CS259884B2 - Method of blood division - Google Patents
Method of blood division Download PDFInfo
- Publication number
- CS259884B2 CS259884B2 CS858019A CS801985A CS259884B2 CS 259884 B2 CS259884 B2 CS 259884B2 CS 858019 A CS858019 A CS 858019A CS 801985 A CS801985 A CS 801985A CS 259884 B2 CS259884 B2 CS 259884B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- matrix
- blood
- sample
- impregnated
- lectin
- Prior art date
Links
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 47
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims abstract description 38
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 239000002523 lectin Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 18
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims abstract description 16
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims abstract description 13
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000004744 fabric Substances 0.000 claims description 15
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 12
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 7
- 229920000297 Rayon Polymers 0.000 claims description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 19
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 27
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 8
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 3
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 3
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 3
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 2
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- 240000000528 Ricinus communis Species 0.000 description 2
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 108010046516 Wheat Germ Agglutinins Proteins 0.000 description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TXXWBTOATXBWDR-UHFFFAOYSA-N n,n,n',n'-tetramethylhexane-1,6-diamine Chemical compound CN(C)CCCCCCN(C)C TXXWBTOATXBWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 108010048090 soybean lectin Proteins 0.000 description 2
- VEFLKXRACNJHOV-UHFFFAOYSA-N 1,3-dibromopropane Chemical compound BrCCCBr VEFLKXRACNJHOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-L 2-oxoglutarate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC(=O)C([O-])=O KPGXRSRHYNQIFN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 1
- 101000950981 Bacillus subtilis (strain 168) Catabolic NAD-specific glutamate dehydrogenase RocG Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 101710107035 Gamma-glutamyltranspeptidase Proteins 0.000 description 1
- 102000016901 Glutamate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 101710173228 Glutathione hydrolase proenzyme Proteins 0.000 description 1
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 1
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 1
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 1
- 240000004322 Lens culinaris Species 0.000 description 1
- 235000014647 Lens culinaris subsp culinaris Nutrition 0.000 description 1
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 1
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O NAD(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-O 0.000 description 1
- 240000007643 Phytolacca americana Species 0.000 description 1
- 235000009074 Phytolacca americana Nutrition 0.000 description 1
- YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N Tritium Chemical compound [3H] YZCKVEUIGOORGS-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 1
- 102000020006 aldose 1-epimerase Human genes 0.000 description 1
- 108091022872 aldose 1-epimerase Proteins 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000007705 chemical test Methods 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 1
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 238000005375 photometry Methods 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000012047 saturated solution Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 229910052722 tritium Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5002—Partitioning blood components
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
- G01N33/521—Single-layer analytical elements
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Vzorek krve se nanese na matrici impregnovanou lektinem a oddělí se plazma nebo sérum, přičemž se matrice sestávající ze savého· materiálu s relativním, odporem, proudění až 40 °/o a napuštěná vzorkem krve 2 až 10 X propláchne isotoníckým roztokem pufru o pH v rozmezí 5,0 až 10,5 jako ředidlem. Matrice se výhodně propláchne ředidlem protiběžně. Jako, matrice se použije savý materiál z bavlněné tkaniny, smíšené tkaniny obsahující bavlnu, celulózy, viskózy nebo materiálu obsahujícího tyto složky. Bavlněná tkanina se použije o hustotě nití 10 až 25 (osnova) a 10 až 20 (útek) nití/cm a plošné hmotnosti 100 až 400 g/m2. Matrice může sestávat z více vrstev, přičemž se vrstva nejvzdálenější od naneseného vzorku může hydrofobovat. Při dělení se stanovená látka reprodukovatelně vypláchne, aniž by nastala analýzu rušící hemolýza. Způsob umožňuje dělení krve s malým množstvím vzorku a v krátké době.
Vynález se týká způsobu dělení krve a způsobu jednoduchého oddělení plazmy nebo séra z krve při současném zředění ředidlem.
