CS203123B2

CS203123B2 - Method of producing 4-hydroxy-l-proline

Info

Publication number: CS203123B2
Application number: CS316376A
Authority: CS
Inventors: Petrice H Brunet
Original assignee: Biochim Appl Ind Sa
Priority date: 1975-05-12
Filing date: 1976-05-11
Publication date: 1981-02-27
Also published as: BR7602952A; GB1499086A; IT1059949B; ES448035A1; DE2620834A1

Abstract

1499086 Preparation of L-hydroxyproline SOC LA BIOCHIMIE APPLIQUEE A L'INDUSTRIE 21 April 1976 [12 May 1975 31 March 1976] 16061/76 Heading C2C 4 - Hydroxy - L - proline (i.e. L - hydroxyproline) is prepared by hydrolysing a collagencontaining material, passing the hydrolysate through a weakly basic anion-exchange resin whereby the resin absorbs glutamic acid, aspartic acid and inorganic anions, passing the effluent through a strongly acidic cationexchange resin whereby the resin absorbs amino acids, eluting the amino acids from the resin and recovering the 4-hydroxy-L-proline from the eluate. The starting material is suitably detanned leather waste, skins and/or pork rinds or boiled-bone liquors.

Description

Vvnález se týká způsobu výroby 4-hydro:xr-L-ppolinu, který·se obvykle uvádí jako L-hydroxyprolin.The present invention relates to a process for the preparation of 4-hydroxy-l-ppoline, which is commonly referred to as L-hydroxyproline.

Existuje celá řada způsobů výroby této látky, které je možno rozddlit do několika skupin.There are a number of processes for the preparation of this substance which can be divided into several groups.

Do první skupiny je možno zařadit způsoby, při nichž dochází k syntéze uvedené sloučeniny. Vzhledem k přítomno o ti dvou asymeerických atomů uhlíku se získá směs čtyř· izomerů: L a D-hyndoxinPo0in, L a D-allohydroxynP01in, přičemž oddělení těchto izomerů je obtížné. .The first group includes methods by which the compound is synthesized. Due to the presence of the three asymmetric carbon atoms, a mixture of four isomers is obtained: L and D-hyndoxinPoin, L and D-allohydroxynP01in, which is difficult to separate. .

Do druhé skupiny patří izolace L-hydroxyypooinu z hydrolyzátů želatiny srážením. Nejprve se vysráží arginin, obvykle použitím kyseliny 2,4-Hnitro-l-naftol-7-sulOonové. Pak se odstraní aminoOkyseiny, které nejvíce brání izolaci žádaného produktu, a to lysin a histidin jako fosfowolframann a/nebo glykokol působením methyl, alkoholu, načež se vysráží hydroxyypolin ve forml pikranu nebo reinekátu, získaná sloučenina se pak rozloží. Bylo popsáno také srážení N-acetyl-OpbenztylhydгoxynPoOinu. Tyto postupy se velmi obtížně provádějí a mimoto se při nich užívá drahých činidel a velkých mnoství rozpouštědel.The second group comprises the isolation of L-hydroxyypooin from gelatin hydrolyzates by precipitation. First, arginine precipitates, usually using 2,4-nitro-1-naphthol-7-sulfonic acid. The amino acids which prevent the isolation of the desired product, lysine and histidine such as phosphotungstate and / or glycocol, are then removed by treatment with methyl, alcohol, and hydroxyypoline precipitates in the form of picran or reincinate, and the compound is then decomposed. The precipitation of N-acetyl-OpbenztylhydroxyoxyPoOin has also been described. These processes are very difficult to carry out and in addition use of expensive reagents and large amounts of solvents.

Do třetí skupiny patří postupy, při nichž se zpracovává hydrolyzát želatiny dusitanem sodným. Při tomto postupu po dléhají všechny aminokknelinn nevratné deaminaci a pouze prolin a hydroxynpotein podléhá nitrosaci. Při těchto postupech je však velmi obtížné zachovat bezpečnost práce, zvláště z toho důvodu, že posledním stupněm těchto postupů je denitrosace.The third group comprises processes in which the gelatin hydrolyzate is treated with sodium nitrite. In this procedure, all aminokknelin undergo irreversible deamination and only proline and hydroxynpotein undergo nitrosation. However, it is very difficult to maintain occupational safety in these procedures, especially since denitrosation is the last step in these procedures.

Žádný z uvedených postupů nedovoluje jednoduchou izolaci hydroxyppolinu v průmyslovém měitku a při žádném z uvedených postupů se také neužívá iontoměničů.Neither of these methods allows simple isolation of hydroxyppoline in an industrial scale, nor does any of these methods use ion exchangers.

Jsou však známy určité obecné postupy proizolaci aminokyselin, které je možno aplikovat také na izolaci hydroxypiooinu. Hlavní z těchto postupů budou dále uvedeny.However, certain general amino acid isolation procedures are known which can also be applied to the isolation of hydroxypiooin. The main of these procedures will be outlined below.

První postup spočívá v tom, že ee nechá projít hpdrolpzát bílkovin sloupcem iontoměniče, obvpkle v karboxplátové formě při pH 3 až 7 při použití pufrů jako acetátů, citrátů a jiných solí. Je ' však možno při každém průchodu.zadržet jednu nebo nejvýš několik aminokyselin podle funkce užitého iontoměniče a v závislosti na pH a na iontové síle piulfru. Mimoto se při pouužtí pufru, který zvýší selektivitu iontoměniče snižuje kapaacta tohoto iontoměnnče, takže je nutno užívat velká mnnožtví iontoměničů.A first procedure is to pass the protein digest of the ion exchanger column, usually in carboxylate form at pH 3-7 using buffers such as acetates, citrates and other salts. However, one or a maximum of several amino acids can be retained at each pass, depending on the function of the ion exchanger used and the pH and ionic strength of the piulfer. In addition, the use of a buffer which increases the selectivity of the ion exchanger reduces the capacity of the ion exchanger, so that large quantities of ion exchangers are required.

Druhý způsob spočívá v tom, že se všechny tminoOypeeiop fixují na kyselý iontoměnič a pak . se provádí selektivní vymývání pomocí pufrů o různém. pH se stejnou iontovou silou nebo se vzrůstojc! iontovou silou, popřípadě při pouužtí kyseliny nebo zásady. Při těchto postupech je nutno užít velkého mnnožtví iontoměniče, přičemž se získají velmi zředěné roztoky, které často obsahují značné mnnožtví iontů, užitých při vymýván. Z tohoto důvodu se uvedených postupů užívá spíše k analytik ým účelům.The second method is that all of the thymypypiophies are fixed to the acidic ion exchanger and then. is carried out by selective elution with buffers of different levels. pH with the same ionic strength or increasing ionic strength, optionally using an acid or base. In these processes, a large amount of ion exchanger must be used, yielding very dilute solutions which often contain a considerable amount of ions used in the washings. For this reason, these procedures are used rather for analytical purposes.

