CS228548B2

CS228548B2 - Způsob výroby pentapeptidů

Info

Publication number: CS228548B2
Application number: CS828110A
Authority: CS
Inventors: Francois Dr Cardinaux; Rene Dr Huguenin; Janos Dr Pless
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1980-07-17
Filing date: 1982-11-15
Publication date: 1984-05-14

Description

Vynález se týká způsobu výroby pentapeptidů obecného vzorce I,

A—B—Gly—D—E (I).

ve kterém

A znamená zbytek obecného vzorce II

(II) kde

Z¹ představuje amidinoskupinu,

Ri znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a Rž znamená atom vodíku nebo

Rl a Rz společně tvoří ethylenový můstek, a

R3 znamená hydroxyskupinu nebo alkoxy2 skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, navázanou v poloze 3, 4 nebo 5,

B představuje zbytek (Dj-isomeru přírodní a-aminokyseliny,

D znamená zbytek obecného vzorce III,

Z²

I

R4 CH2

I I —N—CH—CO— (III) v němž

R4 znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a

Z² představuje fenylovou skupinu, popřípadě mono- nebo disubstituovanou halogenem, nitroskupinou, alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku a/nebo alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, a

E představuje zbytek obecného vzorce IV

Rs R6

I I —N—CH—CH2OH (IV) v němž

Rs znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a

R6 představuje atom vodíku, substituent odpovídající zbytku navázaným na a-uhlík přírodní «-aminokyseliny, zbytek vzorce — (CH₂)_m—CH₂OH kde m je číslo o hodnotě 1 až 6, nebo zbytek vzorce

-(CH₂)_n-CH₂-S(O)_p-R7 kde

R7 znamená alkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku a nap nezávisle na sobě představují vždy číslo o hodnotě 0, 1 nebo 2 s tím, že má-li n hodnotu lap hodnotu 0, pak R7 neznamená methylovou skupinu, kde zbytky A a D mají (L)-konfiguraci, zbytek E má (Dj- nebo (Lj-konfiguraci a zbytek B má (Dj-konfiguraci, jakož i jejich fyziologicky hydrolyzovatelných, fyziologicky přijatelných esterů a solí a komplexů těchto pentapeptidů a esterů.

Při popisování polypeptidů podle vynálezu jako pentapeptidů je třeba mít na zřeteli, že zbytek aminoalkoholu ve významu symbolu E se považuje za derivát aminokyseliny.

Výrazem „amidinoskupina“ se míní skupina vzorce

NH

NH₂—C—.

jak již bylo uvedeno výše, vykazují sloučeniny vyráběné způsobem podle vynálezu výhodné biologické vlastnosti, zejména pak inhlbiční účinnost na sekreci luteinisačního hormonu, a lze je použít jako farmaceuticky účinné látky.

Zbytek ve významu symbolu E může mít bud (Lj-, nebo (Dj-konfiguraci. V textu tohoto vynálezu i v definici předmětu vynálezu se výrazy „zbytek (L)-^-aminoalkoholu“ a „zbytek (Dj-/3-aminoalkoholu“ míní takové zbytky, v nichž relativní konfigurace odpovídá konfiguraci zbytků odpovídající (Lj-α-aminokyseliny, respektive (D)-a-amlnokyseliny [přičemž karboxylové skupina v tomto zbytku (LJ- nebo (D)-aminokyseliny je v každém z těchto případů nahrazena seskupením —CH2OH]. Je třeba mít na zřeteli, že tyto zbytky mohou na atomu dusíku v /S-poloze nést alkylový substituent s 1 až 4 atomy uhlíku.

