CS246791B1 - Avirulentní vakcína proti trichofytóze skotu a způsob její výroby - Google Patents

Avirulentní vakcína proti trichofytóze skotu a způsob její výroby Download PDF

Info

Publication number
CS246791B1
CS246791B1 CS230285A CS230285A CS246791B1 CS 246791 B1 CS246791 B1 CS 246791B1 CS 230285 A CS230285 A CS 230285A CS 230285 A CS230285 A CS 230285A CS 246791 B1 CS246791 B1 CS 246791B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
vaccine
culture
strain
trichophyton
avirulent
Prior art date
Application number
CS230285A
Other languages
English (en)
Inventor
Alois Rybnikar
Josef Chumela
Vladimir Vrzal
Milan Hejtmanek
Evzen Weigl
Original Assignee
Alois Rybnikar
Josef Chumela
Vladimir Vrzal
Milan Hejtmanek
Evzen Weigl
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Alois Rybnikar, Josef Chumela, Vladimir Vrzal, Milan Hejtmanek, Evzen Weigl filed Critical Alois Rybnikar
Priority to CS230285A priority Critical patent/CS246791B1/cs
Publication of CS246791B1 publication Critical patent/CS246791B1/cs

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Description

Vynález se týká avírulentní vakcíny proti trichofytóze skotu a způsobu její výroby. Vakcína je určena k profylaxi trichofytózy skotu.
TriChofytóza skotu je kožní onemocnění, postihující především mladý skot do stáří jednoho roku. Průměrný měsíční počeí_ zvířat, postižených touto nákazou, se v ČSSR pohyboval v letech 1970 až 1976 kolem 10 tisíc až 14 000 kusů, což způsobilo našemu národnímu hospodářství velké ztráty. Po zavedení plošné vakcinace telat v roce 1976 se počet ohnisek trichofytózy i počet nemocných zvířat každoročně výrazně snížil, až koncem roku 1983 se podařilo tuto nákazu v ČSSR jako prvnímu státu na světě v chovech skotu utlumit. Hlavní podíl na utlumení trichofytózy skotu u nás měla nesporně vakcína proti trichofytóze skotu živá Iyofilizovaná (čs. autorské osvědčení číslo 201 481J. Vakcína je připravena ze živého silně virulentního kmene Trichophyton verrucosum, takže při její výrobě, kontrole a praktickém použití dochází k ohrožení zdraví lidí a při nesprávné aplikaci i zdraví zvířat. Podobné nevýhody přináší i sovětská vakcína LTF-130 (čs. autorské osvědčení č. 160 324), která obsahuje živý virulentní kmen Trichophyton faviforme. Vakcína, vyvinutá polskými autory (patent PLR číslo
100 953), je sice připravena z virulentního kmene Trichophyton verrucosum, který má však oproti uvedeným výrobním kmenům a našim avirulentním kmenům CCM F-751 a CCM F-764 podstatně nižší výtěžnost. Také doba expirace polské vakcíny (4 týdny) je v porovnání s naší avirulentní vakcínou podstatně kratší (doba expirace naší vakcíny je 1 rokj.
Předmět našeho vynálezu, avirulentní vakcína proti trichofytóze skotu, zamezuje riziku ohrožení zdraví zvířat a velmi pravděpodobně i lidí, neboť je vyrobena z avirulentního kmene Trichophyton verrucosum. Oproti dříve vyráběné naší i zahraniční vakcíně představuje vakcína kvalitativně vyšší stupeň tohoto výrobního produktu. Také způsob její výroby je oproti předchozím zjednodušen a zkvalitněn. Přitom bylo v pokusech na telatech a morčatech prokázáno, že protekční vlastnosti avirulentní vakcíny jsou plně srovnatelné s vakcínou, připravenou z virulentního kmene T. verrucosum.
