CS262407B2 - Process for preparing peptides - Google Patents

Process for preparing peptides Download PDF

Info

Publication number
CS262407B2
CS262407B2 CS822017A CS201782A CS262407B2 CS 262407 B2 CS262407 B2 CS 262407B2 CS 822017 A CS822017 A CS 822017A CS 201782 A CS201782 A CS 201782A CS 262407 B2 CS262407 B2 CS 262407B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
resin
boc
tyr
phe
gly
Prior art date
Application number
CS822017A
Other languages
English (en)
Other versions
CS201782A2 (en
Inventor
Maurice Manning
Wilbur Henderson Sawyer
Original Assignee
Ohio Med College
Univ Columbia
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ohio Med College, Univ Columbia filed Critical Ohio Med College
Publication of CS201782A2 publication Critical patent/CS201782A2/cs
Publication of CS262407B2 publication Critical patent/CS262407B2/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/16—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/02—Non-specific cardiovascular stimulants, e.g. drugs for syncope, antihypotensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/15—Oxytocin or vasopressin; related peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/26—Containing cys-cys disulfide bridge between nonadjacent cysteine residues

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

Předmětem vynálezu je způsob výroby peptidů s antagonistickým účinkem vůči anti diuretickému působení argininvasopreslnu, obecného vzorce
Ί 2 3 A 5 6. f 89
CHjj-CO Pha. - Va.1 - Á sn-C y- W- Z - G lY- N4? r\i * 7ά (CHJr c
VÍVI.
s —-s ve kterém
X značí Tyr-X\ Tyr- je D- nebo L-, X‘ značí methylovou, ethylovou, n-propylovou, isopropylov.ou nebo butylovou skupinu,
W značí Pro nebo Л3-Рго a
Z značí L- nebo D-Arg.
Sloučeniny, kde X značí D-Tyr(X‘) a X‘ značí vodík nebo X značí D-Phe, D-Val, D-Leu, D-Ile, D-Arg, D-norvalin, D-norleucin, D-cyklohexyialanin, D-a-aminomáselnou kyselinu, D-theronin nebo D-methionin, W- značí Pro a Z- značí D- nebo L-Arg, působí rovněž jako antagonisté antidiuretické účinnosti argininvasopresinu. Příbuzné sloučeniny, kde X‘ značí vodík, methylovou nebo ethylovou skupinu, W značí Pro a Val- v- poloze je nahrazen Gin- mají antivasopresorický účinek proti arginin vasopresinu.
Vynález se týká způsobu výroby nových peptidů, které antagonizují antidiuretické a/ /nebo vasopresorické působení argininvasopresinu in vivo.
Pokusy nalézt klinicky použitelné syntetické antagonisty s antidiuretickou a/nebo vasopresorickým účinkem in vivo proti argininvasopresinu, antidiuretickému hormonu (ADH), vedly k syntéze a farmakologickému hodnocení stovek analogů neurohypofyzálních peptidů, oxytocinu a vasopresinu.
Analoga, která mohou efektivně antagonizovat in vivo vasopresorickou reakci na ADH, jsou uvedena v pracích, jejichž autorem je Dyckes se spol., v časopise:
J. Med. Chem., roč. 17 (1974), str. 250; Manningem se spol.,
J. Med. Chem., roč. 20 (1977), str. 1228; Bankowskim se spol.,
J. Med. Chem., roč. (1978), str. 850; Kruszynskim se spol.,
J. Med. Chem., roč. 23 (1980), str. 364 a Lowbridgem se spol.,
J. Med. Chem., roč. 21 (1978), str. 313, na které se zde odkazuje.
Kruszynski se spol. uvedl, že [-(β-merkapto-^-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-methyl -tyrosin ]argininvasopresin a (l-^-merkapto-^^-cyklopentamethylenpropionová kyselina )-argminvasopresin jsou účinnými vasopresorickými antagonisty, které mají rovněž velice nízkou antidiuretickou účinnost.
Manning se spol. (1977) popsal syntézu [ 1-desaminopeniciliamin, 4-valin, 8-D-arginin] vasopresinu a Lowbridge se spol. syntézu [ 1- (^merkapto-^-cyklopentamethylenpropionová kyselina, 4-valin, 8-D-arginin]vasopresinu. Obě tyto sloučeniny mají slabou antidiuretickou účinnost a jsou mohutnými antagonisty vasopresorické reakce AVP.
Analoga vasopresinu nebo oxytocinu, která antagonizují antidiuretickou reakci ADH byla popsána Chánem se spol., Science, sv. 161 (1968), str. 280 a J. Pharmacol. Exp. Ther., sv. 174 (1970), str. 541 a sv. 196 (1976), str. 746; Nestorem se spol., J. Med. Chem. sv. 18 (1975), str. 1022 a Larssonem se spol., J. Med. Chem. sv. 21 (1978), str. 746, na které je zde odkazováno. Žádná z uvedených sloučenin nebyla farmakologicky nebo klinicky použitelná jako antidiuretický antagonista.
Syntéza a hodnocení vasopresinových ana log, zahrnujících tyrosin etherifikovaný v poloze 2, valin v poloze 4 a D- nebo L-Arg v. poloze 8, které antagonizují antidiuretickou účinnost ADH in vivo, byla popsána Sawyerem se spol., Science, sv. 212 (1981), str. 49 a Manningem se spol., J. Med. Chem., sv. 24 (1981), str. 701, na které je zde odkazováno.
Syntetické vasopresiny byly uvedeny v následujících amerických patentový spisech č.
371 080 Boissonnas se spol.,
415 805 Siedel se spol.,
418 307 Boissonnas se spol.,
454 549 Boissonnas se spol.,
497 491 Zaoral,
148 787 Mulder se spol.
V US patentu č. 3 371 080 Boissonnas a kolektiv uvádějí, že 2-fenylalanin-8-ornitinvasopresin má vasokonstrikční účinek ekvivalentní přirozeným vasopresinům, avšak nízkou antidiuretickou účinnost. Zbývající odkazy popisují syntetické vasopresiny s vysokou nebo relativně specifickou antidiuretickou účinností.
Syntetické modifikace oxytocinu jsou popsány Manningem v amerických patentových spisech č. 3 691 147 a 3 700 652.
Je tudíž zřejmé, že existuje trvalá potřeba vývoje farmakologicky a klinicky účinných antagonistů antidiuretického účinku argininvasopresinu.
Úkolem vynálezu je získat antagonisty anťidiuretického účinku ADH, které jsou účinné in vivo. Dalším úkolem je získat antagonisty vasopresorické účinnosti ADH, které mají nízkou antidiuretickou účinnost.
Předmětem vynálezu je způsob výroby peptidů obecného vzorce
kde
X představuje Tyr X‘, kde X‘ znamená vodík, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl nebo n-butyl a Tyr je D- nebo L-, D-Phe, D-Val, D-Leu, D-Lle, D-Arg, D-norvalin, D-norleucin, D-cyklohexylalanin, D-a-aminomáselnou kyselinu, D-threonin nebo D-methionin,
W představuje Pro nebo A3-Pro,
Z představuje D- nebo L-Arg, a jestliže X značí Tyr-X‘, pak W značí zl3-Pro, a
Y představuje Val nebo Gin, vyznačující se tím, že se provádí postupem zahrnujícím tyto po sobě následující stupně:
a) zpracovaní Boc-Gly-pryskyřice syntézou v pevné fázi o šesti cyklech deprotekce, neutralizace a kopulace s vybranou aminokyselinou za vzniku odpovídající chráněné heptapeptidylové pryskyřice obecného vzorce
Boc-Phe-Y-Asn-Cy (Bzl) -W-Z (Tos) -Gly-pryskyřice, v němž
Y, W a Z mají výše uvedený význam,
b) zpracování odpovídající chráněné heptapeptidylové pryskyřice vyrobené ve stup ni a) peptidovou syntézou v pevné fázi v cyklu deprotekce, neutralizace a kopulace se sloučeninou obecného vzorce
Bjc-X v němž
X má výše uvedený význam, za vzniku odpovídající terc.butoxykarbonyloktapeptidylové pryskyřice obecného vzorce
Boc-X-Phe-Asn-Cy (Bzl) -W-Z [ Tos) -Gly-pryskyřice v němž
X, Y, W a Z mají výše uvedené významy,
c) amonolýzu odpovídající chráněné oktapeptidylové pryskyřice vyrobené ve stupni b) na odpovídající Boc-oktapeptidový amid obecného vzorce
Boc-X-Phe-Y-Asn-Cy (Bzl) -W-Z (Tos) -Gly-NH2 v němž
X, Y, W a Z mají výše uvedené významy,
d) přeměnu odpovídajícího Boc-oktapeptidového amidu vyrobeného ve stupni c] na odpovídající £-(S-benzylmerkapto)-/3,/?-cyklopentamethylenpropionyl-oktapeptidový amid obecného vzorce
v němž
X, Y, W a Z mají výše uvedené významy, kopulací neutralizovaného, deprotektovaného roztoku odpovídajícího terc.butoxykarbonyl-oktapeptidového amidu s p-nitrofenyl-β~ (S-benzylmer kapto) ,β-cyklopentamethylen-propionátem v přítomnosti monohydrátu N-hydroxybenzotriazolu, a
e) redukci odpovídajícího /^-(S-benzylmerkapto )-β, β-cyklopentamethylen-propionyloktapeptidového amidu, vyrobeného ve stupni d), sodíkem v kapalném amoniaku, a oxidační cyklizaci vzniklé disulfhydrylové sloučeniny ferrikyanidem draselným.
Sloučeniny podle vynálezu je možno používat к antagonizaci antidiuretického nebo/ /a vasopresorického působení AD'H a lze jich používat in vivo.
Na obr. 1 jsou uvedeny osmolality moče jako funkce času u krys .léčených interperitoneálně sloučeninou podle vynálezu.
Na obr. 2 je uvedeno množství moče jako funkce času u krys léčených sloučeninou podle vynálezu.
Sloučeniny získané způsobem podle vynálezu jsou deriváty argininvasopresinu (AVP). Aminokyseliny, pokud není uvedeno jinak, jsou v L-formě. Korelace mezi úplnými názvy a zkratkami je následující:
dAVP,
1-desamino-argininvasopresin;
dPAVP, (l-desaminopeniciiamin) argininvasopresin;
d(CH2)2AVP, [ 1- (^-merkapto-^-cyklopentamethylenpropionová kyselina) ] -argininvasopresin;
dVDAVP,
1-desamino [ 4-valin, 8-D-arginin] vasopresin;
dPDAVP, [1-desamino-penicilamin, 4-valin, 8-D-argininjvasopresin;
d(iCH2)2VDAVP, [ 1- (^-merkapto-^-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 4-vali.n, 8-D-arginin ]vasopresin;
dTyr(Me)AVP, [ l-desa'mino-2- (O-methyl) tyrosin ] argininvasopresin;
dPTyr (Me)AVP, [ l-desaminopenicilamin, 2- (O-methyl) -tyrosin ] argininvasopresin;
