CS225272B1 - The new industrial strain of microorganism claviceps purpurea /fr./tul.,ccm f- 721 - Google Patents

The new industrial strain of microorganism claviceps purpurea /fr./tul.,ccm f- 721 Download PDF

Info

Publication number
CS225272B1
CS225272B1 CS164582A CS164582A CS225272B1 CS 225272 B1 CS225272 B1 CS 225272B1 CS 164582 A CS164582 A CS 164582A CS 164582 A CS164582 A CS 164582A CS 225272 B1 CS225272 B1 CS 225272B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
ergocryptine
beta
alpha
alkaloids
tul
Prior art date
Application number
CS164582A
Other languages
Czech (cs)
Inventor
Zdenek Rndr Malinka
Pavel Ing Harazim
Jiri Phmr Spacil
Original Assignee
Malinka Zdenek
Harazim Pavel
Spacil Jiri
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Malinka Zdenek, Harazim Pavel, Spacil Jiri filed Critical Malinka Zdenek
Priority to CS164582A priority Critical patent/CS225272B1/en
Publication of CS225272B1 publication Critical patent/CS225272B1/en

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Vynález se týká nového průmyslového kmene Claviceps purpurea (Fr.) TUL., vyznačující ee při polní kultivaci na žité tvorbou námele s vysokým obsahem alfa-ergokryptinu a beta-ergokryptinu.The present invention relates to a novel industrial strain of Claviceps purpurea (Fr.) TUL. Characterized in that it is cultivated on a field with a high content of alpha-ergocryptin and beta-ergocryptin during field cultivation.

Alfa-ergokryptin a beta-ergokryptin jsou významnými léčivými substancemi a výchozími látkami pro přípravu polosyntetických derivátů s rozšířeným spektrem léčivých účinků. Strukturu alfa-ergokryptinu popsali poprvé Stolí a Hofmann (Helv. Chinu Acta 26, 1570, 1943), strukturu beta-ergokryptinu popsal poprvé Schlientz se sp. (Experientia 23, 991, 1967).Alpha-ergocryptine and beta-ergocryptine are important drug substances and starting materials for the preparation of semisynthetic derivatives with an extended spectrum of therapeutic effects. The structure of alpha-ergocryptin was first described by Stoli and Hofmann (Helv. Chinu Acta 26, 1570, 1943), the structure of beta-ergocryptin by Schlientz sp. (Experientia 23, 991 (1967)).

V současné době jsou v terapii používány lékové formy námelových alkaloidů e přesně definovaným poměrem alfa-ergokryptinu ku beta-ergokryptinu 2 : 1. Ero výrobu alfa a beta-ergokryptinu v průmyslovém měřítku jsou dosud využívány kmeny Claviceps purpurea (Fr.) TUL. nesoucí označení ELO 2 (Strnadové K., Kybal J., Folia Microbiol.Presently, ergot alkaloid dosage forms with a well-defined ratio of alpha-ergocryptine to beta-ergocryptine 2: 1 are used in therapy. Elo production of alpha and beta-ergocryptine on an industrial scale are still used by Claviceps purpurea (Fr.) TUL strains. bearing the designation ELO 2 (Strnadove K., Kybal J., Folia Microbiol.

19, 272 - 280, 1974) a CCM F-508 (Strnadové K., Kybal J;, autorské osvědčení č. 176 803, 1976). Tyto kmeny produkují při ktiltivaci na žitě'v narostlých sklerociích předevěím směs ergokorninu s alfa a beta-ergokryptinem v poměru přibližně 1,2 : 1 a řadu doprovodných alkaloidů v menším množství (ergometrin, laktamové deriváty ergotoxinových alkaloidů, ergotamin). Poměr alfa-ergokryptinu ku beta-ergokryptinu je u těchto kmenů19, 272-280 (1974) and CCM F-508 (Strnadova K., Kybal J .;, Certificate No 176,803, 1976). In particular, these strains produce a mixture of ergocornin with alpha and beta-ergocryptine in a ratio of approximately 1.2: 1 and a number of accompanying alkaloids in smaller amounts (ergometrine, ergamine derivatives of ergotoxin alkaloids, ergotamine). The ratio of alpha-ergocryptine to beta-ergocryptine is in these strains

