CS206823B1 - Sorbents for saccharides,glycoproteins and polymers,containing saccharides and method of their manufacture - Google Patents
Sorbents for saccharides,glycoproteins and polymers,containing saccharides and method of their manufacture Download PDFInfo
- Publication number
- CS206823B1 CS206823B1 CS298279A CS298279A CS206823B1 CS 206823 B1 CS206823 B1 CS 206823B1 CS 298279 A CS298279 A CS 298279A CS 298279 A CS298279 A CS 298279A CS 206823 B1 CS206823 B1 CS 206823B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- oxidized
- polymers
- sorbents
- saccharides
- reaction
- Prior art date
Links
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 title claims description 17
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 title claims description 15
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 title claims description 6
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 title claims description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 13
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 8
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 claims abstract description 5
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims abstract description 4
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims abstract description 4
- MLIWQXBKMZNZNF-KUHOPJCQSA-N (2e)-2,6-bis[(4-azidophenyl)methylidene]-4-methylcyclohexan-1-one Chemical compound O=C1\C(=C\C=2C=CC(=CC=2)N=[N+]=[N-])CC(C)CC1=CC1=CC=C(N=[N+]=[N-])C=C1 MLIWQXBKMZNZNF-KUHOPJCQSA-N 0.000 claims abstract description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims abstract description 3
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims abstract description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims abstract description 3
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 claims description 25
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 claims description 25
- 239000002523 lectin Substances 0.000 claims description 25
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- -1 glycosylated hydroxyalkyl acrylates Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 2
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 claims 1
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 6
- 235000019422 polyvinyl alcohol Nutrition 0.000 abstract 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 8
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 6
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 5
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 5
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 5
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 5
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 4
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 1-[(4s,5s)-4-azido-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 0.000 description 3
- 244000045232 Canavalia ensiformis Species 0.000 description 3
- 235000010520 Canavalia ensiformis Nutrition 0.000 description 3
- 150000001299 aldehydes Chemical group 0.000 description 3
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- HOVAGTYPODGVJG-UHFFFAOYSA-N methyl beta-galactoside Natural products COC1OC(CO)C(O)C(O)C1O HOVAGTYPODGVJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N Hydroxyethyl methacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCO WOBHKFSMXKNTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 2
- 240000000528 Ricinus communis Species 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol dimethacrylate Chemical compound CC(=C)C(=O)OCCOC(=O)C(C)=C STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 2
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- HOVAGTYPODGVJG-ZFYZTMLRSA-N methyl alpha-D-glucopyranoside Chemical compound CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HOVAGTYPODGVJG-ZFYZTMLRSA-N 0.000 description 2
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 2
- JMANVNJQNLATNU-UHFFFAOYSA-N oxalonitrile Chemical compound N#CC#N JMANVNJQNLATNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N periodic acid Chemical compound OI(=O)(=O)=O KHIWWQKSHDUIBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011240 wet gel Substances 0.000 description 2
- 229920002818 (Hydroxyethyl)methacrylate Polymers 0.000 description 1
- QXJDESBAUIILLG-UHFFFAOYSA-N 1,2,3,3,4,4,4-heptafluoro-1-iodobut-1-ene Chemical compound FC(I)=C(F)C(F)(F)C(F)(F)F QXJDESBAUIILLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N Cellulose, microcrystalline Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC)C(CO)O1 PTHCMJGKKRQCBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002353 D-glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 1
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 206010042618 Surgical procedure repeated Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001719 carbohydrate derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 1
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 229920002689 polyvinyl acetate Polymers 0.000 description 1
- 239000011118 polyvinyl acetate Substances 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G81/00—Macromolecular compounds obtained by interreacting polymers in the absence of monomers, e.g. block polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08H—DERIVATIVES OF NATURAL MACROMOLECULAR COMPOUNDS
- C08H1/00—Macromolecular products derived from proteins
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
Vynález se týká sorbentů pro sacharidy, glyko- i proteiny a polymery, obsahující sacharidy a způso- ; bu jejich výroby.
