CS269939B1 - Rekombinované plasmidy pSA27 a pSA28 kódu jící syntézu alfa amylázy ve etreptomycetách - Google Patents
Rekombinované plasmidy pSA27 a pSA28 kódu jící syntézu alfa amylázy ve etreptomycetách Download PDFInfo
- Publication number
- CS269939B1 CS269939B1 CS878305A CS830587A CS269939B1 CS 269939 B1 CS269939 B1 CS 269939B1 CS 878305 A CS878305 A CS 878305A CS 830587 A CS830587 A CS 830587A CS 269939 B1 CS269939 B1 CS 269939B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- psa28
- psa27
- strain
- plasmids
- dna
- Prior art date
Links
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 title claims abstract description 25
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title claims abstract description 12
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 title claims description 7
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 title claims description 7
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 title claims description 7
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 8
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 claims description 8
- 241000187398 Streptomyces lividans Species 0.000 claims description 7
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 claims description 7
- 241000187213 Streptomyces limosus Species 0.000 claims description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 claims description 5
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims description 5
- 241000828254 Streptomyces lividans TK24 Species 0.000 claims description 4
- 230000007023 DNA restriction-modification system Effects 0.000 claims description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims 1
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 3
- NSFFHOGKXHRQEW-UHFFFAOYSA-N Thiostrepton B Natural products N1C(=O)C(C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(C(C)CC)NC(C(C2=N3)O)C=CC2=C(C(C)O)C=C3C(=O)OC(C)C(C=2SC=C(N=2)C2N=3)NC(=O)C(N=4)=CSC=4C(C(C)(O)C(C)O)NC(=O)C(N=4)CSC=4C(=CC)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C(N=4)=CSC=4C21CCC=3C1=NC(C(=O)NC(=C)C(=O)NC(=C)C(N)=O)=CS1 NSFFHOGKXHRQEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 2
- 229930188070 thiostrepton Natural products 0.000 abstract description 2
- NSFFHOGKXHRQEW-AIHSUZKVSA-N thiostrepton Chemical compound C([C@]12C=3SC=C(N=3)C(=O)N[C@H](C(=O)NC(/C=3SC[C@@H](N=3)C(=O)N[C@H](C=3SC=C(N=3)C(=O)N[C@H](C=3SC=C(N=3)[C@H]1N=1)[C@@H](C)OC(=O)C3=CC(=C4C=C[C@H]([C@@H](C4=N3)O)N[C@H](C(N[C@@H](C)C(=O)NC(=C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N2)=O)[C@@H](C)CC)[C@H](C)O)[C@](C)(O)[C@@H](C)O)=C\C)[C@@H](C)O)CC=1C1=NC(C(=O)NC(=C)C(=O)NC(=C)C(N)=O)=CS1 NSFFHOGKXHRQEW-AIHSUZKVSA-N 0.000 abstract description 2
- 229940063214 thiostrepton Drugs 0.000 abstract description 2
- NSFFHOGKXHRQEW-OFMUQYBVSA-N thiostrepton A Natural products CC[C@H](C)[C@@H]1N[C@@H]2C=Cc3c(cc(nc3[C@H]2O)C(=O)O[C@H](C)[C@@H]4NC(=O)c5csc(n5)[C@@H](NC(=O)[C@H]6CSC(=N6)C(=CC)NC(=O)[C@@H](NC(=O)c7csc(n7)[C@]8(CCC(=N[C@@H]8c9csc4n9)c%10nc(cs%10)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(=C)C(=O)N)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)C(=C)NC(=O)[C@H](C)NC1=O)[C@@H](C)O)[C@](C)(O)[C@@H](C)O)[C@H](C)O NSFFHOGKXHRQEW-OFMUQYBVSA-N 0.000 abstract description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 abstract 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 abstract 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 abstract 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 abstract 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 abstract 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000187391 Streptomyces hygroscopicus Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Řešení
ee
týká
«"«kombinovaných
plasmldů
pSA27
a
pSA28
kódujících
syntézu
alfa
smytá
—
zy
vs
strsptomycetácb.
Jsou
charakterizované
přítomností
restrlkčního
fragmentu
chromosomo-
vé
DNA
z
kmene
-
Streptomycee
Umoaus
o
veli
kosti
2,8
kb
u
pSA27
a
3,4
kb
u
pSA28
a
re
—
strikSnfmi
mapami.
Oba
ptasmtdy
byty
připrave
ny
technikou
genové
manipulace
ln
vitro.
Kro
—
mé
produkce
elfa
amylázy
kódují
rekomblnova
—
né
plasmidy
pSA27
a
pSA28
rezistenci
střep
—
tomycerové
bučky
k
antibiotiku
thiostreptonu.
