceliálního typu a je provázeno řídkým výskytem shluků sklerociálních buněk. Na půdách CS2, (viz Tabulka 2) tvoří submersní kultura sespenzní, snadno filtrovatelné mycelium bez nežádoucích, execelulárních. glukanů. Hnědý až hnědočervený rozpustný pigment je tvořen až v konečné fázi kultivace - po 20. dnu. 'The growth of the strain culture on solid agar medium NL 829 (see Table 2) (Maier et al., Planta Medica 40, 104, 1980) is continuous, slightly wrinkled. The mycelium of the strain is gray to off-white. After a longer cultivation period, it produces a brownish-red pigment in the soil. Strain colonies fluoresce in dark blue under UV light. The strain does not sporulate on solid or liquid media. In the liquid medium, they form isolated blastospores and arthospores. The mycelium of the submerged culture of the strain is predominantly of the spacial type and is accompanied by a rare occurrence of clusters of sclerocial cells. On CS2 soils (see Table 2), the submerged culture forms a suspension, easily filterable mycelium without undesired, excellular ones. glucans. The brown to brown-red soluble pigment is formed only in the final stage of cultivation - after the 20th day. '
Kmen podle vynálezu se od původního rodičovského kmene liší ztrátou tvorby konidií, změnou spektra alkaloidů (z ergotoxinů na elymoklavin) a vyšší produkcí alkaloidů.The strain according to the invention differs from the original parent strain by the loss of conidia formation, the change in the spectrum of alkaloids (from ergotoxins to elymoclavine) and the higher production of alkaloids.
Uchovávání kmene Claviceps purpurea 88-EPStorage of Claviceps purpurea 88-EP strain
Krátkodobě lze kmen podle vynálezu uchovávat na agarovém médiu NI 829 (jako 20 až 22 denní kultury) při teplotě 4 °C. Kmen je nutno přeočkovávat po 2 až 3 měsících, delším skladováním se podstatně snižuje jeho životaschopnost.The strain according to the invention can be stored for a short time on NI 829 agar medium (as a 20 to 22 day culture) at 4 ° C. The strain must be revaccinated after 2 to 3 months, prolonged storage significantly reduces its viability.
Pro dlouhodobé uchovávání kmene lze s výhodou použít lyofilizace podle postupu: Konzervační roztok ml> 6Q% rozt. sacharosy sterilizovaného v autoklávu při 115 °C/15 min. 15 mL rozt. sušeného netučného mléka (12,5 g/100 ml dest. H20) sterilizuje se v autoklávu při 105 až 110 °C 10 až 15 min (nesmí zhnědnout), po sterilizaci se oba roztoky sterilně smísí a přidá se promyté mycelium kmene připravené 6 až 8 denní kultivací, na médiu TI promlčíme, rozpl3For long-term storage of the strain, lyophilization can be used advantageously according to the procedure: Preservative solution ml> 60% solution. of sucrose sterilized in an autoclave at 115 ° C / 15 min. 15 mL solution dried skimmed milk (12.5 g / 100 ml dist. H 2 O) is sterilized in an autoclave at 105 to 110 ° C for 10 to 15 minutes (must not turn brown), after sterilization the two solutions are sterile mixed and the washed mycelium of the strain prepared 6 to 8 days of cultivation, expire on TI medium, dissolve
CS 272 562 Bl 2 nine do ampuli, lyofilizujeme, ampule uzavřeme zatavením a uchováváme při 4 °C. Za těchto podmínek si kmen podle vynálezu uchová vitalitu minimálně 1 rok.CS 272 562 Bl 2 nine into an ampoule, lyophilize, seal the ampoules and store at 4 ° C. Under these conditions, the strain according to the invention retains its vitality for at least 1 year.
Suspenzi mycelia kmene podle vynálezu lze v konzervačním roztoku pouze zmrazit a bez lyofilizace ji uchovávat minimálně 6 měsíců při -18 °C. Rozmražením a opětným zmrazením ztrácí kmen životaschopnost.The mycelial suspension of the strain according to the invention can only be frozen in the preservative solution and stored at -18 ° C for at least 6 months without lyophilization. By thawing and re-freezing, the strain loses viability.