Bílkoviny, které jsou schopny selektivně vytvářet komplexy s cukry, polysacharidy a s glykopro- ’· teiny a které nesou obecný název lektiny byly izolovány z řady rostlinných i živočišných zdrojů. Jsou charakterizovány nejen svým původem, ale především svojí specifickou afinitou к cukrům a jejich derivátům.
Navázáním lektinů na vhodný nosič vznikají specifické adsorbenty pro sacharidy, podmínkou vazebné reakce je zachování aktivního sorpčního . centra v molekule lektinů, které při vazebné reakci ; nesmí být blokováno. Lektiny obsahující sorbenty i nacházejí použití v analytické i preparativní afinitní ! chromatografií a při selektivních precipitačních í Ϊ technikách používaných při izolaci biologicky ak- j ; tivních frakcí. ;
Lektiny byly vázány na polysacharidy dextrano- | vého případně agarosového typu bromkyanovou J ! metodou a využity pro celou řadu izolačních i technik při separaci glykoproteinů (K. Aspberg = ! and J. Porath, Acta Chem. Scand. 24 (1970) 1839), ' ! dextranů (K. O. Lloyd, Arch. Biochem. Biophys. j L137 (1970) 460) nebo buněk (G. H. Edelman, U. i i Rutishauser and C. F. Millete, Proč. Nat. Acad. Sci. J ΐ USA, 68 (1971) 2153). Výhodou procesu je jeho j |206823 ' vysoká selektivita a rychlost. Polysacharidové nosiče dextranového nebo polysacharidového typu i však mají i některé nevýhodné vlastnosti, mezi něž patří především velké rozdíly v botnání v roztocích s proměnnou iontovou silou a pH, nízká mechanická pevnost částic a odtud plynoucí potíže s ucpáváním kolon plněných těmito materiály při zvýšených tlacích a průtokových rychlostech mobilní fáze. V neposlední řadě může být na překážku i nízká · odolnost vůči hydrolýze a působení mikroorganis: mů. Způsob vazby molekul lektinů bromkyanovou ! metodou představuje nutnost pracovat s vysoce ! toxickým aktivačním činidlem, jehož účinnost je poměrně nízká. Vazba, která při bromkyanovém postupu vzniká není pro některé účely dostatečně ' stabilní, bylo pozorováno její postupné hydrolyticI ké štěpení doprovázené snižováním kapacity sorí bentu.
Hmoty podle tohoto vynálezu odstraňují uvede- , né nedostatky dosud známých sorpčních materiálů. ’ Kovalentní vazbu cukerných molekul lze s výho- j dou uskutečnit postupem podle čs. autorského i osvědčení č. 195 044 využívajícím kysele katalýzo- I váné reakce sacharidů s polymery obsahujícími hydroxylové skupiny v dioxanu nebo v tetráhydro- ΐ furanu. К této reakci lze využít vedle hydrofilních i syntetických polymerů (makroporezní hydroxyal- ’ í kylakryláty a hydroxyalkylmethakryláty, částečně !
hydrolysovaný síťovaný polyvinylacetát a další) i řady přirozených nebo polosyntetických hydrofilhích polymerů (polydextrany, agarosové polymery, celulóza aj.) protože vlastní reakci je nutno provádět v bezvodém prostředí, které vylučuje případnou hydrolýzu glykosidických nebopeptidivkých vazeb.
Výsledné glykosylové deriváty polymerů se podrobí oxidaci jodistanem, jehož působením dochází к rozštěpení C-C vazby mezi dvěma atomy uhlíku s vicinálné vázanými hydroxyly v molekulách kovalentné vázaných sacharidů za vzniku dvou aldehydických skupin, které jsou značně reaktivní. Oxidací aktivovaný polymer reaguje v dalším stupni s lektiny za vzniku Schiffovy báze. Rychlost této reakce závisí na koncentraci složek a na teplotě a je značně ovlivněna hodnotou pH reakčního prostředí. Nezreagované aldehydické funkční skupiny jsou redukovány působením borohydridu sodného. Vzniklé sorpční, případně precipitační materiály se vyznačují vysokou kapacitou.
