CS261524B1 - Sposob přípravy nerozpustného chromolytického substrátu na stanoveníe Cx zložky celulázovej aktivity - Google Patents
Sposob přípravy nerozpustného chromolytického substrátu na stanoveníe Cx zložky celulázovej aktivity Download PDFInfo
- Publication number
- CS261524B1 CS261524B1 CS867806A CS780686A CS261524B1 CS 261524 B1 CS261524 B1 CS 261524B1 CS 867806 A CS867806 A CS 867806A CS 780686 A CS780686 A CS 780686A CS 261524 B1 CS261524 B1 CS 261524B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- component
- cellulase activity
- mixer
- weight
- insoluble
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
261524 3
Vynález sa týká spósobu přípravy neroz-pustného chromolytického substrátu na sta-novenie C; zložky celulázovej aktivity. .
Na stanovenie C; zložky celulázovej ak-tivity (endo-(J3-l,4-glukan glukanoihydroláza,EC 3.2.1.4j sa používá jú metody viskozime-trické [T. M. Enari, P. Markkanen: in Ad-vances in Biochem. Engineering (1977), T.K. Ghose, A. Fichter, N. Blakesbrough eds.Vol. 5, 24, Springer Verlag, Berlin, NewYork], neíelometrické [I. V. Gorbačova, N.A. Rodinova: Biochim. Biophys. Acta 484, 93(1977) ], [M. Nummi, P. C. Fox, M. L. Niku--paavcfla, T. M. Enari: Anal. Biochem. 116,136 (1981)] a kolorimetrické za použitiapříslušného chromolytického rozpustného a-lebo nerozpustného substrátu, ktorý po en-zýmovej hydrolýze poskytuje farebný filtrát,intenzita kterého je úměrná prítomnej en-zýmovej aktivitě [B. V. Mc Cleary: Carbo-hydr. Res. 86, 104 (1980)], [P. Biely, D. Mis-lovičová, R. Toman: Anal Biochem. 144, 146(1935)], [II. Kuniak, J. Zemek. Čs. AO 192 210(1979)], [A. O. Stamm: Helv. Chim. Acta 46,3 008 (1963)].
Nevýhodou doposial' známých a používa-ných metod stanovenia C, zložky celulázo-vej aktivity je ich poměrná časová, přístro-jová, resp. experimentálna náročnost.
Uvádzané nedostatky rieši navrhovaný po-stup, ktorého podstata spočívá v tom, že nahydroxyetylcelulózu so stupňom substitúcie0,15 až 0,25 sa kovalentne naviaže 5 až 8pere. hmot. dvoijsodnej soli kyseliny 8-amí-no-5- [ 3- (sulfoetylsulf onyl) anilíno ] -6-antra-chinón sulfónovej v prostředí vodného roz-toku hydroxidu sodného o koncentrácii 2až 4 % hmot. po dobu 1 až 2 hodin pri tep-lotě 15 až 20 °C, načo sa vyzráža nalieva-ním do mixéra s okyseleným etanolom priotáčkách mixéra 1 500 až 2 500 za minutu.
Zistili sme, že hydroxyetylcelulóza o níz-kom stupni substitúcie je výhodnějším sub-strátem pre stanovenie Gx zložky celulázo-vej aktivity a patří k neionogénnym derivá-tem celulózy v dosledku čoho nedochádzau nej k nežiadúcim interakciám s celulázo-vým enzýmom. Ďalšou výhodou použitia níz-kosubstituovanej hydroxyetylcelulózy je zná-ma skutečnost:, že so stupňom substitúciezákladného ceilulózového polyméru sa jehosubstrátové vlastnosti pre celulázovú akti-vitu zhoršujú až strácajú.
Doporučený stupeň substitúcie znižuje lenv nepatrnej miere substrátové vlastnosti zá-kladného celulózcvého polyméru, a pretopoužitý derivát je dostatečné citlivý k ce-lulázovej C.í zložke enzýmu. Keďže vlastněkovalentné viazanie použitého farbiva pre-bielia v homogennej fáze dosahuje sa velmirovnoměrná distribúcia chnomogénnej sub-stancie na makromolekule hydroxyetyicelu-lózového reťazca, čo je podkladem pre lep-šili reprodukovatelnosť enzýmovej analýzy.Pri zrážaní vyfarbeného produktu je výhod-né voliť otáčky mixéra medzi 1 500 až 2 500za minútu, nakolko pri týchto rýchlostiach sa dosahuje optimálna velkosť gélových čas-tíc hydroxyetylcelulózy, t. j. 60 až 300 nm.
