CS200377B1 - Způsob výroby exocelulárních enzymů - Google Patents
Způsob výroby exocelulárních enzymů Download PDFInfo
- Publication number
- CS200377B1 CS200377B1 CS251878A CS251878A CS200377B1 CS 200377 B1 CS200377 B1 CS 200377B1 CS 251878 A CS251878 A CS 251878A CS 251878 A CS251878 A CS 251878A CS 200377 B1 CS200377 B1 CS 200377B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- enzymes
- microorganisms
- solution
- production
- dilute
- Prior art date
Links
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 24
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 10
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 9
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 241000194107 Bacillus megaterium Species 0.000 claims description 5
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 241000187392 Streptomyces griseus Species 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 claims description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 claims 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 3
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 2
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 241000186361 Actinobacteria <class> Species 0.000 description 1
- 241000484419 Aedia Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Vynález se týká způsobu výroby exooelulárních enzymů pomocí vhodných kmenů bakterií ae aktinomycet.
Dosavadní způsoby výroby exooelulárních enzymů spočívaly v tom, že vhodné kultury bakterii nebo jiných mikroorganismů byly kultivovány 24 až 72 hodin nebo i déle ve složitých kultivačních médiích.Během růstu nebo po jeho skončení produkovaly tyto mikroorganismy do prostředí enzymy.Uvedený postup mé nevýhody v tom, že produkce enzymů je jednorázová, že během dlouhé doby kultivace trvající 24 až 72 hodin je část enzymů inaktivována a že jejich purifikace je ztížena přítomností balastních látek v mediu (US patent 3,345.269, US patent 3,748.233, US patent 3,127.327).
Tyto nevýhody odstraňuje způsob výroby exocelulárních enzy.ů podle vynálezu, jehož podstatou je, že kultura mikroorganismů, s výhodou Bacillus megaterium nebo Streptomyces Griseus, vytvořená v průběhu výroby enzymů, nebo vyprodukovaná za jiným účelem, například pro tvorbu bílkovin, vitaminů nebo antibiotik, se po skončení původní fermentace oddělí o< převážné části živné půdy a potom se inkubuje ve vodě, ve zředěném roztoku soli, nebo zředěném roztoku organických živin, popřípadě; roztoku dalších látek potřebných pro tvorbu enzymu, po dobu 10 minut až 24 hodin načež se mikroorganismy od tekutého prostředí oddělí a vytvořený enzym nebo enaymy ae buá dále purifikují nebo ponechají v eupernatantu a zpracují ovyklým způsobem, například sušením. Oddělení mikroorganismů od tekutého média a jejich následné
200 377 inkubace ve vodě, ve zředěné· roztoku aoli nebo zředěné· roztoku organických živin,popřípadě· roztoku dalších látek potřebných pro tvorbu enzyau ae nohou několikrát za aebou opakovat·
Protože velká čáet exocelulárních enzyaů je kontrolována represi, dojde za těchto podaínek k jejich intensivní tvorbě«Pokud se jedná o induktivní enzyay, přidá se do prostředí přísluáný induktor.Mikroorganiamy za těchto podmínek využívají k produkci enzyaů aainokyse, lin a dalžích látek uvolněných ze svých aakroaolekul v průběhu jejich turnoveru, zbytků Živin přinesených spolu s bionasou z předcházejícího kultivačního aédia, nebe živin dodaných v resuapenznía Médiu·
Beeuspendovaná kultura se inkubuje za vhodné teploty, například od 25 do 45 ° C, při pH 6 až 8,5 « za aerace podobu 10 ainut až24 hodin.Jakmile aktivita enzyau v prostředí dosáhne žádané velikosti, Mikrobiální bioassa se od prostředí opět oddělí.Tento postup lze několikrát opakovat. .
Výhody tohoto způsobu výroby proti dosavadníau jsou zejména: e ) Opakované-použití jíž vyrostlé bioaasy b ) Úspora živin při následná feraentaci, protože tato· aůže probíhat v chudém médiu, popřípadě i v čisté vodě, nebof odstředěná bioaesa obsahuje dostatek živin i pre další následné fermentace enzymu.
c ) Zkrácení inkubační doby třikrát až více než stokrát.
d ) Zjednodušení purifikace, protože médium použité při následné produkci enzymu neobsahuje balastní látky bud vůbec, nebo jen v nepatrném množství.