Předmětem vynálezu jsou selektivně působící polymemí sorbenty pro sacharidy, glykoproteiny a polymery obsahující sacharidy.
, Jejich podstata spočívá v tom, že na nosičích, vybraných ze skupiny oxidovaných polysacharidů, oxidovaných glykosilovaných hydroxyalkylakrylátů nebo hydroxyalkylmethakryrátů, oxidovaného polyakrylamidu a polyvinylalkoholu, jsou kovalentně vázáný lektiny.
Způsob výroby těchto sorbentů je vyznačen tím, že se polymery, obsahující kobalentně vázané sacharidy oxidují jodistanem sodným nebo draselným, načež se takto aktivované polymery ponechají reagovat s lektiny při teplotách 40 °C v tlumivých roztocích pH 7 až 12, přičemž se po reakci zbývající aldehydické funkční skupiny eliminují působením redukčních činidel, s výhodou borohydrídem sodným.
Ve svém účinku jsou hmoty podle vynálezu srovnatelné se známými a dostupnými materiály na bázi polysacharidů s vázanými lektiny bromkyanovým postupem, přičemž za kriterium účinnosti je brána adsorpční kapacita sorbentů. Způsob výroby podle vynálezu je z technologického hlediska podstatně snazší, nevyžaduje zvláštních opatření pro práci s vysoce toxickými aktivačními Činidly a dovoluje jednoduchou regulaci stupně konverze vazebné reakce při vysoké reprodukovatelnosti. Navíc neoxidované sacharidové molekuly vázané na nosiči mu propůjčují hydrofilní charakter nebo jeho původní hydrofilnost zvyšují. Tím se snižuje pravděpodobnost nespecifických interakcí složek dělených systémů při použití sorbentů v afinitní chromatografií.
Předmět vynálezu je objasněn v následujících příkladech aniž by však byl těmito příklady jakkoli omezován.
Příklad 1 g kopolymerů 2-hydroxyethylmethakrylátu s ethylenmethakrylátem s vylučovacím limitem molekulové hmotnosti 1 000 000 obsahující 16 % kovalentně vázané galaktosy (Separon HEMA1000-Gal) bylo zbotnáno ve vodě (150 ml) po dobu 20 hodin. Poté byla kapalina odsáta přidáno 346 ml 0,1 M NaJO4. Oxidace byla prováděna po dobu 100 minut při teplotě 25 °C. Produkt byl promyt vodou do negativní reakce na oxidující látky (Mn++), ekvilibrován pufrem, ve kterém se provádí vazba lektinu (acetátové pufry s různým pH) a použit v následující vazebné reakci.
140 ml acetátového pufru pH 7,8 bylo použito : pro rozpuštění 2,4 g lektinu z Canavalia ensiformis DC (konkanavalin) а к roztoku byl přidán ekvilibrovaný oxidovaný nosič z předchozího stupně ve formě husté kaše spolu s 250 mgD-glukózy. Směs byla v lednici při 4 °C míchána po dobu 24 hodin. Poté bylo přidáno 25 mg NaBH4 a po 20 minutách další dávka 25 mg NaBH4. Směs byla s borohydridem sodným ponechána celkem 40 min. Poté byl sorbent promyt acetátovým pufrem pH 7,3 a dále třikrát promyt 200 ml Tris HC1 pufru v 1 mol NaCl· pH 8 a acetátovým pufrem v 1 mol NaCl pH 4.ř Takto zpracovaný sorbent byl přenesen do kolony a promýván pufrem, v němž byl prokázán sorpční účinek vůči derivátům sacharidů. Množství na váza-> něho konkanavalinu 15 mg/g suchého nosiče.
