CS223975B2 - Method of making the virus vaccines of the spring-summer meningoencephtalitide - Google Patents

Method of making the virus vaccines of the spring-summer meningoencephtalitide Download PDF

Info

Publication number
CS223975B2
CS223975B2 CS798966A CS896679A CS223975B2 CS 223975 B2 CS223975 B2 CS 223975B2 CS 798966 A CS798966 A CS 798966A CS 896679 A CS896679 A CS 896679A CS 223975 B2 CS223975 B2 CS 223975B2
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
virus
fractions
specific gravity
suspension
gradient
Prior art date
Application number
CS798966A
Other languages
Czech (cs)
Inventor
Franz Heinz
Christian Kunz
Johann Fauma
Otto Schwarz
Original Assignee
Immuno Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Immuno Ag filed Critical Immuno Ag
Publication of CS223975B2 publication Critical patent/CS223975B2/en

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B28—WORKING CEMENT, CLAY, OR STONE
    • B28D—WORKING STONE OR STONE-LIKE MATERIALS
    • B28D1/00—Working stone or stone-like materials, e.g. brick, concrete or glass, not provided for elsewhere; Machines, devices, tools therefor
    • B28D1/02—Working stone or stone-like materials, e.g. brick, concrete or glass, not provided for elsewhere; Machines, devices, tools therefor by sawing
    • B28D1/06—Working stone or stone-like materials, e.g. brick, concrete or glass, not provided for elsewhere; Machines, devices, tools therefor by sawing with reciprocating saw-blades
    • B28D1/068—Components, e.g. guiding means, vibrations damping means, frames, driving means, suspension
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Mechanical Engineering (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mining & Mineral Resources (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Meningo-encephalitis virus (TBE-virus) vaccines are produced by culturing the virus in tissued cultures or in suspensions of avian embryo cells, separating the cells and cell debris by centrifugation, inactivating and concentrating the virus, purifying the suspension containing the virus by subjecting it to a continuous flow density gradient ultracentrifugation in which the gradient content is divided into fractions and the fractions exhibiting an increased absorbance at 260 nm and containing particles with a sedimentation constant in the range of 200 S are collected, and processing the purified suspension into vaccines.

Description

Vynález se týká způsobu výroby virových vakcín jaro-letní meningoencefalitidy kultivací viru ve tkáňových kulturách nebo v suspenzích ptačích embryonálních buněk, zejména v suspenzích kuřecích embryonálních buněk, oddělením buněk a jejich úlomků odstředěním, inaktivaeí, koncentrací a čištěním viru a zpracováním vyčištěných suspenzí na preparáty určené к podávání·BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a method for the production of spring-summer meningoencephalitis viral vaccines by culturing a virus in tissue cultures or in avian embryonic cell suspensions, particularly in chicken embryonic cell suspensions. to serve ·

Podle jedné takové známé metody pro výrobu virových vakcín jaro-letní meningoencefalitidy, popsané v brit· patentovém spisu č. 1 453 035, se po odstředění suspenze získá suspenze obsahující virus, ve které jsou ještě přítomny nežádoucí znečištěniny, které při aplikaci vakcíny mohou mít za následek vedlejší reakce· Proto je žádoucí podrobit suspenzi, obsahující virus, čištění, například chromatografií za použití hydroxylapatitu. Tento známý způsob pracuje se značnými ztrátami· Přesto se nepodařilo dosáhnout požadovaného stupně čistoty·According to one such known method for the production of the spring-summer meningoencephalitis viral vaccines described in British Patent No. 1,453,035, a suspension containing a virus is still obtained after centrifugation of the suspension in which undesirable contaminants may still be present when the vaccine is administered. consequence of side reaction · It is therefore desirable to subject the virus-containing suspension to purification, for example by hydroxylapatite chromatography. This known method works with considerable losses · Despite the failure to achieve the required degree of purity ·

Účelem vynálezu je odstranění vylíčených nedostatků a obtíží; byl vytýčen úkol získat virovou vakcínu jaro-letní meningoencefalitidy o lepší čistotě a v lepším výtěžku, při jejímž použití je silně snížen vznik vedlejších reakcí.The purpose of the invention is to eliminate the shortcomings and difficulties described; the task was to obtain a spring-summer meningoencephalitis viral vaccine of better purity and yield, with the use of which the occurrence of side reactions is greatly reduced.