Avirulentní kmen Trichophyton verrucosum CCM F-751, který je součástí vakcíny, se vyznačuje rychlejším růstem, rychlejším nástupem tvorby mikrokonidií, vyšší sporulací a vyšší schopností přežívat lyofilizaci než virulentní kmen T. verrucosum CCM F-650, který je obsažen ve vakcíně proti tri246791 chofytóze skotu živé lyofilizované (čs. autorské osvědčení č. 201 481). Tyto vlastnosti a především vyšší výtěžnost kmene M-9A, umožňují použít k výrobě vakcíny mladší kulturu od lldenního stáří, což usnadňuje technologii výroby (možnost použití ředěného kultivačního média, menší denzity inokula, kratší doby homogenizace kultury, zastavení menšího množství mikrokonidií v jednotce objemu vakcíny apod. j. Zároveň dochází i ke zvýšení produktivity práce.
Podobnými vlastnostmi, jako kmen M-9A, se vyznačuje též avírulentní kmen T. verrucosum TV-M-8 (= CCM F-764), který je možno také použít k výrobě vakcíny.
Podstatou našeho vynálezu je avírulentní vakcína proti trichofytóze Skotu a způsob její výroby. Avírulentní vakcína proti trichofytóze skotu se vyznačuje tím, že obsahuje 2,5 až 10 miliónů životaschopných mikrokonidií avirulentního kmene Trichophyton verrucosum Bodin 1902 CCM F-751 nebo CCM F-764 v 1 cm3 zředěné vakcíny. Způsob výroby se vyznačuje tím, že avírulentní kmen T. verrucosum se pomnožuje na vhodné živné půdě při pH = 6,6 až 6,9 po dobu 11 až 18 dnů, při teplotě 26 až 28 °C, narostlá kultura se homogenizuje ve sterilním ochranném médiu, rozplní se do lékovek a lyofilizuje.
Zkušenosti sovětských autorů ukazují, že po přerušení vakcinace v oblastech, kde byla trichofytóza skotu utlumena, došlo opět ke vzplanutí této nákazy. Původce onemocnění, houba Trichophyton, je schopný přežívat ve stájovém prostředí po dobu 7 až 10 let při zachování patogenity. Proto se doporučuje provádět vakcinaci všech narozených telat po dobu 10 let od vyléčení posledně nakaženého zvířete v chovu.
Vakcinace skotu avírulentní vakcínou proti trichofytóze má významnou přednost z epidemiologického hlediska, neboť zamezuje vnášení živých viruletních elementů T. verrucosum do chovů hospodářských zvířat, jak je tomu při očkování telat vakcínou, připravenou ze silně virulentního kmene T. verrucosum (T. faviforme). V místě vpichu virulentní vakcíny dochází totiž ke vzniku krusty o průměru 1 až 3 cm, která se může stát potenciálním zdrojem nákazy pro vnímavá zvířata a pro člověka, protože obsahuje infekční houbové elementy. Po vakcinaci avírulentní vakcínou k vytvoření uvedených krust nedochází; kultivačním vyšetřením pokožky v místě vpichu vakcíny nebyl vakcinační kmen prokázán.
Praktické využití avírulentní vakcíny proti trichofytóze skotu vytváří předpoklad pro udržení beznákazového stavu v našich chovech skotu pokud jde o trichofytózu a zároveň i předpoklad pro snížení výskytu trichofytózy u lidí. Otevírají se také možnosti nabídky tohoto přípravku zahraničním odběratelům.
Použitím avirulentního kmene se sníží náklady na dezinfekční prostředky, které by bylo nutné vynaložit při výrobě virulentní vakcíny a při její praktické aplikaci.
Způsob vakcinace zvířat avírulentní vakcínou je stejný jako u vakcíny proti trichofytčze skotu živé lyofilizované (AO číslo 201 481); aplikace dvou dávek hluboko intramuskulárně v krajině bederní nebo křížové s intervalem 10 až 14 dnů mezi vakcinací a revakcinací. Vakcinaci doporučujeme provádět v levé a revakcinací v pravé polovině těla. Profylaktické dávky pro telata stáří 1 až 3 měsíce jsou dvakrát 2,5 cm3 a u skotu nad 3 měsíce dvakrát 5 cm3 vakcíny.
