CS201786B1 - Způsob imobilizovaní (2-galaktosidasy - Google Patents

Způsob imobilizovaní (2-galaktosidasy Download PDF

Info

Publication number
CS201786B1
CS201786B1 CS594578A CS594578A CS201786B1 CS 201786 B1 CS201786 B1 CS 201786B1 CS 594578 A CS594578 A CS 594578A CS 594578 A CS594578 A CS 594578A CS 201786 B1 CS201786 B1 CS 201786B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
galactosidase
cells
gel
imobilized
beta
Prior art date
Application number
CS594578A
Other languages
English (en)
Inventor
Vladimir Jirku
Jaroslava Turkova
Vladimir Krumphanzl
Anna Frydrychova
Jiri Coupek
Original Assignee
Vladimir Jirku
Jaroslava Turkova
Vladimir Krumphanzl
Anna Frydrychova
Jiri Coupek
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vladimir Jirku, Jaroslava Turkova, Vladimir Krumphanzl, Anna Frydrychova, Jiri Coupek filed Critical Vladimir Jirku
Priority to CS594578A priority Critical patent/CS201786B1/cs
Publication of CS201786B1 publication Critical patent/CS201786B1/cs

Links

Landscapes

  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)

Description

Vynález se týká způsobu imobilizace kvasinkové jS-galaktosidasy, který spočívá v zakotvení celé buňky jejího producenta kovalentní vazbou na pevný nosič.
Průmyslová aplikace vázané /3-galaktosidasy nalézá značně uplatnění v procesu úpravy mléka i při degradaci odpadních produktů obsahujících laktózu. V. této souvislosti je použití kvasinkové /3-galaktosidasy výhodnější jednak tím, že optimální pH enzymu je bližší pM mléka, jednak tím, že aktivita kvasinkové /2-galaktosidasy je v prostředí mléka stabilnější.
Ve vývoji způsobů přípravy vázaných enzymů představuje imobilizace celých buněk jejich producentů nový směr, kterému je v současné době věnována pozornost především pro značné operační výhody.
Dosud známé způsoby přípravy vázaných mikrobiálních buněk obecně vycházejí z metod imobilizace čistých enzymů a lze je rozdělit do následujících kategorií:
a) vazba buňky fyzikálním zachycením v gelu, membráně nebo mikropouzdru;
b) vazba buňky adsorpcí na ionex nebo biospecifický adsorbent biologické povahy;
c) vazba buňky kovalentní vazbou na pevný nosič.
Výhody a nevýhody těchto známých způsobů hodnotí z hlediska aplikace vázaných buněk poměrně málo prací. Je však zřejmé, že imobilizací celých buněk kovalentní vazbou je možno získat zakotvený enzymatický systém, jehož aktivita nebude negativně ovlivněna difuzní bariérou nebo dalšími negativními vlivy, které se projevují při použití způsobů, kdy se vazba buňky provádí fyzikálním zachycením nebo adsorpcí na ionexu. Z těchto důvodů je imobilizace buňky kovalentní vazbou na pevný nosič velmi perspektivní.
Podle vynálezu spočívá způsob imobilizace kvasinkové /3-galaktosidasy v zakotvení permeabilizované kvasinkové buňky na hydroxyalkyl metakrylátový gel prostřednictvím triethylentetraminu, který byl aktivován glutaraldehydem nebo karbodiimidem. Synthesa (S-galaktosidasy byla v těchto buňkách indukována před imobilizací.
Účinek tohoto způsobu imbolizace jS-galaktosidasy spočívá ve vyloučení izolace a purifikace enzymu a v jeho zachování v intracelulárním prostředí buňky, což přispívá ke stabilitě jeho aktivity, zaručuje optimální podmínky pro vlastní enzymatickou reakci a izoluje enzym od negativních vlivů extracelulárního prostředí.
Způsob podle vynálezu je dále blíže vysvětlen na několika příkladech provedení,
Příklad 1
Hydroxyalkyl metakrylátový gel (8 až 13 <um), zpracovaný epichlorhydrinem, byl modifikován vazbou triethylentetraminu podle následujícího postupu: 1 g gelu byl suspendován v 10 ml 1 M triethylentetramin dihydrochloridu, jehož pH bylo upraveno 1 M NaOH na hodnotu pH 9,0. Po 24 hod míchání za laboratorní teploty byla suspenze převedena do kolonky a gel byl promýván vodou až do vyrovnání vodivosti. Potom byl gel .promyt desetinásobným objemem ethanolu, butanolu a opět ethanolu a vysušen. Obsah triethylentetraminu byl vypočten na základě stanovení dusíku Kjeldahlovou metodou na 256 pmol/g suchého gelu. Modifikovaný gel (1 g) byl po 3 hod bobtnání ve vodě promyt několikanásobným objemem vody. Odsátý gel byl suspendován ve dvojnásobném objemu vody a k vzniklé suspensi byl přidán glutaraldehyd (25 %) do konečné koncentrace 5 %. Po 1 hod míchání byl gel převeden do kolonky a promýván vodou až do negativní reakce, kterou byla sledována přítomnost glutaraldehydu v jednotlivých promývkách. Po vymytí volného glutaraldehydu byl gel promyt 300 ml 0,05 M fosfátového pufru (pH 7,0). Takto připravený gel (0,5) byl přidán do 5 ml buněčné suspenze, obsahující v 1 ml téhož pufru 109 permeabilizovaných buněk kmene Kluyveromyces lactis. Z hlediska přechodu (3-galaktosidasóvé aktivity na nosič a její stability bylo konstatováno, že imobilizace buněk pevnou kovalentní vazbou byla v podmínkách míchané suspenze dokončena v teplotě 20 °C přibližně po 100 hodinách. Lokalizace buněk na povrchu zmíněného nosiče je dokumentována mikrofotograficky.
Využití intracelulární enzymatické aktivity imobilizovaných buněk je podmíněno jejich permeabilizací, která byla v tomto případě provedena následujícím způsobem: buněčná suspenze byla po 0,1 ml objemech nanášena na střed membránového filtru, přičemž každé následující nanešení bylo provedeno vždy po úplném odsátí média, Po nanesení 1 ml objemů byly filtry přeneseny na skleněnou desku a zachycené buňky byly vystaveny proudu teplého vzduchu o konstantní teplotě 60 °C po dobu 70 sek. Permeabilizované buňky byly z povrchu filtrů smyty 0,05 M fosfátovým pufrem (pH 7,0).
Příklad 2
Příprava zakotvených permeabilizovaných buněk byla provedena způsobem popsaným v příkladu 1 s tím rozdílem, že k vazbě místo triethylentetramin byl použit hexamethylentetramin.
Příklad 3
Příprava zakotvených permeabilizovaných buněk byla provedena způsobem popsaným v příkladu 1 a 2 s tím rozdílem, že bylo použito buněk permeabilizovaných dimethylsulfoxidem. Suspenze buněk v 0,05 M fosfátovém pufru (pH 7,0) byla vystavena účinku dimethylsulfoxidu (40 %) při Teplotě 20 °C. Po 30 min byly buňky promyty, resuspendovány v uvedeném pufru a imobilizovány. Příklad 4
Postupem uvedeným v příkladu 1 a 2 byly zakotveny nepermeabilizované buňky. Takto zakotvené buňky byly dodatečně permeabilizovány postupem uvedeným v příkladu 1 s tím rozdílem, že bylo použito suspenze nosiče s navázanými buňkami.
Příklad 5
Příprava zakotvených buněk byla provedena způsobem popsaným v příkladu 1 s tím rozdílem, že modifikovaný gel byl během imobilizace aktivován přítomností 100 mg N-ethylN'-/3-dimethylaminopropyl/karbodiimidu na 100 mg nosiče.