Kvantitativní analýza biologických látek přítomných v krvi má pro klinickou chemii rozhodující význam. Jako protiklad analýzy jiných tělesných tekutin, jako moči, je však přímé stanovení těchto látek v krvi možné pouze v určitých případech. Obvykle se musí před vlastní analýzou oddělit rušivé části, především erythrocyty. Přitom se musí obzvláště dbát na to, aby nenastalo žádné ovlivnění výsledku analýzy hemolýzou. Nejčastěji používaný způsob dělení je odstředění analyzovaných vzorků krve. Nevýhodou jsou však přitom náklady na aparaturu a nezbytné velké objemy vzorků. Kromě toho pro provádění nezbytný kvalifikovaný personál a pro manipulaci a dopravu vzorků séra jsou nutná rozsáhlá bezpečnostní opatření. Kromě toho jsou spojeny s oddělením přípravy vzorků a vlastní analýzy prblémy s identifikací vzorků.
Podle stavu techniky jsou známé způsoby к dělení krve, které spočívají ňa aglutinaci erythrocytů přídavkem lektinů. Přitom se přidají ke vzorku krve ve vhodné nádobě příslušné látky a po určité době se odebere sérum nebo plazma. Jako nádoba se přitom použije v nejednodušším případě samotná trubice na odběr krve (DE-OS 2038722) nebo má nádoba tvar podložního sklíčka (DE-AS 1498577) nebo má jiný libovolný tvar. Lektiny se nanesou do příslušné nádoby buď jako pevná látka, nebo se imobilizují na látkách obsažených v nádobě (EP — OS 57110). Všem těmto systémům je společné to, že se sérum nebo plazma uvolněná z krve odstraní po určité době z dělicího rozsahu, aby se přivedla do jiného rozsahu další analýzy. Přitom zůstanou oddělené erythrocyty a část séra nebo plazmy v dělicí zóně. Toto neúplné převedení vytvořeného séra nebo plazmy vyžaduje pro další analýzu buď odměření použitého množství vzorku ve srovnání к celkovému reakčnímu roztoku, nebo práci bez zředění roztoku vzorku. Tento způsob vykazuje proto rovněž řadu nevýhod.
Úkolem vynálezu je vyvinout způsob dělení Krve, Který se jednak provádí jednoduše a bez problémů a jednak se může spojit jednoduchým způsobem s vlastní reakcí a integrovat na společný analytický systém.
Neočekávaně bylo zjištěno, že se může na základě matrice impregnované lektinem vytvořit způsob dělení krve, při kterém se může dělicí zóna po přidání vzorku krve několikrát propláchnout ředicím pufrem, přičemž se stanovená látka reprodukovatelně vypláchne, aniž by nastala analýzu rušící hemolýza.
Obzvláště neočekávané je to, že se lektiny použité к oddělení nemusí imobilizovat na matrici jako ve způsobu popsaném v· EP — — OS 57110 a dělicí reakce je kratší než 30 sekund oproti 0,5 až 3 hodinám při způsobu popsaném v DE — OS 2038722.
Úkol se vyřeší tak, že se dělený vzorek krve nanese na vrstvu matrice se speciálními vlastnostmi impregnovanou lektinem nebo směsí lektinů a potom se vrstva matrice nasáklá krví několikrát propláchne ředidlem.
Předmětem vynálezu je způsob dělení krve nanesením vzorku krve na matrici impregnovanou lektinem a oddělením plazmy nebo séra, který se vyznačuje tím, že se matrice sestávající ze savého materiálu s relativním odporem při proudění až 40 % a napuštěná vzorkem krve 2 až 10 X propláchne isotonickým roztokem pufru o pH v rozmezí 5,0 až 10,5 jako ředidlem.
Matrice se s výhodou propláchne ředidlem protiběžně.
Jako matrice ve způsobu podle vynálezu se použijí všechny savé materiály se strukturou tkaniny nebo vlákna, které mají pokud možno nepatrný relativní odpor proudění. Jako relativní odpor proudění se přitom rozumí odpor, který vykazuje určitý materiál protékajícímu roztoku.
Zjistí se z procentuálního zvýšení doby průtoku roztoku sloupcem a dodatečně matricí. Obecně nenastane při hodnotách <30% žádné rušení, při hodnotách >40% silné rušení klinicko-chemického zkušebního postupu. Obzvláštní význam má přitom také nasáklivost použitého materiálu; materiál má potom například dostatečně velkou nasáklivost, když zcela pohltí objem tekutiny ležící v rozmezí maximálně pohltitelného množství tekutiny, maximálně během 10 až 15 sekund. Jako výhodné matricové materiály se osvědčily materiály z bavlněné a viskózové tkaniny a směsné tkaniny, obsahující tyto materiály a celulózové materiály. Materiály mohou mít například v případě bavlny hustotu nití 10 až 25 (osnova] a 10 až 20 (útek) nití/cm při plošné hmotnosti 100 až 400 g/m2.