Příklad 1
I
Příprava 160 000 dávek vakcíny
Pomnožení výrobní kultury probíhá na živné půdě následujícího složení: 10 litrů čerstvé pivovarské sladinky, 30 1 destilované vody, 600 g agaru, 200 g petonu, 800 mg thiaminu a 800 mg kyseliny L-glutamové. Sterilizace probíhá při přetlaku 60 až 80 kPa po dobu 30 minut. Koncentrace vodíkových iontů živné půdy je upravena na pH 6,6 až 6,9. Ředěný sladinkový agar je rozlit asi po 300 cm3 do kultivačních lahví dle Rouxeho o obsahu 2 litrů. Láhve s živnou půdou, uzavřené vatovými zátkami obalenými pergamenovým papírem nebo celofánem, jsou opět outoklávovány při přetlaku 60 až 80 kPa po dobu 30 minut. Pro potvrzení mikrobiální sterility jsou kultivační láhve se ztuhlým živným médiem inkubovány po dobu 3 až 5 dnů v termostatu při +37 °C.
K inokulaci živné půdy je použito inokulum výrobního kmene CCM F-751 (nebo CCM F-764), udržované v lyofilizovaném nebo ve zmrazeném stavu. Inokulace se provádí' pipetovací stříkačkou, na jednu kultivační láhev použijeme 2 až 20X107 životaschopných vegetativních forem, aplikovaných v 10 cm3 fyziologického roztoku. Inokulum je nutno ihned po inokulaci rozmístit po celém povrchu živné půdy krouživými pohyby kultivačních lahví. Inkubace výrobní kultury probíhá při teplotě +26 až +28 °C v poloze kultivačních lahví živným médiem dolů. 11 až 18denní kultura výrobního kmene je oddělena pomocí kovových kliček a motyček od živné půdy a homogenizována v homogenizátoru. K homogenizaci porostu ze 2 až 4 kultivačních lahví použijeme 1 litr ochranného média (500 cm3 fyziologického roztoku + 500 cm3 lyofilizačního média složení: destilovaná voda 1 litr, želatina pro bacto 50 g, sacharóza 75 g). Doba homogenizace při postupném zvyšování počtu otáček homogenizátoru (6 500 až 10 000 otáček za min) je 3 až 5 minut. Koncentrát vakcíny je filtrován přes gázu do zásobní láhve. V odebraném vzorku koncentrátu je mikroskopicky určen počet mikrokonidií a podle zjištěných hodnot jsou pak určeny dávky pro rozplnění koncentrátu vakcíny tak, aby výsledná koncentrace byla 2,5 až 10 miliónů mikrokonidií v 1 cm3.
Koncentrát vakcíny je rozplněn do lékovek obsahu 20 cm3 a zmrazen po dobu alespoň 6 až 12 hodin při teplotě —40 -C nebo 4 až 8 hodin při teplotě —50 °C. Pvní fáze sušení v lyofilizačním zařízení probíhá při maximální teplotě desek 4 -50 °C a maximální teplotě produktu 0 CC po dobu 6 až 15 hodin. Při druhé fázi sušení (18 až 30 h) je maximální teplota desek -(-28 CC a maximální teplota produktu -j- 25 °C. Sušení je ukončena, když dojde k souběhu křivek teploty desek a materiálu po dobu 12 až 14 hodin. Lékovky s usušenou vakcínou jsou uzavírány gumovými zátkami ve vakuu a zajíšEují se hliníkovými pertlemi.
Výroba vakcíny probíhá v podmínkách sterilního prostředí, materiálu a pomůcek.
Lyofilizovaná vakcína se těsně před použitím ředí zřeďovačem A (pufrovaný fyziologický roztok].
S vakcínou jsou prováděny tyto kontrolní zkoušky:
1. Zkouška čistoty kultury a bakteriální sterility se provádí s 0,5 cm3 vakcíny a jejím rozočkováním na krevním agaru, masopeptonovém agaru, masopeptonovém bujónu, glukózovém agaru a Sabouraudově agaru. Zkouška bakteriální sterility je posuzována po dobu 72 h (Petriho misky la 7 dnů (zkumavky) při teplotě -j-37 °C a po dobu 9 dnů při teplotě +20 °C (zkumavky). Zkouška čistoty kultury je ukončena po 10 dnech inkubace při teplotě +26 až +28 °C.