Mimoto existuje ještě způsob, popsaný v publikaci J. R. Bendů.!, Nátuře (1947), sv. 160, str. 374 a S. M. Partridge Biochem. Jour. (1952) sv. 51, str. 628. Tento způsob spočívá v tom, že se hydrolyzát, zbavený aromatických lminnkypeein, fixuje na silně kyselý iontoměnič tak, že se využije pouze 1/2 nebo 2/3 celkové kapacity iontoměnnče. Pak se vrstva iontoměniče vymývá velmi zředěrým hydroxidem sodným, čímž se získávej částečně oddělené am'inokypeeinp. Při pouužtí tohoto postupu je mn oživí iontoměniče sníženo, při předběžném zpracování k odstranění aromatických aminokypeein je však nutno užít velkých množtví aktivního uhlí i mimoto jsou získané produkty velmi zředěné. Znamená to, že ani.tento třetí postup není možno užít úspěšně v průmyslovém měřítku k výrobě hy<^3^(^^^i^i^(^].inu.In addition, there is also a method described in J. R. Bendů., Nature (1947), Vol. 160, p. 374 and S. M. Partridge Biochem. Jour. (1952) Vol. 51, p. 628. This method consists in fixing the hydrolyzate, devoid of aromatic aminocyanine, to a strongly acidic ion exchanger so that only 1/2 or 2/3 of the total ion exchange capacity is utilized. Then, the ion exchanger layer is eluted with very dilute sodium hydroxide to give partially separated aminoacids. By using this process, the ion exchanger recovery is reduced, but in the pretreatment to remove aromatic amino acids, large amounts of activated carbon are required, and moreover, the products obtained are very dilute. This means that even this third process cannot be used successfully on an industrial scale to produce hyaline.

Vynález si klade za cíl odstrnit nevýhody svrchu uvedených postupů a navrhnout způsob výroby hydroxyppoOiou, . při němž by.byly užity pouze malé objemy iontoměniče bez použití pufru, přičemž jako výchozích produktů by bylo možno užžt matteiálů, chudých na kolagen, s výhodou takových maateiálů, kterých až dosud nebylo vůbec možno užít k výrobě hydrkxpprolinu.SUMMARY OF THE INVENTION It is an object of the present invention to overcome the disadvantages of the above processes and to propose a process for the production of hydroxypolymer. only small volumes of buffer-free ion exchanger would be used, starting with collagen-poor materials, preferably those materials which had hitherto not been used at all for the production of hydropropoline.

Předmětem vynálezu je způsob výroby 4-hydro)0^1--^0].inu, vyzneauujcí se tím, že se hydrolyzuje výchozí maateiál s obsahem kolagenu, a to odpady z koželužen, odřezky z kůže nebo vývar z kostí po případném předběžném zpracovánn, získaný hydrolyzát bílkovin se odbarví, výsledný roztok senechá projít slabě zásaditým iontoměničem k zachycení kyselihy glu- . tamové a asparagové a anorganických solí, roztok po průchodu prvním iontoměničem se pak nechá prooít silně kyselým iontoměničem v mLnožsví, schopném zadržet 75 až 95 % amonokyselin, v roztoku přítomných, sloupec pryskyřice se vymývá voduu, eluát se zahuutí na obsah ^^(^jro^^X^j^i^r^l-inu 180 až 350 . g/1, s výhodou 230 až 280 g/1, roztok se odbarví a nechá krys talizovat po okyselení na pH 3,8 až 4,6 k získání čistého hydroxy pro linu v krystalické formě.SUMMARY OF THE INVENTION The present invention relates to a process for the production of 4-hydroxy-4-hydroxy-4-ol, characterized in that the collagen-containing starting material is hydrolyzed, namely tannery wastes, leather cuttings or bone broths after optional pretreatment. , the resulting hydrolyzate of the proteins is discolored and the resulting solution is passed through a weakly basic ion exchanger to capture the glucose acid. The solution after passing through the first ion exchanger is then passed through a strongly acidic ion exchanger in a quantity capable of retaining 75 to 95% of the amino acids present in the solution, the resin column being eluted with water, and the eluate is concentrated to a content of. When the solution is decolorized and the rat is acidified to pH 3.8-4.6 after acidification, the solution is decolorized to obtain a pH of from 3.8 to 4.6. of pure hydroxy proline in crystalline form.

Velký význam má skutečnost, že při provádění způsobu podle vynálezu je možno užít jako výchozí látky odpady, vzní^jc! při vydělávání kůží, odpady vepřových kůží, popřípadě zbavené tuku, chlupů a výpenetých solí nebo vývar z kootí.Of great importance is the fact that, in carrying out the process according to the invention, wastes can be used as starting materials. for tanning, pigskin waste, possibly free of fat, hair and calcined salts, or broth of coot.

Tyto výchozí látky je možno předem zpracovat před hydrolýzou k usnadnění dalších stupňů způsobu podle vynálezu.These starting materials may be pretreated prior to hydrolysis to facilitate further steps of the process of the invention.

Je samozřejmě možno užžt jako výchozí látky želatinu, při jejímž pouužtí se dosahuje nejvyšších výtěžků, želatina však má poměrně vysokou cenu. Jednou z výhod způsobu podle vynálezu je právě mmonost po^iužltí průmyslových bílkovimých odpadů, chudých na kolagen a tedy i na hydroxχppokin, přičemž tyto odpady mohou obsahovat znečištěniny. Není nutno převádět vývar z kostí nebo odpady kůi^zí na želatinu. Výchozím mmteriálem mohou být i další průmyslové odpady, například chrupavky.It is, of course, possible to use gelatin as the starting material, which yields the highest yields, but gelatin has a relatively high price. One of the advantages of the process according to the invention is precisely the ability to utilize industrial protein wastes, which are poor in collagen and thus also in hydroxypspin, and these wastes may contain contaminants. There is no need to convert bone broth or skin waste into gelatin. Other industrial wastes such as cartilage may also be the starting material.

Z použitelných výchozích látek uvádíme například tyto:Among the starting materials which can be used, for example, are:

) odpady z koželužen:) tannery wastes:

a) surové odřezky kůže, popřípadě zbavené chlupů, odřezky z různých strojů, části kůže, kterou z jakýchkooi důvodů není možno zpracovat v koželužnách,(a) raw skin shavings, if appropriate, free of hair, shavings from different machines, a part of leather which for any reason cannot be processed in tanneries;

b) odpad po zpracování taninem v jakékoli formě,(b) waste after tannin treatment in any form,

2) odpad z masného a uzenářského průmyslu:(2) meat and sausage waste:

a) odřezky kůže, popřípadě zbavené tuku a/nebo drcené,(a) cuttings of skin, possibly defatted and / or crushed,

b) kosti, popřípadě zbavené tuku nebo jinak předem zpracované,(b) bones, optionally defatted or otherwise pre-processed;

c) odpadky z jatek, sestávající převážně z kůže.(c) slaughterhouse waste consisting mainly of leather.

Tyto výchozí látky je možno užít přímo v surovém stavu pro kyselou hydrolýzu, přičemž ovšem hlavní obtíž spočívá v odstranění tuků'. Je totiž známo, že filtrace po kyselé hydrolýze je v tomoto případě méně snadná a jejím výsledkem je nehomogenní prodUkt. V důsledku toho je obtížnější celé další zpracování. .These starting materials can be used directly in the raw state for acid hydrolysis, but the main difficulty lies in the removal of fats. Indeed, it is known that filtration after acid hydrolysis is less easy in this case and results in an inhomogeneous product. As a result, further processing is more difficult. .

Výchozí látky je s výhodou možno užít jako takové, zejména v následujících případech:The starting materials are preferably used as such, in particular in the following cases:

- v případě, že odpadové látky jsou dobře konzervovány, jsou prosté síry a vápníku a není nutné izolovat tukovité látky. V tomto případě je možno tyto mateeiály užít · bez obtíží, jen někdy vznikají obtíže při filtraci po kyselé hydrolýze v případě, že maateiál obsahoval příliš velké mnnžžsví tuků, v tomto případě je výhodné maateiál předem zpracovat,- if the waste substances are well preserved, they are free of sulfur and calcium and there is no need to isolate fatty substances. In this case, these materials can be used without difficulty, but sometimes there are difficulty in filtering after acid hydrolysis if the material contains too much fat, in which case it is advantageous to pre-treat the material.