225 272225 272

225 272 · 1 až 7 : 1. Průměrný hmotnostní obsah alkaloidů ve sklerociích těchto kmenů je 0,424 % sušiny, z toho ergokornin a ergokryptlny tvoří 70 až 80 % a doprovodné alkaloidy 20 až 30 % celkové sumy alkaloidů.225 272 · 1 to 7: 1. The average alkaloid content by weight of sclerotia of these strains is 0.424% of dry matter, of which ergocornins and ergocrypts make up 70 to 80% and accompanying alkaloids 20 to 30% of the total sum of alkaloids.

V terapeutické praxi Široce používané lékové forny, obsahující ergokornin, alfa a beta-ergokryptin a ergokrlatin obsahují přesně definovaný poměr složek ergokornin ku ergokryptinu ku ergokrlatin 1 s 1 : 1 a poměr alfa-ergokryptln ku beta-ergokryptin 2 : 1. Ergokornin a ergokryptlny jsou získávány ze sklerocií kmenů PLO 2 a CCM F-508, ergokristin je získáván ze sklerocií jiného kmene námele označeného MY. Za současného stavu je pro výrobu výěe zmíněných lékových forem limitujícím faktorem nízký obsah beta-ergokryptinu ve sklerociích kmenů PLO 2 a CCM F-5O8. Při výrobě těchto lékových forem nemohou být ergokornin a alfa-ergokryptin plně využity a zůstávají jako komerčně nevyužitelný odpad. Separační a izolační operace, které oddělují ze směsi alkaloidů alfa-ergokryptin a ergokornin ee snahou zachovat původní kvantum beta-ergokryptinu jaou ztrátové a značně prodražují tuto část výroby. Je vyvinut způsob fermentační přípravy námelových alkaloidů e řízeným poměrem ergokornlnu, alfa-ergokryptlnu a beta-ergokryptinu (Kybal J., Malinka Z., Herezím P., Stuchlík J. Spáčil J., Svoboda E., autorské osvědčení č. 202 613, 1980), který je však dosud devizově náročný a vhodný zejména pro operativní pokrytí poptávky po některém z uvedených alkaloidů.In therapeutic practice The widely used dosage forms containing ergocornin, alpha and beta-ergocryptine and ergocrlatin contain a well-defined ratio of ergocornine to ergocryptine to ergocrlatin 1: 1 and a ratio of alpha-ergocryptine to beta-ergocryptine 2: 1. obtained from sclerotia of strains PLO 2 and CCM F-508, ergocristin is obtained from sclerotia of another ergot strain designated MY. In the present state, low beta-ergocryptine content in sclerotia of PLO 2 and CCM F-5O8 strains is a limiting factor for the production of the above-mentioned dosage forms. In the manufacture of these dosage forms, ergocornin and alpha-ergocryptine cannot be fully utilized and remain as commercially unusable waste. Separation and isolation operations that separate alpha-ergocryptin and ergocornin from the alkaloid mixture by trying to preserve the original amount of beta-ergocryptine are unprofitable and make this part of the production much more expensive. A method for fermentation preparation of ergot alkaloids with a controlled ratio of ergocornine, alpha-ergocryptine and beta-ergocryptine has been developed (Kybal J., Malinka Z., Herezim P., Stuchlik J. Spacil J., Svoboda E., Author Certificate No. 202 613, 1980), which is still foreign exchange demanding and suitable especially for the operational coverage of the demand for any of these alkaloids.

Uvedené nedostatky výše zmíněných kmenů námele a fermentačního způsobu výroby beta-ergokryptinu odstraňuje do značné míry vynález, jímž je nový kmen mikroorganismu Claviceps purpurea (Fr.) TUL., uložený v československé sbírce mikroorganismů University J.E. Purkyně, Brno, Tř. Obránců míru 10 pod označením CCM F-721. Uvedený kmen Je předmětem tohoto vynálezu.The aforementioned drawbacks of the abovementioned ergot strains and the fermentation process for the production of beta-ergocryptine are largely overcome by the invention of the new microorganism strain Claviceps purpurea (Fr.) TUL., Deposited in the Czechoslovak collection of microorganisms, University J.E. Purkyně, Brno, Tř. Defenders of Peace 10 under the designation CCM F-721. Said strain is an object of the present invention.