Matrice použitá ve způsobu podle vynálezu může sestávat z více vrstev uvedených materiálů. Přitom se může počet materiálových vrstev použitých к dělení značně měnit: na jedné straně je závislý na sací a dělicí kapacitě tkaniny a na objemu děleného vzorku krve, na druhé straně omezuje počet vrstev zvýšení dporu proudění. Obecně jsou dostatečné к dělení normální krve podle vynálezu 1 až 4 vrstvy; u obzvláště tenkých materiálů se může případně také použít více vrstev. Při použití více vrstev se může vrstva nejvíce vzdálená od naneseného· vzorku ještě hydrofobovat. Hydrofobizace se provádí například nanesením roztoku dichlormethanu parafinem při teplotě místnosti na matricový kotouč a následujícím vysušením.
Jako lektin (aglutinin) jsou vhodné všechny látky, které projevují silnou aglutinaci erythrocytů. Vhodným lektinem je například lektin ze Solanum tuberosum, Tritium vulga ris, Ricinus communis, sójových bobů, Phaseolus vulgaris, Lentil, pšeničných klíčků, Phytolacca americana. Případně je možný přídavek látek zesilujících aglutinaci, například kationtových polymerů jako hexadimethrinbromidu,'polymeru N,N,N‘,N‘-tetramethylhexamethylendiaminu a trimethylenbromiidu, N,N,N‘,N‘-tetramethyl-l,6-hexandiaminového polymeru s 1,3-dibrompropanem, poly(N,NX,N‘-tetramethyl-N-trimethylenhexamethylendia.n-omiumdi-bromidu.
Jako obzvláště vhodné se osvědčily směsi ]ekti.nů s malým podílem kationtových polymeru, například lektinové směsi ze sójových bobů a Solanum tuberosum v poměru 2 :1 s 2 % katiointového polymeru nebo lektinová směs z pšeničných klíčků, sójových bobů, Phaseolus vulgaris v poměru 1 : 2 :8 rovněž s 2 % kationtového polymeru.
Několikanásobné propláchnutí dělicí vrstvy nasáklé krví umožňuje fotometrickou analýzu důležitých parametrů pro klinickou diagnostiku. Přitom jsou možné na základě zředění také obzvláště к rušení náchylné tzv. koncové způsoby pro· substráty obsažené v krvi ve vyšší koncentraci. Způsob podle vynálezu umožňuje na jedné straně několikanásobným průtokem ředidla zónou dosažení dostatečně reprodukovatelného vypláchnutí stanovovaných látek, takže není zapotřebí dalšího pipetování, na druhé straně umožňuje výběrem zbývajícího parametru zabránit rušení analyzovaného roztoku produkty dělení krve, aniž by se musely zařadit komplikované přípravné úseky, například imobilizace lektinů nebo další reakční doba. Postup vícenásobného průtoku se může provádět libovolným způsobem, s výhodou v protiběžné formě provedení, při které ředidlo protéká střídavě matricí ze strany nanesení vzorku a potom ze strany odvrácené nanesenému vzorku, protože se může provádět s nepatrnými náklady na aparaturu. Tento postup je v nejjednodušším případě proveditelný pomocí jednocestné stříkačky ponořené do kyvety. Samozřejmě jsou možné také jiné protiběžné a nikoliv protiběžné formy provedení a také sloučeniny dělení krve a následující klinicko-chemické analýzy v celkovém reakčnlm úseku.
Jako· vzorek se může použít jak kapilární, tak také venózní krev. Vzorek se může nanést na dělicí úsek buď ihned po získání, nebo teprve později za přídavku látek bránicích srážení jako kyseliny ethylendiamintetraoctové (EDTA) nebo citranu.