Na
sákladé
restrlkčních
map
téchto
plasmldů
je
možné
genetickou
informaci
pro
syntézu
alfa
a-
mylAzy
z
obou
plasmldů
vydétit
a
přenést
ji
l-
na
jiné
střep
to
my
četové
repllkony.
Plasmid
pSA28
je
uchováván
v
kmenu
Streptomycee
11-
»
‘
vidans
AS28,
který
je
uložen
v
českosloven
ské
sbírce
mikroorganismů
University
J.
E.
Purkyné
v
Bmé
pod
číslem
CCM
4oll.
Plas
—
t
mid
pSA27
je
uchováván
v
kmenu
Streptomy-
>
ces
livldans
AS27,
který
je
uložen
v
Česko
slovenské
sbírce
mikroorganismů
University
J.
E.
Purkyné
v
Bmé
pod
číslem
CCM
4olo.
Description
CS 269939 B1 1
Vynález se týká rekombinovaných plasmidů pSA27 a pSA28 kódujících syntézu alfa amylá-zy ve streptomycetách.
Genetická informace pro ayntézu X —amylázy. nacházející ee zpravidla v chromozomechproducenta, byla přenesena na plaamidovou či fágovou molekulu v připadá několika (K -aroylá-zových genu izolovaných z chromozomů bacilů a klonována v Bacillue subtille (Yamane J. A—gric. Chem. Jap. 54: 887, 198oj Gene 19: 81, 1982; Takelch et al. Agric. Biol, Chem. 47: 159,1983; Joyet et al. FEMS Microbiol. Lett, 21: 358, 1984), v E. coli (Comellis et al. Mol. Gen.Genet. 186: 5o7, 1982; Joet et al. FEMS Microbiol. Lett. 21: 353, 1984; Tsukagoshi et al. Mol.Gen. Genet. 193: 58, 1984), nebo Pseoudomonaa aeruginosa (FUloux et al. FEMS Microbiol. Lett3o: 2o3, 1985). Ve ví ech případech vyčlenění X —amylázového genu na vfcekopiový vektor a je-ho zavedení do bakteriálního hostitele vedlo ke zvýěení produkce X -amylázy ve srovnání s pro-dukcí výchozích kmenů. U streptomycet byl doposud popsán pouze jeden úspéíný pokus o klono-vání X-amylázy. Gen z chromosomu Streptomyces hygroscopicus byl klonován v mnohokopiovémplasmldovém vektoru pU7o2 (McKUlop et al. FEMS Microbiol. Lett. 36: 3, 1986). Vzniklý rekom-blnovaný plasmid pPOD lo39 po vstupu do hostitelská buňky Streptomyces lividans kódoval zvý-íenou produkci X -amylázy hostitelskou buňkou.
Rekomblnované plasmidy pSA27 · pSA28 podle vynálezu kódují syntézu alfa amylázy vestreptomycetách a jsou charakterizované přítomnosti restrikčního fragmentu chromosomové DNA zkmene Streptomyces limosus o velikosti 2,8 kb u pSÁ27 a 3,4 kb u pSA28 a dále restrikčnfmapou znázorněnou na obr, 1 a obr. 2.
Postup přípravy rekombinovaných plssmldů pSA27 a pSA28
Postup přípravy rekombinovaných plasmidů pSA27 a pSA28 měl 4 základní kroky:
Vyhledání a izolace fragmentů chromosomové DNA obsahujících gen kódující ayntézu X -amylázy. X —amylázový gen byl získán z chromosomu S. limosus. Tento kmen při kultivaci na Škrobovýchmédiích produkuje v nízkém množství X—amylázu, jejíž konečným produktem Jsou oligosacharidysložené ze 2 - 5 jednotek glukosy.
Buňky S. limosus byly lyžovány Jysozymem a SDS a chromosomové DNA byla připravena izolač-ní metodou dle Hopwooda a spoL, 1985. Pro zvýěení čistoty chromosomové DNA byla tato čiětěnana konci separační procedury centrifugací v CsCl gradientu. Takto připravená chromosomové DNAbyla částečně žtěpena restrikční endonukleázou Sau3AI nebo Mbol a v sacharosovém gradientubyly odděleny fragmenty o velikosti 2 až é kb. Velikost fragmentů byla kontrolována elektroforetic-ky, elektroforézou restrikčních fragmentů v agarosovém gelu. Včlenění genu pro syntézu X-amylázy do mnohopopiového plasmldového vektoru.
Restrikční fragmenty o velikosti 2 až 4 kb získané parciálním ětěpením chromosomové DNArestrikčnfmi endonukleázaml Sau3AÍ a/ nebo Mbol byly llgovány in vitro enzymem T4 llgázou domolekuly DNA plasmldového vektoru pU622 v jeho Jediném zásahovém místě pro restrikční endo-nukleázu Bgin.
