CS260641B1 - Lidský modifikovaný C-peptid a způsob jeho přípravy - Google Patents
Lidský modifikovaný C-peptid a způsob jeho přípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CS260641B1 CS260641B1 CS871236A CS123687A CS260641B1 CS 260641 B1 CS260641 B1 CS 260641B1 CS 871236 A CS871236 A CS 871236A CS 123687 A CS123687 A CS 123687A CS 260641 B1 CS260641 B1 CS 260641B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- peptide
- gly
- leu
- glu
- preparation
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 7
- VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 33017-11-7 Chemical class OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)CCC1 VOUAQYXWVJDEQY-QENPJCQMSA-N 0.000 claims description 19
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 11
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N diphenylmethanamine Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(N)C1=CC=CC=C1 MGHPNCMVUAKAIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical group CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 2
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical group CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 2
- 108010057083 glutamyl-aspartyl-leucine Proteins 0.000 claims description 2
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 11
- 108010075254 C-Peptide Proteins 0.000 description 8
- -1 Nva Chemical class 0.000 description 7
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 7
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 6
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 6
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 6
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 4
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 4
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 4
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical class C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076181 Proinsulin Proteins 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N tetrachloro-1,4-benzoquinone Chemical compound ClC1=C(Cl)C(=O)C(Cl)=C(Cl)C1=O UGNWTBMOAKPKBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 1
- 102100021277 Beta-secretase 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710150190 Beta-secretase 2 Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101100228210 Caenorhabditis elegans gly-7 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100533230 Caenorhabditis elegans ser-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100315624 Caenorhabditis elegans tyr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101100205180 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-6 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 210000000227 basophil cell of anterior lobe of hypophysis Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N dibenzyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1COCC1=CC=CC=C1 MHDVGSVTJDSBDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000007446 glucose tolerance test Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical group C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Vynález se týká modifikovaného lidského C-peptidu pro radioimunoanalytické stanovení a pro přípravu protilátek a způsobu jeho výroby.
Je známo, že lidský C-peptid (AA33-63 lidského proinsulinu) je specifickými proteázami odštěpen z molekuly proinsulinu, a tak vzniká aktivní hormon insulin. Insulin i C-peptid jsou pak secernovány ^-buňkami pankreatu v ekvimolárním poměru do portální krve (Středa M.: Diabetologie, Avicenum, Praha, 190 s. /1985/; Kemmler W. a kol.: J. Biol. Chem, 248, 4 544 /1973/).
Radioimunoanalytické stanovení hladiny C-peptidu v krevním séru, popř. moči pacientů poskytuje informaci o funkci /3-buněk, a je spolehlivou moderní metodou diagnózy diabetes mellitus (Melani F. a kol.: Proč. Nati. Acad. Sci. USA, 67, 148 /1970/).
Uvedené radiomunoanalytické (RIA) stanovení C-peptidu má oproti jiným diagnostickým metodám diabetů, např. glukosovému tolerančnímu testu či stanovení hladiny insulinu řadu výhod:
1. měření hladiny C-peptidu přímo stanoví produkci vlastního insulinu;
2. na rozdíl od insulinu nedochází k variabilnímu vychytávání C-peptidu v játrech;
3. lze takto sledovat i pacienty, kterým je podáván exogenní insulin.
Nevýhodou dosud syntetizovaných lidských modifikovaných C-peptidů je, že není možno kvantitativně sledovat přímými metodami navázání ligandu na makromolekulární nosič.
Předmět vynálezu je lidský modifikovaný C-peptid vzorce:
H—X—Glu33—Ala—Glu—Asp—Leu—Gln— —Val—Gly40—-Gin—Val—Glu—Leu—Gly45— —Gly—Gly—Pro—Gly—Ala—Gly—Ser— —Leu—Gin—Pro—Leu—Ala—Leu—Glu— —Gly—Ser—Leu—Gin63—Y—OH, kde
X je tyrosin a
Y je např. norvalin nebo norleucin.