Claims (1)

  1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU
    Způsob přípravy imobilizovaný jž-galaktosidasy kovalentní vazbou intatní kvasinkové buňky na pevný nosič, vyznačený tím, že permeabilizovaná nebo nepermeabilizované kvasinková buňka se při teplotě 20 °C zakotví pomocí triethylentetraminu na povrch partikulí hydroxylalkyl metakrylátového gelu.
CS594578A 1978-09-14 1978-09-14 Způsob imobilizovaní (2-galaktosidasy CS201786B1 (cs)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS594578A CS201786B1 (cs) 1978-09-14 1978-09-14 Způsob imobilizovaní (2-galaktosidasy

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS594578A CS201786B1 (cs) 1978-09-14 1978-09-14 Způsob imobilizovaní (2-galaktosidasy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS201786B1 true CS201786B1 (cs) 1980-11-28

Family

ID=5405395

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS594578A CS201786B1 (cs) 1978-09-14 1978-09-14 Způsob imobilizovaní (2-galaktosidasy

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS201786B1 (cs)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Husain β Galactosidases and their potential applications: a review
JPS5912275B2 (ja) 生物学的に活性な物質の固定化に関する改良法
JPH0338B2 (cs)
JPS5978687A (ja) 固定化酵素配合体
Chen et al. Preparation and characterization of urease immobilized onto porous chitosan beads for urea hydrolysis
US3824150A (en) Enzyme bound to polymeric sheet with a triazine bridging group
US5419902A (en) Method for inactivating pathogens
Hussain et al. Urease-Based Biocatalytic Platforms―A Modern View of a Classic Enzyme with Applied Perspectives
Kennedy et al. Application of cellulosic fast‐flow column filters to protein immobilisation and recovery
Iyengar et al. Urease bound to chitin with glutaraldehyde
Stults et al. Immobilization of proteins on partially hydrolyzed agarose beads
JPS6190672A (ja) 生理活性物質を固定した多孔性中空繊維を使用した液の処理方法
CS201786B1 (cs) Způsob imobilizovaní (2-galaktosidasy
CA1179283A (en) SUCROSE MUTASE, IMMOBILISED SUCROSE MUTASE AND THE USE OF THIS IMMOBILISED SUCROSE MUTASE FOR THE PREPARATION OF ISOMALTULOSE (6-0-.alpha.-D- GLUCOPYRANOSIDO-D-FRUCTOSE)
Smiley et al. Immobilized enzymes
Jirků et al. Modified hydroxyalkyl methacrylate gel as a support for immobilization of yeast cells
Chetty et al. Characterization of pneumococcal purpura-producing principle
CA1229808A (en) Preparation of hydrophobic cotton cloth
JPS6187700A (ja) ペプチド含有物質固定化物
WO1989008705A1 (en) Supports for proteins and amino acids
Rocha et al. Spent-grains and zeolites as potential carriers for trypsin immobilisation
Linhardt et al. Patents and literature
Ortega-Lopez et al. Lactose hydrolysis by immobilized β-galactosidase on nylon-6: a novel spin-basket reactor
KR20000011105A (ko) 고정된 미생물에 의한 이소말툴로즈의 제조방법 및 제조용 담체
CHIOU et al. Immobilization of papain on an anion exchange resin by physical adsorption followed by cross linking with glutaraldehyde