V pentapeptidech obecného vzorce I jsou výhodné následující významy jednotlivých obecných symbolů nebo jejich kombinace:

1) Oba symboly Ri a R₂ znamenají atomy vodíku,

2} R3 představuje hydroxyskupinu. Nejvýhodněji pak R3 zaujímá polohu 4 a znamená zejména 4-hydroxyskupinu,

3] B představuje zbytek (DJ-isomeru přírodní nearomatické α-aminokyseliny. Nejvýhodněji pak B představuje zbytek -(D)-Ala-,

4} R4 představuje alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, například skupinu methylovou. Pokud R4 znamená alkylovou skupinu se 3 až 4 atomy uhlíku, je touto skupinou s výhodou n-propylová, isopropylová nebo n-butylová skupina, zejména skupina n-propylová,

5] Z² představuje s výhodou fenylovou skupinu, popřípadě mono- nebo disubstituovanou jedním nebo dvěma zbytky ze skupiny zahrnující fluor, chlor a nitroskupinu, zejména fluorem. Znamená-li Z² substituovanou fenylovou skupinu, představuje s výhodou monosubstituovanou fenylovou skupinu, zejména m- nebo p-substituovanou fenylovou skupinu. Nejvýhodněji znamená Z²fenylovou nebo m- či p-fluorfenylovou skupinu, zvláště pak fenylovou nebo p-fluorfenylovou skupinu,

6.1] Rs představuje s výhodou atom vodíku,

6.2 J Jako substituent navázaný na «-uhlík přírodní «-aminokyseliny představuje R6 s výhodou skupinu vzorce

CHs— s—ch₂—ch₂— ,

HO-CH2-,

CHs—CH(OH)— nebo H2NCO—CH₂—CH2—,

6.3) Pokud R6 má jiný význam než jak je uvedeno v odstavci 6.2), představuje s výhodou zbytek vzorce

CH3—SO—CH₂—CH₂— nebo

CHs—SO₂—CH₂—CH₂—,

6.4) Nejvýhodněji znamená R6 zbytek vzorce CHs—SO—CH₂—CH₂— a

6.5) Zbytek E, včetně výhodných zbytků ve významu symbolu E, definovaných výše v odstavcích 6.1) až 6.4), má s výhodou (Lj-konfiguraci (jak je definováno výše). Nejvýhodněji pak E představuje zbytek -Met(O)-oil, tj. zbytek (L)-methioninol-sulfoxidu.

Hydroxyskupiny v pentapeptidech obecného vzorce I, zejména pak hydroxyskupina terminálního zbytku ,6-aminoalkoholu ve významu symbolu E, mohou být esterifikovány za vzniku odpovídajících fyziologicky hydrolyzovatelných, fyziologicky přijatelných esterů, tj. esterů, které hydrolýzou poskytují fyziologicky přijatelnou kyselinu.

Mezi vhodné estery náležejí například estery s mono a dikarboxylovými kyselinami, zejména estery s karboxylovými kyselinami obsahujícími 2 až 5 atomů uhlíku, jako acetáty, jakož i s aromatickými karboxylovými kyselinami, jako benzoáty.

Pentapeptidy obecného vzorce I a jejich estery mohou být ve formě adičních solí s kyselinami nebo ve formě komplexů. Adiční soli s kyselinami mohou být vytvořeny například s organickými kyselinami, polymerními kyselinami a anorganickými kyselinami. Mezi tyto adiční soli s kyselinami náležejí například hydrochloridy a acetáty. Výrazem „komplexy“ se míní sloučeniny známého typu, připravené z pentapeptidů obecného vzorce I a jejich esterů adicí anorganických sloučenin, například anorganických solí nebo hydroxidů, jako solí vápníku, hořčíku, hliníku, kobaltu a zejména zinku, nebo adicí polymerních organických látek.

Jednu skupinu sloučenin podle vynálezu tvoří pentapeptidy obecného vzorce I, ve kterém

Z¹ znamená amidinoskupinu,

B představuje zbytek -(D)-Ala-,

Z² znamená fenylovou skupinu, popřípadě mono- nebo diSubstituovanou halogenem, nitroskupinou, alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku nebo alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku a

Rl, Rz, R3, Rá a E mají význam jako v obecném vzorci I, a jejich adiční soli s kyselinami a komplexy.

