CS252455B2 - Method of streptolysin's o antibodies continuous determination in whole blood sample - Google Patents
Method of streptolysin's o antibodies continuous determination in whole blood sample Download PDFInfo
- Publication number
- CS252455B2 CS252455B2 CS815164A CS516481A CS252455B2 CS 252455 B2 CS252455 B2 CS 252455B2 CS 815164 A CS815164 A CS 815164A CS 516481 A CS516481 A CS 516481A CS 252455 B2 CS252455 B2 CS 252455B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- antibodies
- oxidized
- streptolysin
- blood sample
- reducing agent
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 24
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 24
- 108010011834 Streptolysins Proteins 0.000 title claims description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 15
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 14
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 12
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims description 11
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 claims description 7
- 108010075210 streptolysin O Proteins 0.000 claims description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 5
- 239000000644 isotonic solution Substances 0.000 claims description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 3
- VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N dithioerythritol Chemical compound SC[C@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N 0.000 claims 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 28
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-UHFFFAOYSA-N 1,4-dithiothreitol Chemical compound SCC(O)C(O)CS VHJLVAABSRFDPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical group S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- -1 lyophilisate Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 125000004149 thio group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 150000007944 thiolates Chemical class 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/56944—Streptococcus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/554—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being a biological cell or cell fragment, e.g. bacteria, yeast cells
- G01N33/555—Red blood cell
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/805—Optical property
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Virology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu kontinuálního stanovení protilátek antistreptolysinu 0 ve vzorcích celé krve.
U většiny chorob způsobených beta-hemolytickými streptokoky reaguje lidský organismus tvorbou protilátek, které jsou speeifické vůči různým' antggenům takto produkovaným, mezi které patří streptolysin 0. ’
Je známo, že streptolysi^n O je protein způsooující lyži erytrocytů. To aby jeho přílootlst a k^nc^f^r^ttrace mohly být stanoveny in vitro.
Receptorem strep^^s^u 0 na oemOráně erytrocytů je patrně cho!_<estero 1. Streptolysin 0 se váže sám na receptor oemOrán jedině v přísaiě, kiy jsou v jeho struktuře proteinu přítomny sulfhyirylové skupiny. Kiyž vhoiné oxidační činidlo převáií sulfhyirylDvé skupiny v iisulfidícké skupiny, strepulysin '0 ztrácí schopnost své vazby na receptory mernmbán, pravděpodobně v důsledku sterické zábrany. Výsledkem je to, že redukovaný strepí^vsi-n 0 je toho neschopen. Obě formy jsou však schopné se vázat na speecfické protilátky.
Biochemické a imunologické chaaaatterstiky otreetllyoitu 0 jsou známy a byly využity dřívějšími vý-tuontky. PuUUiktie Journal of Micrlbilllgy, září 1978, strany 263 až 267 /viz rovněž francouzský patent č. 2 336 685/, popisuje aemolyУictý způsob stanovení protilátek tntistreetll·yoinu 0 ve vzorcích celé krve. Tento způsob je založen na stenném principu jako klasická Raan-RRaddaiova hermetická metoda pro sérum, avšak s tím rozdílem, že mi^to po^žtí redukovaného strep^^s^u 0 se používá oxidovaného strep^es!^ 0, rozděleného do zkumavek ve skalárních dávkách /na rozdíl od klasické Raan-RRandaiovy aemoOytické metody, při níž zkoušené sérum se rozděluje ve skalárních ředěních/. To umc»oňuue, aby zkoušená celá krev byla přidávána k reakCní sirOsí místo zkoušeného séra, čímž se ušeeří násseduu^cí přidání pomytých eryУrliyУS, vzhledem ke skutečnost, že erytaliyУy zkoušené krve nejsou iýzovány oxidovaným strepУllysteeo 0 a mohou být tudíž přidány na začátku.
Ani klasická Raat-RRadutllva metoda ani metoda popsaná dříve, po užívací oxidovaného streetllyoinu 0, neumožní kontinuální stanovení titru protilátek streetllysitu 0, ten se stanou:! pomocí stupňů na bázi skalárních dávek použitého séra a oxidovaného streetllyoinu 0. DDáe, vyhodnocení bodu přechodu nehemoOýzy k heoolýze pro stanovení titru se provádí po · odstředění nebo po době čekání nezbytné k toou, aby se erytrocyty usaadly. U nejvíce používaných způsobů je toto stanovení suЬ^е^^^ z toho důvodu, že výsledek se odečítá vizuálně analytkeem bez pomezi oošících přístrojů, napeíkltU spektrofotometrů, nefelometrů apod.
