SU835446A1

SU835446A1 - Вакцина дл специфической профилактики и лЕчЕНи ТРиХОфиТии пушНыХ зВЕРЕй иКРОлиКОВ-MEHTABAK,СпОСОб изгОТОВлЕНи ВАКциНы и СпОСОб EE иСпОльзОВАНи

Info

Publication number: SU835446A1
Application number: SU782618901A
Authority: SU
Inventors: Арутюн Христофорович Саркисов; Лев Иванович Никифоров
Priority date: 1978-06-07
Filing date: 1978-06-07
Publication date: 1981-06-07

Description

Возбудител трихофитии, вызывающие заболевание

у основных сельскохоз йственных, домашних животных,

птиц и человека

Таблица

Мелкий рогатый

скот Лошадь Собака Копгка Серебристо-черна

лисица Песец Шиншилла Кролик Куриные

Примечал и е. Ччеловек, животные, заболевшие при заражении

этимг возбудител ми.

В результате длительной направленно проведенной работы был получен высокоиммуногенный штамМ гриба Trichophyton gypseum 135/1963 с повышенными энергией роста, накоплением биомассы « спороношением , полезно измененными культурально-морфолопическими свойствами, резким снижением вирулентных свойств дл животных :и человека при сохраненин иммуиогенной активности. Этот штамм был выделен Б 1963 г. от серебристо-черной лисицы, больной трихофитией, принадлежащей зверосовхозу «Сомовский Воронежской области, .Полученный штамм зарегистрирован в коллекции культур дерматофитов во Всесоюзном ордена Ленина институте экслериментальиой ветеринарии.

Предлагаетс вакцина дл специфической :профилактики и лечени трихофитии .пушных зверей и кроликов, содержаща культуру гриба штамма Trichophyton gypseum 135./1963 и защитную среду при концентрации микроконидий указанного штамма гриба МЛИ. на 1 мл защитной среды следующего состава, вес, %: Сорбит или

сахароза10- 40

Желатин2,0-10,0

Вода Остальное.

Предлагаетс также способ изготовлени такой вакцины, включающий приготовление питательной среды, выращивание культуры гриба, съем культуры, дозировку биомассы и лиофилизацию, отличающийс тем, что выраш,ивание гриба провод т при 26-28° С в течение 15-30 суток.

Кроме того, предлагаетс способ исПользовани этой вакцины, отличающийс тем, что вакцину ввод т животным внутри+

мышечно с .внутренней стороны бедра в дозах 0,5-10 мл на голову двукратно с интервалами между введени ми в 7-10 дней. Дл получени живой сухой вакцины 5 против трихофитии пушных зверей и кроликов ириготовл ют две смеси комионентов , содержащие:

1)го,могенат живой культуры гриба иммуногеииого штамма Т. mentogrophytes 135.i963 в стерильиой воде с содержанием в 1 ли МЛН, живых микроконидий;

2)защитную среду, включаюшую 10- 40% сорбита или саха.розы « 2-10% желатина , растворенных в 10 мл воды и нростерилизованных .

Смесь первого « второго компотенто-в в соотношени х 0,6-il,0 к 0,5--1,0 после лиофильного высушивани представл ет собой вакцину дл специфической профилактики трихофитии пушиых зверей и кроликов .

Процесс изготовлени предлагаемой вакцины включает выполнение следующих операций;

а)приготовление питательной среды;

б)засев матровых колб и |Выращивание гриба;

в)приготовление среды высушивани ;

г)съем культуры с поверхности питательной среды;

д).измельчение гр.йбницы;

е)соединение гомогената с защитной средой;

ж)дозированный розлив во флаконы;

3)лиофилизаци материала;

