CS256635B1

CS256635B1 - Způsob extrahování polyvalentního inhibitoru proteáz z živočišných žláz

Info

Publication number: CS256635B1
Application number: CS862994A
Authority: CS
Inventors: Lubomir Krasl; Josef Cervenka; Petr Durdil; Stanislav Revajnec
Original assignee: Lubomir Krasl; Josef Cervenka; Petr Durdil; Stanislav Revajnec
Priority date: 1986-04-25
Filing date: 1986-04-25
Publication date: 1988-04-15
Also published as: CS299486A1

Abstract

Způsob extrakce polyvalentního inhibitoru proteáz ze živočišných žláz, například z hovězích plic, vodným roztokem organických rozpouštědel, například etanolu, s přídavkem rozpustných^anorganických solí při zvýšené ^eplotě spočívá v tom, že živočišná tkán se extrahuje ve dvou, fázích, přičemž v prvé fázi se živočišná tkán extrahuje za míchání v oblasti vysoké turbulence po dobu 3 až 8 hodin s výhodou 5 liodin při pH 5,5 až 6,7 s výhodou 6,5 při teplotě 40 až 45 °C vodným roztokem etanolu o hmotnostní koncentraci 70 až 80 'ío a přídavkem 1 až 3 % hmot. chloridu yápenatého, v druhé fázi se živočišná tkán extrahuje za míchání v oblasti laminární za současného zředění směsi vodou na 10 až 90 % původní koncentrace etanolu s výhodou na 60 % původní koncentrace po dobu 1 až 18 hodin, s výhodou 16 hodin při pH 5,5 až 6,5 při teplotě 18 až 40 “c a ze získané suspenze se pevná fáze oddělí a extrakt se zpracuje známým způsobem.

Description

DURDIL PETR ing. CSc., REVAJNEG STANISLAV, PRAHA

Způsob extrahování polyvalentního inhibitoru proteáz z živočišných žláz

236635 (51) lni c6

B Ol D 11/00

- 1 256 635

Vynález se týká způsobu extrahování polyvalentního inhibitoru proteáz z živočišných žláz.

Postup získávání polyvalentního inhibitoru proteáz /Kallikrein inactivator, Aprotinin, Antilysin/ ze živočišných žláz je zpracován v řadě prací. Inhibitor je získáván například z pankreatu, jater, sleziny, plic a dalšího materiálu.

Při známých způsobech přípravy inhibitoru se používají k extrakci rozdrcených žláz vodné roztoky nebo roztoky vody s organickými rozpouštědly /alkoholy, organickými kyselinami, ketony a pod./ za přítomnosti solí kovů alkalických zemin, alkalických kovů, přechodných kovů a pod. /viz NSR patenty č. 1 014 288, 1 011 576, U.S. pat. 2 840 986/. Teploty při extrakcích se pohybují od 20 do 40 °C. Extrakce probíhají za míchání od několika rniůut po 5 hodiny.

Dle československého vynálezu AO č. 155 891 je postup extrakce následující: plíce čerstvé nebo rozmražené se rozemelou na kousky velikosti řádově milimetrů, extrakční prostředí tvoří vodní roztok etanolu s přídavkem chloridu vápenatého, teplota směsi obou fází /plic a roztoku/ se udržuje na hodnotě 40 až 42 °C, extrakce probíhá za promíchávání po dobu 2 hodiny a následuje oddělení pevné fáze od extraktu na odstředivce. Tímto způsobem extrakce se vyzíská ze Žláz část inhibitoru. Výtěžnost není zdaleka optimální z hlediska skutečných možností využití suroviny, neboí se dosahuje stavu, který je velmi vzdálen od rovnováhy mezi extrahovanou surovinou a extrakčním prostředím.

- 2 256 635

Uvedené nedostatky odstraňuje způsob extrahování polyvalentního inhibitoru proteéz z živočišných žláz podle vynálezu, jehož podstata spočívá v extrakci živočišné tkáně probíhající ve dvou fázích, přičemž v prvé fázi extrakce probíhá za míchání v oblasti vysoké turbulence po dobu 3 až 8 hodin s výhodou 5 hodin při pH 5,5 až 6,7 s výhodou při teplotě 40 až 45 °0 vodným roztokem etanolu o hmotnostní koncentraci 70 až 80 % s přídavkem 1 až 3 % hmot. chloridu vápenatého, v druhé fázi extrakce probíhá za míchání v oblasti laminární za současného zředění směsi vodou na 10 až 90 % původní koncentrace etanolu s výhodou na 60 % původní koncentrace po dobu 1 až 18 hodin s výhodou 16 hodin při pH 5,5 až 6,5 při teplotě 18 až 40 °C, ze získané suspenze se pevná fáze oddělí a extrakt se zpracuje známým způsobem.

Postupem dle vynálezu se dosáhne výtěžnosti inhibitoru 350 000 až 400 000 TU/kg plic, což ve srovnání s dosud známými postupy je o cca 30 % více.

Vlastním příkladem se demonstruje postup extrakce.

Příklad kg plic se desintegruje na částice maximálních rozměrů 3 nm. Hmota se okamžitě přenese do extrakčního zařízení, v němž je směs etanolu a vody o koncentraci etanolu 75 % hmot. s přídavkem 3 % hmot. chloridu vápenatého. Směs se podrobí při teplotě 40 až 42 °C intenzivnímu míchání v oblasti vysoké turbulence po dobu 5 hodin, přičemž pH se průběžně udržuje na hodnotě

6,5 přídavkem minerální kyseliny /HCl/. Po této operaci se změní míchání a směs je dále promíchávána zvolna v laminární oblast proudění, po dobu 16 hodin, přičemž se sníží koncentrace etanolu na hodnotu 40 % hmot. a teplota se samovolně sníží až na 20 °C při pH 6. Dále se směs odstředí, pevná fáze je odpad. Inhibitor obsažený v roztoku se po několika operacích, při nichž se odstraňují balastní látky, vysráží. Získaný surový produkt se nejprve čistí frakcionací a pak následuje fáze čištění pomocí gelového molekulárního síta. Výtěžek inhibitoru činí 0,75 g o aktivitě 5 200 TU/mg.

Claims

PŘEDMĚT VYNÁLEZU

256 635

Způsob extrakce polyvalentního inhibitoru proteóz ze živočišných žláz, například z hovězích plic, vodným roztokem organických rozpouštědel, například etanolu, s přídavkem rozpustných anorganických solí při zvýšené teplotě, vyznačující se tím, že živočišná tkán se extrahuje ve dvou fázích, přičemž v prvé fázi se živočišná tkáň extrahuje za míchání v oblasti vysoké turbulence po dobu 3 až 8 hodin s výhodou 5 hodin při pH 5,5 až 6,7 s výhodou 6,5 při teplotě 40 až 45 °C vodným roztokem etanolu o hmotnostní koncentraci 70 až 80 % s přídavkem 1 až 3 % hmot. chloridu vápenatého, v druhé fázi se živočišná tkáň extrahuje za míchání v oblasti laminární za současného zředění směsi vodou na 10 až 90 % původní koncentrace etanolu s výhodou na 60 % původní koncentrace po dobu 1 až 18 hodin, s výhodou 16 hodin při pH 5,5 až 6,5 při teplotě 18 až 40 °G a ze získané suspenze se pevná fáze oddělí a extrakt se zpracuje známým způsobem.