CS226964B1 - Nový produkční kmen mikroorganismu Streptomyces cinnamonensis KL-1 CCM 3525 - Google Patents

Abstract

Předmětem vynálezu je nový produkční kmen Streptomyoes cinnamonensis KL-1, produkující monensin, který se od standardních kmenů Streptomyces cinnamonensis liší tím, že neprodukuje tmavěhnědočervené pigmenty. Kmen je uložen ve Sbírce mikroorganismů University J.E. Purkyně (CCM) pod číslem 3525.

Description

Vynález se týká nového produkčního kmene mikroorganismu Streptomyoee oinnamonensis KL-l, který produkuje monensin a netvoří pigmenty, jehož vzorek kultury je uložen ve Sbírce mikroorganismů University J.E. Purkyně (CCM) v Brně pod č. 3525.

Novost kmene spočívá v tom, že na rozdíl od standardních kmenů Streptomyces oinnamonensis, nedoprovází biosyntézu monensinu při submerzní kultivaci kmene KL-l syntéza zmavěhnědočervených pigmentů, tyto tmavé pigmenty, rozpustné v organických rozpouštědlech, znesnadňují izolaci monensinu a tím i přípravu monensinovéhe premixu k výrobě medíkovaných krmiv pro výkrm ve velkochovech. Od rodičovského kmene Streptomyces oinnamonensis k7 se nový kmen Streptomyces oinnamonensis KL-l liší také vyšší biosyntetikou aktivitou monensinu.

Pro všechny standardní kmeny Streptomyces oinnamonensis je charakteristické, že při biošyntéze monensinu jsou syntetizovány i antibiotiky neaktivní hnědí až hnědočervené pigmenty. Jako i ú jiných průmyslových mikroorganismů, lze v případě kmenů Streptomyces oinnamonensis, mutagenními zásahy (např. ozářením UV světlem, nebe aplikací některých chemických látek) indukovat kvalitativní nebo kvantitativní změny v produkci standardních metabolitů.

Mutantní kmen Streptomyces cinnamenensis Kl-1 CCM 3525 byl získán z rodičovského kmene Streptomyces cinnamenensis k7 (uleženém ve Sbírce mikroorganismů MBÚ ČSAV*Praha) po ozáření OV světlem. Jaké zdroje záření byle použito lampy Philips 57415 P/40 TUV 15 W. Vodná suspenze konidií kmene k7 byl® vystavena účinkům UV záření při teplotě 24 °C za nepře tržitého promíchávání na elektromagnetickém míchadle. Expoziční dobu 6^V s., odpovídající fluenci energie «•2 -2 -4

360 /uJ mm (3600 erg mm ), přežile 6,3.10 % konidií v suspenzi. Kriteriem pro selekci mutantního kmene KL-l mezi koloniemi, vyrostlými s konidií po sedmidenní kultivaci při 28 ®C na agarové půdě se sladovým a kvasinkovým výtažkem, byla světležlutá barva difundujících pigmentů, výrazně se lišící od hnědečervených pigmentů kolonií standardního typu.

Kmen Streptomyces cinnamenensis KL-l byl porovnáván a vychází rodičevskeu kultureu kmene Streptomyces cinnamenensis k7 při stacionární a submerzní kultivaci.

1) Morfologická charakteristika

Při kultivaci na půdě ee sladýxým a kvasinkovým výtažkem tvořil kmen KL-l, stejně jaké rodičovský kmen k7, vzdušné mycelium s rovnými a zvlněnými sporofery. Po sedmi dnech kultivace byly sperofery obeu kmenů Streptomyces cinnamenensis po celé délce člěněny na jednotlivá konidia (spory). Členění bylo v mikroskopu s procházejícím světlem velmi nezřetelné, byle věak potvrzeno pozorováním v elektronovém mikroskopu.

2) Zbarvení kultur při kultivaci na agarových půdách

Při kultivaci na agarových půdách bylo sledováne zbarvení vzdušného mycelia a zbarvení ” difundujících pigmentů. Rozdíl ve zbarvení vzdušného mycelia i difundujících pigmentů mezi oběma kmeny byl pozorován při kultivaci na třech ze Čtyř testovaných diagnostických půd * (tab.l). Pozorování bylo prováděno po Ifíódhech kultivace při 28 °C (mezi 10 a 20 dny kultivace se zbarvení vzdušného mycelia a difundujících pigmentů již podstatně nezměnilo).