2. Zkouška neškodnosti vakcíny se provádí očkováním 3 cm3 vakcíny dvěma králíkům (hmotnost 2,5 až 3,5 kg) hluboko intramuskulárně. Po aplikaci vakcíny nesmí v průběhu 14 dnů doiít k úhynu ani místním či celkovým změnám zdravotního stavu zvířat.
3. Zkouška aVirulence vakcíny. Do oholené skarafikované zdravé pokožky tří morčat (hmotnost 250 až 350 g) se vetře na plochu asi 3X4 cm 0,2 cm3 vakcíny. Po inokulaci nesmí dojít v místě aplikace k vytvoření typických trichofytických lézí. Doba pozorování: 14 dnů.
4. Zkouška účinnosti vakcíny stanovením počtu životaschopných vegetativních forem výrobního kmene. Provádí se výsevem ředěné vakcíny (ředění 10~5 a 10 6) na Sabouraudův agar s následným počítáním narostlých kolonií výrobního kmene po 9 dnech inkubace při +-26 až +28 °C. Zkouška účinnosti je vyhovující, obsahuje-li 1 cm3 zředěné vakcíny 2.5 až 10xl0s životaschopných vegetativních forem výrobního kmene.
'5. Stanovení koncentrace vodíkových iontů se provádí měřením pH na pH-metru. pH vakcíny je 6,0 až 7,5.
6. Stanovení zbytkové vlhkosti lyofilizátu: maximální přípustná hodnota je do 3 %. Zjistí se z úbytku hmotnosti lyofilizátu po vysušení.
7. Zkouška na vakuum se provádí pomocí vysokofrekvenčního elektrického zkoušeče vakua. Vakuum je vyhovující, je-li tlak menší než 2,66 Pa.
Příklad 2
Příprava vakcíny s použitím jednoduchého lyofilizačního média
Jako kultivační médium je použit agar se sladinovým extraktem (Imuna, n. p, Šarišské Michalany). Sterilizace živné půdy a její rozplnění proběhlo stejně jako v příkladu 1. Inokulace živného média výrobním kmenem CCM F-751 (nebo CCM F-764) se provádí v množství 2 až 20X107 životaschopných vegetativních forem na jednu kultivační láhev. Kultura je inkubována při teplotě +26 až +28 °C. Kultivační láhve s pomnožující se kulturou jsou každodenně prohlíženy a makroskopicky je hodnocena čistota kultury. Kultivace je ukončena po 11 až 18 dnech růstu. Kultura narostlá ve dvou až čtyřech kultivačních lahvích je homogenizována v prostředí 500 cm3 protektivního lyofilizačního média (7,5% nebo 15% roztok sacharózy v destilované vodě) a suspenze je přelita přes řídkou gázu do zásobní láhve. Zásobní láhev s vakcínou je uzavřena gumovou zátkou s pergamenovými papíry a umístěna na 24 hr.din do chladné místnosti při +2 až +8 CC, nebo umístěna po dobu několika dnů do mrazící místnosti při teplotě —18 CC. Po uvedené době je podle výsledků zkoušek čistoty kultury a bakteriální sterility (viz shora) koncentrát vakcíny rozplněn, zmrazen a Iyofilizován. Rozplnění koncentrátu je provedeno tak, aby v 1 cm3 vakcíny po zředění bylo 2,5 až 10 miliónů mikrokonidií.
Tímto způsobem dojde k úspoře lyofilizační kapacity, protože je zkrácena doba sušení lyofilizátu, je rozplněno menší množství koncentrátu vakcíny do lékiovek a nepoužívá se kontaminovaná vakcína k lyofilizaci. Počet dávek výrobku ze stejného množství kultivačního média je přitom stejný jako v příkladu 1.
Zmrazení a lyofilizace vakcíny probíhá při stejných poměrech, jak je uvedeno v příkladě 1. Po skončeném sušení jsou lékovky uzavřeny ve vakuu a provedou se zkoušky u vakcíny stejně jako v příkladu 1.
Doba expirace vakcíny je 12 měsíců od ukončení kontrolních zkoušek při dodržení zásad uchovávání biopreparátů (v temnu, suchu, při teplotě +2 až +8 °C).

