CS201802B1 - Inaktivovaná adjuvantná vakcína proti Aujeszkého choroba a sposob jej přípravy - Google Patents
Inaktivovaná adjuvantná vakcína proti Aujeszkého choroba a sposob jej přípravy Download PDFInfo
- Publication number
- CS201802B1 CS201802B1 CS68178A CS68178A CS201802B1 CS 201802 B1 CS201802 B1 CS 201802B1 CS 68178 A CS68178 A CS 68178A CS 68178 A CS68178 A CS 68178A CS 201802 B1 CS201802 B1 CS 201802B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- inactivated
- virus
- aujeszky
- disease
- hours
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 30
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 title claims description 13
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 title claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 38
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 10
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 8
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 8
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 7
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 6
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 5
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 5
- -1 fatty acid esters Chemical class 0.000 claims description 4
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 claims description 4
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 claims description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 3
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 claims description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 2
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 claims 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 12
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 5
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000252095 Congridae Species 0.000 description 2
- 101100109871 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) aro-8 gene Proteins 0.000 description 2
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 2
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical class O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- CSWPOLMVXVBCSV-UHFFFAOYSA-N 2-ethylaziridine Chemical compound CCC1CN1 CSWPOLMVXVBCSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001497 Agitation Diseases 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000132389 Andraca Species 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 206010007269 Carcinogenicity Diseases 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 229920002491 Diethylaminoethyl-dextran Polymers 0.000 description 1
- RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen sulfide Chemical compound S RWSOTUBLDIXVET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010061217 Infestation Diseases 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 1
- 208000032420 Latent Infection Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 description 1
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000007670 carcinogenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000260 carcinogenicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 208000037771 disease arising from reactivation of latent virus Diseases 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 1
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
Vynález sa týká inaktivovanej adjuvantnej vakcíny proti Aujeszkyho chorobě vnímavých druhov hospodářských a užitkových zvierat a sposobu jej přípravy.
Virus Aujeszkyho choroby vyvolává nákazlivé ochorepie u viaoerých druhov hospodářských a užitkových zvierat, to je ošípanýoh, hovádzieho dobytka, oviee, psov, mačiek a kožušinovýoh zvierat, ktoré sa vyznačuje vysokou morbiditou a mortalitou a zapříčiňuje vysoké národohospodářské straty. Ochranné očkovanie proti Aujeszkyho chorobě sa doposiai robí prevážne pomocou živých vakoín, vyráběných z atsnuovanýoh, respektive avirulentnýoh kmenov /žuffa, A., Grunert, Z., 1974» Les vaccines utilisés en Tcheooslovaquie centre la maladie D Aujeszky·, Cah. Méd. Vér. 4^» 334-337} Bártha, A., 1961» Kísérletek az Aujeszky-féle virus virulenoiájának szelídítésére., Mágy. állatorv. lapja 16 /2/, 42-45/· živé vakcíny z avirulentnýoh kmeňov sú neškodné a ich aplikáoia v primeranej dávke vyvolává u očkovaných zvierat ochranu proti klinickému oohoreniu pri ioh kontakte s infekciou /Žuffa, A·, 1976» The signifikanoe of spscifio prophylaxie for control of Aujeszky*s disease·, Proč. 4-th lnt. Pig Vet. Sec. Congr., Ames USA, G 10 /En/} Szabó, A., Grunert, Z., 1971« Persistence of virulent Pssudorabies Virus in Herda of Vaooinatsd and Monvaoolnated Pigs·, Acta Virologica, 15, 87-94/· Proti pouzívaniu živých vakoín sa vyslovujú námietky, že sa nimi vnáša do chovu a populáoie ošípaných infekčně agens, ktoré može u vskoinovaných zvierat pratrvával a pri přesune vakcinováných zvierat do zdravých ohovov sprostredkovaž přenos infekcie /Skoda, R·, 1976: The
201 802
201 802 control of Aujeszky s disease in large ewine unita by use of attenuated live vaooines. Proo 4-th Iqt. Pig Vet. Šoc. Congr., Ames USA, Q 6/, Baskerville, A·, Perran, J.B., Dow, C·, 1973« Aujeszky e disease in pigs·, Vet. Bull. £2,/9/, 465-480/. Tieto námietky proti používaniu živých vakcín sa stali opodstatněnými najma potom, So aa dokázalo, že virus Aujeezkyho choroby, rovnako ako iné herpetické virusy ludí a zvierat, može po primárnéj infekci!, doprevádzanej klinickým oohorenim alebo prebiehajúcej inaparentne, navodil pretrvávajúou latentnú infekciu /Sabó, A·, Bajčáni, <J« 1976: latent paeudorabies virus infection in pigs. Acta virologica, 20, 208-214/.
