CS232977B1 - Způsob výroby gonadorelínu - Google Patents
Způsob výroby gonadorelínu Download PDFInfo
- Publication number
- CS232977B1 CS232977B1 CS493783A CS493783A CS232977B1 CS 232977 B1 CS232977 B1 CS 232977B1 CS 493783 A CS493783 A CS 493783A CS 493783 A CS493783 A CS 493783A CS 232977 B1 CS232977 B1 CS 232977B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- gly
- formula
- tyr
- ser
- leu
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 102400000932 Gonadoliberin-1 Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 101500026183 Homo sapiens Gonadoliberin-1 Proteins 0.000 claims abstract description 12
- XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N gonadorelin Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)NCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CC=C(O)C=C1 XLXSAKCOAKORKW-AQJXLSMYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 229960001442 gonadorelin Drugs 0.000 claims abstract description 12
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000009833 condensation Methods 0.000 claims description 6
- 230000005494 condensation Effects 0.000 claims description 6
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- -1 e.g. Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 claims description 5
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 4
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 claims description 3
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 claims description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 3
- ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N triflic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C(F)(F)F ITMCEJHCFYSIIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- NSTUFLGQJCOCDL-UWVGGRQHSA-N Gly-Leu-Arg Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N NSTUFLGQJCOCDL-UWVGGRQHSA-N 0.000 claims description 2
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 abstract description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 abstract 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 abstract 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 abstract 1
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 48
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N Dicyclohexylamine Chemical compound C1CCCCC1NC1CCCCC1 XBPCUCUWBYBCDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- JQJPBYFTQAANLE-UHFFFAOYSA-N Butyl nitrite Chemical compound CCCCON=O JQJPBYFTQAANLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 3
- OHCMNYPOVOHMJR-BZSNNMDCSA-N (2s)-2-[[(2s)-3-(1h-imidazol-5-yl)-2-[[(2s)-5-oxopyrrolidine-2-carbonyl]amino]propanoyl]amino]-3-(1h-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CNC=N1 OHCMNYPOVOHMJR-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 3
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HTLZVHNRZJPSMI-UHFFFAOYSA-N N-ethylpiperidine Chemical compound CCN1CCCCC1 HTLZVHNRZJPSMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 3
- 238000010533 azeotropic distillation Methods 0.000 description 3
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 3
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- IMQROYWCRPSOCD-ROUUACIJSA-N methyl (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-[[(2s)-3-hydroxy-2-(phenylmethoxycarbonylamino)propanoyl]amino]propanoate Chemical compound C([C@@H](C(=O)OC)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 IMQROYWCRPSOCD-ROUUACIJSA-N 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000000921 elemental analysis Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000006698 hydrazinolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZNCVCDONTDKDNY-YUMQZZPRSA-N (2s)-n-[(2s)-1-hydrazinyl-3-(1h-imidazol-5-yl)-1-oxopropan-2-yl]-5-oxopyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound C([C@@H](C(=O)NN)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)C1=CN=CN1 ZNCVCDONTDKDNY-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- JVSFQJZRHXAUGT-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethylpropanoyl chloride Chemical compound CC(C)(C)C(Cl)=O JVSFQJZRHXAUGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- BXRMEWOQUXOLDH-LURJTMIESA-N L-Histidine methyl ester Chemical compound COC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 BXRMEWOQUXOLDH-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241001104043 Syringa Species 0.000 description 1
