CS202181B1 - Způsob odstraňováni n1zkomolekulárnich sloučenin z roztoku krevního albuminu - Google Patents
Způsob odstraňováni n1zkomolekulárnich sloučenin z roztoku krevního albuminu Download PDFInfo
- Publication number
- CS202181B1 CS202181B1 CS753977A CS753977A CS202181B1 CS 202181 B1 CS202181 B1 CS 202181B1 CS 753977 A CS753977 A CS 753977A CS 753977 A CS753977 A CS 753977A CS 202181 B1 CS202181 B1 CS 202181B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- low molecular
- molecular weight
- solution
- albumin solution
- albumin
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title description 3
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 35
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 35
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 claims description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 6
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 6
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 3
- 238000005292 vacuum distillation Methods 0.000 claims description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 27
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 10
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000252233 Cyprinus carpio Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004319 trichloroacetic acid Drugs 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N Epichlorohydrin Chemical compound ClCC1CO1 BRLQWZUYTZBJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- -1 after thetaphosphate Chemical compound 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000007012 clinical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
(54) Způsob odstraňováni n1zkomolekulárnich sloučenin z roztoku krevního albuminu
Poznáni skutéčnosti,že albumlnová trakce krevních bílkovin je zodpovědná za udržováni osmotické rovnováhy v organismu způsobilo,že albuminový roztok,upravený do Intusnl tormy o koncentraci bílkovin 5 nebo 20% se stal jedním z nejčastěji užívaných preparátů,vyrobených z krevní plazmy.Až dosud se při výrobě albuminu kladl důraz na jeho výtěžnost a na elektrotoretickou čistotu.Základní podmínkou pro klinickou efektivnost účinku albuminového preparátu je co nejnižši obsah nlzkomolekulárnich anorganických nebo organických sloučenin,která se do albuminového roztoku dostávají v souvislosti s jeho technologickou formou separace. Vynález řeži způsob odstraňováni těchto sloučenin z roztoku krevního albuminu.
Na precipitaci albuminu ze směsi plasmatických nebo sérových krevních bílkovin byl použit siran amonný/Schultze H.,Sch8nenberger M.,Matheke H.D.:Behringwerke Mitt. 26,21,1952; Dietzel E.,Geiger H.: Behringwerke Hitt. 43,1 29,1 964/,polymetafostát /Nitschman H.S.,Rickli E.,Kistler P.: Vox Sang. 5,232,1 960/,trich loroctová kyselina /Hichel S.E.; Biochem.J. 82,
2,1 962/,kapry lát /Hoch H.,Chanutin A.:Arch.Biochem.Biophys. 51,271,1 954/,aceton/Schwert
G.U.: J.Amer.Chem.Soc. 79,139,1957 /,étér / Kekwitz R.A.,Hc Kay H.E.,Nance H.H.,Record B.R:Biochem.J. 60,671,1 955 /, etanol / Cohn E.J.,Strong L.E., Hughes W.L.,Hulford D.J., Ashworth J.N.,Melin H.,Taylor H.L.:J.Amer.Chem.Soc. 68,459,1946; Taylor H.L.,Bloom F.C.,
Mc Call K.B.,Hyndman L.A.:J.Amer.Chem.Soc. 78,1353,1956/,etanol spolu se Zn++ a Ba ++ / Cohn E.J.,Gurd F.N.R.,Surgener D.H.,Barnes B.A.,Broun R.K.,Derounaux G.,Gillespie J.M., Kahnt F.U.,Lewer W.F.,Liu C.H.,Mitte Iman D.,Mouton R.F.,Schmid K.,Uroma E.: J.Amer. Chem.
202 181
202 181
Soc. 72,465,1960/ a ionty Zn++ /Cohn E.J.,TuLlis J.L.,Surgener D.M.,D*Hont M.: Science 114,479,1951 /.
Současná technologická praxe však na jedné straně sice odděluje albumin od směsi jiných krevních bílkovin,ale na druhé straně zanáší do albuminového roztoku nizkomolekulárni anorganické nebo organické sloučeniny.Technologický postup může taktéž část některých nizkomolekulárnich sloučenin s biochemickofyziologickou aktivitou v roztoku koncentračně obohacovat vzhledem k jejich koncentraci ve výchozí surovině,ze které byl albumin izolován.