3) Schopnost využívat různé zdroje uhlíku

Schopnost využívat různé zdroje uhlíku byla testována podle Pridhama a Gettlieba (J.Bact. 58íl07, 1948) s osmi různými zdroji uhlíků. Mutantní kmen KL-l i rodičovský kmen k7 rostly stejně na D-glukóze,'D-glycerolu, D-galaktóze a laktóze. Škrob a oetan sodný byly hůře využívány mutantním kmenem KL-l. Na sacharoze a citronanu sodném rostl kmen k7 slaběji, kmen KL-l nerostl na půdách a těmito zdroji uhlíku vůbec.

226 96#

4) Submertóí kultivace

Submeraní kultivace mutantního kmene ΚΕ-l i rodičovského kmene k7 byla provedena na rotační třepačce a frekvencí 2,8 Hz při teplotě 38 ®C v 500 ml varných baňkách, plněných 50 ml fermentační půdy. Složení fermentační půdy v hmotnostní koncentraci:

sojová mouka 1,5 í / ’

2,5 % pro I. vegetativní generaci nebo 5,Φ % pro II.

vegetativní generaci _u

NaCl . ' 0,3 %

CaCO^ 0,3%

Pe2⁽S0₄)₃ 0,03 %

Půda před očkováním byla sterilizována při 120 °C a tlaku 100 kP po dobu 35 min.

Baňky I. vegetativní generace byly oěkováný sporovým inókulem z kultur na. spolurační půdě se sladovým a kvasinkovým výtažkem. Vlastní submerzní kultivace probíhala ve druhé vegetativní generaci; baňky byly očkovány 2 % inokula z kultur první generace po 24 h kultivace.

Mutai?tní kmen Streptomyces cinnamonensis KL-1 tvořil při submerzní kultivaci světlehnědý (béžový) pigment, výrazně odlišný od tmavěhnědočerveného zbarvení kultur rodičovského kmene.

Antibiotická aktivita monensinu v submerzních kulturách byla stanovena plotnovou difuzní metodou s Bacillus subtilis jako testovacím organismem.

Biosyntetická aktivita komplexu monensinových antibiotik po 96 h kultivace byla u nového kmene Streptomyces cinnamonensis KL-1 v průměru o 20 % vyšší než u rodičovského kmene Streptomyces cinhamonénsis k7.

Z uvedených charakteristik je zřejmé, že nový kmen Streptomyces cinnamonensis Kl-1, získaný po působení UV záření, se liší od rodičovského kmene Streptomyces cinnamonensis k7 v těchto znacích:

a) snížená schopnost spolurace na půdě se sacharozou a áextrinem

b) zbarvení vzdušného myoelia na třech diagnostických půdách

c) zbarvení difundujících pigmentů na třech diagnostických půdách

d) schopnost využívat pro růst čtyři z osmi testovaných zdrojů uhlíku

e) zbarvení submerzních kultur

f) antibiotická aktivita monensinu při submerzní kultivaci

Tab. 1: Zbarvéní vzdušného mycelia a difundujících pigmentů u mutantního kmene Streptomyces cinnamonensis KL-1 a rodičovského kmene Streptomyces cinnamonensis k7

Kmen	KL-1	k7
Zbarvení	Vzdušné myeelium	Difundující pigmentj	Vzdušné mycelim	Difundující pigmenty
Test.půda
Agar se sladevým a kvasinkvým výtažkem	světlé žlutobílé	velmi světle žluté	bílé	hnědočerveňe’ 4
Kamp letní medium	světlé žlutobílé	velmi světležluté	bílé	hnčdočervené
Agar se sacharo- zou a dextrinem	světle x Žlutobílé	velmi světležluté	bílé	světlehnědé až béžové
Agar se škrobem a solemi	bílé x	nezřetelné	bílé x	nezřetelné
x nesouvislá spol:	race (pouze okraje	vá nebo ojedinělá místa)

Claims (1)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   Nevý produkční kmen Streptomyoee cinnameneneie KL-1, CCM 3525 produkující monensin a ne_g tveřící pigmenty.