d(CH2)’5Tyr(Me)VDAP, [ 1- (^merkapto-^-cyklopentamethy lenpropionová kyselina), 2-O-methyltyrosin, 4-valin, 8-D-arginin]vasopresin;
d(CH2)sTyr(Et) VDAVP, [ 1- (|3-merkapto-|S,i3-cyklopentaniethylenpropionová kyselina), 2-O-ethyltyrosin, 4-valin, 8-D-arginin] vasopresin;
d(CH2)5Tyr(Me)VAPV, [ 1- (/S-merkapto-^S-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-methyl)tyrosin, 4-valin Jarginin-vasopresin;
d(CH2)5Tyr (Et)VAVP, [ 1- [^-merkapto-(3,|íí-cyklope,ntamethylenpropionová kyselina), 2-O-ethyltyrosin, 4-valin] argininvasopresin;
d (CH2) 5Ty г (i-Pr) VD AVP, [ 1- (,|3-merkapto-/3,/?-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-isopropyl)tyrosin, 4-valin, 8-D-arginm[vasopresin;
d [ CH2) 5Tyr (n-Pr) -VDAVP, [l-(/3-merkapto-/y,£-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-n-propyl)tyrosin, 4-valin, 8-D-arginin]vasopresin;
d(CH2)5Tyr(i-Pr)VAVP, [ 1- (/3-merkapto-/J,/3-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-isopropyJ)tyrosin, 4-valin]argininvasopresin;
d(;CH2)5Tyr(n-Pr)VAVP, [ 1- [ /3-merkapto-^/3-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-n-propyl)tyrosin, 4-valin]argininvasopresin, a d (CH2 ] íTyr (Et) V-A3-Pro7-A VP, [ 1- (7i-merkaptij-^,|3-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-ethyl)tyrosin, 4-valin, 7-(3,4-dehydroproplin) ]argininvasopresin;
d(CH2)5-D-Tyr-VDAVP, [l-(/3-merkapto-/J,/S-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-D-ty.rosin, 4-valin, 8-D-argininvasopresin;
d(CH2)5D-Tyr-VAVP, [ 1- [ ^-merkapto-^-cyklopentamethylenpropíonová kyselina), 2-D-tyrosin, 4-valin] argininvasopresin;
d(CH2)5-D-Phez VDAVP, [l-(/3-merkapto-p„éí-cyklopentamethylenproplonová kyselina), 2-D-fenylalanin, 4-valin, 8-D-arginiin] vasopresin;
dí'CH2)5D-Phe VAVP, · [ 1- (j3-merkapto-/3,1íl-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-D-fenylalanin, 4-valin] argininvasopresin;
d(CH2)5[Gly2]VAVP, {l-íjá-merkapto-^ja-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-glycin, 4-valin]argininvasopresin;
d(CH2)5-[D-Ala2]VAVP, [ 1- (,p-merkapto-/J,i3-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-D-alanin, 4-valin]argininvasopresin;
d(CH2)5[D-Val2]VAVP, [ 1- (/í!-merkapto-/!ř,/3-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-D-valin, 4-valin ]argininvasopresin;
d(CH2)5[D-Leu2]VAVP, [ 1- (./S-merkapto-^/ž-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-D-leucin, 4-valin ]argininvasopresin;
d(CH2)5[D-Ile2]VAVP, [ 1- (^-merkapto-^fí-cyklopentamethy lenpropionová kyselina), 2-D-isoleucin, 4-valin] argininvasopresin] a •
d(CH2)5[D-Arg2] VAVP, [ 1- (d-merkapto-^-cyklopentamethylenproplonová kyselina), 2-D-arginin, 4-valin] argininvasopresin.
Účinné peptidy byly připraveny syntézou v pevné fázi, jak je popsáno Bankowskim se spol., (1978), výše; Merrifieldem, J. Am. Chem. Soc., sv. 85, 2149 (1963) a Biochemistry, sv. 3 (1964), str. 1385, Manningem, J. Am. Chem. So.c., sv. 90, 1348, (1968), Manningem se spol. J. Med. Chem., sv. 19, 376, (1976), Lowbridgem se spol. J. Med. Chem., sv. 20, 1173, (1977), Manningem se spol., J. Med. Chem., sv. 16, 975 (1973), Kruszynskim se spol., (1980), výše; Sawyerem se spol., (1981), výše nebo Manningem se spol. (1981), výše.
Peptidy obsahující A3-Pro v poloze 7 byly připraveny rovněž tímto způsobem. Inkorporace A3-Pro do peptidů byla popsána Felixem se spol., J. Peptide Protein Res., sv. 10 (1977), str. 299 a Botosem se spol., J. Med. Chem., sv. 22 (1979), str. 926.
Počáteční pokusy vytvořit antagonistu antidiuretlcké reakce argininvasopresinu (AVP) zahrnovaly syntézu [1-desaminopenicilamln, 4-valin, 8-D-arglnin]vasopresinu (dPVDAVP), popsanou výše Manningem se spol. (1977) a [ 1- (iS-merkapto-/J,fS-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 4-valin, 8-D-arginin]vasopresinu d(CH2)5VDAVP, popsanou. Lowbridgem (1978), výše. Tato analoga se vyznačovala náhradou dvou vodíků na /З-uhlíku v poloze 1 vysoce aktivního a selektivního antidiuiretického peptidu l-desamino[ 4-valin, 8-D-arginin]vasopresinu (dVDAVP), popsaného Manningem se spol., J. Med. Chem., sv. 16, 975 (1973), dvěma methylovými skupinami, popř. cyklopentamethylenovou skupinou. Již dříve bylo ukázáno,že tyto skupiny převádějí vysoce účinného oxytoxického antagonistu 1 desaminooxytocin (dOT), v účinného antagonistu oxytccické reakce na oxytocin, specificky (1-desaminopenicilamin)oxytocin (dPOT) a [l-(,d-merkapto-|3,(S-cyklopentamethylenpropionová kyselina) joxytocin [d(CH2)5OT]. Viz Норе se spol., J. Biol. Chem., sv. 237 (1962), str. 1563, Schulz se spol., J. Med. Chem., sv. 9, (1966), str. 647 a Nestor se spol., J. Med. Chem., sv. 18, (1975), str. 284.
Bylo překvapující, že ani dPVDAVP ani d(CH2)5VDAVP nebyly antagonisty antidiuretické reakce na AVP, ačkoliv· mají 0,1, resp. pouze 0,0001 antidiuretické aktivity dVDAVP. Každá látka však byla významným antagonistou vasopresorické reakce na AVP, vyjádřené jako pA2. рАг značí negativní logaritmus na bázi 10, a to průměru molárních koncentrací antagonisty, ktc/ý sníží specifickou biologickou reakci na 2krát jednotek u antagonisty na hladinu reakce x jednotek agonisty. dPVDAVP a d(CH2)sVDAVP měly antivasopresorické hodnoty pA2 7,82 a 7,68.
Nález těchto vasopresorických antagonistů dPVDAVP a d(CH2)sVDAVP vedl к výzkumu účinků jS,^-dimethyl- a /J/í-cyklopentamethyilenových substitucí v poloze 1 u dalších analog AVP, zejména v kombinaci se substitucí O-methyltyrosinu v poloze 2 vysoce aktivního antidiuretického a vasopresorického agonisty 1-desamino-argininvasopresinu (d10
AVP), v naději na získání antivasopresorického peptidu, dokonce účinnějšího a selektivnějšího než dPVDAVP nebo d(CH2)5VDAVP. Viz Huguenin se spol., Helv. Chem. Acta, sv. 49 (1966), str. 695; Manning se spol., J. Med. Chem., sv. 19 (1976), str. 842 a Law se spol., J. Am. Chem. Soc. sv. 82, (1960), str. 4579.
Objev antidiuretických antagonistů d(СНг)5Tyr(alk)VAVP Sawyerem se spol., (1981) výše, Manningem se spol., (1981), výše, vedl к syntéze dvouanalogů substituovaných v jiné poloze. Zvýšenou antidiuretickou aktivitu vykazovaly různé O-alkyl-D-tyrosinové analogy, Manning se spol., Peptides, Structure, Function, vyd. Dan H. Rich a E. Gross, Pierce Chemical Co (v tisku) a J. Med. Chem. (předloženo к tisku). Nealkylované D-tyrosinové izomery d(CH2)5VDAVP a d(CH2)5VAVP, tj. d(CH2)5D-Tyr-VDAVP a d(CH2)5D-Tyr-VAVP, byly rovněž anti-antidiuretiky. Pokusy zvýšit dále anti-antidiuretickou účinnost a selektivitu vedly к syntéze analog d(CH2)5D-Tyr2VAVP a d(CH2)sD-Tyr2VDAVP obsahujících jiné D-aminokyseliny namísto D-tyrosinu v poloze 2 podle vynálezu.
S překvapením bylo zjištěno Bankowskim se spol., (1978), výše, že [1-desaminopenicilaminjargininvasopresin (dPAVP) a (1-desaminopenicilamin, 2- (O-methyl) tyrosin jargininvasopresin (dPTyr(Me)-AVPj, dPAVP, byl méně účinný než dPVDAVP nebo d(CH2)5VDAVP, avšak dPTyr(Me)AVP měl antivasopresorickou účinnost рАг 7,96 a byl nejúčinnějším známým antivasopresorickým peptidem.
Vliv kombinace β,β-cyklopentamethylenové a O methyltyrosinové substituce v dAVP na antivasopresorickou účinnost byl vyvinut ve vynálezu к přípravě [l-(/3-merkapto-,í3,|S·-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2- (O-methyl) tyrosin ] argininvasopresinu [ d(CH2)5Tyr(Me)AVPj obecného vzorce ·? 2. 3 4 5 6 _ z _ S ;?
C : í. -CO - TyríMct. J-Pho-Gín-Aón - С у ^ro'···'r
C 7\
К (·' ________....___________________—--— o
Tato sloučenina má velmi vysokou antivasopresorickou účinnost a velmi slabou antidiuretickou účinnost jako nemethylovaný 2-tyrosinový derivát d(CH2)5AVP.
Sloučeniny získané způsobem podle vyná lezu, které mají účinnost jako antagonisté antidiuretické účinnosti argininvasopresinu patří к sérii 4-valm-8-argininvasopresinu a mají vzorec I < Λ 3 й 5 6 7 8 9
СЕ1;,СО -Туг (.X+Ph^-V^-Ásn-Cy- Pro-z-vP;-NH.
/'чсь.| č 4 CH.~
L.\ il)
ve kterém
Tyr je D- nebo L- a
X‘ a Z jsou
X‘ Z
Me D-Arg
Et D-Arg
Me L-Arg
Et L-Arg
i-Pr D-Arg
n-Pr D-Arg
i-Pr L-Arg
n-Pr L-Arg
Bu L- nebo D-Arg.
Sloučeniny obecného vzorce II mají složení jako výše, ale Pro v poloze 7 je nahrazen A3-Pro.
Sloučeniny obecného vzorce I jsou analoga dříve uvedeného antagonisty vasopresoríckých reakcí na ADH, [l-(^-merkapto-i/?,^-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 4-valin, 8-D-.arginin]vasopresinu, d(CH2)5VDAVO, Lowbridge se spol., (1978). Ačkoliv nebyl antagonistou antidiuretičkých reakcí na ADH in vivo, byl tento analog kompetitivním antagonistou aktivace ledvinové modulární adenylátové cyklázy pomocí ADH in vitro, Butlen se sp., Mol. Pharmacol., sv. 14 (1978), str. 1 006. Práce Larssona se sp., (1978), výše, ukázala rovněž uskutečnitelnost O-alkyl-tyrosinové substituce, aby se tento typ peptidu přeměnil v antagonistu antidiuretické reakce in vivo.
Sloučeniny obecného vzorce II obsahují jednotku Л3-Рго7, o které se Botos se sp., výše domnívá, že přispívá к vysoké antidiuretické účinnosti některých analog AVP.