Přítomnost netěkavých anorganických soli snižuje v injekčním roztoku albuminu jeho osmotickou kapacitu.Přítomnost netěkavých nizkomolekulárnich organických molekul v roztoku albuminu vytváří předpoklady pro vznik nežádoucích interakci těchto látek s molekulami albuminu,a to zejména při lyofilizaci nebo pasteurizaci,popřípadě v průběhu skladováni v podobě terapeutického preparátu.
Nedostatkem dosud užívané technologie je skutečnost,že takto připravené lyofi lizované preparáty obsahuji 2,5 +. 0,5 X sodíku,který citelně snižuje klinický efekt preparátu, zejména při odčerpáváni tekutin tělesných tkáni za patologických podmínek.
U nově navrhované technologie se tyto potiže nevyskytovaly v tak výrazné intenzitě, což lze dokumentovat údajem,že z 10 připravených experimentálních šarži podle předloženého vynálezu bylo dosaženo sníženi sodíku u lyofi lizovaného preparátu o 95 X až 99,9 X ve srovnáni s týmž materiálem,který byl lyofilizován bez předcházející separace nlzkomolekulárnich sloučenin.
Podstata odstraňováni nizkomolekulárnich sloučenin z roztoku krevního albuminu spočívá podle předloženého vynálezu v tom,že bílkovinný mateřiá l,obsahujici purifikovaný albumin se suspenduje za aseptických podmínek v takovém množství destilované apyrogenni vody o teplotě 0 °C až +6 °C,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 2 X až 15 X s optimem 8 Z+ 2 X,albuminový roztok se vyčeři například filtraci a separace nizkomolekulárnich sloučenin z albuminového roztoku se provádí elučni gelovou chromatografll s vylučovací mezi gelu,vyjádřenou molekulovou hmotnosti nizkomolekulárnich sloučenin do 10.000, pomoci eluce s destilovanou apyrogenni vodou anebo s roztokem chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě v koncentraci až 0,9 X,s optimem jen v destilované apyrogenni vodě o teplotě 0 °C až +6 °c s hodnotou pH v rozmezí 4,0 až 6,0 při průtoku 2
O, 01 ml až 3,0 ml za minutu na cm výtokové plochy gelové části kolony.
Za optimální průtok je možno považovat objem v rozmezí od 0,05 ml do 1 ml za minutu na cm ,kdy vzniká naředěnl na čele a konci výtoku bílkoviny z kolony,při čemž cca 80 X naloženého objemu roztoku bílkovin vytéká z kolony prakticky v té koncentraci,v jaké byl roztok bílkovin na kolonu nasazen.Průtoky kolem 5 ml za minutu na cm2/Friedli H.,Kistler
P. sChimia 26,25,1972/ způsobuji naředěnl roztoku vice než na dvojnásobný objem.
Z gelové chromatografické kolony vyteklý albuminový roztok se podrobí sterilizaci, například filtraci nebo radiační sterilizaci a potom dalšímu zpracováni,například lyofilizaci nebo zakoncentrovánl pomoci vakuové dešti láce,popřípadě pomoci membrán.
Vynález je dále objasněn na příkladech provedeni,ji miž jeho obsah není ani omezen,
202 181 ani vyčerpán.
Přiklad 1
Výchozi surovinou je pasta frakce V,izolovaná podle Cohna.Bi Ikovinný albuminový materiál se rozpouští v takovém množství destilované apyrogenni vody o teplotě 0 °C až +6 °C,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 2 Z až 15 Z s optimem 8 % + 2 %.Rozpouštěni se urychluje mícháním.Po rozpuštěni se albuminový roztok vyčeři, například fiItraci.
V technologických poměrech jsou výše uvedená podmínky zpravidla zachovány tehdy, když rozpustíme 1 kg albuminové pasty ve 2 000 ml destilované apyrogenni vody o teplotě 0 °C až +6 °C.Hodnota takto vzniklého albuminového roztoku bývá zpravidla mezi pH 4,0 až 6,0 a koncentrace bílkovin bývá v rozmezí 8*2 Z.Takto připravený roztok purifi kovaného albuminu se vyčeři například filtraci a nizkomolekulárni sloučeniny se z albuminového roztoku odstraní gelovou chromatografi 1,napřiklad na dextranových gelech,pod komerčním označením Sephadex G-25,G-50,na polyakrylových gelech pod označením Biogel P-2,P-4,P-6, na metakrylátových gelech,pod komerčním označením Spheron P-40,nebo na jiných materiálech, jako jsou například domácí vývojové materiály na bázi řetězeného škrobu s epichlorhydrinem nebo na bázi perlové celulózy,s vylučovací mezi gelu,vyjádřenou molekulovou hmotnosti nlzkomolekulárnich sloučenin do 10 000,přičemž uvedené materiály je nutno používat v optimálním zrněni,zaručujicim průtok pro technologická podmínky.