- produkty je možno přímo užít také v případě, že jsou sice bohaté na vápník, jinak jsou však dobře konzervovány, za předpokladu, že množžtví vápenatých iontů nebrání izolaci hydroxyppolinu,- the products may also be used directly if they are calcium-rich but otherwise well preserved, provided that the quantity of calcium ions does not prevent the isolation of hydroxyppoline,

- v případě, že zařízení, užité pro zpracování těchto výchozích látek umoořuje použití zapáchaaících produktů, je možno užít tyto materiály v každém případě, ^^п0-1.1 z jakéhokoli důvodu možno užít výchozí látky přímo, je nutno je podrobit předběžnému zpracování následujícími způsoby.in case the apparatus used to process these starting materials allows the use of odorous products, these materials can be used in any case, for any reason the starting materials can be used directly, they must be subjected to pre-treatment in the following ways.

cC

Kooti je možno vaait s výhodou v autoklávu při zvýšeném tlaku páry, a to až 12.10 Pa, s výhodou 1 až 6.10· Pa po dobu 30 minut až 6 hodin. Vývar se kontinuálně odvádí, popřípadě se odebbrá po frakcích a dělí sé na tukovitou fázi a na vodnou fázi, která obsahuje aminokyseliny ve formě bílkovin. Takto získaná vodná fáze se pak hydrolyzuje.The cocoa can be boiled preferably in an autoclave at an elevated steam pressure of up to 12.10 Pa, preferably 1 to 6.10 Pa for 30 minutes to 6 hours. The broth is continuously drained or collected in fractions and separated into a fatty phase and an aqueous phase containing amino acids in the form of proteins. The aqueous phase thus obtained is then hydrolyzed.

Výociooíi materiály je možno extrahovat teplou vodou, čímž se odstraní tuky a větší část rozpustných anorganických solí. Takto získaný produkt je silně zbarven do hnědošeda a není průsvitný, nebo je možno jej změnót na práškovitý povrch. Tento meziprodukt je velmi dobrou výchozí látkou pro výrobu aydrlχyppóliou a dalších aminolystZin, jako prolinu a argininu způsobem podle vynálezu. Obsahuje obvykle 5 až 10 % aydroxyppolinu a jeho cena je obvykle onkolitrát nižší než cena želatiny.The raw materials can be extracted with warm water to remove fats and most of the soluble inorganic salts. The product thus obtained is strongly brownish-brown and is not translucent, or can be converted to a powdery surface. This intermediate is a very good starting material for the preparation of aryldypoly and other aminolystZines such as proline and arginine by the process of the invention. It usually contains 5 to 10% aydroxyppoline and its cost is usually oncolitrate lower than that of gelatin.

Výchozí látky je možno také netrávit proteolytikkými enzymy tak, že se k těmto látkm popřípadě v rozdrceném stavu a s přídavkem vody podle obsahu sušiny přidá enzym jako pepsin, trypsin, papin, fradiáza (pnteáza z Streptemyces Fradiae), pronáza (proteáza ze Streptemyces Orfeus) nebo ^ЬЬ1.11^о nebo směs enzymů nebo orgánů, bohatých na enzymy, jako je slinivka břišní nebo žaludeční sliznice, s výhodou drcených.Alternatively, the starting materials may not be digested with proteolytic enzymes by adding enzymes such as pepsin, trypsin, papine, fradiasis (protease from Streptemyces Fradiae), pronase (protease from Streptemyces Orfeus), optionally in a crushed state and adding water depending on the dry matter content. Or a mixture of enzymes or enzymes rich in enzymes such as pancreas or gastric mucosa, preferably crushed.

Přitom se pH upraví na hodnotu, vhodnou pro funkci enzymů. Netrávení je možno provádět při teplotě místnosti, je však vhodné směs záhřát na vhodnou teplotu pro působení enzymu, protože tímto způsobem se postup urychlí a izolace tuků se usnadní. Není nutné užít bOkteriostatcckých látek v případě, že se pH směsi velmi liší od neutrálního pH, jako je tomu v případě pepsinu, nebo je-li teplota vyěěí než 50 °C, jako je tomu .'v případě fradiázy a papainu. Oddělení tukovitých látek je snadnněSí v případě, že se reakční směs míchá trvale a/nebo přerušovaně.The pH is adjusted to a value suitable for the function of the enzymes. Non-digestion can be carried out at room temperature, but it is advisable to heat the mixture to a suitable temperature for the action of the enzyme, as this will speed up the process and facilitate the isolation of the fats. It is unnecessary to use antibiotic agents when the pH of the mixture is very different from the neutral pH, as is the case with pepsin, or if the temperature is above 50 ° C, as is the case with fradiasis and papain. The separation of the fatty substances is easier if the reaction mixture is stirred continuously and / or intermittently.

Tento stupeň je zvláště zajímavý v případě, že výchozí látky obstarnu! vysoké množní tuku, což padá v úvahu zejména pro kůže, i když byly předem zbaveny tuků, přičemž izolovaiié tuky zvyšují rentaMl-nost celého postupu. Získaný bílkovinný roztok je pak prostý tuků, takže je možno snadM^! sdnnllt nerozpustný poodl, chudý na hydroэχpгoSií, jako ·rohovité sou^ssi, látky cizorodého původu, dássi horní vrstvy pokožky. Roztok bílkovin je pouze částečně hydrolyzován, takže je možno tuto hydrolýzu doopnit hydrolýzou způsobem podle vynálezu. Příto^mnoťt některých enzymů, například pronázy, může úplně vylouččt nutnost hydrolýzy způsobem podle vynálezu.This stage is particularly interesting if I get the starting materials! high levels of fat, which is especially the case for skins, even if they have been de-fattened, while the isolated fats increase the cost-effectiveness of the process. The protein solution obtained is then fat-free, so that it is possible These are insoluble, poor in hydrophobia, such as corners, substances of foreign origin, the upper layer of the skin. The protein solution is only partially hydrolyzed so that the hydrolysis can be completed by hydrolysis according to the invention. The addition of some enzymes, for example pronases, can completely eliminate the need for hydrolysis by the process of the invention.

Je třeba se zmínit o tom, že zvláštní skupinu výchozích látek tvoří odpadové produkty z koželužen po zpracování taninem a po jeho odstraněný protože tyto látky obstanu! sírany a byly zpracovávány v kyselém prostředí, takže za příSomnosti pepsinu se vyvíjí sirovodík, který je možno ods^ranni nebo shromažďovat k různým účelům, například absorbcí hydroxidem sodným apod.It should be noted that a special group of starting substances are waste products from tanneries after tannic treatment and after it has been removed because these substances can be obtained! sulphates and were treated in an acidic medium so that, in the presence of pepsin, hydrogen sulphide develops which can be removed or collected for various purposes, for example by absorption with sodium hydroxide and the like.