Cílem tohoto vynálezu je postytnout způsob kontinuálního stanovení protilátek streptolysinu 0 ve vzorku celé krve, který umožňuje provádění analýzy jednoduše a opolehaivS, přičemž dosažené výsledky jsou hodnoceny za po^iužtí laboratorního zařízení v kombinaci s jednoduchým měřením času.
Způsob kontinuálního stanovení protilátek antϊstreetllysiru 0 ve vzorku celé krve podle vynálezu spočívá v tom, že první reakční činidlo, lbssthjíií jedinou dávku oxidovaného streptolysinu 0, se uvádí do reakce se opecifickýoi prUti.áík^c^mL, které jsou popřípadě přítomny ve zkoušeném vzorku krve, nechá se proběhnout reakci mezi oxidovaným otreptolystneo 0 a přítomnými erltilákkaoi, načež se oxidovaný otaeptoLysit 0 zredukuje zpět přidáním druhého reak^ího Činidla, kterým je redukční činidlo z taiolové skupiny, napě^la^ ditaίlerythaitol, zimší se rozsah hemc>lýzy a po jeho porovnání s rozsahem hemolýzy vzorků o známém titru protHátek antistreetolysinu 0 se stanoví titr protilátek antistreetolysiru 0 zkoušeného vzorku krve.
Způsob podle vynálezu lze molίfitlvtt tak, že se k reakční soOsí přidáváj erytrocyty.
K reakční simsi se mohou přidávat lddské erytrocyty skupiny 0 a Rh- v tonccetraci 0,4 % nebo zvířecí erytrocyty v k<lncentraci 0,4 %.
Rozsah hemolýzy se s výhodou zjišťuje ze změny absorbentu, propustnosti nebo zákalu reakční tmosi za časovou jednotku, způsobené lýzos erytrocytů, přičemž zjišťování této změny se provádí tpeet.rofltloeericky, turbidioetricky nebo oefelooeericky. *
Způsob l.ze provádět tak, že oxidovaný streptolysio 0 je přítomen v prvním reakinm činidle v mnoossví 1 až 10 jednotek CFU oa 1 ml v izotDnCkkéo roztoku, s výhodou pufrovaném oa hodnotu pH 7.
VýhodoS je redukčním čioideem oebo dithiotreitol v konccnOraci 0,014 moHl/litr, popřípadě mmekaptoethanol v koncceOraci 0,014 moH/litr.
RRyChost henmoýzy lze měSit stanovením změny v absorbenci /nebo prlpustnolti nebo zákalu/ reakčoí smmsi obsaahUící zkoušený vzorek za časovou jednotku, s použitím objektivních mmSicích metod, například tpentrofotomontin, nefe^e^e oebo turbidimeerie a za poouití přístroje opatřeného registračním papírem.
Grafy oa obr. 1 zoááoonuuí tpentrlfltooonricOé křivky pro srovnávací vzorky, tvořené lidskou krví známého titru anOistrnptllytins 0. Úsečka v uvedených grafech znamená dobu a pořadnice znamená absorbanoi.
Bod A každé křivky značí čas přidání redukčního činidla. část A-B značí dobu lateoce, která se může ··· u jednotlivých vzorků lišit. Velkost čás^ A-B ukazuje počáteční hodnotu absorbence, což odpovídá 0 % hnmolýoy. Veeikost D každé křivky značí hodnotu konečné absorbance, odppoíddjící 100 % hemolýoy. Bod E každé křivky značí 10% pokles počáteční absorbance.
Křivka F byla získána pomocí vzorku o titru 1.600 IU, křivka G pom)c:í vzorku o titru 800 IU, křivka H pomc>cí vzorku o titru 400 IU, křivka I pomocí vzorku o titru 200 IU a křivka L pomocí vzorku o titru 100 IU.
Z těchto křivek lze vidět, že změna a” v absorbanci v Časové jednotce /jedna minuta/ u vzorku o titru 1 600 IU /k^vka 1/ je 9,0 dílků, u vzorku o titru 800 IU /k^vka G/ je 14,0 dílků, u vzorku o titru 400 IU /křvvka H/ je 22,5 dílků a u vzorku o titru 100 IU /křivka L/ je 39,0 dílků, a rychlost hnmolýzy představuje tudíž inverzní funkci mnoožtví speecfických protilátek piílomnýcr ve vzorku.