и) укупорка, этикетировка флаконов; к) контроль вакцины. aj Дл .приготовлени .питательной среды стерильное неохмеленное пивное сусло развод т водопроводной водой до содержани 7-8% углеводов по Баллингу, подщелачивают до рН 7уО-7,4 и раствор ют, -добавл при нагревании 2,5-3,0% микробиологического агар-агара, затем фильтруют и разливают до 300 мл в матрасы. Стерилизуют при 0,7 атм в течение 40 мин. б)Засе нные матрасы выдерл ивают в термостате при 26-28° С минимально Г5, максимально 30, оптимально 20-25 дней. Эти колебани во многом завис т от использованного сусла, сезона года и др. в)В качестве среды высушива ни примен ют стерильные водные растворы 10- 40% сорбита или сахарозы и 2-10% пищевого желатина -или пептона. Дл приготавлени этой среды в гор чую дистиллированную воду добавл ют необходимое количество желатина или пептона и после растворени сорбит или сахарозу фильтруют и устанавливают рН 7,0-7,4. Стерилизуют три дн подр д: первый день текучим паром 30 мин, второй и третий день 20 мин текучим паром, затем 40 мин при 0,7 атм. г)Съем культуры провод т в стерильных боксах, дл чего специальным скребком снимают грибницу с поверхности сусло-агара и помещают в банки с крышками. Грибную массу снимают, стара сь ие захватывать поверхность питательной среды. Сразу после съема грибницу измельчают. д)Размол грибной массы провод т в гомогенизаторах различных систем и коллоидных мельницах, обеспечивающих «ужное измельчение и стерильность в работе. Температура во врем работы не должна лревыщать 30°С. Аппараты загружают из расчета (в конце измельчени ): съем грибницы с п ти матрасов в 300 мл стерильной воды. е)Гомогенат соедин ют с защитной средой в отношени х 1 :, 0,5: 1 или 1 : 0,5 в специальной бутыли, оборудованной воронкой и сифоном дл стерильного розлива. ж)Бутыль со смесью устанавливают в щуттель-аппарат и тщательно перемешивают . Затем при периодическом помещива«ии разливают :во флаконы по 50; 100 или 200 доз, что при концентрации микроконидий в вакцине 400 млн/мл составл ет соответственно (2,5, 5 и 10 мл. з) Кассеты с флаконами под двухслойными марлевыми салфетками после розлива незамедлительно помещают в охлажденную до (-40) - (-50)° С камеру холодильника дл быстрого замораживани . Через 12-16 ч хорощо промороженные флаконы с вакциной быстро (не допуска оттаивани биопрепарата) перегружают в подготовленную и охлажденную камеру сублиматора (типов ;КС-30, ТГ-50 н др.), подключают датчики, закрывают камеру и включают вакуумные насосы. Спуст ч . при достижении показателей вакуума 8- 10 мВ ВЕ-слючают нагрев полок до 30-40° С. Нагрев поддерживают таким, чтобы в продукте температура каждый час повышалась на 1-3° С, при температуре продукта 8-10° € нагрев снижают до 25° С и поддерживают до окончани сущки. Температура продукта не должна превышать 25° С. Продолжительность сушки в аппарате КС-30 при полной загрузке и разливе во флаконы по 10 мл (.200 доз) составл ет SO-96 ч. и) Лосле завершени сушки флако ы закрывают резиновыми пробками, фольговыми колпачками и закатывают. к) Дл проверки показателей качества препарата от каждой серии отбирают по 20 флаконов, 10 используют дл испытаии качества, другие 10 хран т в архиве. Вакцину контролируют на следующие показатели: определ ют внешний вид, наличие механических примесей, растворимость, остаточную влалсиость, чистоту в бактериальном отношении и в отнощении плесени, содержание и жизнеспособность микроконидий , безвредность и иммуногенна активность . Содержимое флаконов при внесении в них стерильной воды или физраствора должно растворитьс без остатка в течение 2-3 мин и н-е содержать механических примесей (осколки стекла ,и др.). При высевах на сусло-агар, агар Чапека, МПА, МПБ и Китт-Тароцци посевы должны быть чистыми и не давать роста посторонней микрофлоры. Остаточна влажность должна составл ть не менее 1,0 и не более 3,6%. Концентраци микроконидий в разведенной дл употреблени ва кцине 10-:20 млн/л-гл, жизнеспособиость ие менее 10 илтл1мл. Безвредность и иммуногенную активность провер ют на кроликах. П ти кроликам весом 2,5-3,0 кг внутримышечно в область бедра ввод т по 1,0 мл вакцины, повторно через 7 дней в той же дозе в то же место. Через дней после второго введени на месте инъекции на коже может образоватьс поверхностна корочка диаметром до 5-.10 мм. Спуст 30-40 дней 5 иммунизированных и 5 контрольных (не иммунизированных ) кроликов подвергают экопериментальному заражению путем втирани в скарифицированный участок кожи гомогената вирулентной культуры гриба Trichophyton gypseum. Срок наблюдени 30- 35 дней. Из 5 иммунизированных кроликов 4 не должны заболеть трихофитией, не менее 4 контрольных должны про вить клинические признаки трихофитии, которые подтверждают результаты микроскопкческих исследований. Пример конкретного выполнени вакцины и способа ее изготовлени . Дл приготовлени одной серии предлагаемой вакцины в количестве 300 тыс. дов производ т засев 200 матрасов культурой г f-- - f-- richophyton gypseum 135/1963. Через 20- 25 дней матрасы с выросшей культурой тщательно просматривают и при малейшем подозрении на загр знение выбраковывают. Приготавливают 4,5 л защитной среды и провер ют ее на чистоту. ПрО:Вод т пробный размол съема культуры с 5 матрасов в 300 мл стерильной воды и подсчет количества микроконидий и определ ют необходимое дл размола количество матрасов с культурой с тем, чтобы содержание микроконидий в гомогекате составл ло 400 млн/лгл. Если содержание микрокониднй выше 400 У1лн/мл, то количество матрасоБ уменьшают, если ниже, то увеличивают . Затем с матрасов снимают необходимое количество грибницы. Установлено, что с одного матраса минимально .можно получить 1600, максимально 2400 и оптимально 20QO доз вакцины (одна доза - I мл разведенной вакщгны, содержащей 20 У ЛН/МЛ микроконидий). Таким образом, максимальное количество матрасов дл приготовлени одной серии вакцины в количестве SOO тыс. лоз 190, минимальное 125 и оптимальное 150. К го.могенату добавл ют защитную среду, перемещлвают и разливают во флаконы. .При розливе по 10 мл (200 доз во флакон) количество составл ет 900 щт., 5 мл (100 доз) - 1800, 2,5 мл (50 доз) - ЗбаО шт. Возможен и другой метод нивелировки количества микрокоиидий в вакцине путем изменени соотношени гомогената с защитной средой. Лри этом также определ ют содержание микроконидии в гомогенате культуры и за счет уменьшени или увеличени точно рассчитанного кол.ичества защитной среды (но не более чем соотношени 0,5 : 1 и 1 : 0,5) достигают нужного соотношени .