Podle dalšího provedení způsobu podZLe vynálezu je možno výchozí látky předem zpracovávat za kyselých podnínek, což je zvláště výhodné, protože skladování odpadových produktů je přímo v koželužnách jinak velmi obtížné. V tomto případě se odpadky uzavřou do nádoby s určitý^ mnnostvím vody a silné kyseliny. Toto mioožsví se může měěnt v širokém rozmezí. Vodu je nutno přidávat z toho důvodu, že by jinak nedošlo k dostatečnému promísení mezi kyselinou a odpadovými mattelály. Z kyselin je možno užít zejména silné kyseliny, jako jsou kyselina chlorovodíková, sírová nebo fosforečná, přičemž je nutno dbát toho, aby se pH s^ížíIo pod hodnotu 5, s výhodou na hodnotu nižší než 3, čímž je možno účinně bakteriologicky stabilizovat uvedené odpadové matteiály.According to another embodiment of the process according to the invention, the starting materials can be pretreated under acidic conditions, which is particularly advantageous, since the storage of the waste products directly in the tanneries is otherwise very difficult. In this case, the garbage is enclosed in a container with a certain amount of water and strong acid. This mass may vary over a wide range. Water should be added because otherwise there would be insufficient mixing between the acid and the waste material. In particular, strong acids such as hydrochloric, sulfuric or phosphoric acids may be used, taking care to keep the pH below 5, preferably below 3, to effectively stabilize said waste effluents. matteiály.

Je možno užít až 50 ekvivalentů kyseliny na 1 kg sušiny a ·s výhodou 20 ekvivalentů kyseliny. V případě, že odpadové látky obsahují seníky, je možno se sirovodík odssrannt nebo izolovat jakýmmooi známým způsobem. Po skončení takt;o provedené hydrolýzy je možno snnžit mnnožsví kyseliny, nutné k tomuto předběžnému zpracovaní.Up to 50 equivalents of acid per kg dry matter and preferably 20 equivalents of acid may be used. If the waste substances contain haylofts, the hydrogen sulfide can be removed or isolated by any known method. After the hydrolysis has been completed, the amount of acid required for this pretreatment can be reduced.

Do způsobu podle vynálezu spadá rovněž předběžné zpracování, které je komminací svrchu uvedených způsobů. Je například výhodné, ok^selt odpadové látky na místě jejich vzniku a pak na ně půsoobt proteo^t:^^! enzymy, například pepsinem, nebo je také možno po okyselení těchto odpadových produktů přímo tyto látky zpracovávat způsobem pro výrobu hydroxyprolinu podle vynálezu.The process according to the invention also includes a pretreatment which is a combination of the above processes. For example, it is preferred that the waste material is picked up at the point of its generation and then treated by a protein. enzymes, for example pepsin, or it is also possible, after acidification of the waste products, to directly treat the waste products by the process for producing the hydroxyproline of the invention.

Hydrolýzu výchozích látek, popřípadě · po předchozím zpracování je možno provádět jakoUkooi silnou kyselinou, například·kyselinou chlorovodíkovou nebo sírovou. K tomuto účelu je možno užít celou řadu postupů. Je také možno odE^rant kyselinu úplně nebo částečně známým způsobem, například koncennrací ve vakuu v případě kyseliny chlorovodíkové nebo srážením za tepla v případě kyseliny sírové. Toto odstranění však není nutné. Je však možno odstraněním nebo ředěním upraví konceenraci kyseliny na hodnotu nižší než 4 N, s výhodou na hodnotu nižší než 2,5 N..The hydrolysis of the starting materials, optionally after the pretreatment, can be carried out as a strong acid, for example hydrochloric or sulfuric acid. A variety of procedures can be used for this purpose. It is also possible to remove the acid completely or partially in a known manner, for example by vacuum concentration in the case of hydrochloric acid or by heat precipitation in the case of sulfuric acid. However, this removal is not necessary. However, it is possible to remove or dilute the acid concentration to less than 4 N, preferably less than 2.5 N.

Při provádění způsobu podle vynálezu se pak směs odbarví aktivním uhlím nebo průchodem prystkVieí. K tomuto účelu je možno užít například fensffomlandehyclsvsu ’ prysk^ici s malým mnoostvím aktivních skupin OH volného fenolu nebo polystyrénovou prysk^ici (Duuolt š 30 nebo · Duuolt Eš · 861 fimy DIA-PEOSIM, Vitry).In carrying out the process according to the invention, the mixture is then decolourised with activated carbon or by passing through the particles. For this purpose, it is possible to use, for example, fensffomlandechyl resin with a small amount of active OH groups of free phenol or polystyrene resin (Duuolt š 30 or Duuolt ES · 861 of DIA-PEOSIM, Vitry).

Odbarvení není naprosto nutné, je však výhodné vzhledem к tomu, že šetří další iontoměniče, jichž bude nutno použít a mimoto zvyšuje účinnost čištění iontoměnič!. Je však možno toto odbarvení provádět i v jiném stupni způsobu podle vynálezu nebo je možno v případě potřeby toto odbarvení uskutečnit několikrát.Decolouration is not absolutely necessary, but it is advantageous in that it saves additional ion exchangers to be used and, moreover, increases the cleaning efficiency of the ion exchanger. However, the bleaching can also be carried out at another stage of the process according to the invention, or if desired, the bleaching can be carried out several times.

Takto získaný hydrolyzát se nechá projít vrstvou aniontoměniče se slabou polaritou, to znamená slabě zásaditého aniontoměniče v OH-formě. Tento iontoměnič úplně zadrží kyselinu, užitou к hydrolýze, která ještě zbývá ve směsi. Mimoto se při tomto postupu zadrží alespoň 2/3, s výhodou 9/10 přítomné kyseliny glutamové a asparagové.The hydrolyzate thus obtained is passed through a layer of anion exchanger with a weak polarity, i.e. a weakly basic anion exchanger in the OH form. This ion exchanger completely retains the acid used for the hydrolysis remaining in the mixture. In addition, at least 2/3, preferably 9/10 of glutamic and aspartic acid present are retained in this process.

Slabě zásaditým iontoměničem je například makroporézní polyakrylová pryskyřice se sekundárními aminovými funkčními skupinami (Duolit A 336 firmy DIA PROSÍM nebo Amberlite IR 45 firmy ROHM a HAAS). Tento iontoměnič se obvykle užije ve dvou oddělených sloupcích, zařazených v sérii.A weakly basic ion exchanger is, for example, a macroporous polyacrylic resin with secondary amine functional groups (Duolite A 336 from DIA PROSÍM or Amberlite IR 45 from ROHM and HAAS). This ion exchanger is usually used in two separate columns in series.

Hlavní výhoda slabé polarity aniontoměniče spočívá v tom, že jeho regenerace je daleko snadnější než regenerace iontoměniče se silnou polaritou, přičemž účinnost tohoto postupu je naprosto dostatečná.The main advantage of the weak polarity of the anion exchanger is that it is much easier to regenerate than the regeneration of the high-polarity ion exchanger, and the efficiency of the process is absolutely sufficient.

Roztok se pak nechá projít kationtoměničem, který musí mít silnou polaritu. Je však možno tento iontoměnič hospodárněji regenerovat tak, že se chrání slabě kyselým iontoměničem, který se umístí ve vrstvě na jeho začátku. Znamená to, že tento slaběji kyselý iontoměnič zadrží kationty, které je obtížnější odstranit ze silného iontoměniče. К tomuto účelu je možno užít makroporézní polyakrylové pryskyřice s karboxylovými funkčními skupinami, (Amberlite IRC 50 firmy ROHM a HAAS nebo Duolit C 464 firmy DIA PROSÍM). Regenerační činidlo prochází iontoměničem obráceným směrem než zpracovávaný roztok, to znamená tak, že nejprve prochází silným iontoměničem.The solution is then passed through a cation exchanger which must have a strong polarity. However, it is possible to regenerate the ion exchanger more economically by protecting it with a weakly acidic ion exchanger which is placed in the layer at its beginning. This means that this weakly acidic ion exchanger retains cations, which are more difficult to remove from a strong ion exchanger. Macroporous polyacrylic resins with carboxyl functional groups (Amberlite IRC 50 from ROHM and HAAS or Duolite C 464 from DIA PROSÍM) can be used for this purpose. The regenerating agent passes through the ion exchanger in the opposite direction than the solution to be treated, i.e. by first passing through the strong ion exchanger.

