CS233896B1 - Klonovaná linie lelikérnických buněk produkující interleukin 2 - Google Patents
Klonovaná linie lelikérnických buněk produkující interleukin 2 Download PDFInfo
- Publication number
- CS233896B1 CS233896B1 CS400683A CS400683A CS233896B1 CS 233896 B1 CS233896 B1 CS 233896B1 CS 400683 A CS400683 A CS 400683A CS 400683 A CS400683 A CS 400683A CS 233896 B1 CS233896 B1 CS 233896B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- interleukin
- cells
- line
- lelicéric
- producing cloned
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Vynález se týká klonované linie leukemických buněk produkujících interleukin 2. Linie EL-4 TF/K může být průmyslově využívána jako zdroj interleukinu 2 pro experimentální práci v imunologických, diferenciálních a dalších modelových systémech.
Description
Vynález se týká klonované linie myších leukemických buněk EL-4 TF/K produkující interleukin 2 (T-buněčný růstový faktor)
Interleukin 2 se zatím připravoval jako supernatant kultur krysích sleziňných buněk ovlivněných concanavalinem A. Po 24 hodinách kultivace slezinných buněk v tkáňové kultuře byl supernatant buněk stažen a sloužil jako zdroj interleukinu 2. Tento postup, nazývaný konvenční příprava interleukinu 2, má několik nevýhod. V supernatantu slezinných kultur ovlivněných concanavalinem A se nachází heterogenní směs mnoha lymfokinů, interleukinů a mediátorů, jejichž spektrum a titr jsou v každém jednotlivém supernatantu řůzné a neopakovatelné. Navíc interleukin 2 připravený tímto postupem má nízkou koncentraci, která kolísá za optimálních podmínek kolem lj/ml media.
Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud užívaného postupu odpadnou, je-li k dispozici klonovarlá linie leukemických buněk EL-4 TF/K, produkující monoklonální interleukin 2 a uložená ve Sbírce buněčných linii ÚMG ČSAV Praha 4, Vídenská 1083 pod označením IMG CZAS EL-4 TF/K. Uvedená linie byla získána způsobem známým z odborné literatury (Farrar 0, et al.: Thymona production of T cell growth factor (IL-2). 0. Immunol. 125: 2555-2558, 1980). Bylo testováno větší množství různých leukemických linií na produkci interleukinu 2, a to jak na produkci konstitutivní, tak na produkci indukovanou lektiny, phorbol my ristát acetátem a kombinacemi těchto látek. Ze všech testovaných linií pouze jediná, linie EL-4 TF, produkovala po kombino váné stimulaci concanavalinem A a phorbol myristát acetátem in terleukin 2. Tato linie byla dále opakovaně klonována a z přibližně 200 klonů byl vybrán klon s nejvyšší produkcí interleukinu 2, označený jako EL-4 TF/K.
- 2 233 896
Výhodou klonované linie je, že po stimulaci phorbol myristát acetátem produkuje homogenní buněčný produkt, interleukin 2, který má imunoregulačni účinek a který může sloužit v organismu k posílení imunitní reakce. Klonovanou buněčnou linii EL-4 TF/K je možno kultivovat in vitro v mediích vhodných pro živočišné buňky a je adaptována pro růst in vivo u myěiho kmene C 57 BL/1O. 2 konzerv uchovávaných v kapalném dusíku je možné zahájit produkci interleukinu 2 po přidáni phorbol myristát acetátu a concanavalinu A. Interleukin 2 produkovaný klonovanou vysokoprodukčni linií EL-4 TF/K specificky stimuluje syntézu DNK savčích (myších, krysích) T-lymfocytů in vitro a v organismu amplifikuje imunitní odpověS zprostředkovanou těmito lymfocyty, Monoklonálni produkt má koncentraci 5-80 jednotek/ml a není zde třeba se zbavovat tóLastních mediátorů, lymfokinů a interleukinů.
Příklad
Buňky linie EL-4 TF/K byly 24 hodin pěstovány ve tkáňové kultuře obsahující 20 ng/ml phorbol myristát acetátu a 2 ^ug concanavalinu A a to v koncentraci 2 χ 108 buněk/200 ml me*dia.
Po skončení kultivace bylo kultivační medium zbaveno buněk a zfiltrováno, Celkem bylo získáno 200 ml kultivačního me?dia, které obsahovalo 12 jednotek interleukinu 2/ml, tj. 240 jednotek interleukinu 2, Toto množství odpovídá konvenčnímu interlakinu 2,-který lze získat ze slezin 30 krys při použití 2400 ml tét hož kultivačního media. Interleukin 2 reagoval s buněčnou linií imunních lymfocytů CTLL (Gillis S. and Smith K.A.: Longterm culture of tumour-specific cytotoxíc T-cells. Nátuře (London) 268:154-156, 1977), která specificky odpovídá DNK syntézou pouze na interleukin 2. DNK syntézu lze kvantitativně stanovit inkorporaci H - TDRj tato inkorporace je přímo úměrná koncentraci interleukinu 2, Linii CTLL stejně jako jiné linie imunních lymfocytů lze v interleukinu 2 neomezeně množit, zatímco bez interleukinu 2 takové buňky do 24 hodin hynou. Imunní lymfocyty namnožené v tkáňové kultuře lze pak použít pro injekci do organismu, který takové imunní buňky postrádá a posílit tak imunitní odpověň proti antigenu.