Hlavní výhodou nového kmene je při kultivaci na žité vysoká produkce suny alkaloidů ve sklerociích, která dosahuje průměru 0,56 % sušiny biomasy, snížená tvorbě doprovodných alkaloidů, které tvoří průměrně 8 % sumy alkaloidů a vysoká tvorba žádoucích alkaloidů alfa a beta-ergokryptinu (průměrně 92 % suqy alkaloidů) a zejména vysoké tvorba dosud nedostatkového beta-ergokryptinu, který je tvořen ve eměei s alfa-ergokryptlnem v poměru průměrně 1 : 1,15. Tento poměr alfa a beta-ergokryptinu umožňuje zhodnotit i dosud nevyužitelné zásoby přebytečného alfa-ergokryptinu a ergo komínu.The main advantage of the new strain is the cultivation on lived high production of suny alkaloids in sclerotia, which reaches an average of 0.56% biomass dry matter, reduced production of accompanying alkaloids, which make up an average of 8% of the sum of alkaloids and high production of the desired alpha and beta-ergocryptin alkaloids. 92% of the alkaloid sulfide), and in particular the high production of hitherto deficient beta-ergocryptine, which is formed in an emulsion with alpha-ergocryptine in an average ratio of 1: 1.15. This ratio of alpha to beta-ergocryptine allows us to assess the still unusable reserves of excess alpha-ergocryptine and ergo chimney.

Popis vlastností nového kmene:Description of new strain properties:

Při eaprofytlckém růstu na sladinové půdě ztužené agarem tvoří houba kolonie z typického sfaceliového vzdušného mycelia. Mycelium má hyfy bohatě větvené a postranní hyfy jsou ukončené konidlogenními buňkami. Bohatě tvořené konldle mají průměrné rozměry 7x4 mikrometru. Mycelium je téměř bílé, starší kultury Jeou slabě růžovofialově pigmentované. Při parazitlckém růstu na žité tvoří houba středněUpon eaprophytic growth on wort reinforced with agar, the fungus forms colonies of typical Sphelium air mycelium. The mycelium has richly branched hyphae and the lateral hyphae are terminated by congenic cells. Richly formed cords have an average size of 7x4 micrometers. Mycelium is almost white, older Jeou cultures are slightly pink-violet pigmented. In parasitic growth to rye fungus forms moderately

225 272 tmavá, hnědofialově pigmentovaná eklerocle o váze v rozmezí 0,09 až 0,56 g.225 272 dark, brownish-violet pigmented eclerocle weighing between 0,09 and 0,56 g.

Ve ekleroclích, vznikajících při parazitickém růstu na žitá jsou blosyntetlcky tvořeny námelové alkaloidy v množství 0,36 až 0,73 % sušiny biomasy při průměrném obsahu 0,56 %. 90 až 95 % sumy alkaloidů je tvořeno aašsí alfa a beta-ergokryptinu při pomšru elfe-ergokryptinu ku beta-ergokryptinu 0,9 : 1 až 1,8 : 1 s průměrem 1,15 · 1. Doprovodné alkaloidy jsou ergokornin, ergokryptamy, ergometrin a ergosin tvořící dohromady 5 až 10 % sumy alkaloidů.In eclerocles resulting from parasitic growth on rye, ergot alkaloids are produced blosynthetically in an amount of 0.36 to 0.73% dry matter biomass with an average content of 0.56%. 90 to 95% of the sum of alkaloids consists of ase alpha and beta-ergocryptine at an elf-ergocryptine to beta-ergocryptine ratio of 0.9: 1 to 1.8: 1 with a diameter of 1.15 · 1. The accompanying alkaloids are ergocornin, ergocryptams, ergometrine and ergosine together constituting 5 to 10% of the sum of the alkaloids.