Nabobtnalý get,promytý apyrogenni vodou,před tim předestilovanou o teplotě 0 °C až +6 °C se plni do kolony.Za optimální rozměry technologických gelově-chromatografických kolon se považuji taková,kde průměr kruhová,nebo úhlopříčka Čtvercové nebo obdélníkové základní plochy kolony k výšce kolony se pohybuje v poměru 1:5 až 1:10.
Do kolony necháme nasávat albuminový roztok takovou rychlost1,aby průtok spodní o plochou kolony se pohyboval mezi 0,01 ml až 3,0 ml za minutu na plochu 1 cm .Množství albuminového roztoku,nasazeného na kolonu nemá překročit 25 % až 30 Z objemu gelové části chromatografické kolony.
Po nasazeni celého objemu albuminového roztoku se chromatografické kolona promývá s destilovanou apyrogenni vodou anebo s roztokem chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě o koncentraci až 0,9 Z, s optimem jen s destilovanou apyrogenni vodou o teplotě 0 °C až +6 °C při zachováni stejné průtokové rychlosti.
Po výtoku albuminového roztoku,zbaveného nlzkomolekulárnich sloučenin se gelově 2 chromatografické kolona promývá rychlosti cca 0,3 ml až 0,6 ml za minutu na cm minimálně 10ti násobkem objemu své gelové části s 1M roztokem chloridu sodného v apyrogenni destilované vodě.Potom se chromatografické kolona promyje minimálně 15ti násobkem objemu své gelové části s apyrogenni destilovanou vodou o teplotě 0 °C až +6 °C,při čemž lze oddělováni nlzkomolekulárnich sloučenin z albuminového roztoku opakovat.
V případě,že bychom prováděli odsolováni vzhledem až k 0,9 Znimu roztoku chloridu sodného v apyrogenni vodě,ekvilibrizujeme chromatografickou kolonu po promyti s destilovanou vodou s lOtinásobkem objemu gelové části se zvolenou koncentraci chloridu sodného a potom lze děleni nlzkomolekulárnich sloučenin opakovat.
202 181
Albuminový roztok po eluci z gelově chromatografické kolony se podrobí sterilizaci, například filtraci nebo radiační sterilizaci a potom dalšímu zpracováni,například lyofilizaci nebo zakoncentrovánl pomoci vakuové dešti láce,popřípadě pomoci membrán.
Numerické hodnoty,uváděné jako optima,jsou vhodné pro technologické provedeni,které bylo úspěšně odzkoušeno.
Přiklad 2
Výchozí surovinou může být bílkovinné pasta albuminu,izolovaná 1 pomoci síranu amonného,po týmetafosfátu,tri chloroctové kyše liny,kapry létu,acetonu,étéru,etanolu spolu s Zn++a Ba ++,anebo jenom pomoci Zn++.B1Ikovinná pasta se zpracovává v dalším postupu jako
Claims (2)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZU1. Způsob odstraňováni nízkómolekulámích sloučenin z roztoku krevního albuminu, vyznačující se tim,že bílkovinný mateřiál,obsahuj1ci purifikovaný albumin,se suspenduje za aseptických podmínek v takovém množství apyrogenni vody předtím destilovaná o teplotě 0 °C až +6 °C,aby hodnota koncentrace bílkovin se nacházela v rozmezí 2 X až 15 X,albuminový roztok se vyčeři například filtraci a separace nízkómolekulámích sloučenin z albuminováho roztoku se provádí elučni gelovou chromatografii s vylučovací mezi gelu,vyjádřenou molekulovou hmotnosti nízkómolekulámích sloučenin do 10 000,pomoci eluce s destilovanou apyrogenni vodou nebo s roztokem chloridu sodného v destilované apyrogenni vodě o koncentraci až 0,9 X,o teplotě 0 °C až +6 °C s hodnotou pH v rozmezí 4,0 až 6,0 při průtoku 0,01 ml až 3,0 ml za minutu na cm výtokové gelové části kolony,při čemž z gelově chromatografické kolony vyteklý albuminový roztok se podrobí steri lizaci,například filtraci nebo radiační sterilizaci a potom dalšímu zpracováni,napřik lad lyofilizaci nebo zakoncentrovánl pomoci vakuová destilace nebo pomoci membrán.