Substituent X může být např. Tyr nebo jakákoliv aminokyselina umožňující vnesení radioaktivního atomu a Y napřirozená aminokyselina, tj. aminokyselina nevyskytující se v lidském organismu. Tuto aminokyselinu, např. Nva, Nie apod, lze použít k monitorování vazby na makromolekulární nosič.
Dále je předmětem vynálezu způsob výroby lidského, modifikovaného C-peptidu spočívající v tom, že peptid se syntetizuje na benzhydrylaminovém nebo chlormethylovaném polymerním nosiči známým způsobem při teplotě místnosti.
Přehled jednotlivých kroků syntézy je uveden schematicky v tabulce 1 a 2.
Modifikovaný C-peptid byl připraven dvěma způsoby na pevné fázi (Stewart J. M.; Young J. D.: Solid phase peptide synthesis, Pierce Chemical Company Rockford, 176 s. /1984/), kdy jako výchozích látek bylo použito' 9-f luor enylmethyloxykarbonyl- (Fmoc), resp. t-butyloxykarbonyl- (Boc) derivátů aminokyselin. Výsledný produkt byl odštěpen z pryskyřice a čištěn obvyklými purifikačními metodami — např. elektroforeticky, gelovou a ionexovou chromatografii, vysoce účinnou kapalinovou chromatografii na reverzní fázi (HPLC). Čistota byla ověřována elektroforeticky, HPLC a aminokyselinovou analýzou. Imunoreaktivita byla ověřena radioimunoanalyticky.
Modifikovaný C-peptid je imunoreaktivní a bylo jej použito k přípravě polyklonálního králičího antiséra. Lze jej značit např. radioaktivním 125I a použít tak pro přípravu kompletní soupravy pro RIA stanovení C-peptidu.
iDále jsou uvedeny příklady způsobu výroby modifikovaného lidského C-peptidu podle vynálezu.
Přikladl
Příprava modifikovaného C-peptidu podle vynálezu pomocí Fmoc-derivátů aminokyselin
Bylo použito 1,0 g benzhydrylaminové pryskyřice, na kterou bylo navázáno acidolabilní ramínko (3-/4-hydroxymethylfenoxy/propionát) s první C-koncovou aminokyselinou Nva, substituce byla 0,4 mmol/g pryskyřice (Albericio F.; Barany G.: Int. J. Peptide Protein Res, 26, 92 /1985/).
ΐα-aiminoskupiny aminokyselin byly chráněny skupinou Fmoc-, postranní řetězce Glu a Asp byly chráněny skupinou OBuMt-butylester) a hydroxylová skupina Ser byla chráněna BuHt-butylether-). Karboxylové skupiny byly aktivovány jako estery N-hydroxybenztriazolu (HOBt) (u Gin bylo použito symetrického anhydridů). Syntéza byla prováděna podle postupu, viz tab. 1. Fmoc-skupina byla odštěpována roztokem piperidinu v dimethylformamidu (DMF) (1:1). Jako kondenzační činidlo byl používán dicyklohexylkarbodiimid. Úplnost kondenzace byla sledována ninhydrinovým testem (u Pro chloranilovým testem).
Hotový peptid (a zároveň chránící skupiny postrapních řetě?ců- .aminokyselin) byl štěpen z pryskyřice 45% roztokem trifluoroctové ky sel iny · (TFA) v dichlorm ethanu (2 ti), a vysrážen etherem, z pryskyřice byl dále extrahován 30% kyselinou octovou, vodou a lyofilizován. Peptid byl čištěn na Biogelu P4, DEAE Sephadexu a vysoce účinnou kapalinovou chromatografii na reverzní fázi (HPLC).
Výtěžek po gélové filtraci byl 0,904 g peptidu, tj. 70 %. Peptid čištěný pomocí ione2B0B4Í xové chromatografie a preparativní HPLC je elektroforeticky (s relativní pohyblivostí ke glycínu v pufru o pH — 2,4, E = 0,25) i HPLC jednotný. Výsledek aminokyselinové analýzy odpovídá aminokyselinovému složení:
Teoretické zastoupení Analýza
| Asp | 1 | 0,83 |
| Ser | 2 | 1,8 |
| Gin + Glu | 8 | 7,6 |
| Pro | 2 | 2,2 |
| Gly | 7 | 6,5 |
| Ala | 3 | 3,0 |
| Val | 2 | 1,7 |
| Nva | 1 | 0,97 |
| Leu | 6 | 5,97 |
| Tyr | 1 | 0,7 |
Peptid byl navázán na hovězí sérumalbumin a konjugátu bylo použito pro přípravu králičího a morčecího antiséra.