Nový průmyslový produkční kmen Claviceps purpurea (Fr.) TUL. byl vyšlechtěn z původního produkčního kmene PLO 2. Sklerocium tohoto kmene bylo převedeno do saprofytické kultury, byla provedena monokonidiová izolace, od jednotlivých monokonidiových izolátů připravena suspense konidií, která byla ozařována UV zářením o výkonu 15 <J . m2. s“1 po dobu 240 sekund. Živé konidie byly opětně monosporicky izolovány á suspense konidií opětně ozařována UV zářením o stejném výkonu po uvedenou dobu.New industrial production strain Claviceps purpurea (Fr.) TUL. The sclerotium of this strain was transferred to a saprophytic culture, monoconidium isolation was performed, and conidia suspension was prepared from individual monoconidium isolates, which was irradiated with UV radiation of 15 <J. m 2 . s “ 1 for 240 seconds. Live conidia were re-isolated monosporically and the conidia suspension re-irradiated with UV radiation of the same power for the indicated time.

Celý postup ozařování kombinovaný monokonidiovou izolací byl opakován 5 krát. Po ukončeném ozařování bylo získáno 1 117 monokonidiových izolátů, které byly jednotlivě testovány na tvorbu akleroeií na žitě. Získaná sklerocia byla zanalyzována pro zjištění tvorby námelových alkaloidů. Z vybraných sklerocií, u nichž se projevila průkazně zvýšená tvorba suny alkaloidů, zvýšená tvorba beta-ergokryptinu provázené sníženou tvorbou ergokorninu nebo alfa-ergokryptinu byly připraveny saprofytické kultury, dále monokonidiové izoléty a ty opět ozařovány UV zářením. Postup ozařování kombinovaný s monokonidiovou izolací byl opakován 3 krát. Po ukončeném ozařování bylo získáno 453 monokonidiových izolátů, které byly jednotlivě testovány na růst na žitě. Ze získaných sklerocií byl vybrán kmen, který se vyznačuje snížením tvorby ergokorninu a doprovodných alkaloidů na minimum, zvýšenou tvorbou beta-ergokryptinu, zvýšenou tvorbou celkové sumy alkaloidů ve sklerociích a uspokojivými výnosy při produkčním pěstování na žitě. Genetická stabilita uvedených vlastností byla potvrzena opakovaným pěstováním na žitě ve dvou vegetačních obdobích. Tento kmen je předmětem vynálezu.The entire irradiation procedure combined with monoconjugate isolation was repeated 5 times. After irradiation ceased, 1,117 monoconidium isolates were obtained, which were individually tested for the formation of acleroeia on rye. The sclerotia obtained was analyzed for the formation of ergot alkaloids. Saprophytic cultures were prepared from selected sclerotia, which showed significantly increased production of sun alkaloids, increased production of beta-ergocryptine accompanied by reduced production of ergocornine or alpha-ergocryptine, monoconidium isolates and irradiated with UV radiation again. The irradiation procedure combined with monoconjugate isolation was repeated 3 times. After irradiation, 453 monoconidium isolates were obtained, which were individually tested for growth on rye. From the sclerotia obtained, a strain was selected which was characterized by minimizing the formation of ergocornin and accompanying alkaloids, increased production of beta-ergocryptine, increased production of the total sum of alkaloids in sclerotia, and satisfactory yields in rye production. Genetic stability of these properties was confirmed by repeated cultivation on rye in two growing seasons. This strain is the subject of the invention.

Způsob kultivace nového kmene pro získání výchozí suroviny k izolaci námelových alkaloidů je dále doložen v příkladě použití, aniž by se jím způsob kultivace, použití a vlastnosti nového kmene jakkoli omezovaly.The method of cultivating a new strain to obtain a starting material for the isolation of ergot alkaloids is further exemplified in the use example without limiting the method of cultivation, use and properties of the new strain in any way.