Jako ředidlo se mohou použít isotonické pufrové roztoky, přičemž se mohou použít všechny dostupné pufrové látky jako fosforečnan, glycin, citran, tris (hydroxymethyl)aminomethan(tris), triethanolamin, piperazin-N,N‘-bis (2-ethansulfonová kyselina(pipes), atd. Hodnota pH použitého pufro vého roztoku se může zvolit v rozmezí 5,0 •až 10,5, s výhodou jsou fosforečnanové, triethanolaminové a glycinové pufry v rozmezí pH 6,5 až 10.
Zásadně jsou všechna stanovení substrátu po dělení vzorku krve obvyklá v klinické chemii proveditelná způsobem podle vynálezu. Volným výběrem poměru ředění vzorku až celkového roztoku se mohou bez obtíží stanovit jak substráty obsažené ve vysoké koncentraci v krvi, tak také nepatrná aktivita proteinů.
Vynález bude blíže objasněn v následujících příkladech.
Příklad 1
Stanovení relativního odporu proudění.
Kotouče (0 10 mm) různých matric se napustí 50 jul roztoku.»0,1)3 molu (1 fosforečnanového pufru, 0,1 molu/l chloridu sodného, 1 % katiointového polymeru, 13 /ig lektinu z pšeničných klíčků a 25 lektinu ze sójových bobů a suší se. К takto impregnovaným kotoučům se přidá 30 μΐ krve s přídavkem EDTA, a upnou se do sloupce (0 10 milimetrů) nad výstupním otvorem (0 1 milimetr). Při uzavřeném výtokovém otvoru se naplní 20 ml isotonického roztoku chloridu sodného a po· otevření uzávěru se zjistí čas až do úplného výtoku daného objemu tekutiny. Srovnáním s dobou výtoku u sloupce bez matrice se stanoví relativní odpor proudění jako procentuální zvýšení doby průtoku.
Příklad 2
Stanovení vlastností dělení krve u různých matric
Matricové kotouče impregnované podle příkladu 1 se upevní v jednocestné stříkačce (průměr 10 mm) pomocí krycího kotouče uprostřed otevřeného a napustí se 30 μΐ krve s přídavkem EDTA. Po 30 sekundách se ponoří špička stříkačky do kyvety s 1 ml roztoku obsahujícího 0,03 molu/1 fosforečnanového pufru o pH 7,25 a 0,1 molu/1 chloridu sodného. Roztok se stříká nasátím a vyt-ačením několikrát protiběžné matricovým kotoučem. Přitom se zjistí po každém vypláchnutí na základě extinkce měřené při 4Ό5 nm podíl hemolýzy a posoudí se kvalitativně. Získané výsledky jsou shromážděny v následující tabulce. Přitom znamená 4-4-1- velice dobře, 4-4- dobře, 4- dostatečně, — nedostatečně,--zcela nedostatečně. Pro dobré dělení krve je proto zapotřebí co nejmenšího odporu proudění a dobré nasáklivosti matrice.
до
оо
ОТ rH CO LO CM CO CO CO + +
4CM ОТ СО
CM CM
| см о | oo о ш | |
| гЧ гЧ | ю | гЧ |
CM r4 СП СО
Tt<
гЧ гЧ О
М< СО СО со 4-4-4-4- 4- +
со
О со со ю СМ СМ гЧ ю гЧ гЧ СО
I оо т-ч от ___I --,I —J 1 о см гЧ СМ
со со , гЧ т-Ч гН гЧ 1
| со со | 00 см | |
| от г-Г | см см* | |
| 00 гЧ | со | см см |
| СООТ^СО^ | от~ со | ОТл | |
| LD Ь? СО | со см | гЧ | 1гГ 4* |
| СМ гЧ г-Ч | Ьч γΗ | СО | см см |
Příklad 3
Vhodnost různých pufrových roztoků jako ředidlo
Při třech provedeních pokusů se matricový kotouč z bavlněné tkaniny (0 10 mm) impregnuje nanesením 100 μΐ roztoku dichlormethanu nasyceného při teplotě místnosti parafinem a následujícím vysušením a na něj se položí další kotouč impregnova ný lektinem uvedeným v následující tabulce. Po nanesení 30 μΐ krve s přídavkem EDTA na takto preparovatiou dělicí zónu se tato ještě třikrát protiběžně propláchne 1 ml pufrového roztoku o různé hodnotě pH. Pomocí extinkce při 405 nm se kvalitativně zjistí výsledky dělení krve. Jak vyplývá z tabulky, jsou jako ředidlo velice dobře vhodné pufrové roztoky o pH v rozmezí 5,5 až 10,5. Zhodnocení odpovídá příkladu 2.
