CS264992B1 - Spdsob přípravy siefovanóho proteinu - Google Patents
Spdsob přípravy siefovanóho proteinu Download PDFInfo
- Publication number
- CS264992B1 CS264992B1 CS881072A CS107288A CS264992B1 CS 264992 B1 CS264992 B1 CS 264992B1 CS 881072 A CS881072 A CS 881072A CS 107288 A CS107288 A CS 107288A CS 264992 B1 CS264992 B1 CS 264992B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- protein
- cross
- weight
- linked
- preparing
- Prior art date
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Vynález sa týká spósobu přípravy sletovaných proteinov a to tak pre účely přípravy štandardných chromolytických substrátov, afinantov proteolytických enzýmov obecného typu, hydrogélov proteinového typu, alebo nosičov k imobilizácii enzýmov a buniek.
Doteraz známe spósoby sietovania proteinov využívajú prevažne homobifunkčné látky typu glutaraldehydu (S. Avrameas, Immunochemistry, 6/1969/43) , alebo heterobifunkčně látky typu 2-chlormetyloxiránu (AO 194 592; AO 218 709). Zatial čo v príprave sieťovania glutaraldehydom vznikajú nedefinované oligomérne a polymérne štruktúry, obsahujúce alfa-nenasýtené aldehydy, ktoré taktiež sa zúčastňujú reakcie sietovania (F. M. Richards, J. R. Knowles,
J. Mol. Biol. 37/1968) (231) Schiffove bázy, ktoré v priebehu sietovania vznikajú, nezaručují stabilitu výsledného produktu. V pripade sietovania 2-chlorometyl-oxiránom je potřebná poměrně vysoká alkalita (pH 14) na premenu intermediárneho chlorohydrinu na oxiránovú skupinu, čo je sprevádzané degradačnými reakciami v primárnej štruktúre proteinu. Navýše uvedená reakcia sietovania je sprevádzaná vysokou tvorbou solí, čo negativné ovplyvňuje hydrodynamické vlastnosti připravovaného proteinového gélu. Pri príprave váčších množstiev sletovaného proteinu za použitia 2-chlorometyloxiránu vznikajú technologické problémy s homogénnou distribúciou lúhu v priereze reakčnej zmesi, čo má za následok nerovnoměrnost zosietovania gélu na jednej straně a lokálnu degradáciu proteinu na vodorozpustné fragmenty v dósledku vysokej alkality na straně druhej.
Uvedené nedostatky odstraňuje postup podlá vynálezu, ktorého podstata spočívá v tom, že v prvom stupni sa protein sieťuje za použitia homobifunkčného činidla odvodeného od L-aminokyselinových zložiek primárnej štruktúry proteinu akým je L-etylester kyseliny 2,6-diizotiokyanátohexánovej, v množstve 0,5 až 10 % hmot. vztiahnuté na hmotnost suchého proteinu, v prostředí roztoku o pH 7 až 12, s výhodou borátového alebo fosfátového pufru, pri teplote 10 až 50 °C po dobu 10 až 120 minút. V druhom stupni sa sletovaný protein vyperie od zložiek tlmivého roztoku a adjustuje pre Salšie použitie. Hydrogél sletovaného proteinu možno použit ako selekčnú pódu k sledovaniu mikr.obiálnych producentov enzýmov proteolytického typu alebo v suchom stave po defibrácii v rýchlootáčkovom mixéri a následnom vysušení a vysitovaní ako afinant k izolácii proteolytických enzýmov zo zmesi enzýmov, alebo ako nerozpustný protein k priprave štandardných chromolytických substrátov k stanoveniu aktivit proteolytických enzýmov v chemickej úpravě so zlúčeninami obsahujícími chromofórové skupiny.
Výhodou uvedeného postupu je skutočnosť, že v priebehu reakcie nedochádza k tvorbě vedlajších produktov, reakcia sieťovania prebieha kontrolované v jednom smere bez tvorby sprievodných soli, umožňuje přípravu nových proteinových gélov v širokom rozsahu fyzikálnych a chemických vlastností pre Specifické potřeby ich využívania. Vysušený sletovaný protein sa dobré skladuje. Podlá reakčných podmienok možno reakciu sietovania viesť tak, aby přednostně reagovali len tiolové skupiny proteinu, alebo tak tiolové, ako aj primárné amino-skupiny proteinu.
Přiklad 1
Lyofilizovaný albumin hovSzieho séra (5 g) sa rozpúšta za miešania na elektromagnetickéj miešačke v 100 ml borátového pufru (10 mmol.l ; pH 12) za přídavku 0,01 ml n-oktanolu.
K rozpustnému proteinu sa přidá 0,5 g etylesteru 2,6-diizokyanátu lyzinu za rýchleho premiešania a reakčná zmes sa vyleje do formy (40x40 cm) o.výške 0,5 cm. Reakcia sietovania sa ukončí po 10 minútach pri 50 °C. Vzniknutý hydrogél sletovaného proteinu sa vyperie v destilovanej vodě od zvyškov borátového pufru. Získaný produkt po vymytí a Salšom napučaní vo vodě má suchú hmotnost 1,1 % a modul elasticity penetrometricky 26 mm.