Předmětem vynálezu je způsob výroby shora popsaných sloučenin. Tyto sloučeniny je možno připravit tak, že se pentapeptid nebo jeho ester, mající sekvenci uvedenou v obecném vzorci I, v němž Z¹ znamená atom vodíku, nechá reagovat s činidlem schopným zavést amidinoskupinu ve významu symbolu Z¹ na terminální dusík shora zmíněného pentapeptidů nebo esteru, a takto vzniklý pentapeptid nebo jeho ester se izoluje ve volné formě nebo ve formě adiční soli s kyselinou nebo komplexu.

Shora popsanou reakci je možno provádět analogicky jako postup uvedený níže v příkladu provedení. Pokud není zvlášť popsána příprava výchozích látek, jsou tyto sloučeniny buď známé, nebo je lze vyrobit a vyčistit o sobě známými metodami.

Vhodným činidlem pro provádění reakce podle vynálezu je například l-amidino-3,5-dimethylpyrazol, účelně používaný ve formě soli, například ve formě nitrátu. Reakce se účelně provádí v rozpouštědle nebo ředidle inertním za reakčních podmínek, například v dimethylformamidu.

Pentapeptidy a estery podle vynálezu, jakož i jejich fyziologicky přijatelné adiční soli s kyselinami a komplexy, vykazují cenné farmakologické vlastnosti, jak vyplývá z testů na zvířatech. Tyto- sloučeniny zejména Intilbují sekreci luteinisočnílto hormonu a mají depresivní účinnost na centrální nervový systém, o čemž svědčí například následující testy.

1. Inhibiční účinnost na sekreci luteinisačního hormonu; inhibice ovulace u krys

Dospělé samice krys o hmotnosti 200 až 250 g, s pravidelným čtyřdenním esterálním cyklem, se udržují ve standardních podmínkách (14 hodin světla denně v době -od 0,4,00 do 18,00 hodin, teplota 24 °C a 55 až 60% relativní vlhkost), přičemž se nijak neomezují v příjmu potravy a vody. Testovaná sloučenina se aplikuje subkutánně ve fázi preestru, přičemž testované dávky se aplikují jednou ve 13,00 hodin a pak znovu v 16,00 hodin. Za 20 hodin po první dávce se krysy usmrtí, jejich vejcovody se vyjmou a za použití mikroskopu se zjistí celkový počet vajíček v obou vejcovodech. Vyhodnocování se provádí tak, že se na inhibici ovulace soudí pouze v tom případě, že nelze zjistit přítomnost žádného vajíčka. Každá dávka se zkouší na pěti krysách.

2. Depresivní účinnost na centrální nervovou soustavu

Tento test se provádí sledováním změn ve spontánním chování myší a krys v souladu s principy popsanými J. H. Nodidem a spol. v „Animal and Clinical Pharmacological Techniques in Drug Evaluation“, Chicago, 1964 a v „Psychopharmacologia“, 13, 222 až 257 (Berlín, 1968).

Shora popsané pentapeptidy, estery, soli a komplexy se v souladu s tím mohou používat

a) k léčbě pacientů s poruchami, jejichž etiologíe souvisí nebo je modulována sekrecí luteinisačního hormonu, nebo jejichž etiologie zahrnuje fyziologickou regulaci sekrece luteinisačního hormonu, například při léčbě hypertrofie prostaty nebo při léčbě menopausálního syndromu, zejména post-menopausálních návalů horka, například v souladu se studiemi, které popsali Tataryn a spol. („Thermo-regulatory mechanisms and their Therapeutic Implications“, 4. mezinárodní symposium o farmakologii thermoregulace, Oxford, 1979; publ. Karger, Basilej 1980, str. 202 až 207] a Casper a spol. (“Science“, 205, str. 823 až 825 /1979/), a bj jako-psychofarmaceutika, například při léčbě psychotických stavů.