Jak se ukázalo při intraperitoneálním podání sloučenin normálně hydratovaným bdělým krysám, (O-ethyl)tyrosinová substituce v poloze 2 ve sloučeninách obecného vzorce I je účinnější než (O-methyl)tyrosinová substituce. (O-propyl)tyrosinové sloučeniny obecného vzorce I mají rovněž mohutnou anti-ADH účinnost, avšak 2-(O-Et)-tyrosinová sloučenina obecného vzorce II je nejúčinnější anti-ADH sloučenina zatím hodnocená. 8-L-argininová analoga jsou účinnější než odpovídající 8-D-argininová analoga.
Zdá se, že vyšší dávky d(CH2)5Tyr (Et)VAVP většinou zcela blokují antidiuretickou účinnost endogenního ADH. Například dávka 30 |Ug/kg D(CH2)5Tyr(Et)VAVP zvýšila vylučování moče na průměrnou hodnotu 27 ml/ /kg za hodinu během druhé hodiny po injekci. Spontánní vylučování moče u samic krys homozygotních pro kmen Brattleboro, který nevylučuje žádný ADH, dosahuje průměru 32 ml/kg za hodinu, Sawyer se sp., Endocrinology, sv. 95 (1974), str. 140.
Důležitost menších strukturálních změn je prokázána nálezem, že odpovídající β,β-diethyl- a β,β-dimethylanaloga d(CH2)5Tyr(Et)VAVP nevykazují detegovatelnou antagonistickou účinnost při intravenózním antidiuretickém testu u krys. Přítomnost 4-valinu přispívá rovněž к antagonistické účinnosti. Substituce 4-glutaminové jednotky v d(<CH2)5Tyr(Et)VAVP vede ke ztrátě antagonistické účinnosti.
Sloučeniny získané způsobem podle vynálezu mající Gin v poloze 4, které antagonizují vasopresorickou reakci na AVP, jsou použitelné při farmakologických studiích úlohy AVP při regulaci krevního tlaku za normálních a patofyziologických podmínek. Klinické aplikace zahrnují využití ve formě diagnostických a terapeutických antihypertenzních činidel. К terapeutickým účelům lze tyto látky použít stejně jako známého antihypertenzíva Captorilu, D. B. Čase se sp., „Progress in Cardiovascular Disseases, sv. 21, (1978), str. 195.
Sloučeniny obecných vzorců I а II jsou velice účinnými antagonisty antidiuretičkých reakcí na ADH. Lze jich tudíž využít při farmakologických studiích o účasti ADH při různých patologických stavech, včetně retence vody. Dále se předpokládá, že by mohly být účinnými a specifickými činidly při léčbě syndromu nevhodné sekrece ADH, tj. při Schwartz-Bertterově syndromu nebo SIADH. Tento syndrom může komplikovat řadu chorob. včetně karcinomů, plicních chorob, intrakraniálních chorob a poranění hlavy, Bartter se sp., Am. J. Med., sv. 42, (1967), str. 790.
Bylo nalezeno, že některé deriváty d(CH2)5VAVP, mající D-aminokyselinu odlišnou od tyrosinu a větší než alanin v poloze 2, jsou účinnějšími antagonisty antidiuretické účinnosti AVP než sloučeniny mající Dnebo L-tyrosinové etherové jednotky nebo D-tyrosinovou jednotku v poloze 2 d(C'H2)5VAVP nebo d,(|C№)5VDAVP.
Výhodnými sloučeninami jsou ty, jejichž substituent v poloze 8 je Arg nebo v poloze 2 je D-Phe, D-Val, D-Leu a D-Ile.
Jak bylo ukázáno pomocí intravenózního podání sloučenin získaných způsobem podle vynálezu normálně hydratovaným bdělým krysám a hydratovaným krysám anestezovanýrn ethanolem, sloučeniny mající v. poloze 2 D-Phe, D-Val, D-Leu nebo D-Ile jako substituenty, mají vysoké hodnoty pA2 a účinné dávky blízké nebo nižší než nejnižší zatím známé účinné dávky.
Sloučeniny mající D-Phe, D-Val, D-Leu nebo D-Iie v poloze 2 a Arg v poloze 8, jsou rovněž čistými antidiuretickými antagonisty, tj. tyto sloučeniny nemají přechodný antidiuretický agonismus. Kromě toho, tyto sloučeniny mají selektivnější účinnost v důsledku vysokého poměru anti-ADH antivasopresorické aktivity než známé sloučeniny.
Sloučenin získaných způsobem podle vynálezu lze používat ve směsi s obvyklými pomocnými látkami, tj. fyziologicky a farmaceuticky přijatelnými organickými nebo anorganickými nosiči, vhodnými pro parenterální nebo enterální aplikaci, které nereagují nepříznivě s účinnými látkami.
Vhodné farmaceuticky přijatelné nosiče zahrnují, nejsou na né však omezeny, vodu, roztoky solí, alkoholy, rostlinné oleje, polyethylenglykoly, želatinu, laktózu, amylózu, stearát hořečnatý, talek, silikagel, viskózní parafin, parfémované oleje, monoglyceridy a diglyceridy mastných kyselin, estery pentaerytritu s mastnými kyselinami, hydroxymethylcelulózu, polyvinylpyrrolidon atd.
Farmaceutické přípravky lze sterilizovat a je-li to požadováno, mísit s pomocnými činidly, například s kluznými látkami, ochrannými látkami, stabilizátory, smáčedly, emulgačními činidly, solemi, ovlivňujícími osmotický tlak, pufry, barvivý, chuťovými a/nebo aromatickými látkami a podobně, které nereagují nepříznivě s účinnými látkami.
Pro parenterální nebo intranazální použití jsou vhodné roztoky, s výhodou vodné roztoky, stejně jako suspenze, emulze nebo implantáty, včetně čípků. Ampulky představují vhodné dávkovači jednotky.
Sloučeniny získané způsobem podle vynálezu jsou obecně podávány živočichům, včetně savců, avšak bez omezení na ně, například živému inventáři, domácím zvířatům, lidem, dobytku, kočkám a psům.
Diureticky účinné denní dávky účinných látek lze podávat parenterálně v jedné dávce nebo v rozdělených dávkách během dne.
Výhodné je parenterální a intranazální podání, antidiuretické sloučeniny jsou zejména cenné při léčbě lidí postižených retencí vody jakéhokoliv původu. Z tohoto hlediska je lze podávat v podstatě stejně jako známé sloučeniny oxytocin a vasopresin, aby se docílilo jejich fyziologických účinků.
Lze předpokládat, že aktuální používaná výhodná množství se budou měnit podle specifické látky, které má být použito, přísluš14 né lékové formy přípravků, způsobu podání a jednotlivých organismů, které mají být léčeny. Optimální způsob aplikace za daných podmínek může stanovit odborník za použití testů ke stanovení obvyklého dávkování se zřetelem na výše udané pokyny.
Výhodnými antidiuretickými antagonisty získané způsobem podle vynálezu jsou [1- (/?-merkapto-^,^-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-ethyl)tyrosin, 4-valinjargininvasopresin, nejvýhodnější je sloučenina 8-L-argininu. Výhodnou je i odpovídající sloučenina A3-Pro7.
Jinými výhodnými sloučeninami jsou ty, kde X značí D-Phe, D-Val, D-Leu nebo D-Lle a Z značí L-Arg. Nejvýhodnější je D-Ile nebo D-Phe sloučenina.
Bez dalšího propracování se předpokládá, že odborník může za použití předchozího popisu využívat tohoto vynálezu v jeho nejširším rozsahu. Následující specifická provedení jsou spíše ilustrativní, avšak nikterak neomezují rozsah vynálezu. Teploty v následujících příkladech jsou uváděny nekorigované ve stupních Celsia. Pokud není uvedeno jinak, všechny díly a procenta jsou hmotnostní.
Chlormethylovaná pryskyřice (Bio-RadBio-Beads SX-1) byla esterifikována způsobem podle Gisina, Helv. Chim. Acta, sv. 56, (rok 1973), str. 1476, s Boc-Gly za inkorpora.ee 0,47 mmoJu/g a ~ 0,64 mmolu/g. Deriváty aminokyselin, včetně Boc-Tyr(Me) [Rf (A) 0,7, Rf (B) 0,8] pocházely od firmy Bachem lne., nebo byly syntetizovány.
Triethylamin (TEA) a N-methylmorfolin (NMM) byly destilovány z ninhydrinu.
Kyselina octová používaná ve formě štěpícího činidla kyselina chlorovodíková — kyselina octová, byla zahřívána к teplotě varu s bortriacetátem a oddestilována od činidla. Dimethylformamid (DMF) byl destilován za sníženého tlaku bezprostředně před použitím. Methanol byl sušen methoxidem hořečnatým a destilován. Ostatní rozpouštědla a reakční činidla byla analytické kvality.
Tenkovrstevná chromatografie (TLC) byla prováděna na destičkách se silikageleim (0,25 mm, Brinkmann Silplate) s použitím následujících systémů rozpouštědel:
A. cyklohexan-chloroform-kyselina octová (2:8:1 obj./obj.),
B. propan-l-ol-amoniak (34%) (2:1 obj./ /obj.),
C. ethanol- (95% )-amoniak (34%) (3:1 obj./obj.),
O. chloroform-methanol (7:3 obj./obj.),
E. butan-l-ol-kyselina octová — voda (4: : 1 : 6 obj./obj., horní fáze),
F. butan-l-ol-kyselina octová — voda — pyridin (15 : 3 : 3 : 10 obj./obj.).
Použité nanášky byly 10 až 50 μξ. Minimální délka chromatogramů byla 10 cm. К vyvíjení chromatogramů bylo použito chloroplatičitého činidla a jodových par.
Analýza aminokyselin, peptidů byla prová-
děna metodou podle Spackmana se sp., Anal. Chem., sv. 30 (1958), str. 1190, při které byly hydrnlyzovány vzorky peptidů vážící asi 0,5 mg konstantně vroucí kyselinou chlorovodíkovou (400 ,al) v evakuovaných a zatavených ampulích po dobu 18 hodin při teplotě 120 °C. Analýzy byly prováděny za použití Beckmanova automatického analyzátoru aminokyselin, modelu 121. Molární poměry' byly vztahovány na Gly = 1,00. Elementární analýzy byly provedeny v, Galbraith Laboratories lne., Knoxville, Tenn. Analytické výsledky pro jednotlivé prvky jsou udávány jejich příslušnými symboly v rozmezí + 0,4 % teoretických hodnot. Optické otáčivosti byly měřeny n polarimetru model A,'typ pí, firmy Bellingham Stanley.
Příklad 1 β- (S-benzylmerkapto) -β,β-cyklope.ntamethylenpropionyl-Tyr (Me) -Phe-Gln-Asn-Cys (Bzl) -Pro-Arg (Tos) -Gly-NH2 (a) Kombinace metody v pevné fázi a v roztoku