Příklad použití:Example of use:

Ze eaprofytlckých kultur kmene na ztužené sladinové živné půdě se připraví suspense konidií, kterou se naočkuje 6 až 8 kg předem vysterilizovených vlhkých obilek s přídavkem terciárního citronanu amonného, která jsou umístěny ve'vhodných lahvích nebo obalech opatřených zátkou z buničité vaty. Naočkované žitné oblíky se inkubují 18 až 28 dni při teplotě 22 až 28 °C. Během této doby prorostou žitné oblíky sfaceliovým myceliem, které vytváří značné množství konidií. Takto připravenáConidia suspensions are prepared from the strain cultures of the strain on the solidified wort broth, which is inoculated with 6-8 kg of pre-sterilized wet caryopses with the addition of tertiary ammonium citrate, which are placed in suitable bottles or packages fitted with cellulose wadding plugs. The inoculated rye shells are incubated for 18-28 days at 22-28 ° C. During this time, rye dresses will grow through the sphacellia mycelium, which generates a considerable amount of conidia. So prepared

225 272 očkovací látka se uchovává při teplotě 2 až 10 °C. Konidie z této očkovací látky se bezprostředně před infekcí šita suspendují ve vodě. Příslušně neředěnou suspensí koníci ií se pomocí očkovacího stroje naočkují klasy žita ve fázi metání na ploše 1 ha. Po 35 až 60 denním růstu na žitě se provede postupný opakovaný sběr narostlých sklerocií námele. Z 1 ha žita bylo získáno 207 kg suchých sklerocií námele, obsahujících v průměru 0,56 % sumy alkaloidů, že které bylo 92 % tvořeno směsi elfa a bsta-ergokryptinu s poměrem alfa-ergokryptin ku beta-ergokryptin 1,15 J 1.The vaccine is stored at 2-10 ° C. The conidia from this vaccine are suspended in water immediately prior to infection of the sieve. The ears of rye are inoculated with an undiluted slurry at the area of 1 ha using a seeding machine. After 35 to 60 days of growth on rye, successive repeated collection of the ergot sclerotia is performed. From 1 ha of rye, 207 kg of dry ergot sclerotia were obtained, containing on average 0.56% of the sum of alkaloids, which consisted of 92% of a mixture of elf and bsta-ergocryptine with a ratio of alpha-ergocryptin to beta-ergocryptin of 1.15 µl.

Získaná droga byla vyextrahovaná, alfa-ergokryptin a beta-ergokryptin byly vyizolovány a použity pro výrobu ergotoxinu.The drug obtained was extracted, alpha-ergocryptine and beta-ergocryptine were isolated and used to produce ergotoxin.

Claims (1)

PŘEDMĚT VYNÁLEZUSUBJECT OF THE INVENTION Nový průmyslový kmen mikroorganismu Clavicepe purpurea (Fr.) TUL., CCM F-721., vytvářející v polní kultuře na žitě sklerocia s obsahem sumy alkaloidů nejméně 0,36 % vztaženo na sušinu biomasy, s obsahem alfa a beta-ergokryptinu minimálně 90 % sumy alkaloidů a ae vzájemným poměrem alfa-ergokryptinu ku beta-ergokryptinu 0,9 : 1 až 1,8 : 1.A new industrial strain of Clavicepe purpurea (Fr.) TUL., CCM F-721., Forming sclerotia in a field crop on rye with an alkaloid sum content of at least 0,36% based on biomass dry matter, with an alpha and beta-ergocryptine content of at least 90% sum of alkaloids and ae ratio of alpha-ergocryptine to beta-ergocryptine of 0.9: 1 to 1.8: 1. Vytiskly Moravské tiskařské závody, provoz 12, Leninova 21, OlomoucPrinted by Moravian Printing Works, plant 12, Leninova 21, Olomouc Cena: 2,40 KčsPrice: 2,40 Kčs
CS164582A 1982-03-11 1982-03-11 The new industrial strain of microorganism claviceps purpurea /fr./tul.,ccm f- 721 CS225272B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS164582A CS225272B1 (en) 1982-03-11 1982-03-11 The new industrial strain of microorganism claviceps purpurea /fr./tul.,ccm f- 721

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS164582A CS225272B1 (en) 1982-03-11 1982-03-11 The new industrial strain of microorganism claviceps purpurea /fr./tul.,ccm f- 721