- 235000004338 Syringa vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- DWAYENIPKPKKMV-ILKKLZGPSA-N [(2s)-3-(1h-imidazol-3-ium-4-yl)-1-methoxy-1-oxopropan-2-yl]azanium;dichloride Chemical compound Cl.Cl.COC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 DWAYENIPKPKKMV-ILKKLZGPSA-N 0.000 description 1
- MOKIIISEXMEBSA-UHFFFAOYSA-N [S]C(=O)OCc1ccccc1 Chemical compound [S]C(=O)OCc1ccccc1 MOKIIISEXMEBSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMYWSKJGWVSJAD-IRXDYDNUSA-N benzyl n-[(2s)-1-[[(2s)-1-hydrazinyl-3-(4-hydroxyphenyl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxopropan-2-yl]carbamate Chemical compound C([C@@H](C(=O)NN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 XMYWSKJGWVSJAD-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000011033 desalting Methods 0.000 description 1
- MNNMTFSPSVOWSF-UHFFFAOYSA-N dicyclohexylazanium;chloride Chemical compound Cl.C1CCCCC1NC1CCCCC1 MNNMTFSPSVOWSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 229910000040 hydrogen fluoride Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- VXYFARNRGZWHTJ-FVGYRXGTSA-N methyl (2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 VXYFARNRGZWHTJ-FVGYRXGTSA-N 0.000 description 1
- CVGYJNBFLSPBEX-HVDRVSQOSA-N n-cyclohexylcyclohexanamine;(2s)-5-oxopyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1.C1CCCCC1NC1CCCCC1 CVGYJNBFLSPBEX-HVDRVSQOSA-N 0.000 description 1
- 239000005445 natural material Substances 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000004262 preparative liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 108010087791 pyroglutamylhistidine Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N thioanisole Chemical compound CSC1=CC=CC=C1 HNKJADCVZUBCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Vynález se týká výroby gonadorelinu
vzorce který se označuje též jako faktor pro
uvolňování luteinizačního a folikuly
stimulujícího hormonu nebo LH/ρτ, apod.
Taktika nové syntézy vychází z nového
reakčního schématu 3 + (2+5), který byl
vybrán pro zřetelné odliáný charakter
tripeptidu 1-3 od zbytku molekuly gonadoree·
linu.
Description
Vynález se týká způsobu výroby gonadorelinu, označovaného též jako faktor pro uvolňování luteinizačního a folikuly stimulujícího hormonu nebo LH/RH apod. Gonadorelin byl izolován z vepřového hypotalamu, jeho konstituci zjistil Schally se sp. (Biochem, Biophys. Res. Commun. li. 393 a 1334, 1971) a navrhl strukturu dekapeptidamidu vzorce I
23456789 10 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHg (I), které byla potvrzena porovnáním biologických účinků syntetické látky s účinky látky získané z přírodního materiálu.
Od objevu Schallyho vzrůstá zájem o gonadorelin v souvislosti s rozšiřujícími se možnostmi jeho praktického využití v humánní i veterinární medicíně (při léčení neplodnosti a v diagnostice), zejména však v živočišné výrobě při synchronizaci říje skotu, prasat, a ovcí, při zvyšování produkce ryb, drůbeže apod.
Pro přípravu této poměrně komplikované sloučeniny byly hledány co nejefektivnšjší syntézy, jak o tom svědčí mnoho publikací v odborné i patentové literatuře. Především byly sledovány dvě základní možnosti syntetického přístupu, a to základní klasická syntéza v roztoku a různé modifikace syntézy v pevné fázi (R. Geiger se sp., Biophys. Res. Commun. & (3), 767 (1971)i N. Yanaihara se sp., J. Med. Chem. J6 (4), 373, (1973);
T. Fuji se sp., Bull. Chem. Soc. Jpn. 49. 1595 (1976).
Jednotlivé postupy se liší především tzv. strategií nebo taktikou syntézy. Některé používají postupnou výstavbu peptidiokého řetězce, jiné spojují peptidické fragmenty podle různých schémat, například 2 + 8, 3 + 7 nebo 6+4 apod.
Molekula gonadorelinu obsahuje šest třífunkčních aminokyselin, což poskytuje mnoho možností pro charakter a počet vhodných chránících skupin při přípravě výchozích derivátů aminokyselin a potřebných peptidickýoh fragmentů (meziproduktů). Většinu publikovaných postupů pak charakterizuje snaha co nejvíce omezit použití chránících skupin a tím zjednodušit syntézu.