319 mg (0,26 mmolu.) Boc-Tyr(Mé)Phé-Gln-Asn-Cys (Bzl) -Pr o-Arg (Tos) -Gly-NH2, připraveného způsobem podle Bankowského se sp., J. Med. Chem., sv. 21 (1976), str, 842, bylo rozpuštěno v 6,5 ml TEA a mícháno při teplotě místnosti po dobu 40 minut. 20 ml studeného etheru bylo přidáno za vzniku sraženiny, která byla odfiltrována a .projnyta 3krát po 10 ml etheru. Produkt byl' vysušen ve vakuu nad pevným hydroxidem, sodnými 318,5 mg tohoto materiálu bylo rozpuštěno v 0,8 ml dimethylformamidu, ke kterému bylo přidáno 10 μΙ N-methylrnorfolinu. Vzniklý roztok měl pH 7 až 8 po. měření na, vlhkém pH-papírku. Potom byl neutralizovaný roztok míchán při teplotě, místnosti po dobu 30 minut, byl přidán roztok p-nitrofenylίβ- (S-benzylmerkapto) -β,/3-cyklopentamethylenpropionátu, Nestor se $p., J. Med. Chem., sv. 18 (1975), str. 284, (445 mg, 1,Í55 mmplu v 0,4 ml dimethylformamidu). Reakční směs byla míchána při teplotě místpasti. Po 72 hodinách míchání ukázala ťenkovrstevná chromatografie, s použitím'systému D, že reakční směs obsahovala ještě stopu volného oktapeptidamidu. Bylo přidáno 39,3 mg (0,26 milimolu.) monohydrátu N-hydroxybenzotriazolu, Konig se spol., Chem. Ber., sv. 103 (rok 1970), str. 788. Po uplynutí doby 5 hodin byla reakce skončena. Sraženina byla .odfiltrována, promyta studeným ethylaceť^tem, (4 krát po 10 ml) a vysušena ve vakuu. Surový produkt (330 mg) byl přesrážen. dvakrát ze směsi dimethylformamid-methanoí za vzniku acylpeptidamidu (295,2 mg, 77,3 %); teplota tání 209 až 211 °C;
[a]D 24 = —43,6° (c = 0,5 DMF);
Rř (E) 0,45, Rf (F) 0,63, elementární analýza pro (C75H94O14S3) С, H, N.
Analýza aminokyselin:
Tyř 0,80, Phe 1,01, Glu 1,04, Asp 1,02,
Cys(Bzl) 0,98, Pro 1,06, Arg 1,01, Gly 1,00, NH3 2,91.
(b) Totální syntéza na pryskyřici
Boc-Tyr (Me) -Phe-Gln-Asn-Cys (Bzl)-Pro-Arg(Ťos)-Gly-pryskyrice (1,11 g, 0,4 mmolu, připravená z Boc-Gly-pryskyřice za použití metodiky pevné fáze) byla převedena v acyloktapeptid-pryskyřici (1,167 g, přírůstek' .hmotnosti 57 mg, 97,6 «/o teorie) v jednom cyklu s odstraněním chránící skupiny, neutralizací a kopulací s p-nitrofenyl-^-(S-benzylmerkáptoj-^-cyklopentamethylenpropionátem, viz Nestor, výše. Pryskyřice byla amonoíyzována, Manning, J. Am. Chem. Soc., sv. 90, (1968), str. 1348. Produkt byl extrahován dimethylformamidem (DMF). Po odpaření rozpouštědla ve vakuu byl zbytek vysrážen přidáním vody. 410 mg surového produktu bylo předráženo dvakrát ze smě?i DMF-ethaiiol za vzniku acyloktapeptidu (302 miligramy, 5'Ó,'7 %), vztaženo na počáteční obdah glyčinu v.pryskyřlci); teplota tání 206 až 208°C (rozklad);
R( (E) 0,45, Rf (F) 0,63;
fajn24 = —43,1° (c = 1, DMF).
Elementární analýza pro (C73H94N14S3) С, H, N.
Analýza aminokyselin:
Tyr 0,79, Phe 1,01, Glu 1,03, Asp 1,04 Cys(Bzl) Q,97, Pro 1.03, Arg 0,99, Gly 1,00, NHs 2,95.
Příklad 2 β- (S-benzýlmerkapto) -/ϊ,^-cyklopentamethylenpropionyl-Tyr (Bzl j-Phe-Gln- Asn-Cys (Bzl) -Pro-Arg (Tos) -Gly-NH2
1,46 g (0,5 mmolu) Boc-Tyr (Bzl )-Phe-Gln-Ásn-Cys (Bzl) -Pro-Arg (Tos) -Gly-pryskyřice bylo převedeno v 1,55 g acyloktapeptidbvé pryskyřice (hmotnostní přírůstek 70 mg, 95,9 procenta teorie ) jako v příkladu 1, v jednóm cyklu odstranění ochranných skupin, neutralizace ,a kopulace s p-nitrofenyl-β-(S-benzylmerkapto ) -/3,j8-cyklopentamethylenpr opionátem.. Produkt získaný pomocí amonolýzy pryskyřice býl. extrahován dimethylformamidém. Rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu a zbytek byl srážen přidáním vody. 723 mg surového produktu bylo přesráženo ze směsi dlmethýlformamid-ethanol a dimethylforma262407 mid = 2% vodná kyselina octová (488 mg, 62,4 %, vztaženo na počáteční obsah Gly v pryskyřici); teplota tání 183 až 185°C;
R( (E) 0,38, R( (D) 0,41;
[a]n23 = —32,9 ° (с = 1 DME).
Elementární analýza pro (C79H98N14O14S3) C, H, N.
Analýza aminokyselin:
Tyr 0,97, Phe 1,02, Glu 1,05, Asp 1,01, Cys(Bzl) 0,98, Pro 1,04, Arg 0,98, Gly 1,00, NH3.
Příklad 3 [ 1- ((S-merkapto-/?,/3-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-methyl)tyrosin) arginin vasopresin (a) z nonapeptidamidu
Roztok 170 mg (0,114 mmolu) chráněného nonapeptidamidu, připraveného jako v příkladu 1, ve 400 ml amoniaku (sušeného nad sodíkem a předestilovaného) byl míchán při teplotě varu se sodíkem z kousku kovu obsaženého v malé skleněné trubičce, až světlemodrá barva roztoku vydržela po dobu 30 sekund, podle du Vigneauda, J. Am. Chem. Soc., sv. 76 (1959), str. 3115. Bylo přidáno 0,4 ml bezvodé kyseliny octové, aby zmizela barva. Roztok byl odpařen. Roztok odparku ve vodné kyselině octové (0,2 %, 800 ml) byl zpracován 2M hydroxidem amonným za vzniku roztoku o hodnotě pH 7,5. К tomuto míchanému roztoku byl přidán postupně nadbytek roztoku ferikyanidu draselného [0,01 M, .11,4 m,l), Норе se spol., J. Biol. Chem., sv. 237 (1962), str. 1'563. Žlutý roztok byl míchán 90 minut a potom po dobu 1 hodiny s aniontovou pryskyřicí (BioRad AG-3, Cl-forma, 10 g vlhké hmotnosti). Suspenze byla filtrována pomalu ložem pryskyřice (80 g vlhké hmotnosti). Pryskyřice byla proinyta 300 ml vodné 0,2% kyseliny octové a spojené filtráty a promývací roztoky byly lyofilizovány. 1 386 mg získaného prášku bylo odsoleno na koloně Sephadex G-15 (110 x 2,7 cm) a eluováno 50% vodnou kyselinou octovou rychlostí 4 ml/h způsobem podle Manninga se spol., J. Chromatog., sv. 38 (1968), str. 396. Eluát byl frakcionován a sledován při absorbanci 280 nm. Frakce obsahující žádané maximum byly shromážděny a lyofilizovány. Zbytek 5'5,5 mg byl podroben dále gelové filtraci na koloně Sephadexu G-15 (100 x 1,5 cm) a eluován vodnou kyselinou octovou (0,2M) rychlostí 2,5 ml/ /h. Peptid byl eluován jako jedno maximum (absorbance 280 nm). Lyofilizace příslušných frakcí vedla к vasopresinovému analogu (49 miligramů, 37,3 %);
Rf (E) 0,19, R( (F) 0,30;
[a] D 22 = —59,6 ° (c = 0,19 1M AcOH).
Analýza aminokyselin:
Tyr 0,81, Phe 1,01, Glu 1,04, Asp 0,98, Pro 1,04, Arg 0,95, Gly 1,00, NH3 3,10.
Analýza používající oxidaci permravenčí kyselinou před hydrolýzou podle Moora, J. Biol. Chem., sv. 238 (1963), str. 235, poskytla poměr Cys(O3H)-Gly 1,03 : 1,00.
(b) z acyloktapeptidu
Zpracování 160 mg (0,107 mmolu) acyloktapeptidu, popsané v příkladu 3 (a), vedlo к 64 mg (51,7 %) analoga, které se nelišilo od produktu z předchozí preparace pomocí tenkovrstevné chromatografie:
(α]η23 = —59,1 ° (c = 0,5 1 M AcOH).
Analýza aminokyselin:
Tyr 0,80, Phe 1,02, Flu 1,02, Asp 0.98, Pro 1,03, Arg 0,96, Gly 1,00, NH3 3,05.
Analýza používající oxidaci kyselinou permravenčí před hydrolýzou poskytla poměr Cys(O3H)-Gly 1,02 : 1,00.
Příklad 4 (1- (/3-merkapto-/í,(3-cyklopentamethylenpropionová kyselina) Jargininvasopresin
Reakce 173 mg (0,111 mmolu) acyloktapeptidu popsaného v příkladu 3 (a) poskytla analog (66 mg, 52,5 %);
R( (E) 0,19, Rf (F) 0,43.
[^023 = -38,7° (c = 0,5, 1M AcOH).
Analýza aminokyselin:
Tyr 0,96, Phe 0,98, Glu 1,01, Asp 1,01, Pro 1,05, Gly 1,00, NH3 2,95.
Analýza používající oxidaci kyselinou permravenčí před hydrolýzou poskytla poměr Cys(O3H)-Gly 1,01 : 1,00.
Příklad 5 [l-(|S-merkapto-/í,/3-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-alkyl)tyrosin, 4-valin)-(L- a D-) argininvasopresin
Sloučeniny z této série byly připraveny technikou syntézy v pevné fázi, modifikovanou Manningem, J. Med. Chem., sv. 16 (rok 1973], str. 975 a Kruszynskim se spol., J.
Med. Chem., sv. 23 (1980), str. 364, za získání chráněných meziproduktů pro každý analog. Bylo použito způsobu podle Bodanszkého se špul., J. Am. Chem. Soc., sv. 81 (1959), str. 5688 a J. Org. Chem., sv. 39 (1974), str. 444, za použití p-nitrofenylesteru a hydroxybenzotriazolu (Konig se spol., výše) ke kopulaci β-(S-benzylmerkapto-/Jutf-cyklopentamethylenpropionové kyseliny) podle Nestora, výše, za získání prekurzorů. Každý prekurz >r byl zbaven chránicí skupiny (du Vigneaud, výše) sodíkem v tekutém amoniaku. Získané disuJfhydrilové sloučeniny byly oxidačně cyklizovány ferrikyanidem draselným (Норе se spol., výše). Analogy byly odsoleny a čištěny gelovou filtrací na Sephadexu G-15 dvoustupňovým způsobem, používajícím 50% kyselinu octovou a 0,2M kyselinu octovou jako eluční činidla. Čistota a identita každého analoga byla potvrzena tenkovrstevnou chromatografií ve třech různých rozpuuštědlových systémech, Kruszynski se spol., J. Med. Chem., sv. 23 (1980), str. 364 a analýzou aminokyselin jako výše.
Boc-Phe-Val-Asn-Cys (Bzl )-Pro-D-Arg (Tos)-Gly-pryskyřice
1,562 g (1,0 mmol Gly) Boc-Gly-pryskyrice bylo podrobeno šesti cyklům deprotekce, neutralizace a kopulace za získání chráněné heptapeptidylové kryskyřice A (2,522 g, 1Ό milimol). ,
Boc-Phe-Val-Asn-Cys (Bzl)-Pro-Arg(Tos)-Gly-pryskyřice
Chráněná heptapeptidylová pryskyřice В (2,522 g, 1,0 mmol) byla připravena z 1,562 gramu (1,0 mmol) Boc-Gly-pryskyřice za použití syntézy v pevné fázi.
Boc-Tyr (Me) -Phe-Val-Asil-Cys (Bzl) -Pro-D-Arg (Tos) -Gly-pryskyřice
Syntéza peptidu v pevné fázi v jediném cyklu s Boc-Tyr(Me) jako karboxylovou složkou převedla heptapeptidylovou pryskyřici A (1,261 g, 0,5 mmolu) v odpovídající terc.butyloxykarbonyloktapeptidylovou pryskyřici C (1,35 g, 0,5 mmolu).
Boc-Tyr (Et)-Phe-Val-Asn-Cys(Bzl )-Pro-D · -Arg(Tos)-Gly-pryskyřice