Kationtoměnič se silnou polaritou zadrží všechny aminokyseliny v případě, že je ho užito v dostatečném množství. Přesné množství tohoto objemu závisí na kapacitě užitého iontoměniče a mění se podle použití různých iontoměničů podle obsahu hydrolyzátu s obsahem kationtů hydrolyzátu, jakož i v závislosti na přítomnosti ochranného iontoměniče, tak jak bylo svrchu uvedeno. Má být užito takového množství iontoměniče, aby fixoval 75 a 95 % přiváděných aminokyselin, s výhodou 75 až 85 % v případě, Že výchozí látka je velmi bohatá na hydroxyprolin, jako je tomu u hydrolyzátu želatiny a 85 až 95 % v případě, Že výchozí látka je na hydroxyprolin chudá.A strong polarity cation exchanger retains all amino acids when used in sufficient quantities. The exact amount of this volume depends on the capacity of the ion exchanger used and varies with the use of the various ion exchangers depending on the hydrolyzate content containing the hydrolyzate cations as well as on the presence of the protective ion exchanger mentioned above. An amount of ion exchanger should be used to fix 75 and 95% of the supplied amino acids, preferably 75 to 85% if the starting material is very rich in hydroxyproline, as is the case with gelatin hydrolyzate and 85 to 95% if the starting material the substance is poor in hydroxyproline.

Ze silně kyselých iontoměničů padají v úvahu například sulfonovaný polystyren s 5 až 8 % divinylbenzenu (pryskyřice Duolit C 25 D firmy DIA-PROSIM nebo pryskyřice Amberlite IR 120 firmy ROHM a HAAS).Of the strongly acidic ion exchangers, for example, sulfonated polystyrene with 5-8% divinylbenzene (Duolite C 25 D resin from DIA-PROSIM or Amberlite IR 120 resin from ROHM and HAAS) are suitable.

Kapacita těchto pryskyřic je řádu 2 ekvivalenty na litr. To znamená, že je zapotřebí užít 2,5 až 6 litrů těchto iontoměničů ke zpracování 1 000 g aminokyselin. Příliš velký objem iontoměniče tohoto typu vede к tomu, že se sníží výtěžek hydoxyprolinu, oproti tomu nedostatečné množství užité pryskyřice vede к tomu, že roztok není dostatečně čistý к vykrystalizování čistého produktu.The capacity of these resins is of the order of 2 equivalents per liter. This means that 2.5 to 6 liters of these ion exchangers need to be used to process 1000 g of amino acids. Too large an ion exchanger volume of this type leads to a reduction in the yield of hydoxyproline, while an insufficient amount of resin used results in the solution being not sufficiently pure to crystallize the pure product.

Je obtížné získat dobrý výtěžek a vysokou čistotu v případě, že iontoměnič je uložen pouze v jednom sloupci. Při použití dvou sloupců se dosáhne lepších výsledků, výhodné je užít dva sloupce, a to první sloupec s větší kapacitou než je kapacita druhého sloupce.It is difficult to obtain good yield and high purity when the ion exchanger is stored in only one column. When using two columns better results are obtained, it is preferable to use two columns, namely a first column with a greater capacity than the capacity of the second column.

Kationtoměnič je užit v H⁺-formě. Neužívá se žádný pufr nebo reakční činidlo pro vymývání a dělení. Stačí přesně řídit množství aminokyselin, které se přivádějí na vrchol sloupce kationtoměniče. Je třeba dbát toho, aby nedocházelo к velkým výkyvům v obsahu vody výchozího materiálu nebo к úbytku roztoku. Tím by totiž bylo možno přivádět relativní přebytek nebo nedostatek aminokyselin do sloupce. V případě přebytku aminokyselin je možno určité množství roztoku odstrčit, v případě nedostatku je možno za jistit stálý obsah dusíku v ovinované formě přidáním amoniaku.The cation exchanger is used in the H ⁺ form. No buffer or reagent is used for elution and separation. It is sufficient to precisely control the amount of amino acids that are fed to the top of the cation exchanger column. Care should be taken to avoid large fluctuations in the water content of the starting material or solution loss. This is because it would be possible to feed the relative excess or lack of amino acids into the column. In the case of an excess of amino acids, a certain amount of the solution can be pushed away, in the case of a deficiency a constant nitrogen content in the wound form can be ensured by the addition of ammonia.

Regenerace iontoměničů není ·závažném problémem. Užívá se obvykle hydroxid sodný nebo amoniak v konceenrad 1 až 4 N v případě . zásaditého iontoměniče a kyselina chlorovodíková nebo sírová o konceenraci 1,5 až 4 N, popřípadě po předchozím promytí amoniakem pro kyselé iontoměniče a nakonec hydroxid sodný a v koncentraci 0,3 až 3 N, popřípadě ještě spolu 8 0,2 až 2 molytlitr kyseliny chlorovodíkové pro regeneraci adtorpční pryskyřice.Regeneration of ion exchangers is not a serious problem. Usually, sodium hydroxide or ammonia in the range of 1 to 4 N is used. alkaline ion exchangers and hydrochloric or sulfuric acid with a final concentration of 1.5 to 4 N, optionally after previous washing with ammonia for acidic ion exchangers and finally sodium hydroxide, and in a concentration of 0.3 to 3 N, possibly together 8 to 0.2 to 2 mol. for the regeneration of the adsorption resin.

Roztok, získaný po průchodu silně kyselou pryssyticí, má světle žlutou barvu, pH 3,8 až 5, s výhodou 3,9 až 4,5, a obsahuje ve formě hydrolyzátu 5 až 40 g/litr hydroxyypooinu, s výhodou 20 až 35 g/litr.The solution obtained after passage through a strongly acidic resin has a pale yellow color, pH 3.8 to 5, preferably 3.9 to 4.5, and contains in the form of a hydrolyzate 5 to 40 g / liter of hydroxyypooin, preferably 20 to 35 g. /liter.

V případě, že předchozí stupně byly správně provedeny, zejména pokud jde o množsví aminookysein na 1 iitr iontoměniče, obsahuje eluát na 100 g aninookysein 30 až 60 g, s výhodou 35 až 50 g tydroxytroliou.If the preceding steps have been carried out correctly, in particular in terms of the amount of amino acid per liter of ion exchanger, the eluate per 100 g of aninoacid contains 30 to 60 g, preferably 35 to 50 g, of tydroxytrolia.

' Před krystalizací je nutno roztok zahussit a obvykle také odbearit, přičemž pořadí těchto dvou postupů je lhostejné. Je možno roztok konceenrovat před odbarvením a - ještě po odbarvení, nebo se roztok zahnutí až do získání slabě žlutě zbarveného roztoku, který . obsahuje 180 až · 350 gj s výhodou 230 až 270 g/litr hydrozkyp^inu.Prior to crystallization, the solution must be thickened and usually also de-beared, the order of the two being indifferent. It is possible to concentrate the solution before decolorizing and after decolorization, or to bend the solution until a slightly yellow-colored solution is obtained. it contains 180 to 350 g, preferably 230 to 270 g / liter of hydrocyanine.