Hodnota pH pufrového roztoku
Příklad 4
Stanovení glukózy v krvi
Matricový kotouč (0 10 .mm) z bavlněné tkaniny (matrice 1 z příkladu 2) se hydrofobuje podle příkladu 3, další se napustí 50 /li roztoku «obsahujícího 0,01 molu/1 fosforečnanového pufru o pH 7,25, 2!% kationtového polymeru, 16 μ% lektinu ze sójových bobů a 8 (Ug lektinu z Solanum tuberosum a suší se. Oba kotouče se položí na sebe (hydrofóbní jako spodní) do jednocestné stříkačky (0 10 mm). Na horní kotouč se potom nanese při různých pokusech 20 μΐ vzorku krve s přídavkem EDTA, který obsahoval různou koncentraci glukózy. Obsah glukózy se zjistí dodatečně stanovením v séru. Potom se zóny dělení v oddělených po kusech jednou a třikrát protiběžně propláchnou 1 ml roztoku 0,03 molu/1 fosforečnanového pufru o pH 7,25 a 0,3 molu/1 chloridu sodného a změří se extinkce získaného roztoku při 365 nm. Potom se přidá 50 μ\ reakčního roztoku obsahujícího 100 kU/1 (kU = 1 000 mezinárodních enzymových jednotek) glukózodehydrogenázy, 2 kU mutarotázy a 21 mmolu/1 nikotinamidadenindinukleotidu (NAD+) v 0,1 molu/1 fosforečnanového pufru o pH 7,6 a po 10 minutách se znova změří extinkce celkového roztoku při 365 nm. Z rozdílu extinkce se získá vynásobením faktorem 630 obsah glukózy výchozího vzorku; příslušné výsledky jsou uvedeny v následující tabulce. Celkově z tabulky vyplývá, že při vícenásobném propláchnutí se získají lepší výsledky než při jednom propláchnutí.
Stanovení glukózy
| v séru mg/dl | podle způsobu dle vynálezu | při několikanásobném propláchnutí mg/dl | |
| při jednom propláchnutí mg/dl | standardní odchylka ze 6 hodnot % | ||
| 59 | 21,0 | 61 | |
| 78 | 86 | 12,9 | 74 |
| 120 | 131 | 4,9 | 114 |
| 139 | 144 | 9,0 | 135 |
| 179 | 189 | 4,9 | 171 |
| 235 | 233 | 8,6 | 240 |
| 310 | 293 | 21,0 | 318 |
| 520 ' | 540 | 18,0 | 543 |
istandardní odchylka ze 6 hodnot %
Ίμ
3,0
3.5
3,9
2.3
3,9
4.6
2.4
Příklad 5
Stanovení močoviny v krvi
Do jednocestné stříkačky (0 10 mm) se vloží matricový kotouč z hydrofóbní bavlněné tkaniny (matrice 1 podle příkladu 2) a na ni další matricový kotouč, který byl napuštěn roztokem 0,025 molu/1 fosforečnanového pufru o pH 8,0, 0,1 molu/1 chloridu sodného obsahujícího 2,5 % kationtového polymeru a 19 4ug lektinu z Ricinus communis a potom vysušený. Na horní kotouč se dá 15 μΐ vzorku krve s přídavkem EDTA, který obsahoval různé koncentrace močoviny. Obsah močoviny se zjistil dodatečně v séru. Potom se dělicí zóny krve propláchnou jednou a třikrát protiběžně roztokem 0,03 molu/1 triethanolaminového pufru o pH 8 a 0,3 molu/1 chloridu sodného v oddělených pokusech. Potom se přidá 50 μ reakčního roztoku obsahujícího 25 kU/Ι glutamát-dehydrogenázy, 0,2 molu/1 ketoglutarátu, 4,6 mmolu/l redukovaného nikotinamidenindimulkleotidu (NADH) a 30 mmolu/1 aidenosindifosfátu (ADP) v- 0,3 mmolu/1 triethanolaminového pufru o pH 8 a měří se po 10 minutách ektinkce Ei při 334 nm. Potom se přidá 20 μΐ roztoku 450 kU/Ι ureázy v 0,1 molu/1 triethanolaminového pufru o pH 8 a po' další 10 minutové reakční době se měří při teplotě místnosti extinkce Ez při 334 nm. Z Ei— —Ež se stanoví po vynásobení faktorem 165 obsah močoviny výchozího vzorku; příslušné výsledky jsou uvedeny v následující tabulce. Z ní vyplývá, že obzvláště při několikanásobném protiběžném proplachování se získají velice dobré výsledky.