Claims (7)

1. Avirulentní vakcína proti trichofytóze skotu, vyznačující se tím, že obsahuje 2,5 až 10 miliónů životaschopných mikrokonldií avirulentního kmene Trichophyton versucosum Bodin 1902 v 1 cm3 zředěné vakcíny.
2. Vakcína podle bodu 1, vyznačující se tím, že obsahuje mikrokonidie avirulentního kmene Trichophyton verrocosum CCM F-751 nebo CCM F-764.
3. Způsob výroby vakcíny podle bodu 1, vyznačující se tím, že avirulentní kmen Trichophyton verrucosum se pomnožuje na živné půdě obvyklé při pomnožování kmene Trichophyton, při pH = 6,6 až 6,9, při teplotě 26 až 28 °C, po dobu 11 až 18 dnů, narostlá kultura se oddělí od kultivačního méVYNÁLEZU dia a homogenizuje se ve sterilním ochranném médiu.
4. Způsob podle bodu 3, vyznačující se tím, že homogenizace ve sterilním ochranném médiu probíhá po dobu 3 až 5 minut.
5. Způsob podle bodů 3 a 4, vyznačující se tím, že sterilní ochranné médium obsahuje fyziologický roztok se želatinou a sacharózou nebo roztok sacharózy.
6. Způsob podle bodů 3 až 5, vyznačující se tím, že koncentrát vakcíny se rozplňuje a následně zmrazuje a lyofilizuje.
7. Způsob podle bodu 6, vyznačující se tím, že sušení probíhá ve dvou fázích, přičemž první fáze sušení trvá 6 až 15 hodin při maximální teplotě produktu 0 °C a druhá fáze sušení trvá 18 až 30 hodin při maximální teplotě produktu 25 °C.
CS230285A 1985-03-29 1985-03-29 Avirulentní vakcína proti trichofytóze skotu a způsob její výroby CS246791B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS230285A CS246791B1 (cs) 1985-03-29 1985-03-29 Avirulentní vakcína proti trichofytóze skotu a způsob její výroby

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS230285A CS246791B1 (cs) 1985-03-29 1985-03-29 Avirulentní vakcína proti trichofytóze skotu a způsob její výroby

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS246791B1 true CS246791B1 (cs) 1986-11-13

Family

ID=5359750

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS230285A CS246791B1 (cs) 1985-03-29 1985-03-29 Avirulentní vakcína proti trichofytóze skotu a způsob její výroby

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS246791B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU183765B (en) Process for producing lyophilized vaccine against duck hepatitis
FI66122C (fi) Saett att framstaella ett vaccin vilket aer anvaendbart foerprofylax och behandling av trikofytos hos paelsdjur och kan ner foerorsakad av en patogen organism trichophyton mentagr phytes
Buchanan et al. Immunity to gonococcal infection induced by vaccination with isolated outer membranes of Neisseria gonorrhoeae in guinea pigs
US3853990A (en) Infectious kerating bacterin and antiserum and method of preparing same
DE2360118B2 (de) Impfstoff gegen Ferkel-Colibacillose
Collier The preservation of vaccinia virus
US4229434A (en) Vaccine for prophylaxis of trichophytosis in horse and method of preparing same
US4472378A (en) Live vaccine for the prevention of salmonellosis in water fowl, a process for making and applying the same
RU2099084C1 (ru) Вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий
CS246791B1 (cs) Avirulentní vakcína proti trichofytóze skotu a způsob její výroby
SU835446A1 (ru) Вакцина дл специфической профилактики и лЕчЕНи ТРиХОфиТии пушНыХ зВЕРЕй иКРОлиКОВ-MEHTABAK,СпОСОб изгОТОВлЕНи ВАКциНы и СпОСОб EE иСпОльзОВАНи
KR101210082B1 (ko) 돼지 다발성 장막염 예방용 백신 조성물 및 그 제조방법
EP0135951B1 (en) Method for production of an anti-mastitis polyvalent vaccine
KR101209964B1 (ko) 돼지 다발성 장막염 예방용 백신 조성물 및 그 제조방법
US5198214A (en) Anti-mastitis polyvalent vaccine, method of administration and method for production thereof
CN106822888A (zh) 小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗及其生产方法
US3843451A (en) Microorganism production
RU2099081C1 (ru) Способ получения вакцины для профилактики стрептококкоза нутрий
CA1067824A (en) Vaccine for prophylaxis of trichophytosis in horse and method of preparing same
RU2099083C1 (ru) Способ получения вакцины против стрептококкоза и пастереллеза нутрий
RU2763991C1 (ru) Вакцина против инфекционного атрофического ринита и пастереллеза свиней инактивированная, способ её получения
RU2799603C1 (ru) Штамм "SA-21" бактерии рода Streptococcus вида Streptococcus agalactiae для изготовления биопрепаратов для специфической профилактики мастита коров
RU2741643C1 (ru) Ассоциированная вакцина против миксоматоза, пастереллёза и вирусной геморрагической болезни кроликов 1 и 2 типов
CZ279278B6 (cs) Vakcína proti trichofytóze kožešinových zvířat a způsob její výroby
NO138215B (no) Fremgangsmaate for fremstilling av et preparat for profylakse av trichophytose i kveg