Heptapeptidylová pryskyřice A (1,261 g, 0.5 mmolu) poskytla terc.butyloxykarbo.nyloktapeptidylovou pryskyřici D (1,357 g, 0,5 milimolu) syntézou v pevné fázi v jediném cyklu s Boc-Tyr(Et) jako karboxylovou složkou.
Boc-Tyr (Me)-Phe-Val-Asn-Cys (Bzl)-Pro-Arg(Tos) -Gly-pryskyřice
Heptapeptidylová pryskyřice В (1,261 g, 0,5 mmolu) bylo převedena v chráněnou ok tapeptidylovo-u pryskyřici E (1,35 g, 0,5 milimolu) v jediném cyklu deprotekce, neutralizace a kopulace s Boc-Tyr(Me).
β- (S-benzylmerkapto-^-cyklopentamethylenpropionyil-Tyr (Et) -Phe-Val-Asn-Cys (Bzl) -Pro-Arg( Tos)-Gly-pryskyřice
Heptapeptidylová pryskyřice В (1,261 g, 0,5 mmolu) byla převedena v acyloktapeptidovou pryskyřici (1,43 g, 0,5 mmolu) při dvoucyklové syntéze v pevné fázi za použití karboxylové složky Boc-Tyr(Et) a p-nitrof enyl-,/3- (S-benzylmerkapto) -β',/Lcyklopentamethylenpropionátu.
Boc-Tyr (Me) -Phe-Val-Asn-Cys (Bzl) -Pro-D-Arg(Tos]-Gly-NH2
Chráněná oktapep Lidová pryskyřice C (1,35 gramu, 0,5 mmolu) byla amonolyzována a produkt byl extrahován teplým dimethylformamidern. Produkt byl vysrážen přidáním vody. Surový produkt byl přesrážen ze směsi dimethylformamid-ethanol-ethylether za vzniku čistého produktu ve formě bezbarvého prášku (0,581 g, 88,52 %, vztaženo na počáteční obsah Gly v pryskyřici), teplota tání 239 až 240 °C;
[a]b 24 __14>9 o (c DMFj.
Rř (E) 0,54, Rf (D) 0,73;
elementární analýza pro: (C63H85N13O14S2) C, H, N.
Analýza aminokyselin:
Туг 1,02, Phe 0,98, Val 1,02, Asp 1,00, Cys(Bzl) 0,98, Pro 1,01, Arg 0,97, Gly 1,00, NH3 2,1.
Boc-Tyr (Et) -Phe-Val-Asn-Cys (Bzl) -Pro-D-Arg(Tos)-Gly-NH2
Reakce chráněné oktapeptidové pryskyřice D (1,357 g, 0,5 mmolu) jako vpředu, vedla к Boc-oktapeptidamidu (0,535 g, 80,69 %, vztaženo na počáteční obsah Gly na pryskyřici), teplota tání 211 až 213 °C;
[w]d24 = —16,4 (c 1, dimethylformamid),
Rř (E) 0,61, Rf (D) 0,83.
Elementární analýza pro: (C64H87N13O14S2) С, H, N.
Analýza aminokyselin:
Туг 0,99, Phe 1,00, Val 1,01, Asp 1,02, Cys(Bzl) 0,98, Pro 1,00, Arg 0,98, Gly 1,00, NH3 2,13.
Boc-Tyr (Me) -Phe-V al-Asn-Cys (Bzl) -Pro-Arg(Tos)-Gly-NH2
Reakce chráněné oktapeptidové pryskyřice E (1,35 g, 0,5 mmolu) jako vpředu, poskytla příslušný Boc-aktapeptidamid (0,597 gramu), 90,96 °/o, vztaženo na počáteční obsah Gly na pryskyřici). Teplota tání 216 až 217 C (r zklad).
l>b24 —34,82° (c — 1, DMF);
Rf (E) 0,54, Rf (D) 0 73.
Elementární analýza pro: (C63H85N13N14S2.)
С, H, N.
Analýza aminokyselin:
Tyr 0,99, Phe 1,00, Val 1,02, Asp 1,01, Cys(Bzl) 0,98, Pro 1,01, Arg 0,98, Gly 1,00, NH3 2,09.
^-(S-benzylmerkapto-/j,^-cyklopentamethylenpropionyl-Tyr [ Et)-Phe-Val-Asn-Cys (Bzl)-Pro-Arg {Tos) -Gly-N'H2
Chráněná acyloktapeptidová pryskyřice (1,43 g, 0,5 mmolu) byla amonolyzována a produkt extrahován horkým DMF. Produkt byl vysrážen přidáním vody. Surový produkt byl přesrážen ze směsi dimethylformamid-e· thanol-ethylether za vzniku čistého produktu, (0,490 g, 66,54 %, vztaženo na počáteční obsah glycinu na pryskyřici). Teplota tání 211 až 213 °C;
[ajr?4 — —39,8 ° (c — 1, dimethylformamid);
Rf (E) 0,59, Rf (D) 0,75.
Analýza pro: (C74H97N13O13S3) С, H, N.
Analýza aminokyselin:
Tyr 0,99, Phe 1,01, Val 1,01, Asp 1,01, Cys(Bzl) 0,99, Pro 1,02, Arg 0,98, Gly 1Ό0 NH3 2,07.
β- (S-benzylmerkapto) -β,β-cyklopentarnethylenpropionyl-Tyr (Me) -Phe-Val-Asn-Cys (Bzl) -Pro-D-Arg(Tos)-Gly-NH2
0,270 g (0,206 mmolu) terc.butyloxykarbonyloktapeptidamidu připraveného jako vpředu, bylo rozpuštěno ve 3 ml TFA a ponecháno stát při teplotě místnosti po dobu 20 minut. By) přidán studený ether. Vysrážený materiál byl odfiltrován a promyt 5krát po 10 mililitrech etheru. Produkt byl vysušen ve vakuu nad pevným hydroxidem sodným. 250 miligramů tohoto materiálu bylo rozpuštěno v 0,8 ml dimethylformamidu, ke kterému byl přidán roztok N-methylmorfolinu za vzniku roztoku o hodnotě pH 7 až 8 (vlhký pH-papírek). Neutralizovaný roztok byl míchán při teplotě místnosti po dobu 20 minut. Byl přidán roztok p-nitrofenyl-^-(S-benzylmerkapto) -β,β-cyklopentamethylenpropionátu (0,135 g, 0,37 mmolu) a 57 mg (0,37 mili molu) monnhydrátu N-hydroxybenzotriazolu v 1,0 ml dimethylformamidu. Reakční směs byla míchána při teplotě místnosti přes noc a tenkovrstevná chromatografie (systém E) ukázala, že reakce byla skončena. Za intenzivního míchání bylo přidáno 80 ml methanolu a 20 ml etheru. Vysrážený materiál byl odfiltrován, promyt směsí methanol-ether (8:2) a vysušen ve vakuu. Surový produkt (270 mg) byl přesrážen ze směsi dimethylformamid-methanol za vzniku acylpeptidamidu (263 mg, 75,2 %); teplota tání 220 až 221 °C;
[ajD24 = „25,7° (c = 1, DMF);
Rf (E) 0,55, Rf (D) 0,83.
Elementární analýza pro: (C73H95N13O13S3) С, H, N.
Analýza aminokyselin:
Tyr 0,98, Phe 1,01, Val 1,02, Asp 1,02, Cys(Bzl) 0,97, Pro 1,03, Arg 1,0, Gly 1,00, NH3 2,06.
β- (S-benzylmerkapto) -β,β-cyklopentamethyJenpropionyl-Tyr (Et) -Phe-Val-Asn-Cys (Bzl) -Pro-D-Arg (Tes)-Gly-NH2
Terc.butyloxykarbonyloktapeptidamid (0,398 g, 0,3 mmolu) byl zbaven chránící skupiny a kopulován s p-nitrofenyl-.d-(S-benzylmerkapto) -^,^-cyklopentamethylenpropionátem (0,232 g, 0,6 mmolu), jak popsáno výše, za vzniku acyloktapeptidamidu (0,361 g, 81,67 %); teplota tání 222 až 224 ^C;
[a 1Л = -22,8° (c = 0,5, DMF);
R( (E) 0,5, Rf (D) 0,83.
Elementární analýza pro: (C74H97N13O13S3) С, H, N.
Analýza aminokyselin:
Tyr 1,0, Phe 1,02. Val 1,03, Asp 1,02, Cys(Bzl) 0,98, Pro 1,03, Arg 0,99, Gly 1,00, NH3 2,11.
β- (S-benzylmerkapto) -β,β-cyklopentamethylenpropionyl-Tyr(Me)-Phe-Val-Asn Cys(Bzl)-Рго-Arg (Tos )-Gly-NH2
Terc.butyloxykarbonyloktapeptidamid (0,394 g, 0,33 mmolu) byl zbaven chránící skupiny a kopulován s p-nitrofenyh/HS-benzylmerkapto ) -pT/J-cyklopentamethy lenpropionátem (0,232 g, 0,6 mmolu) jako vpředu, za vzniku acyloktapeptiduamidu (0,388 g, 88,65 procenta), teplota tání 211 až 214 °C;
[a]D 21 = — 39,2 0 (c = 1, DMF);
Rř (E) 0,47, Rf (D) 0,85.
Elementární analýza pro: (C73H95N13O13S3) С, H, N.
Analýza aminokyselin:
Tyr 0,99, Phe 1,02, Val 1,03, Asp 1,01, Cys(Bzl) 0.99, Pro 1,02, Arg 0,99, Gly 1,00, N143 2,04.
[l-(fl-merkapto-^,fi-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-ethyl)tyrosin, 4-valin ] -argininvasopresin
Roztok 140 mg (0,095 mmolu) chráněného acyloktapeptidamidu ve 400 ml amoniaku (sušeného a redestilovaného ze sodíku) byl míchán a při teplotě varu uváděn v reakci se sodíkem, ve formě kousku kovu obsaženého ve skleněné kapiláře, pokud v roztoku nevydržela světle modrá barva po dobu 30 sekund. Bylo přidáno 0,4 ml bezvodé kyseliny octové, aby se odstranila barva. Roztok byl odpařen proudem dusíku zavedeným do baňky. Po 5 minutách byl odparek rozpuštěn v 50 ml 10% vodné kyseliny octové, к roztoku bylo přidáno 800 ml vody. Roztok byl neutralizován·2M hydroxidem amonným za vzniku roztoku o hodnotě pH 6,5. Za míchání byl postupně přidáván nadbytečný roztok ferrikyanidu draselného (16 ml, 0,01 M). Žlutý roztek byl míchán dalších 10 minut a po dobu 10 minut s anexovou pryskyřicí (Bio-Rad Ag-3 v Cl“ formě, 10 g vlhké hmotnosti). Suspenze byla pomalu filtrována pryskyřicí (50 g vlhké hmotnosti). Po promytí pryskyřice 200 ml 0,2% vodné kyseliny octové byly spojené filtráty a promývací roztoky lyofilizovány. 1,63 g získaného prášku bylo odseděno na sloupci Sephadexu G-1’5 (110 krát 2.7 cm) elucí 50% vodnou kyselinou octovou rychlostí 5 ml/h. Eluát byl frakcionován a sledován při absorpci 280 nm. Frakce obsahující hlavní maximum byly shromážděny a lyofilizovány. 28 mg odparku bylo podrobeno gelové filtraci na sloupci Sephadexu G-15 (100 x 1,5 cm). Produkt byl eluován 0,2M vodnou kyselinou octovou rychlostí 4 ml/h. Peptid byl eluován v jediném maximu (absorpce při 280 nm). Lyofilizace příslušných frakcí poskytla vasopresinový analog (24 mg, 20,6 %). Tenkovrstevná chromatografie Rř (E) 0,31, Rf (F) 0,62;
[aju = —65,10 (c = 0,2, 1M AcOH).
Analýza aminokyselin:
Tyr 1,00, Phe 1,01, Val 1,01, Asp 1,01, Pro 1,01, Arg 1 00, Gly 1,00, NH3 1,97.
Analýza po oxidaci kyselinou permravenčí před hydrolýzou poskytla poměr Cys-(O3H)-Gly 1,01 : 1,00.
l-f/j-merkapto-^-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-methyl)tyrosin, 4-valin, 8-D-arginin]vasopresin
168 mg (0,115 mmolu) peptidického meziproduktu bylo redukováno sodíkem v kapalném amoniaku, znovu oxidováno, deionizováno a čištěno jako vpředu, za vzniku 49,5 miligramu produktu (35,5 %);
Rf (E) 0,30, Rř (F) 0,61;
[ ar]D 23 = —46,4° (c = 0,4, 1M kyselina octová).
Analýza aminokyselin:
Tyr 0,98, Phe 1,01, Val 0,98, Asp 0,99, Pro 1,03, Arg 0,98, Gly 1,00, NH3 12,1.
Analýza pro oxidaci kyselinou permravenčí, předcházející hydrolýze, poskytla poměr L'ys(OsH)-Gly 1,03 :1,00.
[ 1- (/3-merkapto-i/3,^-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-ethyl)tyrosin, 4-valin, 8-D-arginin]vasopresin
Výtěžek analoga ze 167 mg (0,113 mmolu) meziproduktu byl 29 mg (20,9 %).
Rf (E) 0,29, Rf (F) 0,57;
(4?- —41,1° (c = 0,3, 1M AcOH).
Analýza aminokyselin:
Tyr 0,98, Phe 1,01, Val 1,03, Asp 0,99, Pro 1,03, Arg 1,02, Gly 1,00, NH3 1,98.
Analýza po oxidaci kyselinou permravenčí před hydrolýzou poskytla poměr Cys-(O3H)-Gly 1,01 : 1,00.