Je-li to zái^c^ okysseí se koncenírát malým mnoostvím kyseliny octové nebo mravenčí do pH 3,8 až'4,6, s výhodou 4 áž 4,3. Toto okyselení však není vždy nutné.If it is an acid, the concentrate is a small amount of acetic or formic acid to a pH of 3.8 to 4.6, preferably 4 to 4.3. However, this acidification is not always necessary.

Krystalizace se · provádí přidáním alkoholu, například mmthylalkoholu nebo ethylalkoholu. Je možno užžt také směs alkoholů, zejména směs dvou svrchu uvedených alkoholů, Užije se 1 až 4 bbjemy, s výhodou 2 áž 3 objemy alkoholu, vztaženo na celkový objem konceeirátu.Crystallization is carried out by the addition of an alcohol, for example methyl alcohol or ethyl alcohol. It is also possible to use a mixture of alcohols, in particular a mixture of the two alcohols mentioned above, using from 1 to 4 volumes, preferably from 2 to 3 volumes of alcohol, based on the total volume of the concentrate.

Suspenze krystalů se zfiltruje, s výhodou po 12 až 24 hodinách stání v lednici při teplotě ⁰ a^ž +1° °C. ^krysta^lky Se ^pro^m^J:í těkavým rozpustilém, mítiteii^ým s vo^dou, napřiklad jedním ze svrchu uvedených alkoholů nebo jejich sidÍsí. Odstranění se provádí fiirrací za odsávání, pak se krystalky suší ve vakuu nebo v proudu vzduchu při teplotě 40 až 110 ®C.The crystal slurry is filtered, preferably 12 to 24 hours of standing in refrigerator at ^0, and ^z + 1 ° C. ^to RYSTA ^lk y of ^Pr ^ J ^m: s volatile dissolved the mítiteii ^{characterized} in ^d ou ms, for example one of the abovementioned alcohols or Sidis. Removal is performed by suction filtration, then the crystals are dried under vacuum or in a stream of air at a temperature of 40-110 ° C.

Sušení není nutno provádět do stálé йпоПо^!, protože je obvykle nutné podrobit materiál překrye taliáni. Toto př-kryttalliáoí se provádí stejně jako první krystalizaíe, to znamená, že se krystalky rozpustí ve vodě na končeniraci 180 až 400 glitr, s výhodou 250 až 350 g/litr hyůro^xproolinu. Je obvykle zapotřebí odb^rvt roztok aktivním úhlím před přidáním alkoholu.It is not necessary to carry out the drying to a constant temperature, as it is usually necessary to subject the material to the overlay with the talc. This crystallization is carried out in the same way as the first crystallization, i.e., the crystals are dissolved in water at a final concentration of 180 to 400 g, preferably 250 to 350 g / liter of hydroxyproline. It is usually necessary to remove the solution with an active angle before adding the alcohol.

Kromě hydгoJqrppoliou je možno izolovat zajímavé veddejší prodiucty, a to z matečného louhu při .^^,^^1^i^lizaci nebo z sluátů iontoměničů. kolagenu, prostý anorganických soXií a chuzený o kyselinu glutimovou a ásparagovou i o hP^dгoэQ^rpP⁰lⁱo se získá dalším vymýváním šiloS kySelého iontomSniče amoniakem o Ro^c^c^-^íi^i^i^zí 0,5 až 3 N a zahuštěním eluátu ve vakuu. Tento hydrolyzát je možno podrobí fгakciloaci nebo užít jako takový.In addition to hydrogenolysis, interesting byproducts can be isolated from the mother liquor at the time of ionization, or from ion exchange salts. collagen, free from inorganic and soXií Chuzenji of aspartic acid and also glutimovou hP ^dгo эQ pP ^r ⁰ l ⁱ is obtained by further washing silos sour iontomSniče ammonia Ro ^ C ^ C ^ - ^ ii ^ i ^ i ^ ne 0.5 3 N and concentration of the eluate in vacuo. The hydrolyzate may be subjected to phactionation or used as such.

Vynález bude osívělen οάΒΐ^^^^Ι příklady.The invention will be illustrated by the following examples.

PřikladlHe did

Do autoklávu, opatřeného míchadlem se vloží 250 litrů vody, 250 kg·technické kyseliny ^rové a ^{250 kg} o^dřez^yů ^yůže. Směs se zahřívá ^piⁱi tlaku 1^ ^pa na ⁸ tad^ načn^{s -} se odebere 550 litrů černé kapaliny, která SS zředí na 1 800 litrů a přidá se 20 kg diatomitu, načež se celá směs zfiltruje.An autoclave equipped with stirrer was charged with 250 liters of water, 250 kg · ^ Rove technical acid and ^{250 kg} of cut ^d ^s of the ^Yu. The mixture was heated ^p i ⁱ i 1 ^ ^p pressure and ^8-TAD ^with NaCN ^- 550 l is removed black liquor which it was diluted to 1800 liters and adding 20 kg of diatomaceous whereupon the entire mixture was filtered.

Filtrát se nechá postupně procházet čtyřmi ža tebou zařazenými sloupci, které oísiíuuíThe filtrate is passed sequentially through four columns that are assigned to each other

500 litrů přípravku Duolit S 30, I 100 litrů přípravku Duolit A 366, 1 10Ó litrů přípravku Duolit A 366, 820 litrů přípravku Amenll-te IR 120. Po nanesení veškerého filtrátu na sloupec se sloupec vymývá vodou, čímž se získá I 000 litrů roztoku s obsahem 85 kg sušiny, z toho je 23 kg hydroxyppooinu. Roztok se nanese na sloupec s 270 litry Aaberllte IR 120, sloupec se vymývá vodou, čímž se získá 570 litrů eluátu s obsahem 28 kg sušiny, 12,5 kg hydro ^prolinu.500 liters of Duolit S 30, 100 liters of Duolit A 366, 10 10 liters of Duolit A 366, 820 liters of Amenll-te IR 120. After all the filtrate has been applied to the column, the column is washed with water to obtain 1000 liters of solution. containing 85 kg of dry matter, of which 23 kg hydroxyppooin. The solution was applied to a column with 270 liters of Aaberllte IR 120, eluting with water to give 570 liters of eluate containing 28 kg of dry matter, 12.5 kg of hydro proline.

Tento roztok se zahuut.í ve vakuu až na objem 45 litrů, odbarví se při 80 °C pomocíThis solution is concentrated under vacuum to a volume of 45 liters, decolorized at 80 ° C with

500 g aktivního hilí (přípravku Acticarbone 2S) a zfiltruje se. Po promyyí černého filtračního koláče se získá 48 litrů roztoku.500 g of active helium (Acticarbone 2S) and filtered. After washing the black filter cake, 48 liters of solution are obtained.

Kyytalizace se vyvolá přidáním 120 litrů methiaoolu, pak se směs nechá stát několik hodin a uloží se v lednici do příštího rána.Cyytalization is induced by the addition of 120 liters of methiaol, then the mixture is allowed to stand for several hours and stored in the refrigerator until the next morning.