Použivanie živých vakcin je preto indikované v oblastiach enzootioky zamořených Aujesz kyho vírusom, kým v oblastiach a štátooh so sporadickým výskytem Aujeszkyho choroby aa odporúča používal vakoíny inaktivované.
Osobitný význam a uplatnenie najde účinná inaktivovaná vakcína proti Aujeszkyho chorobě pri ochrannom očkovaní hovadzieho dobytka a ovlec. Tieto druhy zvierat aú totiž na infekciu Aujeszkyho vírusom velmi vnímavé, pričom ochorenie prebieha vo všetkých prípadoch letálne. 2ivé vakcíny, neškodné pre najnižžie věkové kategorie uvedených druhov zvierat, musia sa preto vyrébal z avirulentnýoh kmeňov a limitovanou sohopnoslou reprodukcie v organizme očkovanoov. To však znamená, že pri antigennej atimuláoii sa uplatňuje len malé množe tvo inokulovaného vakolnačného víruau, čoho prejavom je poměrně slabá imunltná odpovaňePrl inaktivovanej vakcína možno do aplikačnej dávky koncentroval poměrně velká množstvo virusového materiálu, ktorého antigenitu možno Sálej potencoval vazbou na vhodné adjuvana.
Inaktivované vakoíny, vyrábané z orgánov experimentálně infikovaných zvierat, aa ukázali ako neúčinné. Prvé pokusy o přípravu účinnej inaktivovanej vakoíny proti Aujeazkyho ohorobe z víruau napestovaného na buňkových kultúraoh a inaktivovaného foxmaldehydom /Koch, A., Abraham, £., 1952t Xmmunlaationsversuohe mit dem Aujeszkiachen Virus., Acta vat. Hung. 11/4/, 270-279.; Suffa, A. 1963» Verauch zur Xmmunialrung von Laboratoriumatiere und Sohweinen mittela Pormaldehyd- und UV/Strahlen inaktieviertem Aujeazky-Virua·, Aroh.f. Exptl. Vet.-med. 17/3/, 593-613/, alebo ultrafialovými lúčmi /předtým citovaný 2uffa, Béládi, 1·, Ivánovica, D·, 1954» Immunialerung von laboratoriumatieren mit dem Virus der Aujeazkiaohen Krankheit nach deeaan Inaktivierung mit Ultraviolettatrahlen. Acta Mlorobiol. Aoad. Sol. Hung. 2/1-2/, 151-160/, a použitím gélu hydroxidu hlinitého ako adjuvana, aa ukázali neúspěšné. Ani rozrušenle infakčnosti Aujeazkyho víruau, napestovaného na buňkových kultúraoh, pomocou kyseliny dusitej nevládlo k příprava účinnej inaktivovanej vakoíny. Vo vakoínaoh prlpravanýoh z víruaov inaktivovanýeh pomocou aaponínu /Barbinsohi, C., Papadopol, M., 1966» Gereetari prlvind imuzarea in boala lui Aujeszky cu vaociu preparát din virus dea cultura adaorbit ai aaponinat. Luor. Inat Pasteur 111/1-1964/, 71-84/, alebo kryštálovej violeti /ledjelkov, S. a spol., 1968» Verauohe zur Heratellung von Vakzine gagen Aujeszkyeohe Krankheit aua inaktiviertem Virus. 1. Mitt. Arch. exp. Vet. Med. 22, 499-507/, nemožno vylúčil prítomnoel infekčného virusu /predtým citovaný Baskerville a spol. 1973/. Bfaktívnejšou aa ukázala vakoína připravená Haralambievom a apol. /Haralambiev, H., Mermeraki, K., Slmeonov, S·, 1967« Untereuehungen uber dle Zmmunogenitat der mit Aethanol inaktivlerton Vakzine gene dle Aujeezkysche Krankheit., Aroh. exp. Vet Med. 21/2/, 501-507/