Selekce rekombinovaných plasmidů kódujících X—amylázu z transformované populace streptomyce-tového recipienta.
Rekombinované molekuly plasmldového vektoru pU622 s fragmenty chromosomové DNA S.limosus byty vpraveny transformací do reclplentních protoplastů kmene Streptomyces lividansTK24 a buňky obsahující rekomblnovaný plasmid, kódující syntézu X -amylázy byty selektoványjako. alfa amylázu produkující, thiostrepton rezistentní kolonie. K ověření přítomnosti X -amylázukódujícího genu v rekombinovaných plasmldech byly z transformantů S. lividans produkujících X -amylázu izolovány plasmidové DNA a retransformovány do protoplastů kmene S. lividansTK24.
Restrikční analýza rekombinovaných plasmidů pSA27 a pSA28 kódujících syntézu X -amylázy. Z transformantů S. lividans TK24 produkujících X —amylázu byly izolovány plasmidové
Claims (1)
- 2 CS 269939 B1 DNA o velikosti 9,2 kb (pSA28) a 8,6 kb (pSA27). Restrikční analýza pSA27 a pSA28 prokázala, že rekombinované plasmidy obsahuji restrikčnífragmenty chromosomové DNA S. llmoaua nestejné délky pSA27-2,8 kb a pSA28—3,4 kb a žerestrikční fragmenty kódující produkci ei -amylázy jsou v plasmidech pSA27 a pSA28 v opačnéorientaci. To přináěí důkaz, že gen pro produkci «(-amylázy získaný z chromosomu Stře plotny-ces limosus byt klonován v plasmidech pSA2? a pSA28 i s Jeho regulační oblastí. Insertovanéfragmenty kódující syntézu d-amylázy v rekombinovaných molekulách plasmldů pSA27 a pSA28jsou restrikčné charakterizovány přítomností jediných restrikčních míst pro restrikční endonukleá-zy PvuII, Setu a EcoRI. Vzdálenost mezi PvuII a Sstlt restrikčními místy je l,o kb a vzdále-nost mezi SstH a EcoRI restrikčními místy má délku rovnžž l,o kb. Bylo prokázáno, že zásaho-vá sekvence pro Seti restrikční endonukleázu leží v oblasti DNA kódující syntézu cý -amylázy. Počet kopií plasmldů pSA28 a pSA27 v hostitelské buřiče S. lividans TK24 se pohybujev rozmezí 2o áž 4o kopií v závislosti na kultivačních podmínkách. Vysoký počet kopií zajištújevysokou stabilitu plasmldů pSA27 a pSA28 v hostitelské stře ptomy četové buřiče. Po vnesení plasmldů pSA28 do hostitelského kmene Streptomyces lividans TK24 byl vy-tvořen nový kmen Streptomyces lividans AS28, vykazující jako nové vlastnosti přítomnost mole-kul DNA plasmldů pSA28, schopnost syntézy alfa amylázy a reaistend buněk k thios třep tonu. Kmen Streptomyces lividans AS27, který vznikl přenesením plasmldů pSA2? do hostitelského kmene Streptomyčes lividans TK24, se liěí od kmene Streptomyces lividans AS28 přítomno-stí DNA plasmidu pSA27, ve kterém je gen pro syntézu alfa amylázy klonován v obrácené po-loze ve srovnání s plasmidem pSA28. . Rekombinované plasmidy pSA27 a pSA28 jsou uchovávány v kmenech Streptomyces livi-dans AS27 a AS28, které jsou uloženy v Československé sbírce mikroorganismů UniversityJ. E. Purkynž v Brně pod čísly CCM 4oll a CCM 4olo. Restrikční mapy rekombinovaných plasmldů jsou uvedeny na obr. 1 a 2, silně je vyznačeninzert chromosomové DNA kmene S. limosus kódující produkci o( -amylázy, slabě je vyznačenaDNA plasmldového vektoru pU622. pžSedmčt vynálezu Rekombinované plasmidy pSA27 a pSA28, kódující syntézu alfa amylázy ve streptomyce-táeh charakterizované přítomností restrlkčního fragmentu chromosomové DNA z kmene Streptomy-ces limosus o velikosti 2,8 kb u pSA27 a 3,4 kb u pSA28 a restrikční mapou, uchovávané vkmenech Streptomyces lividans AS27 CCM 4oll a AS28 CCM 4olo. « 2 výkresy