Roztok se zfiltruje ve vakuu, krystaly se promyyí 20 litry methanUu, zfiltrují za odsátí a usuší. Títm . o způsobem se získá 8,8 kg produktu š obsahem 5 až 10 % prolinu, 3 až 5 % glycinu a 0,5 až 1 % alaninu. Tento produkt se rozpuutí ve 22 litrech vody, přidá seThe solution is filtered under vacuum, the crystals are washed with 20 liters of methanol, suction filtered and dried. Títm. The process yielded 8.8 kg of product containing 5 to 10% proline, 3 to 5% glycine and 0.5 to 1% alanine. This product was dissolved in 22 liters of water, added

350 g aktivního uhlí (přípravku AAticarbone } a 30 ml kyseliny mravenčí k dosažení pH 4,2, pak se směs zahřeje na 70° a zfiltruje. Po promyyí aktivního uhLí se získá 30 litrů roztoku, který se nechá krysyalizovat na přidání 75 liyrů methanolu. Kystalky se promyyí methanolem a usuší. Získá se 6,5 kg hydroxyppolinu.350 g of activated charcoal (AAticarbone) and 30 ml of formic acid to pH 4.2, the mixture is heated to 70 DEG and filtered, and washed with activated charcoal to give 30 liters of solution which is crystallized to add 75 liters of methanol. The crystals were washed with methanol and dried to give 6.5 kg of hydroxyppoline.

Příklad 2Example 2

Postupuje se obdobně jako v příkladu 1, avšak vypuuyí se sloupec 270 litrů nAmerl^u IR 120. Roztoky se nechají projít třemi sloupci a po Slití se nechají projíy ještě sloupcem o obsahu 820 litrů.The procedure is analogous to Example 1, except that a column of 270 liters of America 120 is discharged. The solutions are passed through three columns and, after decanting, passed through a column of 820 liters.

Příklad 3Example 3

Postupuje se obdobně jako v příkladu 1, avšak roztok se nechá'prooít přímo z prvního sloupce do druhého sloupce Amerlltu IR 120 bez odebbráoí frakcí a stanovení jejich obsahu.The procedure was analogous to Example 1 except that the solution was passed directly from the first column to the second column of Amerill IR 120 without fractions being collected and assayed.

Příklad 4Example 4

Postupuje se stejně jako v příkladu 1, avšak' po izolaci aminooyyslin, nefixovaných na sloupcích. Amerlltu IR 120, se fixovaané abinokkysliny vym^vjí amoniakem o konoenoraci 2 N, a to v taioOství 1 200 1 v prvním sloupci, 400 1 ve druhém sloupci. Tyto eluáty se odeebrají po frakcích, přičemž . se stanoví celkový poměr koncentrace hydr₀χyprolinu a aminoOypelin.The procedure was as in Example 1, but after isolation of the non-fixed aminooyyslines. Amerilta IR 120, the fixed abinoc acids are replaced with ammonia with a 2 N conenoration at a rate of 1200 l in the first column, 400 l in the second column. These eluates are collected in fractions, wherein. determining the total concentration ratio ₀ hydr χyprolinu and aminoOypelin.

Nejbohaaší frakce je možno oechat krystalizovat v případě, že obsah hydroxyprolinu je větší než 38 až 40 %.The richest fractions can be crystallized when the hydroxyproline content is greater than 38-40%.

DDaší frakce se nechají prooít s následujícím roztokem znovu sloupcem 270 litrů АпЬьгЫtu IR 120 (obsah vyšší než 20 % hydroxyypolinu) nebo se smísí s bajeriáleb, který má být hydrolyzován (obsah 10 až 20 %), nebo se jich užije pro výrobu vedlejších produktů (obsah nižší než 10 %).DOther fractions are passed through the next solution again with a 270 liter column of Aspire IR 120 (content greater than 20% hydroxyypoline) or blended with the crane to be hydrolyzed (content 10 to 20%), or used to produce by-products ( content less than 10%).

Tímto postupem se získají o 20 % vyšší výtěžky.This yields 20% higher yields.

Příklad 5Example 5

Postupuje se stejně jako v předchozích příkladech s tím rozdílem, že se bbtlčný louh po krystalizaci a odstranění methanolu destilací znovu nechá krystalizovat. Matečný louh po první krystalizaci se přivádí do s^ěi, která má být hydrolyzována, a matečný louh po druhé krystalizaci se spojí s roztokem pro první krystalizaci.The procedure is the same as in the previous examples except that the baking liquor is allowed to crystallize again after crystallization and removal of methanol by distillation. The mother liquor after the first crystallization is fed to the network to be hydrolyzed and the mother liquor after the second crystallization is combined with the solution for the first crystallization.

Příklad 6Example 6

Postupuje se obdobně jako v příkladech-1 až 5, avšak matečný louh po krystalizacl se přivádí na sloupec pryskyřice Ammerllte IR 120 v možsSví 150 g amnokykelin/litr pryskyřice. Při výstupu ze sloupce se získá směs vodného a alkoholového roztoku, prostá* -aminokyselin, jejíž dessilace je snadná. Amnožkeeeioy se vyýývaj amoniakem o konceenraci 2 N a získané frakce se užžjí podle své čistoty stejně jako v příkladu 4.The procedure is analogous to that of Examples 1-5, but the mother liquor after crystallization is fed to a column of Ammerllte IR 120 resin at a rate of 150 g amnokykeline / liter of resin. Upon exiting the column, a mixture of aqueous and alcoholic solutions, free of β-amino acids, is obtained, the disinfection of which is easy. Ammonia is eluted with 2 N ammonia and the fractions obtained are used according to their purity as in Example 4.

P Píkl a d 7P Pikl a d 7

Hydrolýza se provádí stejně jako v příkladu 1.The hydrolysis is carried out as in Example 1.

Z 550 litrů hydrolyzovaného matteiálu . se 290 litrů Moralizuje vápenným mlékem do pH 7,3.From 550 liters of hydrolyzed material. with 290 liters Moralized with lime milk to pH 7.3.

Směs se zfiltruje a koláč síranu vápenatého se promyje vodu. Filtrát a promývací voda se smísí s podílem hydrolyzované smměs, která nebyla neutralizována. Získá se 750 1 materiálu se 1 400 ekvivalenty kyselin;The mixture was filtered and the calcium sulfate cake was washed with water. The filtrate and the wash water are mixed with a portion of the hydrolyzed mixture which has not been neutralized. 750 l of material with 1,400 acid equivalents were obtained;

Přidá se 20 kg diatomitu, směs se zfiltruje a nechá prooít postupně 300 litry pryskyřice Ducoite S 30, 1 000 1 P^ottu A 366 ve dvou sloupcích (500 + 500) a 1 350 1 Anmerlitu IR 120 ve dvou sloupcích (900 + 450).20 kg of diatomite are added, the mixture is filtered and passed through 300 liters of Ducoite S 30 resin, 1000 L of Pistol A 366 in two columns (500 + 500) and 1,350 L of Anmerlite IR 120 in two columns (900 + 450). ).

Získá se 400 litrů mmaeeiálu s obsahem 9,5 kg hydro^^^inu, který se nechá kryssaaizovat a překrystalovat stejně jako ve svrchu uvedených příkladech, čímž se získá 4,5 kg hydro xyyrooinu.400 liters of a material containing 9.5 kg of hydroxylamine are obtained, which is crystallized and recrystallized as in the above examples, yielding 4.5 kg of hydroxylamine.