Účinek vázaného lektinu byl ověřen sorpcí syntetického polymeru (akrylamidu) obsahujícího kovalentně vázané sacharidy (glukosu, galaktosu) následujícím postupem:
Na sloupec 1 g nosiče s vázaným lektinem po ekvilibraci acetátovým pufrem pH 7,3 bylo naneseno 0,3427 g rozpustného polyakrylamidového polymeru s obsahem 9,4 % hmot, glukózy ve startov' ním pufru. Při eluci 102 ml pufru byl sledován obsah cukru až do nulové hodnoty. Na kolonu byl pak uváděn roztok 0,5 mol methyl-alfa-D-glukopyranosidu (30 ml) a pak byla kolona promývána· startovním pufrem pH 7,3. Eluát byl jímán, dialy- : zován a lyofilizován. Gravimetrickým stanovením: bylo stanoveno 0,016 g polymeru. Na základě látkové bilance bylo při chromatografií stanoveno’
3,1 % ztrát glykosylovaného polyakrylamidového standardu.
Příklad 2
Sorbent byl připraven a zpracován analogicky· j ako v příkladu 1. Jeho účinek byl ověřen selektivní sorpcí ovalbuminu, dále bylo hodnoceno opakované použití. 1 g sorbentů podle příkladu 1 svázaným konkanavalinem bylo ekvilibrováno v acetátovém pufru pH 7,3 a poté byla provedena ekvilibrace v Tris HC1 pufru pH 7,8 + 0,15 M NaCl. Na sloupec bylo naneseno 49 mg ovalbuminu v 5 ml startovního pufru a systém byl promýván pufrem až; do negativní reakce na bílkoviny (UV absorbance 280 nm) za současného jímání eluátu. Poté byl nasazen 0,1 M roztok Me-alfa-D-glukopyranosidu (50 ml). Eluát byl jímán, dialyzován a lyofilizován. Výtěžek v eluátu činil 7,8 mg, obsah nevázané bílkoviny byl stanoven na 40 mg. ztráty představují 2,44 %.
Sloupec byl pak promyt 20 ml Tris HC1 pufrem pH 7,8 + 1 MNaCla20 mlacetátovéhopufru 4- 1 M NaCl pH 4, ekvilibrován Tris HC1 pufrem + 0,15 M NaCl pH 7,8 a celý postup byl opakován.
Při druhém cyklu byl stanoven obsah bílkoviny v eluentu po promytí Me-alfa-D-glukopyránosidem 7,6 mg při třetím 7,8 mg a při čtvrtém 7,6 mg.
Příklad 3
Sorbent byl připraven postupem analogickým jako v příkladu 1 s tím rozdílem, že místo kopolymeru s vylučovacím limitem 1 mil. daltonů bylo jako nosiče použito kopolymerů 2-hydróxyethylmethakrylátu s ethylendimethakrylátem.o vylučovacím limitu molekulové hmotnosti 300 000. Při ověření účinku glykosylovaným polyakrylamidem byla nalezena 4,6 % ztráta (naneseno 0,3470 g, v eluentu stanoveno 0,0154 g). Výchozí sorbent obsahoval kovalentně vázanou glukózu v obsahu 18 % hmotnostních.
Příklad 4 : К vazbě lektinu z Ricinus communis byl použit oxidovaný nosič z příkladu 3. 1,9 g lektinu bylo rozpuštěno v 70 ml acetátového pufru pH 7,3 obsahujícího 220 mg galaktosy a přidáno 10 g oxidovaného nosiče. Eliminace nezreagovaných aldehydických funkčních skupin byla provedena 25 mg NaBH4, doba reakce byla stejná jako v příkladu 1.
Účinek byl testován polyakrylamidem s obsahem cukru 9,4 % hmotn. Naneseno 0,3412 g, výtěžek v eluentu 0,0154 g, ztráty 3,8%.
Příklad 5
Vazba lektinu z Ricinus communis byla próvedena analogicky jako v příkladu 4 s tím rozdílem, že oxidovaný nosič měl vylučovací limit molekulové váhy 300 000 daltonů.
Při ověření účinku polykrylamidem s vázanou glukózou bylo naneseno na 1 g sloupen 0,3400 g polymeru, výtěžek v eluentu 0,0171, ztráty 4,75%.