201 802 z tkanivového virusu inaktivovaného pomocou etanolu s přidáním parafínového oleje ako adjuvans· Nakolko Ida o jednoduché zmiešanie vody s olejom, dochádza po krátkodobom státi emulzie vakcíny k rozdeleniu na vodnú a olejová fázu. Simeonov a spol. /Simeonov, S., Vaeilev, V., Jotov, M·, 1973« Sravnitelno izpitvanie na saponinovi vaksiny protiv boleetta na Aujeszki., Vet. Med. Naukl 10/2/, 83-88/ nahradili olejové adjuvans saponinom. Porovnávali účinnost troch inaktivovaných vakcín, připravených pomocou formaldehydu, kryštálovej violeti a saponínu. Borgen, H.C., Expensen, L., 1970» Immunizíng efect of photoinaotivated pseudorabies virus., Zbl. Bekt. I. Orig., 214/1/, 13-16, předložili v uvedenej publikáoii dokaž o tom, že vystavenie Aujeszkyho virusu posobeniu ultrafialových lúčov vedie k rozrušeniu jeho infekčnosti bez porušenia povrchových štruktúr virionov a tým k zaohovaniu antigen i ty. Keňže testovanie imunizačnýoh schopností virusu inaktivovaného ultrafialovými lúčmi sa robilo aplikáciou velkýoh, pre praktické účely nepoužitelných dávok, a nakolko technické tažkosti inaktivácie a technologické problémy spracovania inaktivovaného virusu na vakeínu ostali nedoríešené, nenašiel tento sposob inaktivácie Aujeszkyho virusu pri výrobě vakcíny proti Aujeszkyho chorobě praktické uplatneňie. Preukaznú imunitnú edpoveS vyvolala vakcína predstavujúca virus nepěstovaný na bunkovej kultuře stabilnej škreččej linie BHK-21, inaktivovaný etyletylénimínom a viazaný na dietylamínoetyl dextran /Škoda, R., Wittmann, 6., 1973» Die Immunlaierung von Schweinen mit Vakzinen sus Inaktiviertem Aujeezky-Virus. Zbl. Vet. Med. B 20, 127-138/. Jednorázové podanie vakcíny ošípaným v přiměřených dávkách vyvolalo aktívnu tvorbu protilátok a chránenost proti infekci! definovaným množstvom virulentného virusu. Neudává sa však stupeň imunity po aplikácii nižších dávok vakcíny, resp. u dobytka len po dvojnásobnou» očkovaní, ako sa to vyžaduje pre praktické použivanie vakcíny.
DeLagneau a spol. /De Lagneau, J.E.» a apol. 1975: Immunisation contre la maladie D*Aujeszky a l*aide ďun nouveau vaccin huileux a virus inactivé, Reo. Méd. Vet. 151/10/, 561-575/ použili pre inaktivovanie Aujeszkyho virusu, pomnoženého na bunkovej linii IB-RS-2, klasický sposob, to je formaldehyd a pre stimulovanie antigenity vírueu lipoidné adjuvans. Dvojnásobné podanie vakcíny vyvolalo u laboratórnych zvierat a ošípaných tvorbu protilátok v titroch 1»16 až 1»128 a chránenosl proti infekci! definovaným množstvom letálnych dávok. Účinná inaktivovanú vaxcinu proti Aujeszkyho chorobě připravil Genov a spol. tak, že virus inaktivoval 1,3-propiolaktónom a následné ho viazal na adjuvans představu júci gél hydroxidu hlinitého /Genov, 1», Řezačka, A·, Genová, A·, 1967» řolučavane inaktivirana s betapropiolakton vakcina srešču boleetta na Aueski s štem Ruse/· Nedoatatkom tejto vakcíny je použitý inaktivačný prostriedok, ktorý bol vyřaděný zo zoznamu látok, použitelných pre přípravu biopreparátov, nakolko ea dokázala jeho mutagenita /Eaerish, B.J., Searle, C.D., 1966» Carcinogenity of beta-propiolactone and 4-nitro quinoline N-oxide for the skin of guinea pig., Brit. J. Cancer 20, 200-205/.