Tento úkol je u způsobu podle vynálezu vyřešen tím, Že se pro čištění podrobí suspenze, obsahující virus, kontinuální měrně hmotnostní gradientově ultracentrifugaci gradientový obsah se rozloží ve frakce, a frakce, vykazující při 260 nm zvýšenou extinkci, které obsahují částice se sedimentační konstantou v oblasti 200 s, se shromažďují.This object is achieved in the process according to the invention by subjecting the virus-containing suspension to a continuous specific gravity gradient by ultracentrifugation, the gradient content is decomposed into a fraction, and the fraction showing increased extinction at 260 nm containing particles with a sedimentation constant in the region 200 s, are collected.

Podle výhodného provedení způsobu se ze suspenze obsahující virus, oddělí před kontinuální měrně hmotnostní gradientovou ultracentrifugaci přidáním protaminsulfátu podíly, sedimentující rychleji než virus jaro-letní meningoencefalitidy. S výhodou se suspenze, obsahující virus, před kontinuální měrně hmotnostní ultracentrifugací inaktivuje, s výhodou formaldehydem nebo beta-propiolaktonem. Výhodně se může suspenze koncentrovat ultrafiltrací.According to a preferred embodiment of the method, the virus-containing suspension is separated from the virus-containing suspension before the continuous specific gravity gradient ultracentrifugation by the addition of protamine sulphate, sediments quicker than the spring-summer meningoencephalitis virus. Preferably, the virus-containing suspension is inactivated, preferably by formaldehyde or beta-propiolactone, before continuous specific gravity ultracentrifugation. Advantageously, the suspension may be concentrated by ultrafiltration.

Podmínky pro spolehlivou inaktivaci jsou následující:The conditions for reliable inactivation are as follows:

К suspenzi viru, vyrobené způsobem podle vynálezu, se přidává formaldehyd v takových množstvích, aby konečné zředění činilo 1 : 2 000, načež se inkubuje po dobu 30 hodin při teplotě 37 °C a dalěích 48 hodin při teplotě místnosti. Nepřítomnost infekčního viru se prokazuje intracerebrálním očkováním na myších o hmotnosti 10 g. Po 14denní pozorovací době nesmějí být zjištěny žádné symptony FSME.Formaldehyde is added to the virus suspension produced by the process of the invention in amounts such that the final dilution is 1: 2,000, then incubated for 30 hours at 37 ° C and for a further 48 hours at room temperature. The absence of infectious virus was demonstrated by intracerebral vaccination in mice weighing 10 g. After 14 days of observation, no FSME symptoms should be detected.

Jako měrně hmotnostní gradient se s výhodou používá roztok sacharózy o 0 až 50A sucrose solution of 0 to 50 is preferably used as the specific gravity gradient

Při použití takovéhoto roztoku sacharózy odpovídá frakce, vykazující při 260 nm zřetelně zvýšenou extinkci, měrné hmotnosti asi 40 % roztoku sacharózy. Mohou se ale používat i jiné gradienty měrné hmotnosti, jako roztok vívanu draselného, roztok chloridu céžného nebo roztok glycerinu. Frakce, odpovídající měrné hmotnosti viru obsahují částice viru se sedimentační konstantou v oblasti 200 S a vykazují proto zvýšenou extinkci při 260 nm.When using such a sucrose solution, the fraction exhibiting a markedly increased extinction at 260 nm corresponds to a specific gravity of about 40% sucrose solution. However, other density gradients, such as potassium tartrate solution, cesium chloride solution or glycerin solution, may also be used. The fractions corresponding to the specific gravity of the virus contain virus particles with a sedimentation constant in the region of 200 S and therefore show increased extinction at 260 nm.