Pro obě tato použití aj a bj se doporučovaná dávka pohybuje v rozmezí od 0,1 do 10 mg pentapeptidů nebo jeho esteru, přičemž tato celková dávka se podává v několika dílčích dávkách dvakrát až čtyřikrát denně v jednotkové dávkovači formě, nebo v protrahované formě. Vhodné jednotkové dávkovači formy, například k orálnímu podání, tedy obsahují od 0,025 do 5,0 mg pentapeptidu nebo esteru uvedeného výše, nebo ekvivalentní množství farmaceuticky u228548 potřebitelné soli nebo komplexu, spolu s pevným či kapalným farmaceutickým ředidlem nebo nosičem. Tyto prostředky mohou mít formu například roztoků nebo tablet.

Vynález dále popisuje

1) způsob inhibování sekrece luteinisačního hormonu, zejména způsob léčby hypertrofie prostaty nebo menopausálního syndromu, zejména post-menopausálních návalů horka, jakož i způsob léčby psychotických poruch u pacientů potřebujících takovouto léčbu, který spočívá v tom, že se zmíněnému pacientovi podá účinné množství pentapeptidů obecného vzorce I nebo jeho fyziologicky hydrolyzovatelného, fyziologicky přijatelného esteru, nebo fyziologicky přijatelné adiční soli s kyselinou nebo komplexu takovéhoto pentapeptidů nebo esteru, jakož i

2) pentapeptidy, estery, adiční soli s kyselinami a komplexy uvedené výše v odstavci 1) jako farmaceutika, tj. pro použití při léčbě člověka nebo zvířete, zejména pro použití způsobem uvedeným výše v odstavci l),a

3) farmaceutické prostředky obsahující pentapeptidy, estery, adiční soli s kyselinami nebo komplexy, uvedené výše v odstavci lj, jako účinné látky.

V popisné části, v příkladové části i v definici předmětu vynálezu se používají následující obvyklé zkratky:

Met-ol = zbytek (Lj-methioninolu, vzorce CH5SCH2CH2CH(CH2OH)NH—,

Met(O)-iol = zbytek (Lj-methioninol-sulfoxidu vzorce CH3-S(O)—CH2CH2CH(CH2OH)—NH—,

MeTyr = —N—methyl-Tyr-,

MeTyr (Butj = -N-methyl-O-terc.butyl-Tyr-, MePhe = -N-methyl-Phe-, (N-propyl jPhe — -N-n-propyl-Phe-, (N-isobutyljPhe — -N-isobutyl-Phe-, (N-butyljPhe = -N-n-butyl-Phe-, (N-propyl jPhe(p-F) = -N-n-propyl-p-fluor-Phe,

Boc = terc.butoxykarbonyl,

Z — benzyloxykarbonyl.

V souhlase se standardní nomenklaturou se u všech zbytků aminokyselin, označovaných zkratkami o třech písmenech, uvažuje L-konfigurace, pokud není uvedeno jinak. Příklad 1

N“-amidino-Tyr- (D j-Ala-Gly-MePhe-Met (O j-ol-acetát g H-Tyr-(D)-Ala-Gly-MePhe-Met(O)-ol-hydrochloridu, rozpuštěného v 10 ml dimethylformamidu, se nechá reagovat s 1,9 g l-amidino-3,5-dimethylpyrazolniťrátu v 0,5 mililitru N-methylmorfolinu a 0,8 ml triethylaminu. Po 5 dnech se pH reakční směsi upraví přídavkem 1 N kyseliny octové na hodnotu 5 až 6 a směs se odpaří ve vakuu k suchu. Zbytek se rozpustí ve vodě a roztok se nanese na chromatografickou kolonu obsahující 50 g slabě kyselého iontoměniče. Po promytí sloupce 0,1% kyselinou octovou se produkt vymyje kyselinou octovou se stoupajícím gradientem od 0,1 do 95 %. Frakce obsahující sloučeninu uvedenou v názvu se spojí a lyofilizují, čímž se získá žádaná sloučenina ve formě světlého amorfního prášku rozkládajícího se při 140 stupních Celsia, o optické rotaci [α]_η ²⁰ — = —50,8° (c = 0,7 v dimethylformamidu j.