Nevýhodou doposial navrhovaných inaktivovaných vakcín proti Aujeszkyho chorobě je, že sú připravené alebo z vírueu nepěstovaného na kultúrách stabilných bunkovýoh linií, čo ovplyvňuje neškodnost vakcín pre potenciálnu onkogenitu takýchto tkaniv, alebo na primárných kulturách připravovaných z obličiek 1 až 3 mesačnýoh ošípaných, čo zvyšuje výrobně
201 802 náklady· Okrem toho. pri doposia! připravených inaktivovanýoh vakcínach proti Aujeazkyho chorobě nebol doetatočne deklarovaný lmunizačný účinok pre všetky druhy vnímavých a ekonomioky zaujímavýoh zvierat, pri aplikáoii rozdielnyoh dávok vakoíny.
Uvedené nedostatky sú riešené inaktivovanou adjuvantnou vakcínou proti Aujeazkyho choroba vnímavých druhov hospodářských zvierat, obeahujúoou v 1 ml 10®’° až 1O7,5 TKID^/ ml inaktivovaného virusu Aujeazkyho choroby, kmeňa Rača-TK-5, uvedeného v Seakoslovenakej zbierke mikroorganizmov na Výakumnom ústave veterinérneho lekáratva v Brně Medlánkach, Hudcova ul. 60 pod označením CCM V-95 a ÍO7*^ až ÍO8’^ TKID,j0/ml inaktivovaného vírueu Aujeazkyho choroby kmeňa Buk-TK-200 uloženého v předtým citovanej zbierke pod označením CCM V-93, emulgovaného v lipoidno-saponínovom adjuvans a sposobom jej přípravy, pozostávajúcej z výběru a vhodného poměru imunogennýoh virusových kmenov so sohopnostou rásí na heterológnom tkanive vzhladom k očkovancom, účinnej inaktivácie etanolom a saponínom, pri zachovaní antigenity a poměru inaktivačných látok k zmeanému antigénu vybratýoh vírusovýoh kmenov·
Virus Aujeszkyho choroby a to kmene BUK-TK-200 a Rača TK-5, sa osobitne pomnožujú známým sposobom na primárných kultúraoh, alebo subkultúraoh kuřácích, alebo kačacích embryonálnyeh buniek, narastenýoh na Skle, alebo v suspenzi!· Na kultiváciu buňkových kultúr použitých pre pomnoženie uvedených kmenov Aujeszkyho vírueu sa použijú vhodné živné média, najma tie, ktoré obsahujú fragmenty bovinného mliečneho albuminu a potřebné množstvo oioavčích, alebo vtáčíoh eér /Portefleld, J.S., 1967: Aniraal tissue culture, v zborníku pod edičným vedením Maramoroaha, K. a Koprowského, H·, Acad· Press New York/· Nevylučuje sa použitie definovaných médií obsahujúcich látky ovplyvnujúce metabolickú a mitotiokú aktivitu buniek vo vrstvovýoh, alebo suspenzných kultúraoh. Buňkové kultúry sa infikujú jednak kmeňom BUK-TK-200 a jednak kmeňom Rača TK-5, pri multiplicite «d 0,1 do 1,0 TKIDg0 na jednu buňku. Po 24 až 48 hodlnovej inkubáoli infikovanýoh kultúr pri 37 °C aa získá pomnožený virus v objeme udržovaoieho mádla s infekčnými titrami pri kmeni Bača TK-5 od 10®»° až 10®’° a pri kmeni BUK-TK-200 od 107,° do ΙΟ8’5 ΤΚΠ>5ο v 1 ml suspenzie. Připravené virusové suspenzie obldvoob kmenov Aujeszkyho virusu sa zbavia buněčného detritu sedimentáclou, odstředěním, alebo filtráoiou· Virusové suspenzie kmenov Bača TK 5 a BUK-TK-200 β uvedenými hodnotami infekčnýoh titrov sa spolu zmiešajú v lubovolnom pomere, e výhodou v pomere 1:2 a následné inaktlvujú poeobením etanolu