Podle výhodné formy provedení způsobu se frakce zóny viru, získané po vysokorychlostním odstředění s gradienty měrné hmotnosti, zředí pufrem, obsahujícím lidský albumin, čímž se dosáhne zvýšené selektivity antigenu viru.According to a preferred embodiment of the method, the fractions of the virus zone obtained after high-speed centrifugation with density gradients are diluted with a buffer containing human albumin, thereby increasing the selectivity of the virus antigen.

Kontinuální vysokorychlostní odstřeóování s gradienty měrné hmotnosti je v poslední době vyvinutá metoda čištění a koncentrování nejmenších částic na základě jejich měrné hmotnosti a jejich sedimentačních vlastností. Spočívá v tom, že se v kontinuálním vysokorychlostním procesu odstřeSování oddělí ze suspenze partikulární podíly, tím že v důsledku na ně působící odstředivé síly vniknou do gradientů měrné hmotnosti, zatímco podíly, které za těchto podmínek nesedimentují, zůstanou v suspenzi (afluentu). Částice vniknuvší do gradientů měrné hmotnosti putují během procesu odstřeóování až na to místo, které odpovídá jejich vlastní měrné hmotnosti, čímž zde dochází ke koncentraci těchto částic. Tento způsob byl poprvé použit к čištění chřipkového viru, který má sedimentační konstantu asi okolo 800 S. Byl podrobně popsán v Journal of Virology, prosinec 1967, str. 1 207 až 1 216, Artikel Purifikation of Large Quantities of Influenza Virus by Density Gradient Centrifugation autorů С. B. Reimer, R. S. Baker, R. M. van Frank, T. E. Newlin, С. B. Cline a N. C. Anderson.Continuous high speed centrifugation with specific gravity gradients is a recently developed method of purifying and concentrating the smallest particles based on their specific gravity and sedimentation properties. It consists in separating the particular fractions from the suspension in a continuous high-speed centrifugation process by causing the centrifugal forces acting on them to penetrate the density gradients, while the fractions which do not settle under these conditions remain in the suspension (afluent). The particles entering the density gradients travel during the centrifugation process to the point corresponding to their own density, whereby these particles are concentrated there. This method was first used to purify an influenza virus having a sedimentation constant of about 800 S. It has been described in detail in the Journal of Virology, December 1967, pp. 1 207 to 1216, by Density Gradient Centrifugation. by С. B. Reimer, R. S. Baker, R. M. van Frank, T. E. Newlin, С. B. Cline and N. C. Anderson.

Vzhledem к tomu, že vir jarně-letní meningoencefalitidy má mnohem nižší sedimentační konstantu, totiž jen 200 S, udrží se podle vynálezu relativně nízká průtoková rychlost.Since the spring-summer meningoencephalitis virus has a much lower sedimentation constant, namely only 200 S, the flow rate according to the invention is kept relatively low.

V podrobnostech se způsob provede následovně:In detail, the method is performed as follows:

Slepičí embryonální buňky se suspendují v kultivačním médiu buněk (TCM 199)’(Tissue Culture Medium 199), infikují virem a za aerobních podmínek se při teplotách mezi 25 až 38 °C udržují v suspenzi jeden až pět dní. Potom se buňky a zlomky buněk odstraní odstředěním; získaná suspenze viru se inaktivuje formalinem nebo beta-propiolaktonem a potom koncentruje ultrafiltrací. Kroky postupu tj. inaktivace a koncentrování se mohou provádět i v obráceném pořadí. Suspenze obsahuje vedle viru jarně-letní meningoencefalitidy různé znečištěniny, které zčásti rychleji popřípadě pomaleji sedimentují než vir jarně-letní meningoencefalitidy. S výhodou se rychleji sedimentující podíly oddělí vysrážením protaminsulfátem, dříve než se provede vlastní kontinuální vysokorychlostní odstřeSování s gradienty měrné hmotnosti.Chicken embryonic cells are suspended in Tissue Culture Medium 199 (TCM 199), infected with virus and kept under suspension at temperatures between 25-38 ° C for one to five days under aerobic conditions. Then the cells and cell fragments are removed by centrifugation; the virus suspension obtained is inactivated by formalin or beta-propiolactone and then concentrated by ultrafiltration. The process steps, i.e., inactivation and concentration, can also be performed in reverse order. In addition to the spring-summer meningoencephalitis virus, the suspension contains various contaminants which partly sediment faster or slower than the spring-summer meningoencephalitis virus. Preferably, the quicker sedimentation fractions are separated by precipitation with protamine sulphate before the actual high-speed centrifugation with specific gravity gradients is performed.