ч
Stanovení močoviny
| v séru | podle způsobu dle vynálezu | při více- | standardní | |
| při jednom | standardní | násobném | odchylka | |
| propláchnutí | odchylka ze 6 hodnot | propláchnutí | ze 6 hodnot | |
| mg/dl | mg/dl | '% | mg/dl | %' |
| 32 | 31 | 17,4 | 31 | 3,9 |
| 40 | 39 | 6,8 | 41 | 3,1 |
| 49 | 46 | 7,6 12,1 | 48 | 2,0 |
| 52 | 51 | 53 | 2,8 | |
| 61 | 56 | 9,1 | 62 | 3,2 |
| 72 | 68 | 5,9 | 74 | 3,3 |
| 88 | 89 | 7,2 | 91 | 2,4 |
| 93 | 88 | 6,1 | 90 | 3,5 |
| 99 | 99 | 11,0 | 108 | 2,4 |
| 125 | 122 | 10,5 | 121 | 3,8 |
Příklad 6
Stanovení y-glutamyltranspeptidázy v krvi
Do jednocestné stříkačky se vloží nad matricový kotouč hydrofóbní bavlněné tkaniny (matrice 1 podle příkladu 2] 4 matricové kotouče z celulózové tkaniny (matrice 10 podle příkladu 2), které byly napuštěny 100 μΐ roztoku 0,015 molu/1 fosforěčnanového pufru o pH 6,5, 0,3 molu/1 chloridu sodného obsahujícího 2 % kationtového polymeru, 25 μξ lektinu ze sójových bobů a 13 μ£ lektinu z pšeničných klíčků. Na takto předem připravené kotouče se nanese 70 μ\ vzorku krve s přídavkem EDTA, který obsahoval různé aktivity y-glutaimyltranspeptidázy. Pro kontrolu byla provedena stanovení séra. Potom se dělicí zóny krve propláchStanovení v-glutamyltranspeptidázy nou jednou a třikrát protiběžně 1 ml roztoku 0,015 molu/1 fosforečnanového pufru o pH 6,5 a 0,3 molu/1 chloridu sodného v oddělených pokusech. К oběma badám pokusů se připipetuje 100 μΐ roztoku 1 molu/1 glycylglycinu v 0,3 molu/1 tris-pufru o pH 8,25 a roztok se dá při 25 °C do termostatu. Po 4 minutách se přidá 100 ^1 roztoku 30 mmolu/1 L- y-glutamyl-3-karboxy-4-nitroanilidu v 0,3 .molu/1 tris-pufru o pH 8,25. Potom se zaznamená po 7 minut zvýšení extinkce při 405 nm a ze zjištěného rozdílu extinkce za minutu se stanoví vynásobením faktorem 3 600 aktivita výchozího vzorku. Jak ukazují výsledky v následující tabulce, dosáhnou se při metodě s několikanásobným proplachováním lepší výsledky než při jednom propláchnutí.
