CS205315B1

CS205315B1 - Manufacturing process of alpha-amylase

Info

Publication number: CS205315B1
Application number: CS419277A
Authority: CS
Inventors: Juraj Zemek; Ludovit Kuniak; Jozef Augustin; Ludmila Marvanova
Original assignee: Juraj Zemek; Ludovit Kuniak; Jozef Augustin; Ludmila Marvanova
Priority date: 1977-06-24
Filing date: 1977-06-24
Publication date: 1981-05-29

Description

POPIS VYNÁLEZU

K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU ČESKOSLOVENSKASOCIALISTICKÁREPUBLIKA( 19 )

(«I) (23) Výstavná priorita(22) Přihlášené 24 06 77(21) PV 4192-77 205 315 (11) (Bl) (51) IntCl? C 12 N 9/26

ÚŘAD PRO VYNÁLEZY

A OBJEVY (40) Zverejnené(45) Vydané 29 08 8001 08 83

Autor vynálezu ZEMEK JUBAJ ing. CSc., LEHNICA, KUNIAK lUDOVÍT ing. CSc., AUGUSTÍN J0ZEF PhMr.,BRATISLAVA a KARVANOVÁ tUDMILA RNDr.CSc., BRNO (54) Spdsob produkcie oí-amylázy 1

Vynález sa týká spósobu produkcie oi-amylázy. V súčasnej době sa enzým oL-amylázazískává izoláciou z produkčného prostredia baktérie Bacillus subtilis a Streptomyces aureo-faciens. Spósob produkcie <4-amylázy je tiež popísaný u kmeňa Saccharomycopsis capsularis(H. Ebertová, Folia mikrobiologica 11:422-438, 1966), Saccharomycopsis fibuliger a Saccha-romycopsis fibuliger var. hordei (US patent δ. 32975 47). Nevýhodou spósobu produkcieoí-amylázy baktériemi je horšia aeparácia biomasy z kultivačnej pódy a niŽŠía sacharifi-kačná schopnosť získanéj oí-amylázy.

Uvedené nevýhody odstraňuje spósob produkcie ot-amylázy na tekutej živnej póde obsahu-júcej zdroje asimilovateTného uhlíka a dusíka a minerálně živné soli, ktorého podstata spo-čívá v tom, že kmene

Botrytis allii CCK F - 17 fabae CCM F - 59 n byssoidea CCM F - 14 ·» squamosa CCM F - 15 tt convallariae CCM F - 345 M globosa CCM F - 346 paeoniae CCM F - 02168 cinerea CCM F - 314 205 315

Claims

205 315 Botrytis cf. narcissicola CCM F - 597 " cf. narcissicola CCM F - 598 sa kultivujú jednotlivo alebo v zmesi na živnej půdě obsahujúcej 0,1 až 3 hmot. % rozpustné-ho škrobu při teplote 20 až 40 °C, pH 4 až 5 po dobu 60 až 120 hodin, pričom ot-amyláza sazíská zahuštěním produkčného média, připadne vyzróžaním acetonem alebo etanolom alebo ad-sorbciou na sieťovaný škrob. Kmene Botrytis použité k produkcii od-amylázy sú uložené v Čs. zbierke mikroorganizmov, » „ Univerzita J. E. Purkyne, Brno, Obránců míru 10. Výhodou uvedeného spůsobu produkcie ot-amylázy je jednoduchá separácia biomasy od kul-tivačnej půdy, zdravotná nezávadnost? biomasy oproti plesnovým fermentáciám, pričom produkčnáschopnost uvedených kmenov sa vyrovná produkčnej schopnosti známých producentov ot-amylázy,ktorá je 2,2 U/mg biomasy. Příklad 1 Z vypratého gélu amylozy připraveného podl’a AO 186 059, 1976 sa vyrežú trojúhelníkovéprofily o straně 4 cm, vložia sa do Petriho misky a zalejú sa roztokom kultivečnej půdyYeast Nitrogen Basse 0,6 g/100 ml (Oxoid) s gélom amylo’zy eko jediným zdrojom uhlíka tak,aby pol gélu vyčnievalo nad hladinu kultivačného roztoku. Po sterilizácii pri 100 °C saočkuje na povrch kultúra Botrytis squamosa CCM F - 15 a kultivuje se pri 25 °C. Amylozovýgél je skvapalnený v priebehu 32 hodin účinkom enzýmu ot-amylázy produkovaného do médiaa získaná biomasa Botrytis squamosa CCM F - 15 sa použila ako inokulum na půdu obsahujúcu25 g vylisovaných hroznových šupiek, 0,2 g chloridu amonného, dihydrogenfosforečňanu dra-selného v 200 ml 0,2 % roztoku škrobu vo vodě (pH je upravené na 5,0), za povrchovéj kul-tivácie po dobu 96 hodin pri teplote 20 °C oí-amyláza sa vylučuje do média. Po ukončeníkultivácie sa biomasa odstráni filtráciou. Filtrát sa 3alej přečistil centrifugáciou(5000 g, 10 minút) od zvyškov z hroznových šupiek a nezým sa získal bu3 zrážaním acetonem(600 ml) alebo v prečistenom stave afinitnou metodou za aplikácie postupu podlá kAO č. 157 955, 1974). Výsledná aktivita ot-amylázy 89 U, špecifická aktivita 6,3 U/mg. Příklad 2 Postupovalo sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že kmene Botrytis allii CCM F - 17,Botrytis fabae CCM F - 59 a Botrytis cynerea CCM F - 314 es kultivuji) na živnej půdě obsa-hujúcej 3 % roztok škrobu vo vodě pri pH = 4, pri teplote 40 °C počas 120 hodin. Specifickáaktivita e>í-amylázy je 12,1 U/mg. PREDMET VYNÁLEZU Spůsob produkcie ot-amylázy na tekutej živnej půdě obsahujúcej zdroje asimilovatelné-ho uhlíka a dusíka a minerálně živné soli, vyznačujúci sa tým, že kmene Botrytis allii" fabae CCM F - 17CCM F - 59 Botrytis byssoidea CCM F - 14 3quamosa CCM F - 15 convallariae CCM F - 345 globosa CCM F - 346 paeoniae CCM F - 02168 cinarea CCM F - 314 cf. nercissicola CCM F - 597 cf. narcissicola CCM F - 598 205 313 sa kultivuji! jednotlivo alebo v zraesi na živnej p6de obsahujúcej 0,1 až 3 hmot. % rozpust-ného škrobu při teplote 20 až 40 °C, pH 4 až 5, po dobu 60 až 120 hodin, pričom ot-amylázasa získá zahuštěním produkčného média, připadne vyzrážaním acetonu alebo etanolom aleboadsorbciou na sieťovaný škrob.