Jak je znázorněno oa obr. 2, vynesením dílků z křivek vzorku podle obr. 1 jako pořadnice a přísSušnéhl titru anOittreptolytins 0 jako úsečky, se získá referenční křivka, ze které lze získat kontinuálně titr protilátek ttryptolytirls 0 jakýchkkoiv zkoušených vzorků krve analyzovaných stejně jako vzorky se známým titem.
Z křivek oa obr. 1, týkajících se vzorků se známým titrem, je možné stanoovt místo rychlost hnmolýoy odppovddaícího v příkaadu 10% poklesu absorbance, meei bodem A a bodem E kterékoU křivky.
Z těchto křivek lze vidět, že doba t, nezbytná k dosažení uvedeného 10% snížení bod E, od okamžiku přidání redukčního činidla bod A, je 4,8 minut pro vzorek o titru 1600 IU, 3,20 minut pro vzorek o titru 400 IU, 1,30 minut pro vzorek o titru 200 IU a 0,90 minut pro vzorek o titru 100 IU.
Jak je znázorněno oa obr. 3, vynesením doby nezbytné k dosažení 10% snížení počáteční absorbance, vzaté z křivky vzorků jako pořadnice a odppovddaícího titru protilátek styptolysinu 0 jako úsečky, se získá referenční křivka, ze které lze získávat kontinuálně titr protilátek ttryptllytins 0 zkoušený vzorek krve, jehož doba k dosažení 10% poklesu počáteční absorbance se má stanDovt, piieeoS se postupuje stejně jako u vzorků se známým titrem. Z předchozího je zřejmé, že způsob podle vynálezu je jedooduchýpři aplikaci tím, že je zapotřebí jenom dvou reakcích činidel a provádí se snadno oa obvyklém laboratorním zařízení.
V popise vynálezu a v jeho definici předmětu vynálezu se výrazem optimální hodnota pH rozumí hodnota pH optimální k dosažení mmximální hemmlyyické aktivity a jehož hodnota je snadno d^j^c^a^itel^n^l z příslušné l:te^]^a^1^ur^y, týkající se tohoto oboru, výrazem ίζ^^ί^γ roztok se rozumí roztok, který má stejný ltmolieký tlak jako má krevní plasma.
Prvým reakčním činideem je oxidovaný streptolysin O v jedné dávce a určité konceenraci, případně v lyofizizoanéém stavu nebo v izotonCkéém roztoku, který může být pufrovln na optimální hodnotu pH. Jessliie zkoušeným vzorkem je sérum a nikoU cell krev, přidává se příslušné mnooitví promytýeh erytroeytů k oxidovaného roztoku strsttllytizl 0 na každý ml oxidovaného roztoku strsttllysirш 0, přieemi uvedené erytrocyty jsou bud lddského skupina 0, Rh- nebo živočišného původu.
Druhým reakčním činideem je redukční činidlo schopné převádět oxidovaný stisttllysiz O v jeho redukovaný stav. Takovým druhým reakčním či^ní^de^m je thiooovl skupina a je to s výhodou dithilsryУhritll, dithiothreitol nebo mmekaatoethanol v izotonCkéém roztoku, případně pufrovaném ox optimální hodnotu pH.
J^s^s^íLí^ž^s druhým reakčním činideem je dithioeryyhhitol nebo dithiothreitol může být v suché formě např. v prášku, iyofilízátu, tabletách k rozpuštění a k povuití s izltonCtkým roztokem, pokud možno pufrovaaým ox. optimální hodnotu pH. Druhé činidlo může být rovněž směsí dvou nebo více složek s thiooovými skupinami v jakérnmkoi poměru v i^H^c^ncké^m roztoku pH.
V příkladech, které.však vynález neommezií, je uvedeno v následujícím někom případů analýzy vzorků lddské krve nebo vzorků séra zx poiuití hermetického způsobu pro kontinuální stanovení tdtru ASO podle vynálezu, přieemi dosažené výsledky jsou srovnány s výsledky dosaženými konvenční ^^ι^2^-Κ5^ι^031 tovou heimoytickou metodou.
