CS270536B1 - Spůsob pripravy boronátových afinltných noaičov - Google Patents

Abstract

RieSenia ea týká apoaobu pripravy boronátových afinltných noaičov. Vychádza ς aa z amlnoaryl derivátu nosiča aktivovaného diazotáciou na ktorý ea priamo nav^aža nadarivatizovaná^kyealina fenylboronová za vzniku azo-vazby. ,Ria$anie najde uplatnania v biotechnologiách,Akda sa fanylboronátová afinitná nosičeAmožu využil! na izoláciu a purlfikáciu roznych biochemikálií (glykoproteinov, aacharidov, nuklaových kyselin a pod.).

Description

Vynález sa týká spoaobu přípravy boronětových afinitných nosičov priamym připojením nederivativovanej kyseliny fenylborónovej na nosič.

Schopnost kyseliny boritej e jej derivátov Specificky intsragovat s vicinálnymi dielmi sa využívá v režných oblaatiach chémie e blochémle. V chámi! cukrov pri řezných syntézách, pri ktorých interstate boronátu e vicinálnymi diolovýml skupinami umožňuje stereoeelektlvnu reekoiu ostatných hydroxylových akupin. Podstatné významnejSlu a áiršiu aplikáciu májá deriváty kyseliny boritej (najme analogy kyseliny fenylborónovej) imobilizované ns tuhé nosiče nejroznejěej štruktúry. Z takto upravených nosičov es stávajá afinitné adsorbenty vhodné pře chromatogrsfické delenie cukrov/Welth, H. L., '

Wlebers, O. L., Gilham, P. T., Biochemiatry, 9, 4396 (1970)/, nukleozidov a nukleotidov /Rosenberg, M., Wiebers, 3. L., Gilhem, P. T., Biochemistry 11, 3623 (1972)/, ribonukleových kyselin_ta oligorlbonukleotidov /Rosenberg, M., Gilham, P. T., Biochim. Biophys. Acts 246, 337 (1971)/, glykoproteínov /Malia, A. K., Hermanson, G. T., Krohn, R. I., Fujimoto, E. K., Smith, P. K., Anal. Lett., 14 (88), 649 (1981)/, enzýmov, nejma serinových proteáz /Akparov, V. H., Stepanov, V. M., 3. Chromatogr. 155, 329 (1978)/, peptidov /Rose, K., Priddle, 3. D., Offord, R. E., 3. Chromatogr. 210, 301 (1981)/ a katecholamínov /Hansson, C., Agrup, G., Rereman, H., Rosengren, A. M., Rosengren, □ ., 3. Chromatogr. 161, 352 (1978)/, s uplatněním v biochámii, biotechnologii a najma v medicine.

V sáčaenoetl je rozprecovenýoh niekolko spůeobov přípravy boronátových afinitných adsorbentov. V nich ea využivajá dva základné deriváty kyaeliny fenylborónovej: 4-vinylbenzén-borónová kyselina a m-aminofenylborónová kyselina. Prvý derivát sa využívá ako monomár pre radikálová tapolymerizáciu s otylvinylbenzěnom /Barker, S. A., Hatt, B. w., Sommers, p, 3., Woodbury, R. R., Carbohydr. Ree·, 26, 55 (1973)/ alebo styrénem, akrylamidom s N, N-metylénbis(akrylamldom) /Elliger, C. A., Chan, B. G., Stanley, w. L., 3. Chromatogr., 104, 57 (1978)/. Vznlkajá polyméry eo zabudovaným zvyákom kyseliny fenylborónovej. V pripede kyseliny m-aminofenylborónovej se zase využívá nukleofilná reaktivita aminoskupiny na benzénovom jadre v kondenzačných reakolěch typických pre aminoekupiny. Využiyajá ea bučí kondenzačně činidlé typu karbodiimidov /McCutchan, T. F., Gilham, P. T., Soli, 0. Nucleic Acids Res. 2, 853 (1975)/, brómkyán /Bouriotls, V., Galpin, I. □ Dean, P. 0. O., 3. Chromatogr. 210, 267 (1981)/ alebo sa matrice laktivujá naviazanim reaktívnych akupin epoxypropylu /Glad, M., Ohlson, S., Hansson, L., Mansaon, M. 0., Mosbach, K., 3. Chromatogr. 200, 254 (1980)/, acylazidu /Davis, G. £., Suita, R. 0., Kuo, K. C., Gehrke, C. W., Waalkes, T. P., Borak, E., Clin, Chem. 23, 1427 (1977)/ apod.