Sloupec o 450 1 se. vymývá 60 litry amoniaku o konccenraci 2 N k získání 380 1 eluátu s obsahem 6 kg hydro joppo linu a 19 kg dalěích aminožkeeeio. Tento eluát se přivádí po matečných louzích po kryi^1^í^].i^zacL na sloupec o obsahu - 200 litrů AmbrU^u IR ' 120. Sloupec se vymývá 100 litry amooiaku o konceenraci 2 N, čímž se získá 110 litrů roztoku s obsahem 6 kg hydroxyypolinu mimo 9 kg dalších aminožkeeein. Po 3 krystalizacích se získá 2,3 kg hydriχeproliou.Column of 450 1 se. eluting with 60 L of 2 N ammonia to give 380 L of eluate containing 6 kg of hydro-iopoline and 19 kg of other amino acids. This eluate was fed through the mother liquors over a 150 L AmbrU @ 1 IR120 column. The column was eluted with 100 L of 2 N ammonia to give 110 L of solution. containing 6 kg of hydroxyypoline in addition to 9 kg of other amino acid. After 3 crystallizations 2.3 kg of hydrocheprolium are obtained.

PříkladeExample

Provádí se způsob podle příkladu 1, avšak sloupec absorpční pryskyřice S 30 se uloží mezi oba sloupce A 366.The process of Example 1 is carried out, but a column of absorbent resin S 30 is placed between the two columns A 366.

Příklad 9Example 9

Provádí se způsob podle příkladu 1, avšak sloupec pryskyřice Ambrl^e IR 120 obsahuje pouze 600 1 pryskyřice místo 820 ' a je zařazen před sloupec s obsahem 200 1 D^itu C 464.The procedure of Example 1 is carried out, but the Ambrine ® IR 120 resin column contains only 600 L of resin instead of 820 'and is placed in front of the 200 L Dititol C 464 column.

P Píkl ad 10P Example 10

Do nádoby o obsahu 500 litrů se uloží 100 kg odřezků vepřové kůže, 1 kg práškovaného papainu a.2 litry kyseliny octové ve 25 lireech vody. Směs se zahřívá na 60 °C. Kůže se stlačuje do vody, takže hladina odpoofádaícím způsobem stoupá. Po 1 nebo 2 hodinách míchání je možno směs míchat již jen přerušovaně. Pak se od sebe od^ldě! sádlo - (14 kg) a 90 li^tiů roztoku ve vodě s obsahem 30 % sušiny a malým mužstvím pevných látek. v suspennz.In a 500 liter container, 100 kg of pork cuttings, 1 kg of powdered papain and 2 liters of acetic acid in 25 liters of water are placed. The mixture was heated to 60 ° C. The skin is compressed into water so that the level rises in a descending manner. After stirring for 1 or 2 hours, the mixture can only be stirred intermittently. Then apart from each other! lard - (14 kg) and 90 liters of solution in water containing 30% dry matter and a small amount of solids. v suspennz.

Přidá . se 27 kg kyseliny sírové a směs se zahřívá v autoklávu stejně jako v příkladu 1. Získá se 100 1 černého roztoku, který se zředí na 200 litrů.Adds. with 27 kg of sulfuric acid and the mixture was heated in an autoclave as in Example 1. 100 l of a black solution was obtained, which was diluted to 200 l.

Tento roztok se pak zpracovává stejné jako v příkladu 1, přičemž je možno -snnžit množství pryskyřic a ^akčních činidel stejně jako v příkladech 1 až 9.This solution is then treated in the same manner as in Example 1, whereby the amount of resins and reagents can be reduced as in Examples 1 to 9.

Příklad 11Example 11

Do nádoby o obsahu 500 1 se, vloží 200 kg různých odpadků z koželužen, [00 1 teplé vody a 200 g kyseliny sírové, pak 100 g pepsinu a dostatečné mnooství kyseliny sírové k dosa^žení pH 1 ^aS 1,5. Teplota se udrizuje několik ^hodin ⁿa ³⁵ a^s 40 °C a pH v rozmezí ¹ a^s 1^,8.To a flask of 500 1 is charged 200 kg of garbage from various tanneries, [00 1 of hot water and 200 g of sulfuric acid, then with 100 g of pepsin mnooství and sufficient sulfuric acid to achieve ^that the pH 1 ^and 1.5. The temperature is several ^hours udrizuje Odin ⁿ and ³⁵ ^s 40 ° C and the pH between ¹ and ^{^1,} the eighth

Po 24 hodinách se míchání zastaví a po dekantaci se produkt izoluje takto:After 24 hours stirring is stopped and after decantation the product is isolated as follows:

- oddělí se 25 kg tukovitých látek, nahromaděných na povrchu aseparate 25 kg of fatty substances accumulated on the surface, and

- oddělí se 230 1 roztoku s obsahem 21 % sušiny a nerozpustné souučsti, z něhož lze vyrobit hydroxyppooin způsobem podle vynálezu.230 l of a solution containing 21% dry matter and insoluble component are separated from which the hydroxyppooin can be prepared by the process according to the invention.

Claims

1. A process for producing 4-hydroxy (^ _iro; x ^ - ^ i ^ Lj ^ _i ^ _(^] _ well, vyznnčující in that the hydrolyzed starting material containing collagen and a waste of tanneries, scrap from the leather or broth from the bones after possible pretreatment, the obtained protein hydrolyzate is decolorized, the resulting solution is passed through a weakly basic ion exchanger to trap glutamic and aspartic acid and inorganic salts, up to 95% of the amino acid present in the solution, the resin column is eluted with water, the eluate is concentrated to a hydrozxynroline content of 180 to 350 g / l, preferably 230 to 280 g / l, the solution is discolored and crystallized after acidification to pH 3 8 to 4.6 to obtain pure hydrochloride in crystalline form.

2. The method of claim 1, wherein the unreacted skin residues are subjected to a pretreatment with one or more proteolytic enzymes or organs rich in these enzymes.

3. The method of item 2 wherein the method is as follows: wherein the proteolptic enzymes are pepsin, trypsin, papin, Streptomyces fradias fradiasis, Streptomyces griseus pronase, or subeilisio.

4. The process of item 1 is strong acid.

they are known for their unprocessed skin remnants being pre-treated

5. The process according to claim 4, characterized in that it is hydrochloric, sulfuric or phosphoric.

6. The method of item 1, characterized by or activated carbon.

The method according to claim 1, wherein the hydrolyzate is decolorized to a gum

7. The process of claim 6, wherein the decolorizing resin is a phenol-formaldehyde resin having a number of active OH-wave phenol or polystyrene-based resins.

8. The method of item 1, characterized by: The method according to claim 1, characterized in that a mercaporous polyacrylic resin with active secondary amine groups is used as a weakly basic ion exchanger.

9. The process according to claim 1, wherein the strongly acidic ion exchanger is sulfonated polystyrene containing 5-8% divinylbenzoate at a rate of 2.5 to 6.1 per kg of pseo.

10. The method of claim 1 wherein a weakly acidic ion exchanger is deposited prior to the strongly acidic ion exchanger.

11. The method of claim 10, wherein the weakly acidic ion exchanger is a macroporous polyacrylic resin having active carboxyl groups.

12. The process of claim 1 wherein the two decolorizing steps are performed at any time prior to the last crystallization.

Process according to claim 1, characterized in that the crystallization is effected by adding 1 to 4 volumes of alcohol, preferably 2 to 3 volumes, based on the volume of the solution.

14. A process according to claim 13, wherein ethyl alcohol, methanol or mixtures thereof is used.

15. The method of claim 1, wherein the amino acids other than hydroxyproline fixed on the acid ion exchanger are isolated by elution with ammonia.