Uvedený způsob se v podrobnostech provádí například tak, že se ve vysokorychlostní odstředivce s rotorem naplněným pufračním roztokem, například fosforečnenovým pufračním roztokem, při otáčkách 3 000 ot./minutu protlačí pufrační roztok 50% roztokem sacharózy a tím se vytvoří gradient měrné hmoonooti sacharózy v rozmezí 0 až 50 %· Potom se suspenze, obssarnUící vir nechá protékat rotorem při počtu otáček rotoru 35 000 · otáček za minutu průtokovou rychlostí s výhodou 3 1/h. Za zvolených podmínek vnikne velká část částic viru do gradientů měrné h^oot^nsst.. Poté co se veškerý matri^i^l protlačí zařízením odstreóuje . se ještě hodinu, zatímco se nechá·současně protékat fosforečnamový pufrační roztok. Potom se rotor opatrně zastaví a obsah rotoru se rozdděí na jednotlivé frakce. Potom se u každé frakce zjistí extinkce při 260 nm a současně se stanoví obsah sacharózy ve frakci. LokaUzace viru v gradientech měrné hmotnotti se u^c^o^r^jí jeho ^tinta! při 260 nm· Vir se váže ; v oblasti okolo 40 % sacharózy a vyvolává zde zřetelné zvýšení extinkce při 260 nm.For example, the method is carried out in detail by pushing a buffer solution with a 50% sucrose solution at a speed of 3000 rpm in a high speed centrifuge with a rotor filled with a buffer solution, for example a phosphate buffer solution, to form a sucrose specific hmoonooti gradient Then, the virus-containing suspension is allowed to flow through the rotor at a rotor speed of 35,000 rpm at a flow rate of preferably 3 l / h. Under selected conditions, a large proportion of the virus particles penetrate into the specific gravity gradients. After all the matrices are forced through the apparatus, they are centrifuged. The phosphate buffer solution is allowed to flow simultaneously for one hour. The rotor is then carefully stopped and the rotor content is separated into individual fractions. The extinction at 260 nm is then determined for each fraction and the sucrose content of the fraction is determined simultaneously. Virus localization in specific gravity gradients is determined by its tint. at 260 nm · Virus binds; in the region of about 40% sucrose and induces a marked increase in extinction at 260 nm.

V přiožennám diagrimu je znázorněn tento vztah, z něhož je zřejmá oxtiikce vých frakcí v relaci ke gradientu měrné hmottotSt· Gradient měrné hmoonc>oti roztoku sacharózy se pt]hybvu□r mezi 0 až 50 %.In the diagrim, this relationship is shown, which shows the fraction of the fractions in relation to the gradient of the specific gravity of the sucrose solution with a p-momentum between 0 and 50%.

Cerchovaná Čára reprodukuje rozdělení extinkce při 260 nm v jednotlivých frakcích.The doted line reproduces the extinction distribution at 260 nm in the individual fractions.

V oblasti okolo 40 % sacharózy mědí frakce 10, 11 a 12 zvýšenou a frakce 11 maairnmání extinkci. V těchto frakcích se nachází téměř výlučně částice viru se sedimentační konstantou 200 S bez zřetelně rychheji nebo poimleei než vir sedimerOuUících zneččštěnin. Pík odpovídá ^ηοο^^ο! sacharózy 39 %· DqIší pík u frakce číslo 25, který odpovídá konce^nci sacharózy nižší než 10 %, vykazuje zneččštěniny, které se zahaauuí. V diagrimu je také znázorněna relativní prot^Uvní účinnost (zjištěná v · přímém pokusu ochrany marši) ícdnotlivých frakcí pomocní různě vysokých sloupců. Frakce 11 má podle toho nejvyšší relativní ochranný účinek.In the region of about 40% sucrose, fractions 10, 11 and 12 have an increased fraction and fraction 11 has an extinction. These fractions contain almost exclusively virus particles with a sedimentation constant of 200 S without significantly faster or less than the sediment-contaminating virus. The peak corresponds to ^ ηοο ^^ ο! Sucrose 39% The second peak at fraction number 25, which corresponds to a sucrose end lower than 10%, shows pollutants that are concentrated. The diagrim also shows the relative efficacy (as determined in a direct marsh protection experiment) of the various fractions in the different column sizes. Fraction 11 accordingly has the highest relative protective effect.