Společnou nevýhodou věetkých uvedených postupóv je, že vyžadujá SalSiu derivatizáciu kyseliny fenylborónovej, čo znamená vo vačSlne pripadov minimálně dvojstupňová syntézu a okrem toho vyžadujá komplikovaná derivatizáciu matrice, na která sa derivát kyseliny fenylborónovej vlaže. Používaná kondenzačně činidlé (karbodiimid, brómkyán) eá vysoko toxické, drahé a pre prěcu vo vačěom meradle nevhodné.

vedená nedostetky rleěi spSsob přípravy boronátových afinitných nosičov podXa vynálezu. Podstata vynálezu spočívá v tom, že k 1 hmot, diolu amlnoarylderivatizovaného nosiče sa přidá 10 obj. dielov 0,5 až 2 mol.I¹ kyaeliny chlorovodíkové.), zmes ea ochladí na O až 10 °C, prldě ea 1 obj. dlel 1 až 2 fflol.l**l roztoku dusitanu sodného a mieán sa 4 až 7 mlnát pri O až 10 °C, Po důkladném premleěani sa odsaje, premyje destilovanou vodou o teploto O až 10 °C a získaný aktivovaný nosič sa prldě k 10 obj. dielom 0,01 až 0,1 mol.r*l roztoku kyseliny fenylborónovej v bázickom tlmivom roztoku s pH 7,0 až 9,5, mleěa ea pri teplota 10 až 50 °C, 10 až 120 min. Po reakcil sa produkt premyje destilovanou vodoú, 1 až 2 mol.l^ roztokem chloridu aodného, opať destilovanou vodou, etanolom, acetonem a vysuži sa.

Spoaobom přípravy podlá vynálezu aa prlpravia boronátové afinitné adeorbenty priamym připojením nederlvatizovanej kyaeliny fenylborónovej na tuhý nosič po aktivácii po

CS 270 536 Bl vrchových aminoarylskupin bez 3alšej derivatizácie kys. fenylborónovej. Boronátové nosiče připravené spřsobom podlá vynálezu majú 70 až 90 % aminoarylskupin pívodného nosiče derivatizovených na azofenylborónové deriváty. Množstvo naviazanej fenylborónovej kyseliny se stanovilo acidobázickou titráciou.

Uvedené prikledy iluatrujú, eis neobmedzujú predmet vynálezu.

Příklad 1

K 5 g‘ p-aminofenylsulfonylderivátu perlovej celulózy obsahujácej 0,1 mmol.g^-^· aminoaryleulfonyl skupin (Ostsorb AV) ss přidalo 60 ml 0,5 mol.l~l kyseliny chlorovodíkové J a ochladilo ea na O °C. Potom ea přidalo 5 ml 1 mol.l“^ roztoku dusitanu sodného, 7 min ss miešalo pri O °C. Po rýchlom odsátí o premytí studenou destilovanou vodou sa aktivovaný nosič přidal do 50 ml 0,01 mol.l”^ kyseliny fenylborónovej v 0,1 mol.I”¹ uhličitanovom tlmivom roztoku, pH 9,5 a miešal ea pri laboratórnej teplote 2 h. Osrivatizovaný nosič sa premyl destilovanou vodou, 2 mol.l^ chloridem sodným, destilovanou vodou, etanolom, acetónom a vysušil sa. Výsledný produkt - boronátový afinitný adsorbent - obsahoval 0,08 ml.gl (t.j. 80 %) fenylborónových skupin (stanovené acidobázickou titráciou) .

Příklad 2 /

Postupovalo sa ako v příklade 1 s týtR rozdielom, že sa fenylborónová kyselina rozpustila v 0,1 mol.I”·*· fosfátovom tlmivom roztoku, pH 7,0. Produkt obsahoval 0,075 mol.g“^ fenylborónových ekupín, t.j. dsrivatizácia prebehla na 76 %.

Příklad 3

Postupovalo ss ako v příklade 1 s tým rozdielom, že ako nosič ss použil SPHERON ArA (modifikovsný hydroxystyl metakrylátový gél, obsahujúci 0,85 mmól.g¹ aminoarylskupín). Produkt obsahoval 0,7 mmol.g^ fenylborónových ekupín, t.j. derivatizácia prsbshla na 84 %.

Riešenie nájde uplatnenie v biotechnológiách, kde se fenylboronátové sorbenty móžu využit na izoláciu a purifikáciu roznych biochamikálií (glykoproteinov, sacharidov, nukleových kyselin).

Claims (1)

1. PREDMET VYNÁLEZU

   Sposob přípravy boronátových .afinltných nosičov, vyznačujúci ea tým, že k 1 objemovému dielu aminoarylderivatizovaného nosiča ea přidá 10 objemových dielov 0,5 až 2 mol.l“^ kyeoliny chlorovodíkovéj, ochladí sa na o až 10 °C, přidá sa 1 objemový disl 1 mol.1! dusitanu sodného, 4 až 7 min ss mieša při O až 10 °C, odsaje se, prsmyjs sa destilovanou vodou o teplote O až 10 °C a aktivovaný nosič ss přidá do 10 objemových dielov 0,01 ež 0,1 mol.l”^ roztoku kyseliny fenylborónovej s pH 7,0 až 9,5 e nechá sa reagovat pri teplote 10 až 50 °C 10 až 120 min.