Příklad 6
4,2 g sférické celulózy bylo ponecháno botnat po dobu 20 hodin v 50 ml dioxanu nasyceného plynným HC1 na obsah 16 % váh. Po této době bylo к reakční směsi přidáno 2,0 g D-galaktózy a při laboratorní teplotě byla směs třepána 24 hodin. Po této době byl obsah nádoby vlit do 5 litrů vody a produkt byl po odsátí na filtru opakovaně promýván vodou do neutrálního pH a negativní reakce na cukr.
4,0 g sférické celulózy s vázanou D-galaktosou (analýzou byl stanoven obsah vázané D-galaktózy
11,7 % váh.) bylo ponecháno botnat po dobu 20 hodin v destilované vodě. Voda byla odfiltrována а к mokrému gelu bylo přidáno 100 ml 0,1
M NaJO4. Oxidace při laboratorní teplotě probíha206823 la 1 hod. za míchání. Pak byl roztok NaJO4 odfiltrován a gel byl promýván na sloupci destilovanou vodou až do dosažení vodivosti eluátu rovné vodivosti použité destilované vody. К celulózovému gelu byl pak přidán borátový pufr pH 8,5 a po 1 hodině 500 mg konkanaválinu A (lektinu z Canavalia ensiformis). Lektin byl inhibován methylα-D-glukopyranosidem. Po 70 hodinách stání při teplotě 4 °C byly nezreagované aktivní funkční skupiny zredukovány při 4 °C 20 mg NaBH4 při míchání po dobu 20 minut. Gel byl pak střídavě promýván acetátovým pufrem pH 4,1 (1 M NaCl) a TRIS-HC1 pufrem 9 (1 m NaCl). V konečné fázi před použitím byl gel skladován v acetátovém pufru pH 6 (1 M NaCl) obsahujícím 10~3 M MnCl2 a 1СГ3 M CaCl2. Obsah navázané bílkoviny byl stanoven 9,0 mg/ml vlhkého gelu.
Příklad 7
Aminoglykosylový derivát celulózy byl připraven způsobem analogickým jako v příkladu 6 s tím rozdílem, že к reakci bylo vzato 0,8 g N-acetyl-Dglukosaminu a produkt nebyl oxidován, nýbrž bylo stanoveno pouze množství navázaného aminocukru na celulosovém nosiči.
Příklad 8
Analogický pokus jako v příkladu 7 byl proveden s nosičem, tvořeným hydroxyethylmethakrylátovým kopolymerem s vylučovacím limitem molekulové hmotnosti 1 000 000, viz příklad 1. Obsah vázaného aminocukru 8,9 % váh. je dvojnásobkem proti příkladu 7.
Příklad 9
4,0 g rozpustného plyakrylamidového gelu se zapolymerovaným allylglukosidem (připraven dle V. Hořejší, P. Šmolek and J. Kocourek, Biochim. Biophys, Acta, 538 (1978) 293-298) bylo oxidováno ve 100 ml 0,1 M NaJO4 po dobu 1 hodiny při teplotě laboratoře. Po této době byla reakční.směs zředěna na 250 ml a ponechána dialyzovat proti destilované vodě. Po odstranění jodistanu z reakční směsi dialýzou byl gel lyofilizován. Lyofilizát byl rozpuštěn ve 20 ml destilované vody. К roztoku bylo přidáno 500 mg lektinu z Canavalia ensiformis iňhibovaného methyl-a-D-glukopyranosidem. Směs reagovala po dobu 70 hodin při 4 °C, pak byly zredukovány zbylé aldehydické skupiny reakcí s NaBH4 stejně jako v příkladu 6. Konečná reakční směs byla po zahuštění lyofilizací rozdělena preparativní gelovou chromatografií na dextranovém gelu na frakci lektinu a frakci obsahující lektin navázaný na glykosylovaném polymemím akrylamidu.
Příklad 10
4,0 g polyvinylalkoholu o molekulové hmotnosti
125 000 a stupni hydrolýzy 87—89 %, který byl substituován D-glukózou podle čs. autorského osvědčení č. 195044 bylo oxidováno analogicky jako v příkladě 9.