| v séru | podle způsobu dle vynálezu | při více- | standardní | |
| při jednom | standardní | násobném | odchylka | |
| propláchnutí | odchylka ze 6 hodnot | propláchnutí | ze 6 hodnot | |
| mg/dl | mg/dl | 1% | mg/dl | % |
| 13 | 14 | 24,0 | 14 | 8,9 |
| 19 | 18 | 13,0 | 18 | 5,7 |
| 31 | 30 | 16,0 | 30 | 4,8 |
| 56 | 56 | 7,5 | 52 | .4,3 |
| 66 | 63 | 15,0 | 70 | 0,8 |
| 84 | 84 | 13,0 | 85 | 4,5 |
| 87 | 88 | 9,3 | 92 | 4,9 |
| 106 | 108 | 6,2 | 105 | 3,3 |
| 115 | 112 | 7,1 | 116 | 4,1 |
| 140 | 139 | 6,Q | 138 | 4,7 |
| 215 | 209 | 8,1 | 195| | 5,2 |
Claims (5)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Způsob dělení krve nanesením vzorku krve na matrici impregnovanou lektinem a oddělením plazmy nebo séra, vyznačený tím, že se matrice sestávající ze savého- materiálu s relativním odporem proudění až 40 °/o a napuštěná vzorkem krve 2 až 10.X propláchne isotonickým roztokem pufru o pH v rozmezí 5,0 až 10,5 jako ředidlem.
- 2. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že se matrice propláchne 2 až 10 X protiběžně ředidlem.
- 3. Způsob podle bodů 1 a 2, vyznačený tím, že se jako matrice použije savý materiál z bavlněné tkaniny, smíšené tkaniny obsahující bavlnu, celulózy, viskózy nebo materiálu obsahujícího tyto složky.
- 4. Způsob podle bodu 3, vyznačený tím, že se použije bavlněná tkanina o hustotě nití 10 až 25 nití/cm a 10 až 20 nití/cm a plošné hmotnosti 100 až 400 g/m2.
- 5. Způsob podle bodů 1 až 4, vyznačený tím, že se použije matrice sestávající z více vrstev, přičemž se vrstva nejvzdálenější od naneseného vzorku může hydrofobovat.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19843441149 DE3441149A1 (de) | 1984-11-10 | 1984-11-10 | Verfahren zur vollblutauftrennung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS801985A2 CS801985A2 (en) | 1988-03-15 |
| CS259884B2 true CS259884B2 (en) | 1988-11-15 |
Family
ID=6250006
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS858019A CS259884B2 (en) | 1984-11-10 | 1985-11-07 | Method of blood division |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0183991B1 (cs) |
| JP (1) | JPS61118661A (cs) |
| CS (1) | CS259884B2 (cs) |
| DE (2) | DE3441149A1 (cs) |
| IL (1) | IL76962A (cs) |
| ZA (1) | ZA858618B (cs) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3508427A1 (de) * | 1985-03-09 | 1986-09-11 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Mittel und verfahren zur abtrennung von plasma oder serum aus vollblut |
| CA1310905C (en) * | 1987-06-19 | 1992-12-01 | Marvin A. Genshaw | Process and device for separating and testing whole blood |
| DE3729001A1 (de) * | 1987-08-31 | 1989-03-09 | Behringwerke Ag | Vorrichtung und verfahren zur abtrennung von blutzellen aus koerperfluessigkeiten, die erythrozyten enthalten, und deren verwendung |
| FR2637687B1 (fr) * | 1988-10-11 | 1991-01-11 | Inst Textile De France | Dispositif a usage unique pour tests biologiques |
| US5435970A (en) * | 1989-12-18 | 1995-07-25 | Environmental Diagnostics, Inc. | Device for analysis for constituents in biological fluids |
| CA2031975A1 (en) * | 1990-01-12 | 1991-07-13 | Brian R. Barkes | Device and method of separating and assaying whole blood |
| DE4015589A1 (de) * | 1990-05-15 | 1991-11-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | Vorrichtung und deren verwendung zur abtrennung von plasma aus vollblut |
| EP0535485B1 (en) | 1991-10-03 | 1997-07-16 | Bayer Corporation | Device and method of separating and assaying whole blood |
| CA2104976A1 (en) * | 1992-09-02 | 1994-03-03 | Stephan D. Daubney | Separation of plasma or serum from whole blood using a red blood cell binding component and a polymer containing multiple cationic sites |
| WO2003073095A1 (en) | 2002-02-27 | 2003-09-04 | Sanko Junyaku Co., Ltd. | Instrument for separating plasma or serum, method of collecting plasma or serum, method of separating plasma or serum, test carrier and glass fiber |