vo výslednej konoentráoii od 15 do 25 hmotových peroent pri teplote 25 až 35 °C počas 18 až 72 hodin, účinkom aaponínu, ktorý je aúčasne adjuvanaom, vo výslednej konoentráoii od 0,05 do 0,4 hmotových peroent pri teplote 20 až 35 °C po dobu 18 až 72 hodin, kombinovaným účinkom etanolu a saponinu v jednom roztoku, alebo následným přidáváním jednotlivých látok bezproetredne po sebe, alebo do uplynutla 72 hodin v uvedených konoentráoiaoh počas 14 až 72 hodin v rozsahu uvedených teplot. Po kontrole inaktivácie vírueu, ktorá sa uskutočni intramuskulárnou aplikáoiou králikom v dávkaoh 2 aŽ 10 ml, sa antigány emulgujú eo známými adjuvantnými olejami v definovanom pomere vodnej fáze k olejom· Lipoidno-eaponínová emulzia vakcíny aa stabilizuje uložením počas 12 až 24 hodin pri teplote 20 až 25 °0 a následné
201 aa chladí na 2 až 10 °C· Obsah adjuvantných olejov, ktoré obsahujú minerálně oleje o kině matickej viskozitě 20.10^ až 120.10^ m2 · a”1, estery vyšších mastnýoh kyselin, akými aú lanolín, arlaoel, cereol a emulgátory typu tweenov v takom pomere, aby vytvářeli emulziu voda v oleji, alebo voda v oleji a vo vodě, ktorých zastúpenie vo vakcína představuje 12 až 60 hmotových %, s výhodou 16 hmotových %.
Příklad prevedenia
Uvedený příklad predmet vynálezu nijak neobmedzuje, ani nevyčerpáva· Primárná kultúry z kuřácích, alebo kačacích embryí, alebo ich subkultúry, vytvárajúce na povrchu skla kultivačních nádob súvislú jednovrstvu, sa zbavia rastového média pozostávajúceho z Earlovho roztoku obohateného o 7 hmotových percent telacieho séra a 0,4 hmotových pereent laktalbu mínhydrolyzátu, prepláchnu 2 až 3 krát ústojným fyziologickým roztokom a jednotlivo infikujú kmeňmi BUK-TK-200 a Rača-TK-5, uvedenými v popienej časti, pri multiplioite infekcle 0,1 až 1,0 TKIDg0 na buňku» Infikované buňkové kultúry sa zalejú Earlovým roztokom obohateným o 0,3 hmotových percent laktalbumínhydrolyzátu a inkubujú počas 24 až 48 hodin pri 37 °C· Po vírusspecifickej degenerácii tkaniva, určenej mikroskopicky, sa inkubácia přemi· ší a získá infekčná kvapalina, ktorá sa zbaví buněčného detritu odstředěním, alebo filtráciou oez gázu. Dva objemové diely virusovéj suspenzie kmeňa Buk-XK-200 a infekčným titrom najmenej lO?’^ TKID^0/ml a jeden objemový diel suspenzie kmeňa Rača-TK-5 s infekčným titrom najmenej 10θ*° TKID^/ml aa spolu zmiešajú a k zmesnej vírusovej suspenzi! aa přidá etanol do výslednej koncentrácie 20 hmotových percent a roztok saponínu o koncentrácii 10 hmotových percent vo vodě do výdednej koncentrácie 0,1 hmotových percent vo vírusovej suspenzii. Inaktivačné prostriedky sa pridávajú v spoločnom roztoku, alebo v následnosti bezprostredne po sebe· Inaktivácia prebieha počas 72 hodin pri teplote 30 °C·