Shromážděné frakce, tbstαuUící vir, se s výhodou zředí nyní pufrem, obsahujícím lidský albumin, aby se zlepšila stabliitl antigenu viru, i potom se dále ·zpracuuí obvyklým způsobem na vakcíny.The collected virus-containing fractions are preferably diluted now with a buffer containing human albumin to improve the stability of the virus antigen, and then further processed in a conventional manner into vaccines.

Získané vakcíny ooIÍ vyšší stupeň čistoty·a jsou lddmi podstatně lépe snášeny než preparáty vyrobené obvyklým způsobem. Toto je vyjádřeno v násseduuící tabulce, přičemž jsou v první koloně vyčleněny - procentuálně vyhodnocené - reakce s vakcínami vyrobenými obvyklým způsobem a ve druhé koloně s vakcínami vyrobenými způsobem podle vynálezu. Při opakovaných očkováních vagínami, vyrobenými podle vynálezu nebyly pozorovány žádné nežádoucí reakce, a to ani lokální ani systemické.The vaccines obtained have a higher degree of purity and are substantially better tolerated by humans than preparations made by conventional methods. This is expressed in the following table, in which, in the first column, the percentages evaluated are responses to the vaccines produced by the conventional method and in the second column to the vaccines produced by the method of the invention. No adverse reactions, either local or systemic, were observed with repeated vaccination with the vagina produced according to the invention.

Ob^kle Ob ^ kle Podle vynálezu vyrobené preparáty Preparations prepared according to the invention lokální bolest local pain až 72 % up to 72% 36 % 36% všeobecné reakce bolest hlavy, únava general reaction headache, fatigue až ' 64 % up to 64% 25 % 25% horečka (celkem) fever až 68 % up to 68% 19 % 19% 37,3 až 38 °C 37.3-38 ° C až 36 % up to 36% 14 % 14% 38 až 39 °C 38-39 ° C až 27 % up to 27% 4 % 4% více než 39 °C more than 39 ° C až 9 % up to 9% 1 % 1%

Vakcíny, vyrobené způsobem podle vynálezu se vyznaačuí, nepřihlížeje k přidniému lidskému album.nu, nízký obsah proteinu. Tento obsah proteinu je při stejné antigenní účinnosti o mnohonásobek, nejméně desetinásobně nižší než u preparátů až dosud používaných. Také speccfický obsah proteinů / = obsah proteinů (nepo^taje lidský albumin) v mikrogramech naVaccines produced by the method of the invention are characterized by low protein content, disregarding the added human albumin. This protein content is, at the same antigenic potency, many times, at least ten times lower than in the preparations used up to now. Also, specific protein content = protein content (does not include human albumin) in micrograms

223975 4 immiizační dávku/ je u vakcín podle vynálezu zřetelně nižší, jak vyplývá z následujících srovnán:223975 4 The dose / dose is clearly lower for the vaccines according to the invention, as shown by the following comparisons:

šarže získané podle vynálezubatches obtained according to the invention

SpeeCfický obsah proteinu v/ig na imiuinzační dávkuSpecific protein content in µg per immunization dose

Nappoti tomu se tyto hodnoty u obvyklých preparátů pohyb^í v rozm^z^Jí mezi 250 500 je proteinu na imunizační dávku.In contrast, in conventional preparations, these values range from 250,500 protein per immunization dose.