Tento rozměr velkosti častíc je optimálnyaj pre vymýváme nezreagovaného' farbivaz hotového chromolytického produktu. Op-timálně množstvo kovalentne viazaného far-biva pre tento typu celulózového substrá-tu je 5 až 8 % hmot. na hmotnost východis-kového derivátu celulózy. Výhodou nového navrhovaného spostobupřípravy substrátu pre stanovenie C- zložkycelulázovej aktivity je, že připravený sub-strát má vysokú citlivost k příslušnému en-zýmu, má homogenně distribuované chro-mtogénne skupiny, čo podmieňuje velmi vy-sokú reprodukovatelnosť enzýmovej ana-lýzy ako i skutečnost, že nový substrát jeneionogénny, takže pri jeho použití nedo-chádza ku nežiadúcim interakciám enzýmuso substrátem. Příklad 1 5 g hydroxyetylcelulózy so stupňom sub-stitúcie 0,15 sa rozpustí v 100 ml vodnéhoroztoku hydroxidu sodného o koncentrácii4 % hmot. Po rozpuštění sa roztok ochladína teplotu 15 °C a postupné sa k němu zastálého miešania přidává roztok 0,5 g far-biva dvojsodnej soli kyseliny 8-amíno-5-[3-- (sulfoetylsulf onyl) anilíno ] -6-antrachinónsulfónovej (Reanazol briliant blue R) v 100mililitroch vody po dobu 30 minút, pričomsa teplota stále udržuje chladením na tep-lotě 15 °C. Po přidaní celého objemu rozto-ku farbiva sa reakčná zmes ešte mieša 90minút pri uvedenej teplote, po ktorej doběje viazanie farbiva ukončené. Nato sa re-akčná zmes tenkým prúdom nalieva do mi-xéra, v ktorom sa mieša 2 litre etanolu oky-seleného s 10 ml koncentrovanej kyselinyoctové] pri otáčkách mixéra 1 500 za minú-tu. Pridávanie roztoku vyfarbeného substrá-tu trvá 10 minút, načo sa nerozpustný pro-dukt odfiltruje a na filtri premýva destilo-vanou vodou tak dlho, až odtekajúci filtrátje bezfarebný. Nakoniec sa voda z chroimo-lytického substrátu vytěsní alkoholom, resp.acetóuoro a použité organické rozpúšíadlosa nechá odpařit z produktu pri laborator-ně j teplete alebio vákuovo sa oddestiluje priteplote do 50 °C.
Hotový suchý produkt o výtažku 5,2 gobsahoval 8,0 % hmot. viazaného farbiva,dobré napúčal vo vodě na objem 9 ml/g abol vhodným chromolytickým substrátem prestanovenie C, zložky celulázovej aktivity privelkosti častíc za sucha 80 až 300 nm. Příklad 2
Postupuje sa ako v příklade 1 s tým roz- dielom, že sa použije hydroxyetylcelulóza so stupňom substitúcie 0,25 a na farbenie sa použije 0,3 g farbiva a celková reakčná do- ba bola 60 minút pri teplote 20 °C, zráža-
Claims (1)
- B Vynález móže nájsť uplatnenie v bioche- mii a biotechnológii, kde je potřebné sta- novit úroveň Cx celulázovej aktivity, a to tak pre výskumné účely, ako i v priemyslo- vých aplikáciách. S nie sa previedlo pri otáčkách mixéra 2 500až minútu. Výsledný produkt mal 5,1 % hmot.kovalentne viazaného farbiva a napúčal vovodě na objem 10 ml/g. Velkost’ častíc zasucha bola v rozsahu 40 až 200 nm. PREUMET Sposob přípravy nerozpustného chromo-lytického substrátu na stanovenie C( zložkycelulázovej aktivity kovalentným viazanímfarbiva v alkalickom prostředí na celulózovýderivát vyznačený tým, že na hydroxyetyl-celulózu so stupňom substitúcie 0,15 až 0,25sa kovalentne naviaže 5 až 8 % hmot. far-biva dvojsodnej soli kyseliny 8-amíno-5-[3- VYNÁLEZU - (sulf oetylsulf onyl) anilíno ] -6-antrachinonsulfónovej v prostředí vodného roztoku hyd-roxidu sodného o koncentrácii 2 až 4 %hmot. po dobu 1 až 2 hodin pri teplote 15 až20 °C, načo sa v druhom stupni vyfarbenýprodukt zráža nalievaním do mixéra s oky-seleným