Postup získání nového kmene podle vynálezu:Process for obtaining a new strain according to the invention:
Kmen Claviceps purpurea (Fr.)Tul 88-EP byl získán kombinovanou mutační technikou a následujícím testováním asi 500 izolátů (Tab. 1). 'The Claviceps purpurea (Fr.) Tul 88-EP strain was obtained by a combined mutation technique followed by testing of about 500 isolates (Table 1). '
Protoplasty kmenů v průběhu šlechtění byly připravovány následujícím postupem:Protoplasts of strains during breeding were prepared as follows:
Submersní kultivací kmene v médiu TI (viz Tabulka 2) 4 dny za podmínek uvedených v příkladu 1 bylo získáno mycelium, které bylo odstředěno a promyto 2x médiem PM (viz Tabulka 2). Do sterilní baňky (100 mL) se vloží 500 mg vlhké váhy mycelia, přidá 10 mL média PM a 1 až 2 mL roztoku (5 %) gastrické šíávy (helikasa) z hlemýždě zahradního Helix pomatia a za mírného třepání se inkubuje asi 2 h při 28 °C, směs se přefiltruje přes fritu SI a odstředí se (10 min/5 000 rpm). Protoplasty se nashromáždí na hladině, odkud se stáhnou Pasteurovou pipetou. Protoplasty se potom naředí médiem PM a buS se přímo vysévají na médium NL 829, nebo se ozařují UV světlem, popřípadě se na ně působí N-nitro-N'-nitrosomethylguanidinem (NNTG). NNTG se rozpustí v malém množství acetonu a doplní se na koně. 1/mg/mL médiem PM. K 5 mL suspenze protoplastů v médiu PM se přidá 0,5 mL rozt. NNTG. Po 1 h inkubaci při 24 °C ve tmě se protoplasty odstředí, promyjí médiem PM a vysévají na médium NL 829. Samotný proces přípravy protoplastů helikasou vyvolává mutagenní účinky; helikasa je mírným mutagenem (Černá, Mutat. Res. j.43, str 169, (1985)).Submerged culture of the strain in TI medium (see Table 2) for 4 days under the conditions described in Example 1 yielded a mycelium, which was centrifuged and washed twice with PM medium (see Table 2). Place a 500 mg wet weight of mycelium in a sterile flask (100 mL), add 10 mL of PM medium and 1 to 2 mL of a gastric sap solution (helicase) from a Helix pomatia garden snail and incubate with gentle shaking for about 2 h at 28 ° C, the mixture was filtered through an SI frit and centrifuged (10 min / 5,000 rpm). The protoplasts accumulate on the surface, from where they are removed with a Pasteur pipette. The protoplasts are then diluted in PM medium and buS are seeded directly on NL 829 medium, or irradiated with UV light, or treated with N-nitro-N'-nitrosomethylguanidine (NNTG). NNTG is dissolved in a small amount of acetone and made up on horses. 1 / mg / mL with PM medium. To 5 mL of a suspension of protoplasts in PM medium is added 0.5 mL of a solution. NNTG. After 1 h incubation at 24 ° C in the dark, the protoplasts are centrifuged, washed with PM medium and seeded on NL 829. The process of preparation of protoplasts with helicase itself induces mutagenic effects; helicase is a mild mutagen (Black, Mutat. Res. j.43, p. 169, (1985)).
Mutageneze hyfových fragmentů:Mutagenesis of hyphal fragments:
Mycelium připravené obdobně jako pro tvorbu protoplastů se důkladně zhomogenizuje mixérem Ultra-Turrax. Stupeň homogenizace se kontroluje mikroskopicky. Suspenzí takto připravených hyfových fragmentů ozáříme UV světlem a potom se vysévá na médium NL 829.Mycelium prepared similarly to protoplast formation is thoroughly homogenized with an Ultra-Turrax mixer. The degree of homogenization is checked microscopically. The suspension of the hypha fragments thus prepared is irradiated with UV light and then sown on NL 829 medium.
Kolonie, které po cca 23 dnech kultivace při 24 °C vyrostly ze zárodků mutovaných různým postupem, se potom přeočkují na šikmé agary s médiem NL 829 a testují na produkci elymoklavinu kultivačním způsobem na médiu OS2.Colonies that have grown from embryos mutated by various methods after approximately 23 days of culture at 24 ° C are then inoculated onto slant agar with NL 829 medium and tested for elymoclavine production by culture on OS2 medium.