ažto

Důkaz imirnogennty a ochranné (protektivní) účinnosSi vakcíny se provádí přímou nou zkouškou na mších, která se v jednotlivostech provádí následujícím postupem.Demonstration of immunogenicity and protective (protective) efficacy of the vaccine is carried out by a direct mass test carried out in the following procedure in detail.

ochranZkoušený přípravek se zřeSuje po trojnásobcích (1:3, 1:9, 1:27, 1:81,' ·1:243) a vá se k němu jako pomocná látka hydroxid hlinitý AKOH)^. Vždy po dessei m^ch (o hmotnoesi po asi 10 g) se imunnzuje 0,2 mililitry těchto zředění dvakrát v Časovém odstupu jednoho týdne sublnitáimě. Po dalších dvou týdnech se m^í iitгaepritoiιeálně infikují 100 až 1 000 LDjq uvedeného viru; odeečtání protekt^rní dávky^g se provádí metodou, kterou popsaai Reed a Muench (L. J. Reed, H. A. Muench. A simple method of estimating 50 % pndeoint, Anmeičan Journal Hygiene, 193Q, sv. 27, str. 493), po tříýýdenní pozorovací době.The test preparation is diluted in triplicate (1: 3, 1: 9, 1:27, 1:81, 1: 243) and bound to it as an aluminum hydroxide adjuvant (AKOH). After each batch (weighing about 10 g), 0.2 milliliters of these dilutions were immunized twice at a time of one week, sublimated. After a further two weeks, 100-1000 LDjq of said virus are infected infectiously; the protective dose is read by the method described by Reed and Muench (LJ Reed, HA Muench. A simple method of estimating 50% pndeoint, Anmeichan Journal Hygiene, 193Q, vol. 27, p. 493), after a three-week observation period. time.

přidáV následnicí tabulce jsou uvedeny výsledky ochranné zkoušky na myších provedené s 5 vakcínami vyrobenými podle popsaného způsobu.The following table shows the results of a mouse protective test performed with 5 vaccines produced according to the described method.

Vakcina čísloVaccine number

Protekti^í dávka aPDgO epD^O = reciproká hodnota takového zředění, které chrání 50 % m^i před smrtnou infekcí.Protective dose and PD 50 O 2 D = reciprocal of such a dilution that protects 50% m 2 from lethal infection.

Konečná vakcína se upravuje na hodnotu 20 PD^q.The final vaccine is adjusted to 20 PD ^ q.

of highly purified vaccine against tick-borne 1980 (v tisku), činily sérokonverze po druhémof highly purified vaccine against tick-borne 1980 (in print), they did seroconversions a second time

Imшioteeita u člověka byla zjišťována stanovením sérokonverze v hemmggutinačním inhibičním testu, popřípadě v enzymovém imunoostanoveni·* Jak bylo v jednotlivostech popsáno v článku ,,ImmuuitenicCty and reactogeencity a^<^€^ppa]^j.iiLs, JoujrniOL of Meeical Virology, a třetím dílčím očkování 93 % a 100 %.Immunity in humans was determined by determining seroconversion in the hemoglobin inhibition assay and in the enzyme immunoassay as described in detail in the article " Immuno-sensitivity and Reactogenicity and Reactivity", JoujrniOL of Meeical Virology, and the third partial vaccination 93% and 100%.

Claims (6)