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS878305A CS269939B1 (cs) | 1987-11-19 | 1987-11-19 | Rekombinované plasmidy pSA27 a pSA28 kódu jící syntézu alfa amylázy ve etreptomycetách |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS878305A CS269939B1 (cs) | 1987-11-19 | 1987-11-19 | Rekombinované plasmidy pSA27 a pSA28 kódu jící syntézu alfa amylázy ve etreptomycetách |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS830587A1 CS830587A1 (en) | 1989-10-13 |
| CS269939B1 true CS269939B1 (cs) | 1990-05-14 |
Family
ID=5433414
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS878305A CS269939B1 (cs) | 1987-11-19 | 1987-11-19 | Rekombinované plasmidy pSA27 a pSA28 kódu jící syntézu alfa amylázy ve etreptomycetách |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS269939B1 (cs) |
-
1987
- 1987-11-19 CS CS878305A patent/CS269939B1/cs not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS830587A1 (en) | 1989-10-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105238806B (zh) | 一种用于微生物的CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建及其应用 | |
| Hanada et al. | Isolation and characterization of the Streptococcus mutans gtfD gene, coding for primer-dependent soluble glucan synthesis | |
| Scott | Conserved nodulation genes from the non–legume symbiont Bradyrhizobium sp.(Parasponia) | |
| Rosen et al. | Genes and sites involved in replication and incompatibility of an R100 plasmid derivative based on nucleotide sequence analysis | |
| Gealt et al. | Transfer of plasmids pBR322 and pBR325 in wastewater from laboratory strains of Escherichia coli to bacteria indigenous to the waste disposal system | |
| Josson et al. | Lactobacillus hilgardii plasmid pLAB1000 consists of two functional cassettes commonly found in other gram-positive organisms | |
| Kodaira et al. | The dnaX gene encodes the DNA polymerase III holoenzyme τ subunit, precursor of the γ subunit, the dnaZ gene product | |
| KR20190082318A (ko) | Crispr/cpf1 시스템 및 방법 | |
| CN113957071B (zh) | 一种具有双重启动子和双重分泌信号功能的组合dna片段及其应用 | |
| JP2544710B2 (ja) | β−ラクタマ―ゼの製法 | |
| CN116917485A (zh) | 表达岩藻糖基转移酶的重组微生物和使用其生产2’-岩藻糖基乳糖的方法 | |
| CN112980891A (zh) | 一种基于CRISPR-Cas的大肠杆菌基因组编辑工具 | |
| Biot et al. | The replication, partition and yop regulation of the pYV plasmids are highly conserved in Yersinia enterocolitica and Y. pseudotuberculosis | |
| AU2019388420B2 (en) | DNA-cutting agent | |
| Billington et al. | Identification of a native Dichelobacter nodosus plasmid and implications for the evolution of the vap regions | |
| RU2221042C2 (ru) | ПОЛИНУКЛЕОТИДНАЯ МОЛЕКУЛА, КОДИРУЮЩАЯ БЕЛОК-РЕГУЛЯТОР ВЫРАБОТКИ АВЕРМЕКТИНА В Streptomyces avermitilis (ВАРИАНТЫ), СОДЕРЖАЩИЕ ЕЕ ВЕКТОР КЛОНИРОВАНИЯ И ШТАММ; СПОСОБЫ СКРИНИНГА МУТАЦИИ В РЕГУЛЯТОРНОМ ГЕНЕ, ПОЛУЧЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ КЛЕТОК И ПОВЫШЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ АВЕРМЕКТИНОВ В КУЛЬТУРЕ | |
| CN109295087B (zh) | 一种表达制备udp-葡萄糖-己糖-1-磷酸尿苷酰转移酶的方法 | |
| KR102633804B1 (ko) | 재조합 바실러스 속 미생물 및 이를 이용한 모유올리고당 제조방법 | |
| CS269939B1 (cs) | Rekombinované plasmidy pSA27 a pSA28 kódu jící syntézu alfa amylázy ve etreptomycetách | |
| HK1203970A1 (en) | New actinomycete integrative and conjugative element from actinoplanes sp.se50/110 as plasmid for genetic transformation of related actinobacteria | |
| CN118345107A (zh) | 一种食品级枯草芽孢杆菌168表达系统及异源表达ε-聚赖氨酸的应用 | |
| KR102152142B1 (ko) | Cas10/Csm4를 이용한 사이클릭 올리고아데닐레이트 제조방법 | |
| Chan | Expression and purification of recombinant lysostaphin in Escherichia coli | |
| Catakli et al. | Spontaneous chromosome circularization and amplification of a new amplifiable unit of DNA belonging to the terminal inverted repeats in Streptomyces ambofaciens ATCC 23877 | |
| Braedt | Recombination in recA cells between direct repeats of insertion element IS1 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20001119 |