[ 1- (fj-merkapto-^,/íř-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-methyl)pyrosin, 4- valin ] argininvasopresin
Reakce 174 mg (0,119 mmolu) acyloktapeptidu jako vpředu poskytla 51,5 mg produktu (3'5,6 %).
Rř (E) 0,28, Rř (F) 0,60;
[a]o23 = —66,3° (c = 0,4, 1M AcOH).
Analýza aminokyselin:
Tyr 0,99, Phe 1,01, Val 1,02, Asp 1,01, Pro 1,00, Arg 1,01, Gly 1,00, NH3 2,11.
Analýza po oxidaci kyselinou permravenčí předcházející hydrolýze poskytla poměr Cys(O3H)-Gly 1,03 : 1,00.
Příklad 6 [ 1- (/3-merkapto-/3,^-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-ethyl)tyrosin, 4-valin, 7-(3,4-dehydroprolin) ]argininvasopresin
Sloučteniila byla;' připravena5 stejně jakó v příkladu 5, za póWžitrA5-prolmu místo prolinu.
Příklad 7 [ 1- (i^-merkapt:)-pTp-cyklo:pentamethylenpřopionová kyselina),1 ’2-súbstituováná, 4-valin, 7-prblíri]-(L- a'D-)argininvásopřesin
Sloučeniny téťój série'-’byly' připráveňy jákó'v příkladu 5. Čistota býla stanovena ρΰmófcí ténkovřštevné' chrómatbgrafie na šilikágéiu1 ve; dvou- systémech rozpouštědel; E. buťáUWkysélina očtová/voda (BAW) (4:1: : 5) n‘éfeb· F. butánol/kýselina očtóvá/voda/ /pyridin (15 : 3:3: 1Ú); Byly získány následujíčí výsledky:
X Z RfE RfE
D-Tyr L-Ařg 0,17 0,50
D-Ph L-Arg' 0,17 0,52
Gly L-Arg 0.15 0,48
D-Ala L-Arg 0,16 0,49
D-Val L-Arg 0,17 0,49
D-L,eu L-Arg 0,17 0,53
D-Ile L-Arg 0,17 0,53
D-Arg L-Arg 0,08' 0,30
D-Phe D-Arg 0,16 0,51
Příklad 8
Antagonismus к vasopresorické reakci byl stanoven podle Dyckese se spol., J. Med. Chem., sv. 17 (1974), str. 969. Hodnoty se vyjadřují jako l^odnoty pA2, definované Shib dem!se spol., Br. JI Pharmacol., sv: 2 (1947), str. 189.
Účinnost antidiuretickýcli agonistů byla stanovena pomočí intravenózní injekce hodnocených sloučenin na ethanolem anestezovaných hydratdvafiých krysách podle Sawyera sě spol., Endocrinology, sv. 63 (1958), str. 694.
Antagonistická aktivita byla stanovena a vyjádřena jako „účinné dávky“ a jako tiódnoty pA2. „Účinná/dávka“ je definována jako dávka (v- nanomolech na kilogram), která redukuje reakci pozorovanou po 2x jednotkách agonisty podaného injekčně 20 minut po dávce antagonisty na reakci lx jednotek agonisty. Stanovené in vivo, hodnoty „pAž“ představují negativní logaritmy účinných dávek dělené stanoveným distribučním objemem [67 ml/kg). Výsledky jsou udány v tabulce 1.
Tabulka I
C-Uj- CÓ-X~Ph<z.-Y-Asn~C}'~ Pro -A·' I - Gry- +. ¢-4
C-R 1 .$________________ - -...... s
Peptid R2 X1 Y Z Autivasopreso- AntidiUretická
rická účinnost účinnost
pA’2 U/mg
dAVP (H)2 Tyr Gin Arg agonista 1 745 + 385
dPAVP (CH3)2 Tyr Gin Arg 7,45 + 0.11 42 + 3
d(CH2>5AVP (СЦ2)5 Tyr Gin Arg 8,35 + 0,99 0,033 + 0,005
dVDAVP (H)2 Tyr V.al D-Arg 7,03 + 0,11 1 230 + 170
dPVDAVP (CH3)2 Tyr Val D-Arg 7,82 + 0,05 123 + 22
d(.CH2)5VDAVP (CH2)5 Tyr Val D-Arg 7,68 + 0,05 0.10 + 0,02
dTyr(Me)AVP H2 Tyr(Me). Gin Arg agonista 830 + 70
dPT.yr(Mp)AVp (CH3)2 Tyr(Níe) Gin Arg 7,96 + 0.05 3.5 + 0,5
d(CH2)5Tyr(Me)AVP (CH2)5 Ťyr(Mé) Gin Arg 8,62 + 0,03 0,31 + 0,07
Výsledky uvedené v tabulce I ukazují, že sloučeniny získané způsobem podle vynálezu, zejména [l-^-merkapto-^-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 8-arginin ] vasopresin a [ l-(/?-merkapto-/3,^-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-methyl)tyrosin, 8-arginin] vasopresin antagonizují vasopresorickou reakci na argininvasopresin a vykazují význačné snížení antidiuretické účinnosti.
Příklad 9 [ l-J^-merkapto-^^-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-alkyl)tyrosin, 4-valin, 8-(L- a D-)arginin]vasopresiňové sloučeniny, hodnocené jako v příkladu 8, byly slabými antidiuretickými agonisty. Způsobují počáteční submaximální inhibici vylučování moče, trvající asi 10 minut, následovanou obdobím inhibice reakce na ADH, trvajícím 1 až 3 hodiny, v závislosti na dávce. TaTabulka II to inhibice byla reverzibilní, tj. lze ji překonat zvýšením dávek ADH. Opakované pokusy dovolovaly stanovení „účinné dávky“ každého analoga, jež je definována jako dávka, která redukuje antidiuretickou reakci na 2x jednotek ADH, podaných injekčně 20 minut po dávce antagonisty, odpovídající reakci lx jednotek, podaných injekčně před antagonistou. Stanovené účinné dávky pro tato analoga (v nmol/kg) a antivasopresorická aktivita jsou udány v tabulce II.
Zatímco [ l-(^-merkapto-/?,/J-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-alkyl)tyrosin, 4-valin, 7-(L- a D-)arginin]vasopresinové sloučeniny byly slabými antidiuretickými agonisty, vyvolávajícími počáteční submaximální inhibici vylučování moče trvající po dobu asi 10 minut, následovanou obdobím inhibice reakcí na ADH trvající po dobu 1 až 3 hodin, výhodné sloučeniny,, označené hvězdičkou v tabulce níže, neměly antidiuretickou agonistickou účinnost
Sloučenina Anti-antidiuretická účinnost Antivasopresorická účinnost
ED nmol/kg рАг ED nmol/kg рАг
d(CH2)5D-Tyr VAVP 2,2 +0,2 7.51 + 0,08(4) 0,29 + 0,09 8,41 + 0,11 (4)
d(CH2)5D-Phe VAVP 0,67 + 0,13* 8,07 + 0,09(8) 0.58 + 0.04 8,06 + 0,03 (4)
d(CH’2)5[Gly2l VAVP agonista 1— atonlsta —
d(CH2)<5[DAla^]VAVP agonista — 177 + 31 5,79 + 0,08 (4)
d(CH2)5[D-Val2]VAVP 2,3 +0,3* 7,48 + 0,06(4) 27 + 3 6,41 + 0,05 (4)
d(CH2)5[D-Leu2)VAVP 1,2 +0,3* 7,79 4- 0,12(4) 26 + 5 6,45 + 0,09 (4)
d(CH2)5[D-Ile2] VAVP 0,70 + 0,0* 7,98 + 0,05(4) 8,2 + 1,4 6,95 + 0,08 (5)
d(CH2)5[D-Arg2]VAVP >90 <5,9 -260 -5,4
d(GH2)5D-Phe VDAVP 6,9 +1,3 7,07 + 0,10(9) 0,73 7,98 + 0,07 (4)
d(CH2)5Tyr(Me)VDAVP 15 + 3 6,68 + 0,11(4) 0,28 + 0,05 8,44 + 0,07 (8)
d(CH2)5Tyr(Et) VDAVP 5,7 +0,5 7,10 + 0.08(4) 0,34 + 0,04 8,31 + 0,05 (8)
d(CH2)5Tyr(i-Pr) VDAVP 8,5 + 0,07 6,88 + 0 07(4) 0,28 + 0,07 8,41 + 0,08·(8)
d(CH2)5Tyr(n-Pr)VDAVP 14 +2 6,67 + 0,06(4) 1,1 ± 0,2 7,86 + 0,10 (8)
d(CH2)5Tyr(Me)VAVP 3,1 +0,4 7,35 + 0,06(4) 0,29 + 0,06 8,32 + 0,08 (4)
d(CH2)5Tyr(Et)VAVP 1,9 +0,2 7,57 + 0,06(4) 0,49 + 0,11 8.16 + 0,09 (4)
d[CH2)5Tyr(i-Pr)VAVP 3,6 +0,9 7,32 + 0,06(6) 0 31 4- 0,06 8,36 + 0,09 (4)
d(CH2)5Tyr(n-Pr)VAVP 3,5 4-0,06 7,29 4-0,07(4) 0,40 + 0,04 8,22 4-0,04 (4)
d(CH2)5-D-Tyr(Me)VAVP 1,2 +0,3 7,77 + 0,07(6) 0,23 -Ι- 0,04 8,48 + 0,08 (4)
d('CH2)5-D-Tyr(Et)VAVP d(CH2)5-Tyr(Et)-V-A3-Pro7-AVP 1,1 +0,2 1,5 +0,3 7,81 + 0,07(5) Ο,45 + 0,11 8,22 + 0,12 (4)
Výhodné sloučeniny získané způsobem podle vynálezu jsou také selektivnější než dřívější antidiuretičtí antagonisté se zřetelem na antivasopresorické aktivity, jak je ukázáno poměrem antivasopresorické anti-antidiuretické účinné dávky:
O1 x Antivasopresorická
Sloučenina ED -A—--—-ζ.-Anti-antidiureticka d(CH2)5D-Tyr(Et) VAVP0,41 d(CH2)5 D-Phe VAVP0,87 d(CH2)5[D-Val]2VAVP12 d(CH2)'5[D-Leu2]VAVP22 dfCtoJslD-Ile^jVAVP12
Příklad 10 (a)
Antagonismus [ 1- (/S-merkapto-/í,i/S-cyklopentamethylenpropionová kyselina), 2-(O-alkyljtyrosin, 4-valin]-(L- a D-)argininvasopresinové sloučeniny na endogenní ADH byl ukázán injekcí sloučeniny intraperitoneálně bdělým krysám. Po 4 hodiny po injekci byla odebírána moč. Údaje v tabulce níže představují průměr +SE výsledků ve skupinách 4 až 6 krys. *P <0,05 a **P <0,005 jsou udány pro rozdíl mezi průměry u krys po podání antagonistů a průměry reakcí stej262407 ných krys po injekci samotného rozpouštědla. Průměrná velikost objemu moče u kontrolních krys po injekci rozpouštědla byla
0,9 + 0,1 ml/kg za hodinu a průměrná osmolalita byla 1544 + 85 mOsm/kg HaO [n = = 32).
Dávka /xg/kg Objem moče ml/kg za h. Osmolalita mOsm/kg H2O d(CH2)5Tyr(Me)VDAVP100 d(C№)5Tyr(Et)VDAVP300 d(CH2)5Tyr(Me)VAVP100 d(CH2)5Tyr(Et)VAVP30
30 (b)
Reakce intaktních krysích samic o hmotnosti 200 až 240 g po intraperitoneálních injekcích d(iCH2)5Tyr(Et)VAVP byly hodnoceny v pokuse, při němž každá krysa dostala rozpouštědlo a obě dávky antagonisty ADH. Injekce byly podávány v rozmezí nejméně dvou dnů. Krysám byla voda к dispozici ad libitum. Injekce byly podávány v 11 hodin dopoledne, načež byla spontánně odcházející moč sbírána v 1 hod. intervalech po dobu 4 hodin.
Na obr. 1 je znázorněna osmolalita moče jako funkce času. Osmolalita moče u kontrol (injekce rozpouštědla) byly hodnoceny po dvouhodinovém období v důsledku nepravidelnosti močení.
Na obr. 2 je znázorněno vylučování moče jako funkce času.
Na obou obrázcích vertikální přímky procházející body označují SE.
1,5 + 0,3 1 341 + 428
2,2 + 0,4* 961 + 204*
2,8+ 0,3** 640 + 47**
9,5 + 1,8** 234 + 25**
1,1 + 0,5 1 303 + 190
3,4 + 0,9* '514 + 105**
7,4 + 1,0** 316+ 38**
13,3 + 2.5** 194+ 17**
Příklad 11
Sloučeniny, ve kterých Tyr v poloze 2 patří do D-série a není etherifikován (X‘ značí vodík) se připravují jako v příkladech 1 až
5. Sloučenina, ve které Z značí L-Arg, je velice aktivní jako antagonista antidiuretické aktivity arginin-vasopresinu.
Předchozí příklady lze opakovat s podobným úspěchem náhradou obecně nebo specificky popsaných reakčních činidel' a/nebo reakčních podmínek podle vynálezu za ty, které jsou používány v předchozích příkladech.
Z předchozího popisu odborník snadno zjistí podstatně charakteristiky tohoto vynálezu a aniž by opustil jeho ducha a rozsahu, může provádět různé změny a modifikace, aby jej přizpůsobil různému použití a podmínkám.