Velký počet autorů preferuje syntézy v pevné fázi (H. Sievertson se sp., J. Med. Chem. 22 (3). 222 (1972); W. H. Arnold se sp., J. Med. Chem. 16 (9), 1054 (1973)). V některých pracech se přímo porovnávají výtěžky a celková efektivnost klasické syntézy a syntézy v pevné fázi (G. Flouret se sp., J. Med. Chem. 16 (4), 369 (1973))· Jiní autoři obě metody více nebo méně úspěšně kombinují (L. Bilk se sp., Mh. Vet.-Med. 34 606 (1979)), například spojováním fragmentů podle schématu 3 + 7, přičemž heptapeptid se získává syntézou v pevné fázi. Souhrnně z literatury vyplývá, že předností syntézy v pevné fázi je velká úspora času a relativně vysoká výtěžnost. Naproti tomu poskytují klasické syntézy sice poněkud nižší výtěžky, ale čistota konečného produktu bývá vyšší, takže při jeho zpracování na kvalitu použitelnou pro farmaceutické účely bývají ztráty již relativně menší.
Při hledání nového v průmyslovém měřítku použitelného způsobu výroby gonadorelinu bylo nutno respektovat především hledisko maximální efektivnosti. Z tohoto hlediska byly proto podrobeny kritickému rozboru všechny dosud publikované syntézy. Na základě výběru nejvhodnějších poznatků, doplněných novými původními postupy, se podařilo vypracovat novou strategii syntézy gonadorelinu, která je předmětem tohoto vynálezu. Je pronikavě efektivnější než jiné dosud známé syntézy: je velmi rychlá, s malými nároky na pracnost a materiálové náklady, poskytuje velmi čistý, homogenní produkt, který lze jedinou operací, například preparativní HPLC, snadno a s minimálními ztrátami vyčistit do kvality žádoucí pro farmaceutické použití (chromatograficly čistá látka). Syntézu lze realizovat v běžném zařízení, ve velkých šaržích.
Vynález se tedy týká způsobu výroby gonadorelinu výše uvedeného vzorce I, jehož podstata spočívá v tom, že se tripeptid 1 - 3 ve formě hydrazidu vzorce II
3 p-Glu-His-Trp-N2H3 (II), uvádí v reakci s heptapeptidamidem 4-10 vzorce III
5 6 7 8 9 10
Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg(Tos)-Pro-Gly-NH2 (III), připraveným kondenzací pentapeptidamidu 6 - 10 vzorce IV
7 6 9 10
Gly-Leu-Arg(Tos)-Pro-Gly-NH2 (IV), s hydrazidem chráněného dipeptidu 4-5 vzorce V
Z-Ser-Tyr-KgH^ kde Z je chránící skupina například benzyloxykarbonylová, načež se ze získaného chráněného dekapeptidamidu odstraní chránící tosylskupina.
Taktika syntézy při výrobě gonaóorelinu podle vynálezu vychází z nóvého reakčního schématu 3 + (2 + 5)', který byl vybrán předevSím proto, že charakter tripeptidu .1-3 vzorce II je zřetelně odlišný od zbytku molekuly. Pro jeho přípravu se podařilo vypracovat originálně modifikovaný postup, který poskytuje vysoké výtěžky.
Ve snaze vystačit s minimálním chráněním funkčních skupin choulostivých aminokyselin, tj. šeřinu a tyrosinu, bylo snahou tyto kyseliny zařadit do syntetického schématu co nejpozději a reagovat s nimi v co nejmenším počtu reakčních stupňů. Bylo tedy využito dobře charakterizovatelného dipeptidhydrazinu Z-Ser-Tyr-NgH^, který se kondenzuje azidovým způsobem s pentapeptidesterem nebo příslušným amidem 6 - 10. Za těchto podmínek je potřebné jen minimální chránění funkčních skupin, stačí pouze blokování guanidoskupiny argininu tosylem.
I
Pentapeptidester 6 - 10 se připravuje známými metodami postupnou výstavbou z karboxylového konce, s použitím jednoduchých derivátů aminokyselin, které jsou běžně dostupné.
Pro azidovou kondenzaci pGlu-His-Trp-NgH^ s HBr/Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg(Tos)-Pro-Gly-IiH2.' se podařilo vypracovat modifikovaný postup (v bezvodých podmínkách), který poskytuje příslušný chráněný dekapeptid ve vysoké čistotě a s velmi dobrými výtěžky.
