CS209570B1 - Sposob přípravy (U -14 C) celobiozy - Google Patents

Description

Vynález má význam pre přípravu (U - ¹⁴C) značenej celobiozy, zaujímavej z hladiska chémie a biochémie sacharidov a pre bakteriologická, a klinická prax.

209 570

Vynález rieši epfieob přípravy (U - ¹⁴C) značenej celobiozy hydrólytickým netrávením buněčných atien riasy.ChlorelEe účinkom enzýmu celulázy,(EG 3.2.1.4, /3-1,4-glukán glukanehydroláza) po predehádzajúcej kultivácii riedy Chlorella v prostředí ¹⁴c značeného kysličníka uhličitého.

Z biochemických metod přípravy (U - *C) Značených mono- a oligosacharidov je popisovaná příprava (U - ¹⁴C) D-glukozy (δβ. AO. č. 189 471)» (Ú - ¹⁴C) maltosy (čs.'AO č. 187 882, (U - ¹⁴C) D-glukjónove j kyeeliny (čs. AO č. 188 626) a (U-- ^C) oč-D-glukopyranozylfosfátu (čs. AO č. 194 5>Q7)» pričom základnou východiskovou látkou pre přípravu týchto sacharidov· bol intraceluláťny oí-1,4 (6) glukán (U - ^⁴C) izolovaný z riasy Chiorella, kultivovanéj v .prostředí ^⁴C značeného kysličníka uhličitého. Vhodným zdrojem mono- a oligosacharidov sú však aj buněčné steny mikroorganizmov, pričom mono- a oligosacharidy možno z nich uvolnit účinkem-vhodných enzýmových· systémov bez toho _r že by došlo k podstatnému narušeniu zvyšku buňky.

Podstata vynálezu spočívá vtom, že es na celé buňky riásy Chlorella nakultivovanej v prostředí kysličníka uhličitého značeného ^⁴C rádionuklidom pfisobí roztokom enzýmu celulázy pufrovaným na pH hodnotu 4,5 až 6, pričom uvolněná celobioza (U - ^⁴C) sa získá z roztoku papierovou chromatograficu

Výhodou navrhovaného spfisobu príprávy (U - ^⁴C) značenej celobiozy je, že:.

- využívá doteraz nespracovaný stěnový materiál (odpad), ·» umožňuje spracovanie zvyšného buněčného materiálu (intracelulárny obsah, nukleové kyseli-¹ ny a pod.) bez změny zaužívaného technologického postupu,·

- celý postup přípravy je v technickom převedení velmi jednoduchý a enzýmy potřebné k hydrolytickému štiepeniu buněčněj steny riasy Chlorella sú komerčně dostupné, á'to izolované ale aj v zmesi. , - .

Příklad 1 ·.

K 0,5 ml'suspenzie riasy Chlorella o aktivita 20 kBq sa přidalo 0,5 ml 50 mM citrátfosfátového roztoku (pH » 4,5) s rozpuštěnou celulózou (0,5 mg, 2U) a reakčná zmes sa neché pretrepávať po dobu 6 hodin při 30 °C. Po přeběhnutí hydrolytickej reakcie sa zmes nanesie na chromatografický papier Whatman 1 a chromatográfieké delértié sa prevádza vsystéme aceton-n-butanol-voda, po dobu 16 hodin. Zóna odpovedajúča pohyblivosťou celobioze sa vystřihl a eluuje 50 % vodným roztokom etanolu. Rádiochemický výťažok celobiozy bol 0,97 ^Bq (5 &)·

Příklad 2

Postupovalo sa ako v příklade 1, s tým rozdielom, že ea hydrolytické štiepenie buněční steny prevádza 0,5 ml riedeněho enzýmového systému (1:5) slimáka (Helix pomatia) připraveného z tráviaceho traktu 50 mM citrát-fosfátovým pufrom o pH 6,0. Po 8 hodinách priebehu reakcie p»i 30 ®C je Saláia apraeovaftie reakčnej zmesi také, ako je uvedené v příklade 1. Rádiochemický výťažok celobiozy je ako v príklede 1.

Příklad 3

Postupovalo sa ako v příklade 1, a tým rozdielom, že reakcia přebieha v destilovanej vodě. Pre získanie rovnakého výtažku ako v příklade 1 musí však reakcia prebiehať 24 hodin.

Vynález má význam pre přípravu (U ¹⁴C) značenej celobio'zy, zaujímavej z hladiska chémie a biochémie sacharidov a pre bakteriologická a klinická prax.

Claims (1)

1. PREDMET VYNÁLEZU

   Spfisob přípravy (U - celobiozy, vyznačujúci sa tým, že sa na celé buňky riasy

   Chlorella kultivovanej v prostředí kysličníka uhličitého značeného rádionuklidom pdsobí roztokem enzýmu celulázy pufrovaným na pH hodnotu 4,5 až 6, pričom uvolněná (U - ^C) celobioza sa získá z roztoku chromatografiou na papieri.