Př'íklad 1
Stanovení titru lnnistrrttllysdzl 0 v celé krvi měřením rychlosti hernooýzy.
0,01 ml analyzované celé krve se přidá ke 2 ml pudrovaného fyiiOogCtkéhl roztoku /fosflty 0,05 mol/l.tr + NaCl 0,15 mol/l.tr, hodnota pH 7,0 při te^otě 20 °C /^sa^uící 5 jednotek CU/ml oxidovaného ttisttliytdzl O. /Jednotka CU je mmeznárodní symbol pro kombinační jednotku vztaženou ox mmsinárldní standardní sérum/. Provede se p^^J.í^vě smíchání a směs se ponechá stát při teplotě mí^t^ι^c^otiL po dobu 15 minut, aby se usna^nia reakce aztigsz-tiltiáátkl. Přidá se 0,1 mi redukčního roztoku lbsalulíeího thiol /dithiorryУhritol, d^t^hiotreítol nebo mmekaptoethanol nebo jakou^H jejich sméě/, směs se míchá a hodnnoí pomocí spektrofotometru při 600 nm. Získaná tpeetrlfltlmmerietl křivka je znázorněna ox obr. 4, ze kterého lze vidět změnu v absorbanci 21,5 dílků/min. Z křivky ox obr. 2 lze vidět, že zkoušený vzorek krve má titr lzzdstrsttllysizl O 430 IU.
Když byl stejný vzorek analyzován klascckým Ranz-RaaOallovým způsobem, possfyl titr
333 IU /následně stanovená hodnota podle RaazzRaxZaalovy stupnice 500 IU/.
Příklad 2
Stanoveaí tdtru ASO v séru pomooí mměeaí rychloosi hemolýzy·
V tomto případě, protože analyzovaný vzorek neobsahuje erytrocyty,· oxidovaný roztok SO pouHtý v kozcceOracd 5 CU/ml ve fyziologCtkém roztoku, obsahuje promyté erytrocyty předem k němu přidané, v mno^^í 0,1 ml sedimentu ггу^^у^ na 40 mi oxidovaného SO. Erytrocyty mohou být lddské /skupina 0, Rh-/, nebo z králíka nebo jOného vhodného ivířsts· Aby se stanoovi titr ASO, přidá se 0,01 mi zkoušeného séra ke 4 mi oxidovaného SO obsalшlíeíhl arytro cyty v suspenzi a směs se pečlivě promíchá. Ponechá se stát při teplotě místnosti po dobu minut, potom se přidá 0,2 ml redukčního činidla, připraveného jak je uvedeno v příkladu 1. Ze získané spektrofotometrické křivky, znázorněné na obr. 5, lze vidět změny v absorbanci 28,5 dílků/min. Z referenční křivky na obr. 2A, sestrojené ze vzorků séra známého titru a stejným způsobem jaký byl použit pro obr. 2, lze vidět, že zkoušený vzorek séra má titr ASO 260 IU.
Stejný vzorek analyzovaný klasickým Ranz-Randa Hovým hemolytickým způsobem poskytl titr protilátek streptolysinu 0 250 IU /následující předem určená hodnota podle Ranz-Randallovy stupnice 33 IU/.
Jestliže je to žádoucí, lze erytrocyty přidávat к reakční směsi /streptolysin 0 + sérum/, přičemž se získají stejné výsledky.
Příklad 3
Stanovení ASO titru v séru celé krve měřením doby nezbytné к počátečnímu 10% poklesu absorbance.
Příprava oxidovaného streptolysinu O erytrocyty nebo bez nich, v závislosti na tom, zda vzorek sestává ze séra nebo celé krve, a poměry různých reakčních složek v reakční směsi spolu s analytickým postupem odpovídají přesně tem, které jsou uvedeny v příkladech 1 a 2, pouze konečný způsob výpočtu je odlišný.
V tomto příkladu reakční směs obsahující zkoušený vzorek má počáteční absorbanci 1 100 A. 10% pokles odpovídající 0,110 А к dosažení bodu E, odpovídající hodnotě 0,990 A /1,100 - 0,110 - 0,990/ vyžaduje dobu 1,35 minut od přidání redukčního činidla /bod А/, jak lze vidět ze spektrofotometrické křivky 6. Z křivky na obr. 3 lze vidět, že titr ASO zkoušeného vzorku je 220 IU.