Tripeptidhydrazid pGlu-His-Trp-NgH^ se připravuje novým postupem, při kterém se methyl— ester pyroglutamylhistidinu získává kondenzací dicyklohexylamonné soli pyroglutamové kyseliny s dihydrochloridem methylesteru histidinu pomocí dicyklohexylícarbodiimidu v dimethylformamidu. Methylester histidinu se uvolní in šitu přidáním dicyklohexylaminu a reakce probíhá 48 h za postupného přidávání kondenzačního činidla v nadbytku (1,5 ekvivalentu). Dipeptidester se izoluje ve výtěžku nad 90 % teorie. Příslušný hydrazid pyroglutamylhistidinu se získá hydrazinolýzou 80 až 90% hydrazinhydrátem obvyklým způsobem v methanolu.
232977 4
Příprava methylesteru pyroglutamyl - hystidyl - tryptofanu znesnadňuje jeho rozpustnost ve vodě a přítomnost solí v reakění směsi. Obtíže odstraňuje nově provedená azidová kondenzace za bezvodých podmínek s 1,1 ekvivalentem butylnitritu v dimethylformamidu za přítomnosti anisolu, přičemž se k úprevě pH používá dicyklohexylaminu. Výtěžek je i v tomto případě vyěěi než 90 % teorie.
Hydrazid pyroglutamyl - histidyl - tryptofanu se získá hydrazinolýzou předchozího tripeptidesteru obvyklým postupem v methanolu nebo dimethylformamidu. Výhodou této modifikace je využití nízké rozpustnosti hydrochloridu nebo hydrobromidu dicyklohexylaminu v dimethylformamidu a z toho vyplývající snadná izolace produktů a jejich odsolení prostou filtrací reakSní směsi. Přítomnost anisolu potlačuje vznik vedlejších produktů.
Příprava pentapeptidesteru 5-10 používá běžných postupů. Ke kondenzaci sloužila modifikované metoda směsných anhydridů s pivaloylchloridem v přítomnosti pyridinu, která poskytovala vysoké výtěžky homogenních a velmi čistých produktů. Benzyloxykarbonylová skupina byla odštěpována roztokem bromovodíku v ledové kyselině octové. Jednotlivé stupně byly prováděny přímo s přísluěnými hydrobromidy a k uvolnění peptidu in šitu byl používán (podle vlastností jednotlivých produktů) bu3 H-ethylpiperidin, triethylamin nebo dicyklohexylamin.
Z parciálně chráněného dekapeptidamidu gonadorelinu bylo možno odštěpit chránící tosylskupinu celou řadou známých postupů. Z nich jako nejvýhodnější a relativně šetrné bylo zjištěno štěpení kapalným fluorovodíkem, zejména v přítomnosti ochranných látek, například anisolu, thioanisolu, thioglykolové kyseliny nebo směsi těchto látek, zaručujících zvláště šetrný průběh štěpení, bez nebezpečí štěpení peptidickýoh vazeb nebo jiných vedlejších reakcí. Volný gonadorelin se získá ve vysokém výtěžku a uspokojivé čistotě. Lepších výsledků bylo dosaženo původním postupem štěpení, který spočívá v použití kyseliny trifluormethansuifonové za přítomnosti uvedených ochranných látek (anisolu atd.) a který poskytuje stejný výtěžek produktu jako štěpení kyselinou fluorovodíkovou, navíc je však jeho velkou výhodou vyšší čistota volného gonadorelinu. Ten lze nově vypracovaným postupem v jedné operaci vyčistit pomocí HPLC na chromatograficky jednotnou čistou látku, s obsahem téměř 100 % hmot., použitelnou k farmaceutickým účelům.
Způsob podle vynálezu je blíže ilustrován následujícím příkladem provedení, který však tento způsob neomezuje na podmínky v něm uvedené.