Styri objemové diely zmesnej inaktivovanej vírusovej suspenzie sa zmiešajú a 0,85 objemovými dielmi lehkých minerálnych olejov /například Marcol/, 0,15 objemovými dielmi esterov vyšších mastných kyselin /například Arlaoel/ a a 0,02 objemovými dielmi emulgátora /například Tween 80/ a zmes sa emulguje miešaním v zariadení pri vysokých obrátkách, alebo pod účinkom tlaku /například Turmix, alebo Ultrathurax/ pri laboratorněj teplote počas 60 sekund· Lipoidno-saponínová emulzia vakcíny sa stabilizuje státim počas 16 hodin pri laboratórnej teplote a následné aa skladuje pri 2 až 10 °C·
Účinnosl inaktivovanej adjuvantnej vakcíny proti Aujeszkyho chorobě, podlá vynálezu, potvrdzujú výsledky v nasledujúcej tabulke, v ktorej sa uvádzajú titre virus neutrallzujúcioh protilátok v krvnom sáre roznych druhov zvierat vnímavých na infekciu Aujeszkyho virusom v závislosti na množstve i.m· aplikovanej vakcíny a ohránenosť proti vyvolávajúcej infekcii definovaným množstvem smrtelných dávok.
201 802
Tabulka 1
| Druh zvierat | Titre VN-protilátok v krvnom sére po dvojrázovej aplikácii ···. ml vakcíny | Chránenoal proti vyvolávajúoej infekoii ••LDe. u zvierat očkovaných ·· ml vakcínj | |||||
| 1 | 2 | 5 | 10 | 1 | 2 | 5 | |
| Norky | 2-4 | 4-16 | 4-32 | N | 102 | 103 | N |
| Ošípané | 4-16 | 8-32 | 8-64 | N | 103 | 1O4 | 104 |
| Hovadzí dobytok | 2-16 | 8-64 | 8-128 | 32-256 | 104 | 106 | 106 |
PREDMET VY Ν X LE Z U
Claims (3)
1· Inaktivovaná adjuvantná vakcína proti Aujeszkyho choroba vnímavých druhov hospodárskyoh a úžitkovýoh zvierat vyznačujúca sa tým, že v 1 ml obsahuje 10^’° až lO?’^ TKIDg0/ml inaktivovaného virusu Aujeszkyho choroby kmeňa Rače-TK-5 CCM V-95 a 10?’3 až 108»5 TKID,j0/ml inaktivovaného virusu Aujeszkyho choroby kmeňa Buk-TK-200 CGM V-93» emulgované v lipoidnom alebo lipoidno-saponínovom adjuvans·
2. Sposob přípravy vakcíny podlá bodu 1, vyznačujúci sa tým, že sa virusové kmene Aujeezkyho choroby pomnožujú na vrstvených alebo suepenzných primokultúrach alebo subkultúrach kuřácích alebo kačacích embryonálnych buniek a potom sa inaktivujú účinkom etanolu vo výelednej koncentrácii v médiu od 10 do 25 hmotových % pri teplote 25 °C až 35 °0 počas 20 až 72 hodin, alebo účinkom saponínu vo výelednej koncentrácii v médiu od 0,1 do 0,33, hmotových % pri teplote 25 °C až 35 °C počas 12 až 72 hod·, alebo kombinovaným účinkom etanolu a saponínu v lubovolnom poradí, alebo v spoločnom roztoku v uvedených konoentračnýoh pomeroch pri teplote 12 °C až 37 °C počas 12 až 72 hod· a následné sa emulguje 80 až 420 ml vírusovej euspenzie v zmesi adjuvantnýoh olejov obsahujúcioh 60 až 85 ml lahkých minerálnych olejov a 3 až 13 ml esterov mastných kyselin·
3· Sposob přípravy vakcíny podlá bodu 2· vyznačujúoi sa tým, že vytvořená emulzia aa stabilizuje státlm pri 12 až 25 °C počas 10 až 28 hodin a následné sa ochladí na 2 až
10 °C
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS68178A CS201802B1 (cs) | 1978-02-02 | 1978-02-02 | Inaktivovaná adjuvantná vakcína proti Aujeszkého choroba a sposob jej přípravy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS68178A CS201802B1 (cs) | 1978-02-02 | 1978-02-02 | Inaktivovaná adjuvantná vakcína proti Aujeszkého choroba a sposob jej přípravy |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS201802B1 true CS201802B1 (cs) | 1980-11-28 |