Итоги испытани вакцины против трихофитии пушных зверей в неблаготолучных звероводческих хоз йствах (1976-1977 гг) Лримечамие: В указанных хоз йствах в заболевало от 10 до 40 % голы, предшествующие применению пакципы, трихофитией животных. Вакцина сохран ет иммуногенную активиость и годна к применению не менее одного года при хранении при 4-8° С. Вакцину примен ют с профилактической и лечебной целью дл иммунизации молодн ка, взрослых лисиц, песцов и кроликов Путем двукратного с интервалами в 7-10 дней внутримышечного введени с внутренней стороны бедра в следующих профилактических дозах, мл: Молодн к серебристо-черных лисиц, песцов возраста 1-4 мес. Старше 4 мес. и взрослые Кролики с 45 дней1 С лечебной целью вакцину ввод т по той же методике в удвоенных дозах. На месте введени у животных наблюдаетс образование спуст 10-15 дней небольшого (диаметром до мм) трихофитиеподобного п тна - специфическа реакци на введение, котора спонтанно проходит через дней. Иммунитет у привитых животных наступает через 20 аней после вакцинации. Продолжительность имм нитета не менее двух лет. В соответствии с разрешени ми Главных управлений ветеринарии МСХ СССР и РСФСР было изготовлено 437 тыс. доз опытных серий вакцины, котора была испытана на 87,4 тыс. лисиц и песцов, 10,8 тыс. кроликов в п ти круциых зверосовхозах и двух кроликокомнлексах, стационарно Неблагополучных по трихофитии. ПрИ этом установлено, что вакцина безвредна , не реактогенна, не оказывает отрицательного действи на воспроизводство, создает у 99,2-99,6% животных напр женный иммунитет, что иозвол ет предохранить их от заболевани (см. табл. 2). Таблица 2

Claims

Формула изобретени

Вакцина дл специфической профилактики и лечени трихофитии пушных зверей и кроликов, отличающа с тем, что содержит культуру гриба штамма Trichophyton gypseum 136/1963 и защитную среду при концентрации микроконидий указанного штамма гриба 100-600 млн на 1 мл защитной среды следующего состава, -вес. %:

Сорбит или сахароза10-40

Желатин2,0-10,0

ВодаОстальное.
2. Способ изготовлени вакцины, включающий приготовление питательной среды, выращивание культуры гриба, съем культуры , дозировку биомассы и лиофилизацию , отличающийс тем, что выращивание гриба провод т при 26-28° С в течение 15-30 суток.
3. Способ использовани вакцины, о тл и чающийс тем, что вакцину ввод т животным внутримышечно с внутренней стороны бедра в дозах 0,5-10 мл на голову двукратно с интервалами между введени ми в 7-1-0 дней.

Примечание: Изобретение носит комплексный характер и его целесообразно защитить как состав, способ его изготовлени и способ использовани .

Источники информации, прин тые во вн-имание при экспертизе:

1.Авторское свидетельство СССР 372864, А 61 К 39/00, 1971.

2.Патент Франции 2189022, С 12 К 5/00, 1974.

3.Авторское свидетельство СССР 268593, А 61 К 39/00, 1974.
4.Авторское свидетельство СССР 548947, А 61 К 39/00, 1976.