Způsob kultivace kmene C. purpurea 88-EP podle vynálezu pro získání výchozí suroviny k izolaci elymoklavinu a k následné výrobě finálních produktů a léčebných preparátů je doložen v příkladech použití, aniž by se tímto příkladem jakkoliv omezovaly vlastnosti nového kmene, způsob jeho kultivace a použití při průmyslové výrobě.The process for culturing a strain of C. purpurea 88-EP according to the invention for obtaining a starting material for the isolation of elymoclavine and for the subsequent production of final products and therapeutic preparations is illustrated in the application examples without limiting the properties of the new strain. production.
Příklad 1Example 1
Výchozí inokulum kmene pro submersní fermentaoi elymoklavinu se připraví ze zásobní kultury kmene C. purpurea 88-EP narostlé na agarovém médiu NL 829 v Endově zkumavce. Kultura má být stará 21 až 25 dní, nejlépe bez uchovávání v chladničce. Veškeré kultivace kmene podle vynálezu probíhají ve tmě při teplotě 24 °C. Mycelium kultury takto narostlé je velmi křehké a je možno ho snadno smýt uříznutou pipetou do inokulačního média TI (Spala C., ing Genetics of Industrial Microorganisms, eds. Z. Vaněk et al., Elsevier, Amsterdam 1973, str. 393). Zaočkované médium (60 mL ve 300 mL Erlenmayerově baňce) se kultivuje na rotační třepačce (240 rpm, 5,5 cm excentr.) s výhodou 6 dní, popřípadě i déle. Z takto získaného inokula je 5 mL přeneseno do Erlenmayerových baněk (300 mL) s médiem GS2 (60 mL) (AO 199986). Kultury se kultivují 16 až 21 dní. Produkce celkových alkaloidů v 16. dni fermentace činí 2 100 až 2 500 mg/L s obsahem elymoklavinu až 90 %, produkce v 21. dni je 2 800 až 3 500 mg/L s obsahem elymoklavinu 70 až 80 %.The starting inoculum of the strain for submerged fermentation of elymoclavin was prepared from a stock culture of C. purpurea strain 88-EP grown on NL 829 agar medium in an End tube. The culture should be 21 to 25 days old, preferably without refrigeration. All cultures of the strain according to the invention take place in the dark at a temperature of 24 ° C. The mycelium of the culture thus grown is very fragile and can be easily washed with a cut pipette into the TI inoculation medium (Spala C., Genetics of Industrial Microorganisms, eds. Z. Vanek et al., Elsevier, Amsterdam 1973, p. 393). The inoculated medium (60 mL in a 300 mL Erlenmeyer flask) is cultured on a rotary shaker (240 rpm, 5.5 cm eccentric) for preferably 6 days or longer. From the inoculum thus obtained, 5 mL is transferred to Erlenmeyer flasks (300 mL) with GS2 medium (60 mL) (AO 199986). The cultures are grown for 16 to 21 days. The production of total alkaloids on day 16 of fermentation is 2,100 to 2,500 mg / L with an elymoclavine content of up to 90%, production on day 21 is 2,800 to 3,500 mg / L with an elymoclavine content of 70 to 80%.
Příklad 2Example 2
Kultivace probíhá za obdobných podmínek, jak je uvedeno v příkladu 1, pouze místo produkčního média CS2 je použito média 0S25, popřípadě média CS30 a vyššími koncentracemi sacharosy. Tento postup dává o 10 až 20 % vyšší výtěžky elymoklavinu a nástup produkce to3The cultivation takes place under similar conditions as in Example 1, only instead of the CS2 production medium, 0S25 medium or CS30 medium and higher concentrations of sucrose are used. This procedure gives 10 to 20% higher yields of elymoclavine and the onset of to3 production
CS 272 562 Bl hoto alkaloidu je rychlejší, než při použití média CS2.CS 272 562 B1 of this alkaloid is faster than when using CS2 medium.