- 2. Způsob podle bodu 1,vyznačující se tim,že výchozí bílkovinný materiál se suspenduje na hodnotu koncentrace bílkovin v rozsahu 6 až 10 X.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS753977A CS202181B1 (cs) | 1977-11-16 | 1977-11-16 | Způsob odstraňováni n1zkomolekulárnich sloučenin z roztoku krevního albuminu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS753977A CS202181B1 (cs) | 1977-11-16 | 1977-11-16 | Způsob odstraňováni n1zkomolekulárnich sloučenin z roztoku krevního albuminu |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS202181B1 true CS202181B1 (cs) | 1980-12-31 |
Family
ID=5424720
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS753977A CS202181B1 (cs) | 1977-11-16 | 1977-11-16 | Způsob odstraňováni n1zkomolekulárnich sloučenin z roztoku krevního albuminu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS202181B1 (cs) |
-
1977
- 1977-11-16 CS CS753977A patent/CS202181B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Elgin et al. | Limited heterogeneity of the major nonhistone chromosomal proteins | |
| Markey et al. | Human platelets contain profilin, a potential regulator of actin polymerisability | |
| Safer et al. | Isolation of a 5-kilodalton actin-sequestering peptide from human blood platelets. | |
| Thompson et al. | Phosphorylation of ovine rhodopsin. Identification of the phosphorylated sites | |
| Bellvé et al. | Synthesis and amino acid composition of basic proteins in mammalian sperm nuclei | |
| MacGillivray et al. | The heterogeneity of the non-histone chromatin proteins from mouse tissues | |
| FI81720C (fi) | Foerfarande foer inaktivering av oekningsbenaegna filterbara sjukdomsalstrare i blodprodukter. | |
| Michael | The isolation of albumin from blood serum or plasma by means of organic solvents | |
| FI102036B1 (fi) | Menetelmä rasvaliukoisten aineiden stabiilien valmisteiden valmistamiseksi | |
| Böhm et al. | Proteolytic Digestion Studies of Chromatin Core‐Histone Structure: Identification of a Limit Peptide of Histone H2A | |
| Tuan et al. | Calcium-binding protein of chorioallantoic membrane: identification and development expression. | |
| Evans et al. | Zinc transport by transferrin in rat portal blood plasma | |
| Chiu et al. | DNA-binding chromosomal nonhistone proteins. Isolation, characterization, and tissue specificity | |
| PL99599B1 (pl) | Sposob otrzymywania tolerowanej srodzylnie gammaglobuliny | |
| Kahlenberg et al. | Studies on the characterization of the sodium-potassium transport adenosinetriphosphatase: V. Partial purification of the lubrol-solubilized beef brain enzyme | |
| Johns et al. | A method for the large scale preparation of the avian erythrocyte specific histone F2C | |
| Silversand et al. | Isolation of turbot (Scophthalmus maximus) vitellogenin by high-performance anion-exchange chromatography | |
| PL210616B1 (pl) | Sposób rozdzielania i oczyszczania fibrynogenu i plazminogenu | |
| Sherman et al. | In vivo transformation between fibrinogens of varying ethanol solubilities: a pathway of fibrinogen catabolism | |
| Mikhailidis et al. | Effect of human plasma proteins on stabilisation of platelet anti-aggregatory activity of prostacyclin | |
| CS202181B1 (cs) | Způsob odstraňováni n1zkomolekulárnich sloučenin z roztoku krevního albuminu | |
| Schoenenberger et al. | Peptide inhibitors of lactic dehydrogenase (LDH). II. Isolation and characterization of peptides I and II | |
| Schwartz | Rat embryo nonhistone chromosomal proteins: interaction in vitro with normal and bromodeoxyuridine-substituted DNA | |
| Po-Chao Lin et al. | Isolation and properties of nonhistone chromosomal proteins from pea chromatin | |
| Gronow et al. | Nuclear protein changes during the nitrosamine-induced carcinogenesis of rat liver |