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS225272B1 true CS225272B1 (en) 1984-02-13

Family

ID=5351318

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS164582A CS225272B1 (en) 1982-03-11 1982-03-11 The new industrial strain of microorganism claviceps purpurea /fr./tul.,ccm f- 721

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS225272B1 (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007051651A1 (en) * 2005-11-07 2007-05-10 Ivax Pharmaceuticals S.R.O. INDUSTRIAL PRODUCING STRAIN OF THE FUNGUS CLAVICEPS PURPUREA (Fr.) Tul.
CZ309511B6 (en) * 2019-12-19 2023-03-15 Teva Czech Industries S.R.O. Industrial production strain of the microorganism Claviceps purpurea (Fr.) Tul., CCM8865

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007051651A1 (en) * 2005-11-07 2007-05-10 Ivax Pharmaceuticals S.R.O. INDUSTRIAL PRODUCING STRAIN OF THE FUNGUS CLAVICEPS PURPUREA (Fr.) Tul.
CZ309511B6 (en) * 2019-12-19 2023-03-15 Teva Czech Industries S.R.O. Industrial production strain of the microorganism Claviceps purpurea (Fr.) Tul., CCM8865

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Azcón Germination and hyphal growth of Glomus mosseae in vitro: effects of rhizosphere bacteria and cell-free culture media
JP7360465B2 (en) Bacterial strain producing ergothioneine and method for screening thereof
KR20070015568A (en) Industrial Fermentation Production Method of Chinese Cordyceps Inflorescence Bacillus Bat Moth
CN112970512A (en) Method for cultivating pleurotus tuber-regium sclerotium at medium temperature
CS225272B1 (en) The new industrial strain of microorganism claviceps purpurea /fr./tul.,ccm f- 721
US5349121A (en) Biologically pure mushroom culture and method for mushroom cultivation
CN101238208A (en) Industrial producing strain of the fungus claviceps purpurea (Fr.) Tul.
Sethi et al. Growth and betaine formation in Medicago sativa tissue cultures
CZ2019790A3 (en) Industrial production strain of the microorganism Claviceps purpurea (Fr.) Tul., CCM8865
CS276359B6 (en) NOVEL INDUSTRIAL STRAIN OF MICRO-ORGANISM CLAVICEPS PURPUREA (Fr.)TUL . CCM 8057
CZ287130B6 (en) Industrial production strain of Claviceps purpurea (Fr.) Tul. microorganism
CA1154699A (en) FERMENTATION PROCESS FOR THE PREPARATION OF ERGOT ALKALOIDS, PRIMARILY ERGOCORNINE AND .beta.- ERGOCRYPTINE
CZ283773B6 (en) INDUSTRIAL PRODUCTION STRAIN OF CLAVICEPS PURPUREA (Fr)Tul. MICRO-ORGANISM
CS276627B6 (en) Novel industrial strain of microorganism of species claviceps purpurea(fr) tul. ccm 8059
CZ239691A3 (en) novel industrial strain of micro-organisms claviceps purpurea (fr.) tul., ccm 8058
CZ2023105A3 (en) An industrial production strain of microorganism Claviceps purpurea (Fr.) Tul., CCM9309
CZ279533B6 (en) INDUSTRIAL PRODUCTION STRAIN OF CLAVICEPS PURPUREA /Fr./Tul. MICRO-ORGANISM
Irintoto et al. Effect of humic acid on callus culture of slash pine (Pinus elliottii Engelm)
RU2118661C1 (en) Strain of fungus claviceps purpurea (fr) tul - a producer of ergocriptines
Malinka Saprophytic cultivation of Claviceps
Křen et al. Claviceps purpurea (Ergot): Culture and Bioproduction of ergot alkaloids
RU2188231C1 (en) Strain of fungus claviceps purpurea (fr) tul vkm-f-3662 d as producer of ergocornam
CS242138B1 (en) New industrial steam of microorganism type claviceps purpurea
US3282796A (en) Microbiological process for producing ergobasine
WO2024127299A1 (en) Production of a psychoactive alkaloid and compositions, and production of a fruiting body organism