1· Způsob výroby virových vakcín jaro-letní meeiIi;etncefplitiiy kultivaci viru ve tkáňových kulturách nebo suspenzích ptačích embryonnáních buněk, s výhodou v suspenzích kuřecích pmmryonááníca buněk, oddělením buněk a úlomků buněk c^i^nt^ifug^c^íí, inOctivací, koncentrací a čištěním viiu a zpracováním vyčištěných suspenzí na vakcíny» vyznač^ící se tím, že se suspenze, tЪ8saarící virus pro čištění podrobí kontinuální měrně hmoonoosní gradientově ultracentrifugaci, gradientový obsah se rozloží na frskce a frakce, vykaauuící přiA method for producing viral vaccines of spring-summer mellitus, comprising culturing the virus in tissue cultures or suspensions of avian embryonic cells, preferably in suspensions of chicken cells, by separating the cells and cell debris by inactivation, concentrating and purifying viiu and processing the purified suspensions into vaccines, characterized in that the suspension, the purifying virus for purification, is subjected to a continuous, specific, mono-mono-gradient gradient ultracentrifugation, the gradient content is decomposed into fractions and fractions, and emitted at the 260 nm zvýšenou extinkci, které obsahují částice se sedimentační konstantou v oblasti260 nm increased extinction containing particles with a sedimentation constant in the region 200 S, se shromažSují.200 S, are collected. 2. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, že se suspenze obsahující virus podrobí kontinuální měrné hmotnostní gradientově ultracentrifugaci, při které se podíly sedimentující rychleji než virus jaro-letní meningoencefalitidy, oddělí předem.přidáním protaminsulfátu.2. The method of claim 1, wherein the virus-containing suspension is subjected to a continuous specific gravity gradient ultracentrifugation wherein the fractions sedimenting faster than the spring-summer meningoencephalitis virus are separated beforehand by the addition of protamine sulfate. 3. Způsob podle bodu 1, vyznačující se tím, Že se suspenze, obsahující virus podrobí kontinuální měrně hmotnostní gradientově ultracentrifugaci, při které byl virus předem inaktivován, s výhodou formaldehydem nebo beta-propiolaktonem.3. A method according to claim 1, characterized in that the virus-containing suspension is subjected to a continuous specific gravity gradient ultracentrifugation in which the virus has been previously inactivated, preferably with formaldehyde or beta-propiolactone. 4. Způsob podle bodů 1 až 3, vyznačující se tím, že se suspenze, obsahující virus podrobí kontinuální měrně hmotnostní gradientově ultracentrifugaci, při které se virus předem inaktivuje a provádí se koncentrování ultrafiltrací.4. The method of claims 1 to 3, wherein the virus-containing suspension is subjected to a continuous specific gravity gradient ultracentrifugation in which the virus is inactivated in advance and concentrated by ultrafiltration. 5. Způsob podle bodů 1 až 4, vyznačující se tím, že jako měrně hmotnostní gradient používá roztok sacharózy o koncentraci 0 až 50 %.5. The method of claims 1 to 4, wherein the specific weight gradient is a sucrose solution having a concentration of 0 to 50%. 6. Způsob podle bodů 1 až 5, vyznačující se tím, že se vrcholové virové frakce, získané po kontinuální měrně hmotnostní gradientově ultracentrifugaci, se zředí ústrojným roztokem, obsahujícím lidský albumin.6. A method according to any one of claims 1 to 5, wherein the peak viral fractions obtained after continuous specific gravity gradient ultracentrifugation are diluted with a buffer solution containing human albumin.
CS798966A 1978-12-22 1979-12-18 Method of making the virus vaccines of the spring-summer meningoencephtalitide CS223975B2 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT922078A AT358167B (en) 1978-12-22 1978-12-22 METHOD FOR PRODUCING EARLY SUMMER MENINGOENZEPHALITIS VIRUS (FSME VIRUS) VACCINES

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS223975B2 true CS223975B2 (en) 1983-11-25

Family

ID=3612255

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS798966A CS223975B2 (en) 1978-12-22 1979-12-18 Method of making the virus vaccines of the spring-summer meningoencephtalitide

Country Status (11)