Tabulka 1 Postup přípravy nového kmene Clavieeps purpurea (Fr. )Tul 88-EP kombinovaným mutačním šlechtěním (na médiu CS2)Table 1 Procedure for preparation of a new strain of Clavieeps purpurea (Fr.) Tul 88-EP by combined mutation breeding (on CS2 medium)
(působení 1 h) a16. den submersní fermentace bkmen P produkoval převážně ergotoxiny cvýeev intaktních protoplastů - potenciální mutagenní účinek helikasy při přípravě protoplastů(action 1 h) and on the 16th day of submerged fermentation b strain P produced mainly ergotoxins c of intact protoplasts - potential mutagenic effect of helicase in the preparation of protoplasts
Tabulka 2Table 2
Složení použitých médií:Composition of used media:
PŘEDMĚT VYNÁLEZUOBJECT OF THE INVENTION
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS305488A CS272562B1 (en) | 1988-05-05 | 1988-05-05 | Industrial strain of fungi cia viceps purfurea (br.)tul.88-ep/1988 for elymoclavine preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS305488A CS272562B1 (en) | 1988-05-05 | 1988-05-05 | Industrial strain of fungi cia viceps purfurea (br.)tul.88-ep/1988 for elymoclavine preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS305488A1 CS305488A1 (en) | 1990-05-14 |
| CS272562B1 true CS272562B1 (en) | 1991-02-12 |
Family
ID=5369484
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS305488A CS272562B1 (en) | 1988-05-05 | 1988-05-05 | Industrial strain of fungi cia viceps purfurea (br.)tul.88-ep/1988 for elymoclavine preparation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS272562B1 (en) |
-
1988
- 1988-05-05 CS CS305488A patent/CS272562B1/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS305488A1 (en) | 1990-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS272562B1 (en) | Industrial strain of fungi cia viceps purfurea (br.)tul.88-ep/1988 for elymoclavine preparation | |
| CN108575556A (en) | A kind of hedgehog hydnum bacterial strain and its selection | |
| DE3104151C2 (en) | ||
| US3038840A (en) | Process for the production of alkaloid derivatives of lysergic acid | |
| RU2118661C1 (en) | Strain of fungus claviceps purpurea (fr) tul - a producer of ergocriptines | |
| KR100754821B1 (en) | Mass production method of mycelium and extracellular polysaccharide of bee Cordyceps sinensis | |
| Shirane et al. | Mineral salt medium for the growth of Botrytis cinerea in vitro | |
| Malinka | Saprophytic cultivation of Claviceps | |
| CS276627B6 (en) | Novel industrial strain of microorganism of species claviceps purpurea(fr) tul. ccm 8059 | |
| CS245153B1 (en) | Strain of acremonium chrysogenum microorganism | |
| EP0304400A2 (en) | Phenanthridine derivatives, process for their preparation and medium for performing the process | |
| FR2550549A1 (en) | NOVEL CLAVINE-PRODUCING STRAIN, PROCESS FOR PREPARING THE SAME, AND MICROBIOLOGICAL PROCESS FOR THE PRODUCTION OF CLAVINE ALKALOIDS | |
| CZ283773B6 (en) | INDUSTRIAL PRODUCTION STRAIN OF CLAVICEPS PURPUREA (Fr)Tul. MICRO-ORGANISM | |
| CS253097B1 (en) | Industrial strain of fungus claviceps fusiformis loveless f 27 cc-4-/85 | |
| Nnoruka | EV J\LUJ\TION Of DTECJ I AND HEXAGON TB KITS USED fOR DIAGNOSIS Of TUBERCULOSJS JN NIGERIA. | |
| CZ279533B6 (en) | INDUSTRIAL PRODUCTION STRAIN OF CLAVICEPS PURPUREA /Fr./Tul. MICRO-ORGANISM | |
| AT269363B (en) | Process for the production of a production strain of a Claviceps purpurea (Fr.) Tul. Culture for the production of ergot alkaloids | |
| CS225272B1 (en) | The new industrial strain of microorganism claviceps purpurea /fr./tul.,ccm f- 721 | |
| CZ282335B6 (en) | High-production strain of penicillium chrysogenum ccm 8197 micro-organism | |
| CN102604838A (en) | Arthrobotrys oligospora strain N and application thereof | |
| CS262188B1 (en) | Strain of microorganism penicillium chrysogenum ccm f 8012 | |
| CZ239691A3 (en) | novel industrial strain of micro-organisms claviceps purpurea (fr.) tul., ccm 8058 | |
| CZ405598A3 (en) | Industrial production strain of micro-organism Claviceps purpurea (Fr.) Tul. | |
| HU195249B (en) | Process for producing ergot alkaloides first of all ergochristine by parasites | |
| CZ282334B6 (en) | High-production strain of penicillium chrysogenum ccm 8196 micro-organism |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20020505 |