233 896
Buňky klonované linie EL-4 TF/K rostou jako suapenzni či polosuspenzni kultury· Základním kultivačním mediem je Eaglovo minimální esenciální medium s Hanksovou solnou směsi doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin (3mM) a pyruvát sodný (lmM). Toto medium (označované jako H-MEMd, Ústav molekulární genetiky ČSAV), je pro kultivaci buněčné linie doplněno penicilinem, streptomycinem a inaktivovaným bovinnim sérem (Bioveta, Ivanovice na Hané, 10%). Kultivace probíhá při 37 °C. Modální počet chromosomů EL-4 TF/K buněk je v hypodiploidní oblasti (39). Pro klonální původ EL-4 TF/K populace jednoznačně svědčí, že 39Í1 chromosom obsahuje 88% buněk populace. Interleukin 2. produkovaný linií EL-4 TF/K reaguje specificky s myšími a krysími lymfocyty.
Linie EL-4 TF/K může být průmyslově využívána jako zdroj interleukinu 2 pro experimentální práci v imunologických,diferenciačních a dalších modelových systémech.
Claims (1)
- Klonovaná linie leukemických buněk produkující interleu kin 2, uložená ve Sbírce buněčných linii Ústavu molekulární genetiky ČSAV, pod označením IMG CZAS
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS400683A CS233896B1 (cs) | 1983-06-02 | 1983-06-02 | Klonovaná linie lelikérnických buněk produkující interleukin 2 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS400683A CS233896B1 (cs) | 1983-06-02 | 1983-06-02 | Klonovaná linie lelikérnických buněk produkující interleukin 2 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS233896B1 true CS233896B1 (cs) | 1985-03-14 |
Family
ID=5381806
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS400683A CS233896B1 (cs) | 1983-06-02 | 1983-06-02 | Klonovaná linie lelikérnických buněk produkující interleukin 2 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS233896B1 (cs) |
-
1983
- 1983-06-02 CS CS400683A patent/CS233896B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Masucci et al. | Disappearance of the NK effect after explantation of lymphocytes and generation of similar nonspecific cytotoxicity correlated to the level of blastogenesis in activated cultures. | |
| Mueller et al. | A Viscum album oligosaccharide activating human natural cytotoxicity is an interferon γ inducer | |
| Warren et al. | Production of IL-5 by human NK cells and regulation of IL-5 secretion by IL-4, IL-10, and IL-12. | |
| Okazaki et al. | IL-7 promotes thymocyte proliferation and maintains immunocompetent thymocytes bearing alpha beta or gamma delta T-cell receptors in vitro: synergism with IL-2. | |
| Hörig et al. | Exogenous glutamine requirement is confined to late events of T cell activation | |
| EP3227435B1 (en) | Gammadelta t cell expansion procedure | |
| Guy et al. | Coordinated action of IgE and a B-cell-stimulatory factor on the CD23 receptor molecule up-regulates B-lymphocyte growth. | |
| AU2014224141A1 (en) | ICOS critically regulates the expansion and function of inflammatory human Th17 cells | |
| EP0789588A1 (en) | Method for making a medicament for treating secondary immunodeficiency | |
| Hameg et al. | IL-7 up-regulates IL-4 production by splenic NK1. 1+ and NK1. 1− MHC class I-like/CD1-dependent CD4+ T cells | |
| Talmadge et al. | Proliferation of human peripheral blood lymphocytes induced by recombinant human interleukin 2: contribution of large granular lymphocytes and T lymphocytes | |
| Glade et al. | Products of lymphoid cells in continuous culture | |
| Suciu-Foca et al. | Reactivity of HTLV-transformed human T-cell lines to MHC class II antigens | |
| AU621046B2 (en) | Method for therapy of leukemias and certain other malignancies | |
| Van Gool et al. | CD28 ligation by monoclonal antibodies or B7/BB1 provides an accessory signal for the cyclosporin A-resistant generation of cytotoxic T cell activity. | |
| JP2023503098A (ja) | Ｔ細胞培養用培地組成物及びこれを用いたｔ細胞の培養方法 | |
| CS233896B1 (cs) | Klonovaná linie lelikérnických buněk produkující interleukin 2 | |
| Friedman et al. | Allospecific human T cell lines and clones which mediate HLA-DR restricted helper activity. | |
| AU594449B2 (en) | Tripeptide with immunostimulating activity | |
| Miller | IL 2 production by mitogen-stimulated T cell subsets: helper-precursors are predominantly Lyt-2-. | |
| Kyoizumi et al. | A cloned cell line, Mk1, possessing Ia antigens and accessory cell activity. | |
| Maeda et al. | Application of a human T cell line derived from a Sezary syndrome patient for human interleukin 4 assay | |
| KR101472903B1 (ko) | T 세포 활성 억제 펩타이드 및 이의 용도 | |
| Arnaud‐Battandier et al. | Natural killer cells in guinea pig spleen bear Fc receptors | |
| Shimizu et al. | Mechanisms controlling TCGF production by cloned sublines of EL-4 azgr in response to stimulation by anti-Thy-1 antibody. |