Příklad 2
Příprava modifikovaného C-peptidu podle vynálezu pomocí Boc- chráněných aminokyselin
Bylo použito 0,5 g chlormethylované pryskyřice, na které byl navázán Nie v substituci 0,32 mmol/g pryskyřice, a-aminoskupiS ny aminokyselin byly chráněny skupinou ' Boc-, karboxylové skupiny postranních řetězců Glu, Asp skupinou OBzl- (benzylester-j, hydroxyskupina Ser skupinou Bzl(benzylether-). Aminokyseliny byly aktivovány jako estery N-hydroxybenztriazolu, popř. jako symetrické · anhydridy. Syntéza byla prováděna podle postupu v tab. 2. Bocskupina byla štěpena 45% trifluoroctovou kyselinou v dichlormethanu. Jako kondenzačního činidla bylo použito dicyklohexylkarbodiimidu. Průběh kondenzace byl sledován. ninhydrinovým, popř. chloranilovým a acetylačním testem.
Hotový peptid (a chránící skupiny postranních řetězců] byl štěpen 1 h kapalným fluorovodíkem v přítomnosti 3% thioanizolu, který byl potom extrahován ethylacetátem, peptid byl extrahován 30*% kyselinou octovou, vodou a lyofilizován. Čištěn byl gelovou chromatografii (na Biogelu P4 nebo Fraktogelu), popř. elektroforeticky. Byla získána směs peptidů (0,493 gj, v níž byl prokázán celý C-ipeptid. Imunoreaktivita produktu byla 60% aktivity komerčního C-peptidu (fy BIODATA). Produktu bylo použito pro tvorbu konjugátu s hovězím sérumalbuminem a pro produkci králičího antiséra.
Lidský modifikovaný C-peptid podle vynálezu je vhodný pro radioimunoanalytické stanovení a pro přípravu protilátek, např. králičího a morčecího antiséra.
Tabulka 2
Tabulka 1
| krok | Fmoc-příprava reagencie (~ 15 ml) | min. |
| 1 | CH2CI2 (2X ) | 3 |
| 2 | DMF (2X ) | 3 |
| 3 | DMF : piperidin (2X ) | 20 |
| 4 | (1:1) DMF (2X ) | 3 |
| 5 | dioxan : H2O (2:1) (2X ) | 10 |
| 6 | DMF (3X ) | 5 |
| 7 | CH2CI2 (či DMF) (3X ) | 5 |
| 8 | HOBt ester Fmoc-AK či | 15 |
| symetrický anhydrid | a více | |
| 9 | (3 ekv.) v CH2CI2 (či CH2CI2 : DMF) ninhydrinový test | 5 |
| 10 | opakovat kondenzaci | |
| 11 | v př. potřeby (krok 7—9) DMF (5X ) | 8 |
| 12 | 2-propanol (5 X) | 8 |
| 13 | CH2CI2 (5X ) | 8 |
Boc-příprava
| krok | reagencie (~ 15 ml) | min. |
| 1 | CH2CI2 (4X ) | 7 |
| 2 | 45 % TFA v CH2CI2 (IX ) | 2 |
| 3 | 45 % TFA v CH2CI2 (IX ) | 20 |
| 4 | CH2CI2 (3X ) | 5 |
| 5 | 8% TEA v CH2CI2 (2X ) | 3 |
| 6 | CH2CI2 (4X ) | 7 |
| 7 | HOBt ester Boc-AK či symetr. anhydrid (3 ekv.) v CH2CI2 | 40 i více |
| 8 | ninhydrinový test | 5 |
| 9 | CH2CI2 (3X ) | 5 |
| 10 | 2-propanol (3 X ) | 5 |
| 11 12 | CH2CI2 (4X ) opakovat kondenzaci v př. potřeby (krok 7—11) | 7 |
Poznámka:
TEA = triethylamin AK = aminokyselina
Claims (2)
- PŘEDMĚT1. Lidský modifikovaný C-peptid vzorce:H—X—Glu33—Ala—Glu—Asp—Leu—Gin— —Val—Gly40—Gin—Val—Glu—Leu—Gly45— —Gly—Gly—Pro—Gly—Ala—Gly—Ser— —Leu—Gln—Pro—Leu—Ala—Leu—Glu— —Gly—Ser-vLeu—Gin63—Y—OH, kdeVYNÁLEZUX je tyrosin aY je norvalin nebo norleucin.