etanolom pri otáčkách mixéra 1 500až 2 500 za minútu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS867806A CS261524B1 (sk) | 1986-10-29 | 1986-10-29 | Sposob přípravy nerozpustného chromolytického substrátu na stanoveníe Cx zložky celulázovej aktivity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS867806A CS261524B1 (sk) | 1986-10-29 | 1986-10-29 | Sposob přípravy nerozpustného chromolytického substrátu na stanoveníe Cx zložky celulázovej aktivity |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS780686A1 CS780686A1 (en) | 1988-07-15 |
| CS261524B1 true CS261524B1 (sk) | 1989-02-10 |
Family
ID=5427860
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS867806A CS261524B1 (sk) | 1986-10-29 | 1986-10-29 | Sposob přípravy nerozpustného chromolytického substrátu na stanoveníe Cx zložky celulázovej aktivity |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS261524B1 (cs) |
-
1986
- 1986-10-29 CS CS867806A patent/CS261524B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS780686A1 (en) | 1988-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4966607A (en) | Method of producing dyed polysaccharide:amino or imino starch derivative with reactive dye | |
| US5877310A (en) | Glycoconjugated fluorescent labeling reagents | |
| Biely et al. | Remazol brilliant blue-xylan: a soluble chromogenic substrate for xylanases | |
| Helbert et al. | Fluorescent cellulose microfibrils as substrate for the detection of cellulase activity | |
| Leisola et al. | Determination of the solubilizing activity of a cellulase complex with dyed substrates | |
| US3278392A (en) | Water insoluble enzymes | |
| US4321364A (en) | Preparation of soluble chromogenic substrates | |
| CS261524B1 (sk) | Sposob přípravy nerozpustného chromolytického substrátu na stanoveníe Cx zložky celulázovej aktivity | |
| US5807943A (en) | Synthesis of glycopolymers | |
| US4002424A (en) | Solution of isomer mixture of naphthylazophenylazonaphthyl disulfonate dye | |
| EP0062968B1 (en) | Support material for use in serological testing and process for the production thereof | |
| US4039383A (en) | Process for producing maltopentaose | |
| CN114835826A (zh) | 一种两性离子纤维素及其制备方法与应用 | |
| CZ476389A3 (cs) | Spósob přípravy chromolytického substrátu na stanovenie xylanáz ověj enzýmovej aktivity | |
| Barker et al. | 561. The structure of the starch-type polysaccharide synthesised from sucrose by Neisseria perflava | |
| SU696377A1 (ru) | Способ определени целлюлолитической активности ферментов | |
| US2727034A (en) | Primary aromatic amino ether of cellulose and preparation of same | |
| RU1792428C (ru) | Способ получени хромогенного субстрата дл определени хитиназной активности | |
| CS241325B1 (sk) | Spasob pripravý sodnej soli 2-[4-(l-amino-2-suIfoantracIiinón- -4-ylamíno) řenylsulfonyl] etylxylánu | |
| RU2691611C1 (ru) | Способ получения препарата бромелайна в геле на основе пищевого хитозана и сукцината хитозана | |
| CS254163B1 (sk) | Sposob přípravy ohromolytického substrátu na stanovenie /(1-3) glukanázy | |
| CS203676B1 (en) | Process for preparing chromogenic amylaceous substrate for the determination of the activity of glucoamylase | |
| Johnston | Methodologies for assaying the hydrolysis of cellulose by cellulases | |
| US4029516A (en) | Process for producing soluble amylose | |
| CA1109407A (en) | Process for producing maltopentaose |