Claims (20)

  1. Způsob výroby peptldů obecného vzorce kde
    X představuje Туг X‘, kde X‘ znamená vodík, methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl nebo n-butyl a Tyr je D- nebo L-, D-.Phe, D-Val, D-Leu(, D-Ile, D-Arg, D-norvalin, D-norleucin, D-cyklohexylalanin, D-a-aminomáselnou kyselinu, D-threonin nebo D-methionin,
    W představuje Pro nebo A3-Pro,
    Z představuje D- nebo L-Arg, a jestliže X značí Tyr-X‘, pak W značí A3-Pro, a
    Y představuje Val nebo Gin, vyznačující se tím, že .se provádí postupem zahrnujícím tyto po sobě následující stupně:
    (a) zpracování Boc-Gly-pryskyřice syntézou v pevné fázi o šesti cyklech deprotekce, neutralizace a kopulace s vybranou aminokyselinou za vzniku odpovídající chráněné heptapeptidylové pryskyřice obecného vzorce
    Boc-Phe-Y-Asn-Cy (Bzl) -W-Z (Tos) -Gly-pryskyřice, v němž
    Y, W a Z mají výše uvedený význam,
    b) zpracování odpovídající chráněné heptapeptidylové pryskyřice vyrobené ve-stupni a) peptidovou syntézou v pevné fázi v cyklu deprotekce, neutralizace a kopulace se sloučeninou obecného vzorce
    Boc-X v němž
    X má výše uvedený význam, za vzniku odpovídající terc.butoxykarbonyloktapeptidylové pryskyřice obecného vzorce
    Boc-X-Phe-Y-Asn-Cy (Bzl)-W-Z (Tos)-Gly-pryskyřice v němž
    X, Y, W a Z mají výše uvedené významy,
    c) amonolýzu odpovídající chráněné oktapeptidylové pryskyřice vyrobené ve stupni
    b) na odpovídající Boc-oktapeptidový amid obecného vzorce
    Boc-X-Phe-Y-Asn-Cy(Bzl)-W-Z (Tos)-Gly-NH2 v němž
    X, Y, W a Z mají výše uvedené významy,
    d) přeměnu odpovídajícího Boc-oktapeptidového amidu vyrobeného ve stupni c) na odpovídající β-(S-benzylmerkapto) -β,/3-cyklopentamethylenpropionyl-oktapeptidový amid obecného vzorce
    CÍ4CO -.X-· Ρϊ(ΐ. -Υ~Ογ(Βζ.Ι)-Μ·-Ζ { Tes, )~Gly-Nl·^
    .....3-C4,Ph
    4.
    v němž
    X, Y, W a Z mají výše uvedené významy, kopulací neutralizovaného, deprotektovaného roztoku odpovídajícího terc.butoxykarbonyl-oktapeptidového amidu s p-nitrofenyl-β- (S-benzylmerkapto) -’β β-cyklopentamethylen-propionátem v přítomnosti m 'hydrátu N-hydroxybenzotriazolu, a
    e) redukci odpovídajícího /3-(S-benzylmerkapto ) -β,β-cyklopentamethylen-propionyloktapeptidového amidu, vyrobeného ve stupni d), sodíkem v kapalném amoniaku, a oxi- 1 dační cyklizaci vzniklé disulfhydrylové sloučeniny ferrikyanidem draselným.
  2. 2. Způsob podle bodu 1 pro výrobu sloučenin obecného vzorce
    C Hr CO -z - P h C-- V<U ~ A S n - C y- Ψ- Z ~ G * Y~ N /......\i ά
    C ve kterém
    X představuje Tyr X‘, kde X‘ znamená methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl nebo n-butyl a Tyr je D- nebo L-, D-Phe, D-Val, D-Leu, D-Ile, D-Arg, D-norvalin, D-norleucin, D-cyklohexylalanin, D-a-aminomáselnou kyselinu, D-threonin nebo D-methionin,
    W značí Pro nebo A3-Pro,
    Z značí D- nebo L-Arg, a jestliže X značí Tyr-X‘, pak W značí A3-Pro, vyznačující se tím, že se provádí postupem zahrnujícím tyto po sobě následující stupně:
    a) zpracování Boc-Gly-pryskyřice syntézou v pevné fázi o šesti cyklech deprotekce, neutralizace a kopulace s vybranou aminokyselinou za vzniku odpovídající chráněné heptapeptidylové pryskyřice obecného vzorce
    Boc-Phe-Val-Asn-Cy(Bzl]-W-(D- nebo L-)Arg(Tos ] -Gly-pryskyřice, v němž
    W má výše uvedený význam,
    b) zpracování odpovídající chráněné heptapeptidylové pryskyřice vyrobené ve stupni a) peptidovou syntézou v pevné fázi v cyklu deprotekce, neutralizace a kopulace se sloučeninou obecného vzorce
    Boc-X, v němž
    X má výše uvedený význam, za vzniku odpovídající terc.butoxykarbonyloktapeptidylové pryskyřice obecného vzorce
    Boc-X-Phe-Val-Asn-Cy(Bzl)-W-(D- nebo L-)- Arg (Tos) -G ly-pryskyrice, v němž
    X a W mají výše uvedené významy,
    c) amonolýzu odpovídající chráněné oktapeptidylsvé pryskyřice vyrobené ve stupni
    b) na odpovídající Boc-oktapeptidový amid obecného vzorce
    Boc-X-Phe-Val-Asn-Cy (Bzl) -W- (D- nebo L-) Arg(Tos)-Gly-NH2 v němž
    X a W mají výše uvedené významy,
    d] přeměnu odpovídajícího Boc-oktapeptidového amidu vyrobeného ve stupni c) na odpovídající β- (S-benzylmerkapto) -β,/3-cyklopentamethylenpropionyl-oktapeptidový amid obecného vzorce v němž
    X a W mají výše uvedené významy, kopulací neutralizovaného, deprotektovaného roztoku odpovídajícího terc.butoxykarbonyl-oktapeptidového amidu s p-nitrofenyl-,β- (S-benzylmerkapto) -β,^-cyklopentamethylen-propionátem v přítomnosti monohydrátu N-hydroxybenzotriazolu, a
    e) redukci odpovídajícího β-[ S-benzylmerkapto) -^, /3-cyklopentamethylen-propiony 1oktapeptidového amidu, vyrobeného ve stupni d), sodíkem v kapalném amoniaku, a oxidační cyklizaci vzniklé disulfhydrylov.é sloučeniny ferrikyanidem draselným.
  3. 3. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž X značí methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl nebo butyl, Tyr je D- nebo L- a W značí Pro nebo Δ3-Pro.
  4. 4. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž X značí (0-methyljtyrosin a Z značí arginih.
  5. 5. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž X značí (0-methyljtyrosin a Z značí (L- nebo D-) arginin.
  6. 6. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 1, v nichž X značí (0-ethyljtyrosin a Z značí (L- nebo D-)arginin.
  7. 7. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž X značí (0-methyl)-D-tyrosin a Z značí (L- nebo D-)arginin.
  8. 8. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž X značí (O-isopropyíjtyrosrn a Z značí (L- nebo D-)arginin.
  9. 9. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž X značí (0-n-propyljtyrosin a Z značí (L- nebo D-)arginin.
  10. 10. Způsob pudle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž X značí (0-ethyl) tyrosin, W značí 3,4-dehydroprolin a Z značí arginin.
  11. 11. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž X značí D-Phe, D-Val, D-Leu, D-Ile, D-Arg, D-norvalin, D-norleucin, D-cyklohexylalanin, D-a-aminomáselnou kyselinu, D-threcnin nebo D-methionin, W značí prolin a Z značí D- nebo L-arginin.
  12. 12. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž X značí D-Phe, D-Val, D-Leu nebo D-Ile.
  13. 13. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž Z značí L-arginin.
  14. 14. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž X značí D-fenylalanin a Z značí arginin.
  15. 15. Způsob pudle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž X značí D-valin a Z značí arginin.
  16. 16. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž X značí D-leucin a Z značí arginin.
  17. 17. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzorců uvedených v bodě 2, v nichž X značí D-isoleucin a Z značí arginin.
  18. 18. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se používá sloučenin obecných vzor282407 ců uvedených v bodě 2, v nichž X značí D-
  19. 19. Způsob podle bodu 1 pro výrobu slou-fenylalanin a Z značí D-arginin. cenin obecného vzorce ve kterém
    X‘ značí vodík, methyl nebo ethyl a
    Z značí L- nebo D-Arg, vyznačující se tím, že se provádí postupem zahrnujícím tyto po sobě následující stupně:
    a) zpracování Boc-Gly-pryskyřice syntézou v pevné fázi o šesti cyklech deprotekce, neutralizace a kopulace s vybranou aminokyselinou za vzniku odpovídající chráněné heptapeptidylové pryskyřice obecného vzorce
    Boc-Phe-Gln-Asn-Cy (Bzl)-Pro-Z(Tos)-Gly-pryskyřice v němž
    Z má výše uvedený význam,
    b) zpracování odpovídající chráněné heptapeptidylové pryskyřice vyrobené ve stupni a) peptidovou syntézou v pevné fázi v cyklu deprotekce, neutralizace a kopulace se sloučeninou obecného vzorce
    Boc-Tyr(X‘) v němž
    X‘ má výše uvedený význam, za vzniku odpovídající terc.butoxykarbonyloktapeptidylové pryskyřice obecného vzorce
    Boc-Tyr (X1) -Phe-Gln-Asn-Cy (Bzl) -Pro-Z (Tos) -Gly-pryskyřice v němž
    X a Z mají výše uvedené významy,
    c) amonolýzu odpovídající chráněné butoxykarbonyloktapeptidylové pryskyřice vyrobené ve stupni b) na odpovídající Boc-oktapeptidový amid obecného vzorce
    Boc-Tyr-[X‘J-Phe-Gln-Asn-Cy( Bzl)-Pro-Z(Tos)-Gly-NH2 v němž
    X a Z mají výše uvedené významy,
    d) přeměnu odpovídajícího Boc-oktapeptidového amidu vyrobeného ve stupni c) na odpovídající ^-(S-benzylmerkapto)-^-cyklopentamethylenpropionyl-oktapeptidový amid obecného vzorce j -Ph^-Glh-Asn-Cy (Bzl)- Pro-Z( Jo.s)-G v němž
    X a Z mají výše uvedené významy, kopulací neutralizovaného, deprotektovaného roztoku odpovídajícího terc,butoxykarbonyl-oktapeptidového amidu s p-nitrofenyřl-tf- (S-benzylmerkapto) -β,β-cyklopentamethylen-propionátem v přítomnosti monohydrátu N-hydroxybenzotriazolu, a
    e) redukci odpovídajícího β-(S-benzylmerkapto) cyklopentamethylenpropionyloktapeptidového amidu, vyrobeného ve stupni d), sodíkem v kapalném amoniaku, a oxidační cyklizaci vzniklé disulfhydrylové sloučeniny ferrikyanidem draselným.
  20. 20. Způsob podle bodu 1, pro výrobu sloučenin obecného vzorce ve kterém
    Tyr je D-Tyr a
    Z značí D- nebo L-Arg, vyznačující se tím, že se provádí postupem zahrnujícím tyto po sobě následující stupně:
    *a) zpracování Boc-Gly-pryskyřice syntézou v pevné fázi o šesti cyklech deprotekce, neutralizace a kopulace s vybranou aminokyselinou za vzniku odpovídající chráněné heptapeptidylové pryskyřice obcného vzorce
    Boc-Phe-Val-Asn-Cy (Bzl) -Pro-Z (Tos) -Gly-pryskyřice, v němž
    Z iná výše uvedený význam,
    b) zpracování odpovídající chráněné heptapeptidylové pryskyřice vyrobené ve stupni a) peptidovou syntézou v pevné fázi v cyklu deprotekce, neutralizace a kopulace se sloučeninou vzorce
    Boc-D-Tyr (H) za vzniku odpovídající terc.butoxykarbonyloktapeptjdylové pryskyřice obecného vzorce
    Boc-D-Tyr (H)-Phe-Val-Asn-Cy (Bzl)-Pro-Z(Tos)-Gly-pryskyřice, v němž
    Z má výše uvedený význam,
    c) amonolýzou odpovídající chráněné oktapeptidylové pryskyřice vyrobené ve stupni b) na odpovídající Boc-oktapeptidový amid obecného vzorce
    Boc-D-Tyr (H) -Phe-Val-Asn-Cy (Bzl) -Pro-Z(Tos]-Gly-NH2, v němž
    Z má výše uvedený význam,
    d) přeměnu odpovídajícího Boc-oktapeptidového amidu vyrobeného ve stupni c) na odpovídající β- (S-benzylmerkapto)-β,^-cyklopentamethylenpropionyl-oktapeptidový amid obecného vzorce
    C Wr CO-D - Tyr (H)~ Phe-Va.1- Asn-C у Pro-Z { To ív-NH \ | · ά
    C
    S^CPh v němž
    Z má výše uvedený význam, kopulací neutralizovaného, deprotektovaného roztoku odpovídajícího terc.butoxykarbonyl-oktapeptidového amidu s p-nitrofenyl-β- (S-benzylmerkapto) -β,β-cyklopentamethy len-propionátem v přítomnosti monohydrátu N-hydroxybenzotriazolu, a
    e) redukci odpovídajícího β-(S-benzylmerkapto ) -β,β-cyklopentamethylenpropionyloktapeptidového amidu, vyrobeného ve stupni d), sodíkem v kapalném amoniaku, a oxidační cyklizaci vzniklé disulfhydrylové sloučeniny ferrikyanidem draselným.
CS822017A 1981-03-24 1982-03-23 Process for preparing peptides CS262407B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US06/247,008 US4367225A (en) 1981-03-24 1981-03-24 Novel antagonists of the antidiuretic and/or vasopressor action of arginine vasopressin