Po analýze klasickým Ranz-Randallovým hemolytickým způsobem poskytl týž vzorek titr
160 IU /následná předem určená hodnota podle Ranz-Randallovy stupnice 250 IU/.
Claims (6)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Způsob kontinuálního stanovení protilátek antistreptolysinu 0 ve vzorku celé krve, vyznačující se tím, že první reakční činidlo, obsahující jedinou dávku oxidovaného streptolysinu 0, se uvádí do reakce se specifickými protilátkami, které jsou popřípadě přítomny ve zkoušeném vzorku krve, nechá se proběhnout reakce mezi oxidovaným streptolysinem 0 a přítomnými protilátkami, načež se oxidovaný streptolysin O zredukuje zpět přidáním druhého reakčního činidla, kterým je redukční činidlo z thiolové skupiny, například dithioerythritol, změří se rozsah hemolýzy a po jeho porovnání s rozsahem hemolýzy vzorků o známém titru protilátek antistreptolysinu O se stanoví titr protilátek antistreptolysinu 0 zkoušeného vzorku krve.
2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se к reakční směsi přidávají erytrocyty. 3. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se к reakční směsi přidávají lidské ery- trocyty skupiny 0 a Rh- v koncentraci 0,4 %. 4. Způsob podle bodu 2, vyznačující se tím, že se к reakční směsi přidávají zvířecí ery· trocyty v koncentraci 0,4 %. - 5. Způsob podle bodu 1, vyznačující se t:^m, že rozsah hemolýzy se zjišťuje ze změny absorbance, propuutnoiti nebo zákalu reakční směsi za časovou jednotku, způsobené lýzou erytrocytů, přučemž zjišťování této změny se provádí s^^^e^kmjfoto^etti.ck/, turbidimetricky nebo nefelometticky.
- 6. Způsob podle bodu 1, vyznaačuící se tím, že oxidovaný strep^^si-n 0 je příoomen v prvním reakčním činidle v mndssví 1 až 10 jednotek CU na 1 ml v izotonickém roztoku, s výhodou pufrovaném na hodnotu pH 7.
- 7. Způsob podle bodu 7, vyznaauuící se tím, že redukční činidlo je rozpuštěno v nickém roztoku, s výhodou pufrovaném na hodnotu pH 7.
- 8. Způsob podle bodu 7, vyznaa^í^ se tím, že redukčním činideem je άϊ^ϊ^Γγ^Γϊ^Ι nebo d-thUtre-tH v konceenraci 0,014 molů/lltr.
- 9. Způsob podle bodu 7, vyznaa^í^ se tím, že redukčním činideem je meekaptoethanol v koncennraci 0,014 mHůliitr. .
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT23215/80A IT1132167B (it) | 1980-07-03 | 1980-07-03 | Metodo emolitico per la determinazione in continuo degli anticorpi antistreptolisina o,in campioni di sangue o di siero con impiego di streptolisina o ossidata |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS252455B2 true CS252455B2 (en) | 1987-09-17 |
Family
ID=11204965
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS815164A CS252455B2 (en) | 1980-07-03 | 1981-07-03 | Method of streptolysin's o antibodies continuous determination in whole blood sample |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4379850A (cs) |
| EP (1) | EP0043608B1 (cs) |
| JP (1) | JPS5794659A (cs) |
| AT (1) | ATE15546T1 (cs) |
| CA (1) | CA1162846A (cs) |
| CS (1) | CS252455B2 (cs) |
| DE (1) | DE3172219D1 (cs) |
| IT (1) | IT1132167B (cs) |
| SU (1) | SU1367838A3 (cs) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1218273B (it) * | 1981-05-07 | 1990-04-12 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Metodo integrato per l'analisi degli anticorpi antistreptolisinici e mezzi adatti allo scopo |
| DE3210080A1 (de) * | 1982-03-19 | 1983-09-22 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Anti-streptolysin o-latex-reagenz und verfahren zu seiner herstellung |
| US4554248A (en) * | 1982-11-08 | 1985-11-19 | American Home Products Corporation | Composition and method for detecting Antistreptolysin O |
| ES2037045T3 (es) * | 1986-09-24 | 1993-06-16 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Metodo nuevo para la determinacion del valor de antistreptolisina y un estuche utilizado para ello. |
| US5354846A (en) * | 1988-11-18 | 1994-10-11 | Michael Kehoe | Streptolysin O antigen derivatives, its production and uses |
