CS252599B1 - Klonovaná linie lidských lymfomových buněk IMG CZAS Jurkat K5-2B6 - Google Patents

Abstract

Řešení se týká klonované linie lidských lymfomových buněk IMG CZAS Jurkat K5-2B6, produkujících interleukin 2. Linie může být průmyslově využívána jako zdroj lidského interleukinu 2 pro experimentální práci v imunologických diferenciačních a dalších modelových systémech, a může být využitelná i pro některé oblasti lékařské praxe.

Description

252599 2

Vynález se týká klonované linie lidských lymfomových buněk Jurkat K5-2B6 produkujícíchinterleukin 2 (T-buněčný růstový faktor).

Lidský interleukin 2 je možné připravit konvenčním způsobem, kde zdrojem interleukinu 2je supernatant lidských lymfocytů aktivovaných lektiny. Tento způsob má několik nevýhod. V supernatantu těchto kultur se nachází heterogenní směs mnoha interleukinů, lymfokinů a me-diátorů, jejichž spektrum a titr jsou v každém jednotlivém.supernatantu různé. Navíc inter-leukin 2 připravený tímto postupem má velmi kolísavou a v průměru nízkou koncentraci, za op-timálních' podmínek kolem 1,0 j/ml média.

Uvedené nedostatky výše uvedeného a dosud užívaného postupu odpadnou, je-li k dispoziciklonovaná linie lidských leukemických buněk Jurkat K5-2B6, produkující monoklonální lidskýinterleukin 2 a uložená ve Sbírce buněčných linií ÚMG ČSAV Praha 6, Flemingovo nám. 2 podoznačením IMG CZAS Jurkat K5-2B6. Uvedená linie byla získána z výchozího materiálu neklonova-né linie Jurkat produkující méně než 0,1 j/ml (Kaplan et al., Amer. J. Hematol. 1, 219, 1976)způsobem známým z odborné literatury (Farrař et al.,.z J. Immunol. 125, 2 565, 1980). Bylotestováno větší množství leukemických linií a sublinií na produkci interleukinu 2, a to jakna produkci konstitutivní, tak na produkci indukovanou lektiny, phorbol myristát acetátem akombinacemi těchto látek. Ze všech testovaných linií byla pro další klonální selekci vybránajako nejvýhodnější sublinie Jurkat - 0. Tato sublinie byla opakovaně klonována a z přibližně200 klonů byl vybrán klon s nejvyšší produkcí interleukinu 2, označený jako Jurkat K5-2B6. Výhodou klonované linie je, že po stimulaci phorbolmyristát acetátem a lektinem (phyto-hemaglutinin) produkuje homogenní buněčný produkt - interleukin 2 - v poměrně vysoké koncent-raci. Tento produkt má imunoregulační účinek a může sloužit v organismu k posílení reakce.Klonovanou buněčnou linii Jurkat K5-2B6 je možné kultivovat in vitro v médiích vhodných proživočišné buňky. Z konzerv uchovávaných v tekutém dusíku je možné zahájit produkci interleu-kinu 2 po napěstování buněk do vhodného množství a přidání phorbol myristát acetátu a phyto-hemaglutininu. Interleukin 2 produkovaný klonovanou vysokoprodukční linií Jurkat K5-2B6 spe-cificky stimuluje syntézuONK savčích (lidských, myších, krysích) T-lymfocytů in vitro av organismu ámplifikuje imunitní odpověd zprostředkovanou těmito lymfocyty. Monoklonální pro-dukt má koncentraci 10-60 jednotek/ml a není zde třeba se zbavovat balastních mediátorů, lymfokinů a interleukinů. Příklad

Buňky linie Jurkat K5-2B6 byly 24 hodin pěstovány v koncentraci 2.10® buněk/ml v tkáňovékultuře obsahující 50 ^ig/ml phorbol myristát acetátu a 1,5/ig/ml phytohemaglutininu v celko-vém objemu 200 ml média. Po skončení kultivace bylo kultivační médium zbaveno buněk a zfilt-rováno. Celkem bylo získáno 200 ml kultivačního média, které obsahovalo 40 jednotek interleu-kinu 2 na ml, tj. 8 000 jednotek interleukinu 2 celkem. Toto množství odpovídá konvenčnímuinterleukinu 2, který lze získat z 8 000 ml lidské periferní krve při konvenčním způsobu pří-pravy, a to pouze za optimálních podmínek. Interleukin 2 reagoval s buněčnou linií imunníchlymfocytů CTLL (Gillis a Smith, Nátuře 288, 154, 1977), která specificky odpovídá DNK synté-zou pouze na interleukin 2. DNK syntézu lze kvantitativně stanovit inkorporací ^H-TdR; tatoinkorporace je přímo úměrná koncentraci interleukinu 2. Linii CTLL stejně jako jiné linieimunních lymfocytů lze v interleukinu 2 neomezeně množit, zatímco bez interleukinu 2 takovébuňky do 24 hodin hynou. Imunní lymfocyty namnožené v tkáňové kultuře lze pak použít k injek-ci do organismu, který takové buňky postrádá a posílit tak imunitní odpověd proti cizímu anti-genu či vlastnímu nádoru, nebo kompenzovat imunodeficitní stavy. Buňky klonované linieJurkat K5-2B6 rostou jako suspenzní či polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem jeRPMI 1 640 doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin, penicilín, streptomycin a 10%inaktivovaného bovinního séra (Bioveta, Ivanovice na Hané).

Linie Jurkat K5-2B6 může být průmyslově využívána jako zdroj lidského interleukinu 2 proexperimentální práci v imunologických, diferenciačních a dalších modelových systémech, alemůže být v budoucnosti využitelná i pro některé oblasti lékařské praxe.

Claims (2)

1 252599 PŘEDMĚT VYNÁLEZU Klonovaná linie lidských lymfomových buněk IMG CZAS Jurkat

2 K5-2B6, produkující interleukin.