Přikladli
Sorbent byl připraven postupem analogickým jako v příkladu 1 s tím rozdílem, že místo kopolymeru ethylendimethakrylátu s hydroxyethylmet------( hylakryíátu s ethylendiakrylátem o vylučovacím < limitu molekulové váhy 500 000 daltonů. Při ověření účinku glykosylovaného polyakrylamidu : při sorpci byla nalezena ztráta 5,3 %.
hakrylátem bylo použito kopolymerů hydroxyet-
Claims (2)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Sorbenty pro sacharidy, glykoproteiny a polymery, obsahující sacharidy, vyznačené tím, že na nosičích, vybraných ze skupiny oxidovaných polysacharidů, oxidovaných glykosilovaných hydroxyalkylakrylátů nebo hydroxyalkylmethakrylátu, oxidovaného polyakrylamidu a polyvinylalkoholu, jsou kovalentně vázány lektiny.
- 2. Způsob výroby sorbentů podle bodu 1, vy značený tím, že se polymery, obsahující kovalentně vázaně sacharidy, oxidují jodistanem sodným nebo draselným, načež se takto aktivované polymery ponechávají reagovat s lektiny při teplotě 0 až ,40 °C v tlumivých roztocích pH 7 až 12, přičemž se po reakci zbývající aldehydové funkční skupiny z polymeru eliminují působením redukčních činidel, s výhodou borohydridem sodným.Vytiskly Moravské tiskařské závody, provoit 12, Leninova 21, Olomouc
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS298279A CS206823B1 (en) | 1979-04-28 | 1979-04-28 | Sorbents for saccharides,glycoproteins and polymers,containing saccharides and method of their manufacture |
| DE19803014632 DE3014632A1 (de) | 1979-04-28 | 1980-04-16 | Sorbenten fuer saccharide, glykoproteine und saccharide enthaltende polymerisate und verfahren zu deren herstellung |
| CH322680A CH653348A5 (de) | 1979-04-28 | 1980-04-25 | Sorbentien fuer saccharide und saccharide enthaltende polymerisate und verfahren zur herstellung derselben. |
| GB8013733A GB2048896B (en) | 1979-04-28 | 1980-04-25 | Sorbents for saccharides glycoproteins and saccharide-containing polymers and a method of their manufacture |
| FR8009553A FR2455061A3 (fr) | 1979-04-28 | 1980-04-28 | Polymeres contenant des sorbants des saccharides, des glycoproteines et des saccharides, et procede pour leur preparation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS298279A CS206823B1 (en) | 1979-04-28 | 1979-04-28 | Sorbents for saccharides,glycoproteins and polymers,containing saccharides and method of their manufacture |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS206823B1 true CS206823B1 (en) | 1981-07-31 |
Family
ID=5368590
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS298279A CS206823B1 (en) | 1979-04-28 | 1979-04-28 | Sorbents for saccharides,glycoproteins and polymers,containing saccharides and method of their manufacture |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| CH (1) | CH653348A5 (cs) |
| CS (1) | CS206823B1 (cs) |
| DE (1) | DE3014632A1 (cs) |
| FR (1) | FR2455061A3 (cs) |
| GB (1) | GB2048896B (cs) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE8202544L (sv) * | 1982-04-23 | 1983-10-24 | Larsson Per Olof | Lektinhaltigt separationsmedel |
| EP0211756A1 (en) * | 1985-08-01 | 1987-02-25 | Merck & Co. Inc. | Assay for varicella-zoster virus (VZV) antibodies |
| GB2184732B (en) * | 1985-12-26 | 1990-07-11 | Showa Denko Kk | Active support substance and adsorbent for chromatography |
| ES2058020B1 (es) * | 1992-07-03 | 1995-10-01 | Consejo Superior Investigacion | Procedimiento de fabricacion de soportes solidos inertes activados con grupos amino. |