| EP2673065B1 (en) * | 2011-02-10 | 2015-12-09 | Academisch Ziekenhuis Leiden Acting Under The Name Leiden University Medical Center | Method for the purification of a glycan and/or a glycoconjugate by chromatography using a stationary phase comprising cotton |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE458793C (de) * | 1928-04-25 | Conrad Esche Dr | Hilfsmittel zur Feststellung der Wirkung einer Haarfrisur | |
| US3146163A (en) * | 1962-01-23 | 1964-08-25 | John H Brewer | Apparatus for separating certain components from blood |
| GB1325043A (en) * | 1969-08-04 | 1973-08-01 | Greenspan D J | Method of separating blood components |
| DE3029579C2 (de) * | 1980-08-05 | 1985-12-12 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Mittel zur Abtrennung von Plasma oder Serum aus Vollblut |
| US4426451A (en) * | 1981-01-28 | 1984-01-17 | Eastman Kodak Company | Multi-zoned reaction vessel having pressure-actuatable control means between zones |
| US4594327A (en) * | 1983-11-02 | 1986-06-10 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Assay method for whole blood samples |
-
1984
- 1984-11-10 DE DE19843441149 patent/DE3441149A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-10-31 EP EP85113860A patent/EP0183991B1/de not_active Expired
- 1985-10-31 DE DE8585113860T patent/DE3571082D1/de not_active Expired
- 1985-11-06 IL IL76962A patent/IL76962A/xx unknown
- 1985-11-07 CS CS858019A patent/CS259884B2/cs unknown
- 1985-11-08 ZA ZA858618A patent/ZA858618B/xx unknown
- 1985-11-08 JP JP60249154A patent/JPS61118661A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0183991B1 (de) | 1989-06-14 |
| DE3441149A1 (de) | 1986-05-15 |
| ZA858618B (en) | 1986-07-30 |
| IL76962A (en) | 1989-09-28 |
| IL76962A0 (en) | 1986-04-29 |
| DE3571082D1 (en) | 1989-07-20 |
| JPS61118661A (ja) | 1986-06-05 |
| CS801985A2 (en) | 1988-03-15 |
| EP0183991A1 (de) | 1986-06-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7078480B2 (en) | Process for stabilizing the content of glycated protein of a sample on a matrix material | |
| US5135716A (en) | Direct measurement of HDL cholesterol via dry chemistry strips | |
| US5055195A (en) | Erythrocyte-retention substrates | |
| FI77894C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett analytiskt element foer bestaemning av glukos i hoeg konsentration. | |
| CA2108105C (en) | Improved device and method of assaying whole blood for hdl cholesterol | |
| US5215886A (en) | HDL determination in whole blood | |
| EP0820338B1 (en) | Whole blood separation method and devices | |
| CA1179865A (en) | Process for analytical determinations and rotor insert element therefor | |
| CS259884B2 (en) | Method of blood division | |
| EP2438856B1 (en) | Hdl-cholesterol-measuring strip and method for measuring cholesterol using same | |
| US20040126833A1 (en) | Test strip and method for determining concentration of creatinine in a body fluid | |
| WO2006091918A2 (en) | Process, composition and kit for providing a stable whole blood calibrator/control | |
| US6309887B1 (en) | Filter paper treatment for improved diagnostic assays | |
| JPH0698028B2 (ja) | 分析用組成物，分析要素及び被分析物の測定方法 | |
| US4990457A (en) | Whole blood dry analysis element | |
| EP0252750B1 (en) | Composition and analytical element having stabilized peroxidase | |
| EP0295526B1 (en) | Process and device for separating and testing whole blood | |
| US6521460B1 (en) | Method of carrying out blood tests | |
| Standefer et al. | Evaluation of a colorimetric method for determination of glycosylated hemoglobin. | |
| Hoffmann et al. | Automated nephelometry of fibrinogen: analytical performance and observations during thrombolytic therapy. | |
| EP0182385B1 (de) | Verfahren und Reagenz zur quantitativen Bestimmung von freiem Thyroxin in Plasma, Serum oder Vollblut | |
| JPS61170400A (ja) | 酵素阻害によるテオフイリンの分析用分析素子，組成物および方法 | |
| Grann et al. | Polybrene neutralization as a rapid means of monitoring blood heparin levels | |
| Nakashima et al. | D-mannose as a preservative of glucose in blood samples. | |
| EP0345460A2 (en) | Method and device employing covalently immobilized colored dyes |