Methylester pyroglutamyl - histidyl - tryptofanu pGlu-His-N2H3 (4,2 g, t.t. 242 až 244 °C) se rozpustí ve směsi dimethylformamidu (170 ml) a 8 N kyseliny chlorovodíkové v dioxanu (5,2 ml). K roztoku ochlazenému na -30 °C se přikape n-butylnitrit (1,86 ml). Po 30 min míchání za chlazení na -15 až -20 °C se pomocí dicyklohexylaminu upraví pH na hodnotu 5 až 5 a k reakční směsi se přilije roztok HCl.Trp-Otóe (3,99 g, t.t. 218 až 223 °C) a anisolu (1,7 ml) v dimethylformamidu. Po úpravě pH na hodnotu 8 až 9 pomocí dicyklohexylaminu se v míchání při 0 °C pokračuje přes noc. Po filtraci se filtráty odpaří a odparek se krystaluje ze směsi methanol (30 ml), octan ethylnatý (300 ml) a ether (100 ml). Ziská se 5,94 g (85 % teorie) chromatograficky čistého pGlu-His-Trp-OMe s t.t. 225 až 227 °C.
Hydrazil pyroglutamyl - histidyl - tryptofanu
Roztok pGlu-His-Trp-Otáe (4,0 g) v dimethylformamidu (50 ml) s přídavkem 80% hydrazinhydrátu (5 ml) se nechá stát 4 h při teplotě místnosti a přes noc v lednici (0 °C).
Po odpaření rozpouštědel se přidá methanol (30 ml) a produkt se vyloučí stáním v mrazícím boxu. Filtrací a vysušením se získá 3,8 g (95 % teorie) pGlu-His-Trp-N^H^ s t.t.
157 až 158 °C,/a/ = -20,7 0 (c = 0,2; dimethylformamid).
Methylester benzyloxykarbonylseryl - tyrosinu
K roztoku benzyloxykarbonylšeřinu (22,2 g, t.t. 109 až 1 11 °C) ve směsi dimethylformamidu (50 ml) a pyridinu (8,2 ml), ochlazené na -50 °C, se přikape N-ethylpiperidin (12,7 ml) a pivaloylchlorid (11,32 ml). Po 10 min míchání se přidá roztok hydrochloridu methylesteru tyrosinu (21,4 g t.t. 189 až 194 °C) v dimethylformamidu (50 ml) a N-ethylpiperidinu (12,7 ml), pH se upraví na hodnotu 7,5 a reakční směs se nechá stát 20 h při 0 °C. Rozpouštědla se oddestilují, odparek se rozpustí v methylenohloridu (300 ml), vytřepe roztokem, 1 N kyseliny chlorovodíkové a 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Azeotropickou destilací s benzenem se získá 38,6 g (100 % teorie) Z-Ser-Tyr-OMe ve formě chromatograficky čistého oleje.
Hydrazid benzyloxykarbonylseryl - tyrosinu
K roztoku Z-Ser-Tyr-OMe (38,6 g) v methanolu (460 ml) se přidá 80% hydrazinhydrát (40 ml) při teplotě místnosti. Po 1 h se přidá další podíl methanolu (300 ml) a po dalších 3 h se reakční směs uloží na 20 h při 0 °C. Filtrací a vysušením se získá 36,67 g (95 % teorie) chromatograficky čistého Z-Ser-Tyr-NgH^ s t.t. 220 až 225 °G.
ť Q
Amid benzyloxykarbonylseryl - tyrosyl - glycyl - leucyl - N - tosyl - arginyl - prolyl - glycinu
K roztoku chromatograficky čistého Z-Gly-Leu-Arg(Tos)-Pro~Gly-NH2 (17 g) v kyselině octové (50 ml) se přidá roztok 35% bromovodíku v kyselině octové (50 ml). Vzniklý hybrobro-., mid pentapeptidamidu se po 1 h vyeráží 1 litrem etheru, zfiltruje a vysuší. Poté se k roztoku Z-Ser-Tyr-NgH^ (9 g) ve směsi dimethylformamidu (70 ml) a 7 N chlorovodíku v dioxanu (22,3 ml), ochlazenému na -50 °C, přikape n-butylnitrit (3,66 ml). Po 15 min míchání při teplotě -10 až -30 °C se reakční směs ochladí na -50 °G a přidá se roztok hydrobromidu pentapeptidamidu v dimethylformamidu (70 ml). Pomocí N-ethylpiperidinu se ihned upraví pH reakční směsi na hodnotu 7,0 až 7,5 a uloží se na 48 h při 0 °C. Po odpaření rozpouštědel se odparek rozpustí v methylenohloridu (250 ml), vytřepe roztokem 1 N kyseliny chlorovodíkové a vodou. Azeotropickou destilací s benzenem a krystalizaci odparku ze směsi methanolu s etherem se získá 20,62 g (92 % teorie) Z-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg(Tos)-Pro-Gly-NH2 s t.t. 157 °C.