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS201782A2 CS201782A2 (en) 1988-08-16
CS262407B2 true CS262407B2 (en) 1989-03-14

Family

ID=22933152

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS822017A CS262407B2 (en) 1981-03-24 1982-03-23 Process for preparing peptides

Country Status (5)

Country Link
US (1) US4367225A (cs)
JP (2) JPS5849352A (cs)
CS (1) CS262407B2 (cs)
IN (1) IN156510B (cs)
ZA (1) ZA821422B (cs)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4491577A (en) * 1981-11-16 1985-01-01 The Medical College Of Ohio Antagonists of the antidiuretic action of arginine vasopressin
DE3363830D1 (en) * 1982-12-21 1986-07-03 Ferring Ab Vasotocin derivatives
US4587045A (en) * 1983-02-16 1986-05-06 Smithkline Beckman Corporation Intermediates for preparing octapeptide vasopressin antagonists
US4469679A (en) * 1983-02-16 1984-09-04 Smithkline Beckman Corporation Octapeptide vasopressin antagonists
US4469680A (en) * 1983-07-06 1984-09-04 Smithkline Beckman Corporation Iodinated vasopressin antagonists
US4551445A (en) * 1983-10-14 1985-11-05 The Medical College Of Ohio Derivatives of arginine vasopressin antagonists
US4649130A (en) * 1984-01-26 1987-03-10 Medical College Of Ohio Novel derivatives of arginine vasopressin antagonists
US4714696A (en) * 1984-01-26 1987-12-22 Medical College Of Ohio Novel derivatives of arginine vasopressin antagonists
US4481194A (en) * 1984-03-07 1984-11-06 Smithkline Beckman Corporation Des-proline-des-glycine vasopressin antagonists
US4481193A (en) * 1984-03-07 1984-11-06 Smithkline Beckman Corporation Des-proline vasopressin antagonists
PH21037A (en) * 1984-03-07 1987-06-30 Smithkline Beckman Corp Des-proline vasopressin antagonists
US4719199A (en) * 1984-12-14 1988-01-12 Smithkline Beckman Corporation Diuretic compositions and methods of producing diuresis
US4597901A (en) * 1984-12-14 1986-07-01 Smithkline Beckman Corporation β-indolylalanyl or β-indolylglycinyl vasopressin antagonists
US4684716A (en) * 1984-12-14 1987-08-04 Smithkline Beckman Corporation Polypeptide intermediates
US4624943A (en) * 1985-03-20 1986-11-25 Smithkline Beckman Corporation Aromatic basic-tailed vasopressin antagonists
US4656248A (en) * 1985-04-23 1987-04-07 Smithkline Beckman Corporation Cupric oxidation of 1,6-dimercapto-containing peptides
US4711877A (en) * 1985-09-18 1987-12-08 Smithkline Beckman Corporation 6-pen-vasopressin compounds
US4826813A (en) * 1987-05-21 1989-05-02 Smithkline Beckman Corporation 4'-Methyl-β-mercapto-β,β-cyclopentamethylenepropionic acid vasopressin antagonists
US5055448A (en) * 1987-06-25 1991-10-08 Medical College Of Ohio Linear derivatives of arginine vasopressin antagonists
US5225528A (en) * 1990-02-27 1993-07-06 Merck & Co., Inc. Cyclic hexapeptide oxytocin antagonists
US20030103983A1 (en) * 2002-05-09 2003-06-05 Pressler Milton Lethan Ace inhibitor-vasopressin antagonist combinations
US8168592B2 (en) * 2005-10-21 2012-05-01 Amgen Inc. CGRP peptide antagonists and conjugates

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1193509B (de) * 1960-06-02 1965-05-26 Hoechst Ag Verfahren zur Herstellung eines neuen Oktapeptids mit vasopressorischer Wirksamkeit
CH426861A (de) * 1963-06-06 1966-12-31 Sandoz Ag Verfahren zur Herstellung eines bisher unbekannten Polypeptids
CH442342A (de) * 1964-07-17 1967-08-31 Sandoz Ag Verfahren zur Herstellung eines neuen Polypeptids
CH460039A (de) * 1965-04-15 1968-07-31 Sandoz Ag Verfahren zur Herstellung eines neuen Polypeptids
CH495957A (de) * 1966-09-15 1970-09-15 Ceskoslovenska Akademie Ved Verfahren zur Herstellung eines antidiuretisch wirksamen Polypeptids
US3691147A (en) * 1970-06-05 1972-09-12 Medical College Of Ohio The (4-l-threonine)-oxytocin
US3700652A (en) * 1970-08-31 1972-10-24 Medical College Of Ohio At Tol (4-l-threonine)-mesotocin
ZA72790B (en) * 1971-03-12 1972-10-25 Kloeckner Werke Ag Conveyor trough for scraper chain conveyors,particularly twin chain conveyors
US4148787A (en) * 1976-05-24 1979-04-10 Ferring Ab Antidiuretically effective polypeptide and a process for preparing the same

Also Published As

Publication number Publication date
JPS5849352A (ja) 1983-03-23
ZA821422B (en) 1983-04-27
IN156510B (cs) 1985-08-17
CS201782A2 (en) 1988-08-16
JPH0325439B2 (cs) 1991-04-05
JPS63239297A (ja) 1988-10-05
US4367225A (en) 1983-01-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CS262407B2 (en) Process for preparing peptides
EP0061356B1 (en) Antagonists of the antidiuretic and/or vasopressor action of arginine vasopressin
US4024248A (en) Peptides having LH-RH/FSH-RH activity
US5070187A (en) Pharmacologically effective antagonists of arginine-vasopressin
US4223021A (en) Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4228158A (en) Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US5055448A (en) Linear derivatives of arginine vasopressin antagonists
US4228157A (en) Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4491577A (en) Antagonists of the antidiuretic action of arginine vasopressin
EP0333071A2 (en) Polypeptides, methods for their preparation, pharmaceutical compositions comprising them and use
US4110322A (en) Peptide derivatives and pharmaceutical compositions containing same
Prasad et al. Structure-activity relationships in luteinizing hormone-releasing hormone
HU185427B (en) Process for preparing antagonists of hormone releasing luteinizing hormone
US4649130A (en) Novel derivatives of arginine vasopressin antagonists
US5516759A (en) LHRH antagonists having lactam groups at the N-terminus
EP0151016A2 (en) Arginine vasopressin antagonists
US4551445A (en) Derivatives of arginine vasopressin antagonists
US4657892A (en) Pharmacologically active peptides
CA1200547A (en) Antagonists of the antidiuretic action of arginine vasopressin
US5618791A (en) Memory enhancing peptides
US4772586A (en) Novel derivatives of arginine vasopressin antagonists
AU2533988A (en) Vasoactive peptides
HU197929B (en) Process for producing vasopressin-antagonist compounds of cyclic desproline-vasopressin and pharmaceutical compositions comprising these compounds
Zaoral et al. [1-β-Mercaptopropionic acid, 8-norarginine] vasopressin and [1-β-mercaptopropionic acid, 8-D-norarginine] vasopressin. Two analogs with strong biological effects
JPS6168499A (ja) 新規ペプチド