Príklad2
Postup podlá příkladu 1 s tým rozdielom, že ako protein sa použije ovalbumín. Získaný produkt má suchú hmotnost 1,8 ta modul elasticity penetrometricky 24 mm.
Příklad 3
Postup podlá příkladu 1, s tým rozdielom, že ako protein sa použije kazeín. Reakcia sieťovania sa uskotoční v prostředí fosfátového pufru (40 mmol.I-1; pH 7) a za přídavku 25 mg etylesteru 2,6-diizotiokyanátu L-lyzínu. Reakcia sieťovania sa ukončí po 10 minútach pri 10 °C. Získaný produkt sa za mokra defibruje vo vysokootáčkovom mixéri, premýva destilovanou vodou a etanolom a suší za izbovej teploty (20 °C). Získaný suchý gél sa sítuje na velkosť častíc 0,06 až 0,3 mm napučací objem 33 ml.g 3 a použije ako afinant proteolytických enzýmov (pepsín, trypsin, chymotrypsin) obecného typu.
Vynález má široké uplatnenie predovšetkým v enzýmovom inžinierstve, potravinárstve a v obecnej aplikovanéj mikrobiologii.
Claims (1)
- PREDMET VYNÁLEZUSpósob přípravy sieťovaného proteinu vyznačený tým, že protein sa sieťuje za použitia homobifunkčného činidla odvodeného od L-aminokyselinových zložiek primárnej štruktúry proteinu akým je L-etylester kyseliny 2,6-diizotiokynátohexánovej v množstve 0,5 až 10 % hmot. vztiahnuté na hmotnost suchého proteinu, pri pH 7 až 12 upraveném pomocou roztokov zriedených lúhov alebo kyselin, alebo pomocou tlmivých roztokov 1 až 50 mmol.l 3, s výhodou fosfátových alebo borátových, pri teplote 10 až 50 °C po dobu 10 až 120 minút.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS881072A CS264992B1 (cs) | 1988-02-19 | 1988-02-19 | Spdsob přípravy siefovanóho proteinu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS881072A CS264992B1 (cs) | 1988-02-19 | 1988-02-19 | Spdsob přípravy siefovanóho proteinu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS107288A1 CS107288A1 (en) | 1988-10-14 |
| CS264992B1 true CS264992B1 (cs) | 1989-09-12 |
Family
ID=5344156
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS881072A CS264992B1 (cs) | 1988-02-19 | 1988-02-19 | Spdsob přípravy siefovanóho proteinu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS264992B1 (sk) |
-
1988
- 1988-02-19 CS CS881072A patent/CS264992B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS107288A1 (en) | 1988-10-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3711574A (en) | Copolymers of acrylamide gas | |
| US5514572A (en) | Method to maintain the activity in polyethylene glycol-modified proteolytic enzymes | |
| HoRIUCHI et al. | γ‐Glutamyl Transpeptidase: Sidedness of Its Active Site on Renal Brush‐Border Membrane | |
| Axéan et al. | Chemical fixation of enzymes to cyanogen halide activated polysaccharide carriers | |
| US3619371A (en) | Production of a polymeric matrix having a biologically active substance bound thereto | |
| US4592998A (en) | Process for coupling biological substances by covalent bonds | |
| Fuchsbauer et al. | Influence of gelatin matrices cross-linked with transglutaminase on the properties of an enclosed bioactive material using β-galactosidase as model system | |
| CA1040561A (en) | Cyanogen halide activation of carbohydrates and protein binding thereto | |
| US5976527A (en) | High surface area support having bound latex particles containing oxirane groups for immobilization of substances | |
| DE1944048C3 (de) | Verfahren zur Herstellung eines wasserlöslichen Enzymsystems | |
| US3843446A (en) | Preparation of enzymatically active membranes | |
| Kosakowski et al. | The Subunit Structure of Phenylalanyl‐tRNA Synthetase of Escherichia coli | |
| Silman et al. | Some water‐insoluble papain derivatives | |
| US4245064A (en) | Activated solid carrier and a method of its preparation | |
| JPH05501499A (ja) | 固定化酵素調製品、その製法および使用 | |
| Berger et al. | Cocoonase: III. Purification, preliminary characterization, and activation of the zymogen of an insect protease | |
| US3977941A (en) | Protein-enzyme complex membranes | |
| US3846306A (en) | Bonding of enzymes,enzyme derivatives and other biologically active molecules to polymeric materials | |
| US3985620A (en) | Substrate for determining proteinase | |
| EP0302284B1 (en) | Stabilized enzymes | |
| Kennedy et al. | Preparation of a water-insoluble trans-2, 3-cyclic carbonate derivative of macroporous cellulose and its use as a matrix for enzyme immobilisation | |
| CS264992B1 (cs) | Spdsob přípravy siefovanóho proteinu | |
| US5053225A (en) | Functional organic thin film chemically bonded to biologically active agent | |
| Friess et al. | Insoluble collagen matrices for prolonged delivery of proteins | |
| CA2154013A1 (en) | Analytical element, composition and method using modified apo-horseradish peroxidase |