Aminokyselinové složení: Ser 0,91; Tyr 1,03; Gly 1,93; Arg 1,06; Orn 0,009; Pro 1,04;
Leu 1,08.
Nalezené hodnoty elementární analýzy souhlasí s hodnotami vypočítanými.
Q
Amid pyroglutamyl - histidyl - tryptofyl - seryl - tyrosyl - glycyl - leucyl - N - tosyl - arginyl - prolyl - glycinu
Do roztoku Z-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg(Tos)-Pro-Gly-NH2 (2,2 g) v kyselině trifluoroctové (30 ml) se přes promývačku obsahující anisol zavádí při teplotě 0 °C plynný bromovodík po dobu 1 h. Vysrážením etherem a vysušením v exsikétoru se získá hydrobromid heptapeptidamidu, ze kterého se odstraní hydrobromidové ionty na anexu v OH - cyklu (100 ml). Eluce se provádí methanolem. Zahuštěním a azeotropickou destilací s benzenem se získají 2,05 g látky. Poté se k roztoku pGlu-His-Trp-^H^ (0,665 g) ve směsi dimethylformamidu (7 ml), dimethylsulfoxidu (6 ml) a 2,4 N chlorovodíku v tetrahydrofuranu (35 ml), ochlazenému na -20 °C, přikape roztok n-butylnitritu (0,173 ml) v dimethylformamidu (1 ml).
Po 30 min míchání při teplotě -20 °C se pomocí triethylaminu upraví pH na hodnotu 8 až 9 a přidá se roztok dříve připraveného heptapeptidamidu v dimethylformamidu (6 ml). Po dalších 30 min míchání při teplotě -30 °G se reakční směs uloží na 20 h do lednice při 0 °C. Po filtraci x se filtrát odpaří a odparek se z roztoku v dimethylformamidu (3 ml) přesráží octanem ethylnatým (150 ml). Filtraci a vysušením se získá 2,61 g (92% teorie) chromatograficky čistého pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg(Tos)-Pro-Gly-NH2 s t.t. 175 až 180 °C.
Aminokyselinové složení: Ser 0,91; Tyr 0,95; Olu 1,05; Pro 1,02; Leu 1,00; Arg 0,95;
Gly 1,95; His 1,01; Trp 0,92.
Gonadorelin
K roztoku chráněného dekapeptidamidu (10 g) v kyselině trifluoroctové (50 mg) a kyselině thioglykolové (10 ml), ochlazenému na 0 °C, se přidá kyselina trifluormethansulfonová (50 ml). Po míchání 60 min při 0 °C se reakční směs vlije do 1 litru etheru a uloží na 2 h při -20 °C. Filtrací a vysuSenlm v exsikétoru se získá 6,76 g (99%) gonado-, relinu, který se čistí preparativní kapalinovou chromatografií na koloně upraveného silikagelu (1 500 g) pomocí mobilní fáze obsahující 40 % obj. methanolu a 60 % obj. 0,2% kyseliny trifluoroctové. Odpařeníma lyo.filizací z roztoku v 50% kyselině octové se získá 7,96 g (90 % teorie) čiětěné substance amfoterní struktury. Čistota látky byla ověřena kapalinovou chromatografií (2 systémy) a elektroforézou na papíře (2 pufry). Aminokyselinové složení: Ser 0,93; Tyr 0,98; Glu 1,03; Pro 1,02; Leu 1,00; Arg 0,97;
Gly 1,95; His 1,01; Trp 0,96. Nalezené hodnoty elementární analýzy souhlasí s hodnotami vypočítanými.