| WO1999036778A1 (en) | 1998-01-20 | 1999-07-22 | University Of Victoria Innovation & Development Corporation | Detection of gpi anchored proteins |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1914081A1 (de) * | 1969-03-20 | 1970-10-01 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Herstellung eines Antistreptolysin-Reagenzes |
| TR19262A (tr) * | 1975-12-22 | 1978-09-19 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Antistreptolisin antikor'larin titrasyonu icin cihaz ve bu cihazin unsurlari vasitasiyle yapilan titrasyon usulu |
| FR2435020A1 (fr) * | 1978-08-29 | 1980-03-28 | Suovaniemi Finnpipette | Procede pour la mesure automatique semi-quantitative de l'intensite de couleur ou de la turbidite d'une solution liquide |
-
1980
- 1980-07-03 IT IT23215/80A patent/IT1132167B/it active
-
1981
- 1981-06-12 DE DE8181200658T patent/DE3172219D1/de not_active Expired
- 1981-06-12 EP EP81200658A patent/EP0043608B1/en not_active Expired
- 1981-06-12 AT AT81200658T patent/ATE15546T1/de not_active IP Right Cessation
- 1981-06-22 US US06/276,442 patent/US4379850A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-06-29 JP JP56099785A patent/JPS5794659A/ja active Pending
- 1981-06-30 CA CA000380895A patent/CA1162846A/en not_active Expired
- 1981-07-01 SU SU813304334A patent/SU1367838A3/ru active
- 1981-07-03 CS CS815164A patent/CS252455B2/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US4379850A (en) | 1983-04-12 |
| SU1367838A3 (ru) | 1988-01-15 |
| ATE15546T1 (de) | 1985-09-15 |
| IT8023215A0 (it) | 1980-07-03 |
| JPS5794659A (en) | 1982-06-12 |
| EP0043608A1 (en) | 1982-01-13 |
| DE3172219D1 (en) | 1985-10-17 |
| EP0043608B1 (en) | 1985-09-11 |
| IT1132167B (it) | 1986-06-25 |
| CA1162846A (en) | 1984-02-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Artiss et al. | Spectrophotometric study of several sensitive reagents for serum iron | |
| US4115538A (en) | Assay kit for cAMP and/or cGMP and method of using the same | |
| EP0008432B1 (de) | Immunologisches Bestimmungsverfahren | |
| EP0471293A2 (en) | Solubilization reagent for biological test samples | |
| Bernard et al. | Latex immunoassay of retinol-binding protein. | |
| CS257757B2 (en) | Method of reaction determination between antigen and antibody and reaction agent for realization of this process | |
| US5705353A (en) | Method of reducing interferences in assays | |
| Luxton et al. | A micro-method for measuring total protein in cerebrospinal fluid by using benzethonium chloride in microtiter plate wells. | |
| US4210622A (en) | Kit for assay of immune complexes | |
| Inchiosa | Direct biuret determination of total protein in tissue homogenates | |
| EP0328388A2 (en) | Wash solution, test kit and method for the determination of an immunological ligand | |
| CS252455B2 (en) | Method of streptolysin's o antibodies continuous determination in whole blood sample | |
| JP2000516344A (ja) | 甲状腺機能の測定のための標準液 | |
| CA1168580A (en) | Immunological reagent for the detection of tubes of the rheumatoid factor in a biological specimen and process for preparing this novel reagent | |
| US3558278A (en) | Determination of albumin | |
| Buffone et al. | Chemical and immunochemical measurement of total iron-binding capacity compared. | |
| EP2309265B1 (en) | Method of assaying complex and kit to be used therefor | |
| Scott | Enzyme immunoassay of lactoferrin in newborn term infants: reference values and influence of diet | |
| Anisimovich et al. | Spectrophotometric determination of proteins in biological fluids | |
| Saleem et al. | Improved micromethod for plasma fibrinogen unaffected by heparin therapy | |
| Cherry et al. | Evaluation of commercial fluorescein isothiocyanates used in fluorescent antibody studies | |
| JP4507439B2 (ja) | ラテックス免疫比濁測定法及びそれに用いるキット | |
| D'orazio et al. | Potentiometric electrode measurement of serum antibodies based on the complement fixation test | |
| JPH0658935A (ja) | 免疫学的測定方法及びその試薬 | |
| Harris | Serum iron determination: a sensitive colorimetric experiment |