Family
ID=5339380
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS68178A CS201802B1 (cs) | 1978-02-02 | 1978-02-02 | Inaktivovaná adjuvantná vakcína proti Aujeszkého choroba a sposob jej přípravy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS201802B1 (sk) |
-
1978
- 1978-02-02 CS CS68178A patent/CS201802B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN1056085C (zh) | 母育酚在疫苗中用作佐剂 | |
| DE69535520T2 (de) | Abgeänderter, verbesserter BRSV Lebend- Impfstoff | |
| EP0073547B1 (en) | Infectious-bronchitis vaccines for poultry, combined infectious-bronchitis vaccines, process for preparing such vaccines and infectious-bronchitis virus strain | |
| US4650677A (en) | Method of preparing adjuvanted live attenuated vaccines and adjuvanted live attenuated vaccines thus obtained | |
| KR20040028952A (ko) | 웨스트 나일 백신 | |
| KR19980025002A (ko) | 개량된 불활성 백신 | |
| US6528058B1 (en) | Saponin adjuvant composition | |
| US4505892A (en) | Infectious bronchitis vaccine for poultry | |
| US4357320A (en) | Infectious bronchitis vaccine for poultry | |
| Cunningham | Immunization of cattle against Theileria parva | |
| CS201802B1 (cs) | Inaktivovaná adjuvantná vakcína proti Aujeszkého choroba a sposob jej přípravy | |
| DE69711673T2 (de) | Adjuvans, insbesondere in form einer dreiwertigen metallkation-emulsion sowie diese enthaltende impfstoffzusammensetzung | |
| DE3888775T2 (de) | Impfstoff für den Schutz von Katzen gegen infektiöse Katzenperitonitis. | |
| Crick | The vaccination of man and other animals against rabies | |
| US3585108A (en) | Transmissible gastroenteritis vaccines and methods of producing the same | |
| IE48482B1 (en) | Combined vaccine active against newcastle disease and egg production drop caused by adeno-like viruses,process for preparing it,adeno-like and newcastle disease virus strains | |
| IE48722B1 (en) | Vaccine against diseases caused by reo viruses,combined vaccine with newcastle disease virus,process for preparing them and reo virus strain used for their preparation | |
| Gough et al. | A viral subunit immunogen for porcine transmissible gastroenteritis | |
| CS231514B1 (cs) | Inaktivovaná olejová vakcína proti Aujeszkyho chorobě a sposob jej výroby | |
| Johnson et al. | Intracerebral infection of mice with ovine strains of Chlamydia psittaci: an animal screening test for the assay of vaccines | |
| USRE34013E (en) | Infectious bronchitis vaccine for poultry | |
| DE2121237C3 (de) | Verwendung einer Zellinie zur Züchtung von Viren | |
| RU2154496C2 (ru) | Вакцина против чумы, инфекционного гепатита и парвовирусного энтерита плотоядных | |
| DE3026044A1 (de) | Parenteraler impfstoff fuer rinder gegen infektioese rinderrhinotracheitis | |
| FR2535204A1 (fr) | Procede de preparation d'un vaccin adjuve, inactive, contre la peste de cocar |