Vysvětlení k celé PV:
HPLC ........vysokotlaká kapalinové chromatografie
Claims (2)
1. Způsob výroby gonadorelinu vzorce I
1 23456789 10 pGlu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHg vyznačující se tím, že se trípeptid 1 - 3 ve formě hydrazidu vzorce II
1 2 3 pGlu-Ηί s-Trp-NgHj uvádí v reakci s heptapeptidamidem 4—10 vzorce III
4 5 6-7 8 910
Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg(Tos)-Pro-Gly-KH^ připraveným kondenzací pentapeptidamidu 6-10 vzorce IV
678 9 10 Gly-Leu-Arg(Tos)-Pro-Gly-NHg s hydrazidem chráněného dipeptidu 4-5 vzorce V (II), (III), (IV),
4 5
Z-Ser-Tyr-^H-j (V), kde Z je chránící skupina, např. benzyloxykarbonylová, načež se ze získaného chráněného dekapeptidamidu odstraní chránící tosylskupina.
2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se tosylskupina odstraňuje z chráněného dekapeptidamidu působením kyseliny trifluormethansulfonové, v přítomnosti ochranných látek, zejména anisolu, thianisolu, thioglykolové kyseliny nebo jejich směsí, při teplotě 0 až -30 °C.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS493783A CS232977B1 (cs) | 1983-06-30 | 1983-06-30 | Způsob výroby gonadorelínu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS493783A CS232977B1 (cs) | 1983-06-30 | 1983-06-30 | Způsob výroby gonadorelínu |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS232977B1 true CS232977B1 (cs) | 1985-02-14 |
Family
ID=5393226
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS493783A CS232977B1 (cs) | 1983-06-30 | 1983-06-30 | Způsob výroby gonadorelínu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS232977B1 (cs) |
-
1983
- 1983-06-30 CS CS493783A patent/CS232977B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4100274A (en) | Polypeptide | |
| FI60553C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ovulationsframkallande nonapeptidamidderivat | |
| JP2542362B2 (ja) | 新規ハロ低級アルキルグアニジノ置換アミノ酸化合物およびその製法 | |
| JPH0610184B2 (ja) | 非天然アミノ酸 | |
| SHIOIRI et al. | Amino acids and peptides. XI. Phosphorus in organic synthesis. VI. Application of diphenyl phosphorazidate to the synthesis of peptides containing various functions | |
| HU186877B (en) | Process for preparing new hormone antagonists releasing luteinizing hormone and acid addition salts thereof | |
| JPS6317839B2 (cs) | ||
| US5169935A (en) | Method of making peptides | |
| US4124703A (en) | Luliberin analogs | |
| HU185022B (en) | Process for the preparation of biologically active tetrapeptide derivatives | |
| FR2567524A1 (fr) | Procede de synthese de la somatocrinine en phase liquide et peptides intermediaires | |
| US4491541A (en) | Peptides | |
| US4758552A (en) | Gonadoliberin derivatives containing an aromatic aminocarboxylic acid in the 6-position, pharmaceutical and veterinary compositions containing them and process for preparing same | |
| HU185427B (en) | Process for preparing antagonists of hormone releasing luteinizing hormone | |
| LU85710A1 (fr) | Nouveaux derives de la gonadoliberine et procede pour leur preparation | |
| US3862927A (en) | Process for preparation of vasoactive intestinal peptide | |
| US4512923A (en) | Luteinizing and follicle stimulating hormones and process for the preparation thereof | |
| US4301066A (en) | Preparation of (D-Trp 6)-LH-RH via the heptapeptide H-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 | |
| GB2130590A (en) | Peptides | |
| Prestidge et al. | Use of substituted benzyl esters as carboxyl-protecting groups in solid-phase peptide synthesis | |
| CS232977B1 (cs) | Způsob výroby gonadorelínu | |
| US4369137A (en) | N-Protected pentapeptides useful as intermediates in the preparation of thymopoietin pentapeptide | |
| DE2327396A1 (de) | Synthetisches polypeptid und verfahren zur herstellung desselben | |
| RU2074191C1 (ru) | Способ синтеза дез-гли 10, /d-лей 6/ lh-rh-этиламида | |
| US3790555A (en) | Octapeptide derivative of gonadotropinreleasing hormone |