Příklad 2

Analogickým postupem jako v příkladu 1 se připraví následující sloučeniny:

2.1 bH-amidino-Tyr- (D j -Ala-Gly-MePhe(p-Fj-Met(O j-ol-hydrochlorid, o optické rotaci [«]d²⁰ = —29,3 ° (c = 1 v 95% kyselině octové),

2.2 bUamidino-Tyr- (D) -Ala-Gly- (N-propyl )Phe-Met-ol-hydrochlorid, o optické rotaci [a]_D ²⁰ = —41,0° (c = 1 v dimethylformamidu j, rozkládající se při 90 “C a

2.3 N“-amidino-Tyr- (D j -Ala-Gly- (N-propylj-Phe-Met (O j-ol-hydrochlorid, O' optické rotaci [a]_D ²⁰ = —33,8 ° (c = 1 v 95% kyselině octové).

Claims

PŘEDMĚT

1. Způsob výroby pentapeptidů obecného vzorce I,

A—B—Gly—D—E (I) ve kterém kde

Z¹ představuje amidinoskupinu,

Ri znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a Rz znamená atom vodíku nebo Rt a Rž společně tvoří ethylenový můstek, a

R3 znamená hydroxyskupinu nebo alkoxyskupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, navázanou v poloze 3, 4 nebo 5,

B představuje zbytek (D)-isomeru přírodní a-aminokyseliny,

D znamená zbytek obecného vzorce III,

Z²

I

Rl CHz

I I —N—CH—CO— (HI) v němž

Rá znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a

Z² představuje fenylovou skupinu, popřípadě mono- nebo disubstituovanou halogenem, nitroskupinou, alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku a/nebo alkoxyskupinou s 1 až 4 atomy uhlíku,

E představuje zbytek obecného vzorce IV,

Rs R6

I I —N—CH—CH2OH

VYNÁLEZU v němž

Rs znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku a

R6 představuje atom vodíku, substituent odpovídající zbytku navázaným na a-uhlík přírodní α-aminokyseliny, zbytek vzorce — (CH₂)_m—CH2OH kde m je číslo o hodnotě 1 až 6, nebo zbytek vzorce — (CH2)_n—CH2-S(O)_p-R7 kde

R7 znamená alkylovou skupinu s 1 až 5 atomy uhlíku a nap nezávisle na sobě představují vždy číslo o hodnotě 0, 1 nebo 2 s tím, že má-li n hodnotu lap hodnotu 0, pak R7 neznamená methylovou skupinu, přičemž zbytky A a D mají (Lj-konfiguraci, zbyté E má (D)- nebo (L)-konfiguraci a zbytek B má (D)-konfiguraci, jakož i jejich fyziologicky hydrolyzovatelných, fyziologicky přijatelných esterů a solí a komplexů těchto pentapeptidů a esterů, vyznačující se tím, že se pentapeptid nebo jeho ester, mající sekvenci uvedenou v obecném vzorci I, v němž Z¹ znamená atom vodíku, nechá reagovat s činidlem schopným zavést amidinoskupinu ve významu symbolu Z¹na terminální dusík shora zmíněného pentapeptidu nebo esteru, a takto vzniklý pentapeptid nebo jeho ester se izoluje ve volné formě nebo ve formě adiční soli s kyselinou nebo komplexu.
2. Způsiob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se použijí odpovídající výchozí látky, za vzniku sloučenin obecného vzorce I, v němž

B znamená zbytek D-Ala a

Z¹, Ri, R2, R’j, D a E mají význam jako v bodu 1.