| CN114236138B (zh) * | 2021-12-20 | 2023-11-07 | 杨霜 | 一种岩藻糖糖蛋白荧光显色载体的制备方法、荧光强度参考载体的制作方法及用途 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CH536860A (fr) * | 1971-03-31 | 1973-05-15 | Nestle Sa | Procédé de préparation d'un produit doué d'activité enzymatique, insoluble en milieu aqueux |
-
1979
- 1979-04-28 CS CS298279A patent/CS206823B1/cs unknown
-
1980
- 1980-04-16 DE DE19803014632 patent/DE3014632A1/de active Granted
- 1980-04-25 GB GB8013733A patent/GB2048896B/en not_active Expired
- 1980-04-25 CH CH322680A patent/CH653348A5/de not_active IP Right Cessation
- 1980-04-28 FR FR8009553A patent/FR2455061A3/fr active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CH653348A5 (de) | 1985-12-31 |
| FR2455061B3 (cs) | 1981-03-20 |
| GB2048896A (en) | 1980-12-17 |
| GB2048896B (en) | 1983-03-16 |
| DE3014632C2 (cs) | 1992-05-21 |
| FR2455061A3 (fr) | 1980-11-21 |
| DE3014632A1 (de) | 1980-11-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US3645852A (en) | Method of binding water-soluble proteins and water-soluble peptides to water-insoluble polymers using cyanogen halide | |
| US6699386B2 (en) | Endotoxin adsorbent, and a method of removing endotoxin by using the same | |
| US5328603A (en) | Lignocellulosic and cellulosic beads for use in affinity and immunoaffinity chromatography of high molecular weight proteins | |
| Lloyd | The preparation of two insoluble forms of the phytohemagglutinin, concanavalin A, and their interactions with polysaccharides and glycoproteins | |
| US4269605A (en) | Method and kit for separation of glycoproteins | |
| CA1334042C (en) | Process for the preparation of a material for affinity chromatography | |
| US8496123B2 (en) | Process for cross-linking cellulose ester membranes | |
| US4411832A (en) | Polysaccharide matrices comprising macromolecular spacer arms for use as adsorbents in affinity chromatography techniques | |
| KR101355276B1 (ko) | 크로마토그래피 매트릭스의 제조 | |
| JPS5839576B2 (ja) | 生物学的巨大分子を可逆的に固定しうる新規物質並びにその製造方法 | |
| EP1729867B1 (en) | A method for chromatographic purification | |
| US3649456A (en) | Separation of polypeptide substances with macroreticular resins | |
| GB2024829A (en) | Method and Product for Separation of Glycoproteins | |
| US4281233A (en) | Hydrophilic macroporous three dimensional copolymers of hydroxyalkyl acrylates or methacrylates with crosslinking agents and the method of their manufacturing | |
| US4446275A (en) | Sorbent for saccharides, glycoproteins and polyesters comprising a lectin covalently bonded with a vehicle and method for preparation thereof | |
| CS206823B1 (en) | Sorbents for saccharides,glycoproteins and polymers,containing saccharides and method of their manufacture | |
| Sasaki et al. | Improved method for the immobilization of heparin | |
| CA1283073C (en) | Adsorbent for purification of blood coagulation factor viii and process for purification of blood coagulation factor viii using the same | |
| EP0165800A1 (en) | Support material for immobilisation of ligands | |
| JP2903251B2 (ja) | アフィニティークロマトグラフィー用担体およびアンチトロンビン▲ｉｉｉ▼の精製方法 | |
| Bussey et al. | Specific ion mediated chromatography of glycoproteins and neutral polysaccharides on substituted agarose gels | |
| Lis et al. | [32] Wheat germ agglutinin | |
| Andrew et al. | Affinity chromatography of arabinogalactan-proteins | |
| WO1991007427A1 (en) | Carrier for column chromatography, process for separating and purifying water-soluble polymeric substance using said carrier, novel pectic acid-cellulose gel and process for preparing the same, and adsorbent for affinity chromatography | |
| CN1191866A (zh) | 以纤维素为基质的亲和膜介质的合成方法 |