Country Link
AT (1) AT358167B (en)
BE (1) BE880732A (en)
CH (1) CH644271A5 (en)
CS (1) CS223975B2 (en)
DE (1) DE2950004C2 (en)
FR (1) FR2444466A1 (en)
GB (1) GB2038179B (en)
IT (1) IT1126676B (en)
SE (1) SE447789B (en)
SU (2) SU1318149A3 (en)
YU (1) YU42204B (en)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT384363B (en) * 1982-10-05 1987-11-10 Immuno Ag METHOD FOR USE OF ANTIGENS REACTIVE PEPTIDES FOR THE PRODUCTION OF VACCINES ACTIVE AGAINST TBE VIRUS INFECTIONS
AT385203B (en) * 1985-04-26 1988-03-10 Immuno Ag METHOD FOR PRODUCING AN EARLY SUMMER MENINGOCEPHALITIS VIRUS (TBE VIRUS) VACCINE
US5719051A (en) * 1989-12-22 1998-02-17 Immuno Aktiengesellschaft Perfusion system and a method for the large scale production of virus or virus antigen
AT393356B (en) * 1989-12-22 1991-10-10 Immuno Ag METHOD FOR PRODUCING TBE VIRUS ANTIGES
AT393277B (en) * 1990-01-04 1991-09-25 Immuno Ag METHOD FOR PRODUCING EARLY SUMMER MENINGOENZEPHALITIS VIRUS (TBE VIRUS) ANTIGES
IT1305405B1 (en) * 1998-02-18 2001-05-04 Augusto Cappelli CUTTING FRAME FOR THE SEGMENT OF STONE, ROCK, GRANITE, MARBLE, OR SIMILAR BLOCKS.

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1152626A (en) * 1967-07-07 1969-05-21 Merck & Co Inc Rubella Vaccine
GB1453035A (en) * 1972-12-21 1976-10-20 Secr Defence Virus vaccine production

Also Published As

Publication number Publication date
SU1003738A3 (en) 1983-03-07
IT1126676B (en) 1986-05-21
DE2950004C2 (en) 1991-04-18
SE7910054L (en) 1980-06-23
GB2038179A (en) 1980-07-23
AT358167B (en) 1980-08-25
YU42204B (en) 1988-06-30
DE2950004A1 (en) 1980-07-03
YU311779A (en) 1983-10-31
SU1318149A3 (en) 1987-06-15
FR2444466A1 (en) 1980-07-18
SE447789B (en) 1986-12-15
CH644271A5 (en) 1984-07-31
FR2444466B1 (en) 1983-07-08
ATA922078A (en) 1980-01-15
IT7928341A0 (en) 1979-12-21
GB2038179B (en) 1983-02-16
BE880732A (en) 1980-04-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2197683C (en) Method for preparing an influenza virus, antigens obtained and applications thereof
Woodroofe et al. Serological relationships within the poxvirus group: an antigen common to all members of the group
Campbell et al. Fowl plague virus from man
Schaffer et al. Purification and properties of poliovirus
US3962421A (en) Method for the disruption of lipid-containing viruses
JP2000507825A (en) Method of influenza virus replication in cell culture, and influenza virus obtainable by the method
JP5095685B2 (en) Enhanced immunogen for inactivated vaccine against Japanese encephalitis virus group infection and method for producing the same
Beveridge et al. MUMPS 2. VIRUS HAEMAGGLUTINATION AND SEROLOGICAL REACTIONS.
JPH05260962A (en) Chicken anemia agent vaccine
CS223975B2 (en) Method of making the virus vaccines of the spring-summer meningoencephtalitide
Bailey et al. Preparation of a serological antigen and a vaccine for experimental tsutsugamushi disease (scrub typhus)
Åkerblom et al. Formation and characterization of FeLV ISCOMs
Le Cam et al. Adjuvants for influenza vaccine
Häkkinen et al. Induction of tumor immunity in mice with antigens prepared from influenza and vesicular stomatitis virus grown in suspension culture of Ehrlich ascites cells
NL8005577A (en) METHOD FOR PREPARING A VACCINE.
US3769415A (en) Method of preparing a killed vaccine for oral use
Schneider et al. Purification of rabies virus from tissue culture
Tzianabos et al. Origin and structure of the group-specific, complement-fixing antigen of Rickettsia rickettsii
Buckley et al. Production of hemagglutinin by dengue virus in HeLa cells
KR20210065952A (en) Inactivated transfer-influenza vaccine and preparation method thereof
Ananthanarayan The fabric of virus elementary bodies
AU649728B2 (en) Vaccines against equine herpesviruses and the preparation thereof
Hobson The strain-specific serological activity of a non-haemagglutinating fraction of influenza viruses
Mussgay et al. Investigations on complement-fixing subunits of a group A arbo virus (Sindbis)
Bonin et al. Arthus phenomenon like skin reaction and antibody pattern in rabbits immunized with various myxovirus fractions