- 2. Způsob přípravy lidského modifikovaného C-peptidu podle bodu 1, vyznačený tím, že pep.tid se syntetizuje na benzhydrylaminovém nebo chlormethylovaném polymerním nosiči, při teplotě místnosti.Severografia, n. p. závod 7, MostCena 2,40 Kčs
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS871236A CS260641B1 (cs) | 1987-02-25 | 1987-02-25 | Lidský modifikovaný C-peptid a způsob jeho přípravy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS871236A CS260641B1 (cs) | 1987-02-25 | 1987-02-25 | Lidský modifikovaný C-peptid a způsob jeho přípravy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS123687A1 CS123687A1 (en) | 1988-05-16 |
| CS260641B1 true CS260641B1 (cs) | 1989-01-12 |
Family
ID=5346245
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS871236A CS260641B1 (cs) | 1987-02-25 | 1987-02-25 | Lidský modifikovaný C-peptid a způsob jeho přípravy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS260641B1 (cs) |
-
1987
- 1987-02-25 CS CS871236A patent/CS260641B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS123687A1 (en) | 1988-05-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI83660C (fi) | Foerfarande foer framstaellning bukspottskoertelns grf hos maenniskan. | |
| US4493795A (en) | Synthetic peptide sequences useful in biological and pharmaceutical applications and methods of manufacture | |
| Dryburgh et al. | Radioimmunoassay for motilin | |
| US4423034A (en) | Process for the preparation of antibodies | |
| JP3983806B2 (ja) | ソマトスタチンの環状ペプチド類似体 | |
| JPS61118400A (ja) | 成長ホルモン放出性因子類似体及びその製造方法 | |
| US4859765A (en) | Synthetic peptide sequences useful in biological and pharmaceutical applications and methods of manufacture | |
| DK162649B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af pgrf eller pgrf-analoge peptider, farmaceutisk acceptable additionssalte heraf samt mellemprodukt til brug ved fremgangsmaaden | |
| US4407965A (en) | Process for preparing antibody | |
| HU199508B (en) | Process for producing grf analogues and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient | |
| US4687839A (en) | Calcitonin gene related peptide analogs with C-terminal D-amino acid substituents | |
| US4697002A (en) | Calcitonin gene related peptide analogs with amino acid subdstituents at the penultimate position 36 | |
| US3978035A (en) | 13-Norleucine-14-desamido motilin, a method for preparing it and an agent containing it | |
| US4518527A (en) | Polypeptides related to the pre-acetylcholine receptor-α of the electric organ of Torpedo californica | |
| GB2062644A (en) | Glucagon fragment and utility hereof | |
| US4622386A (en) | [1,7-di-alanine]calcitonin | |
| US4652627A (en) | Calcitonin analogs with C-terminal D-amino acid substituents | |
| US4414149A (en) | Glycine8 -D-arginine24 calcitonin | |
| US4376760A (en) | Tridecapeptide | |
| US4721704A (en) | Potent synthetic atrial peptide analogs | |
| US4659804A (en) | (Bis-1,7-S-acetamidomethyl-L-cysteine)salmon calcitonin | |
| US4658014A (en) | Synthetic peptides with calcitonin-like activity | |
| US4327075A (en) | Synthetic antigenically-active polypeptide and a process for its preparation | |
| US4639510A (en) | (1-S-acetamidomethyl cysteine, 7-alanine)calcitonin | |
| Ohga et al. | Radioimmunoassays for the thymic hormone serum thymic factor (FTS) |