Dále jsou uvedeny příklady výroby exocelulárních enzjrjmů-dvou typů proteáz- aniž se věek předmět vynálezu omezuje pouze na tyto typy enzyaů, nebo na použité mikroorganismy.
Přikladl
Vyrostlé mycelium Streptomyces griseus bylo po skončení laboratorní fermentace antibiotika odstředěno, jednou proayto vodou a resuspendováno ve vodě obsahující 2,5 aM CaClj na hustotu odpovídající 4,8 mg sušiny/a.40 a suspenze bylo indukováno na třepícím stroji v 500 a varné baňce 24 hodin při 28 0 C. Fřoteolytická aktivita byla stanovována Ansonovou metodou ( Anson,M.L.,J.Generál.Physiol., 22, 79, 1938 ) v supematantě po odstředění aycelia j® vyjadřevána v tyroainovýeh jednotkách - TU/ a .
Proteolyticky aktivita pa 24 hodinách odpovídala 0,394 TU/a .
Příklad 2
Mycelium streptoayoes griseus přípravné podle příkladu 1 ) bylo resuspeadováno na hustotu odpovídající 4,8 mg sušiny / a v roztoku obsahujíoím 0,2 % peptonu, ff,2 % glukózy a CaClg
2,5 mlí o pH 7,5 » 40 a suspenze bylo inkubováno na třepacím stroji v 500 a varné baňce 24 hodin při 28 0 C. Proteolýtická aktivita byla stanovována Ansonovou metodou po 5 a 24 hodinách. 1 a supeřnatantu vzorku odebrepiého po 5.hodinách obsahoval 0,087 TU, po 24 hodinách 0,900 TU.
Příklad 3
Vyrostlá kultura asporogenní varianty Bacillus megaterium KM vyprodukovaná jako zdroj bílkovin, se po'skončené kultuvaci oddělila od mála centrifugací a desiment byl resuspendo3 ván aa hustotu 2,5 až 2,7 mg sušiny / m v bezdusíkovám médiu následujícího složení «
1^ΗΡ04 . 121^0 1,5 %, KI^P04 0,3 %, NaCl 0,3 %, bezvodý Na2S04 0,0125 %, MgOlg 0,08 %' , ;0a012 0,011 glukóza 0,5 % o pH 7,5 · Inkubace 50 m kultury probíhala v 500 Brlenmaýrových baňkách na třepacím stroji při 35 ° 0 1 hodinu. Potom byla kultura odstředěna a v superfaatan™ tu byla stanovována proteolytická aktivita s azokaseinem jako substrátem ( Charney J ·,Tornarelli R.M, : J.Biol.Chem. 171 : 50, 1947 · Jedna jednotka - j.odpovídá 1 yug substrátu roztápěného za 1 minutu při 37 0 0 · ' _ j
Suspenze 8,megaterium vytvořila za uvedených, podmínek za 30 minut enzym o aktivitě odpovídající 66,0 jednotek neutrální metaloproteázy /m .
Příklad 4
Suspenze Bacillus megnaterium KM vyrostlá a zpracována, jak je uvedeno v příkladu 3 byla inkubována v médiu-popsaném v příkladu 3, ale doplněném MaNO-j na koncentraci 0,4 %· Inkubace probíhala za podmínek uvedených v příkladu.3 30 minut. Potom byla kultura odstředěna a opět resuspendována v čerstvém médiu téhož složení. Resuspendovaná kultura byla třepána dalších 30 minut. Tento postup byl třikrát opakován. Supernatanty byly uchovány odděleně a byla v nich uvedeným způsobem stanovena proteolytická aktivita.
| Aktivita po prvém přenosu | 44, 5 j.neutrální metaloproteázy / m |
| druhém. | 37,2 j . |
| třetím | 36,3 j . |
| čtvrtém | 38,5 j . |
Příklad 5
Kultura Bacillus megaterium vyrostlá v syrovátce jako zdroj bílkovin byla po skončené kultuvaci odstředěna a resauspendována v 1 litru roztoku obsahujícího 0,5 % KaCl ,0,001 % MgCl2 , 0,022 % CaClg a 0,5 % glukózy. Hustota suspenze bakteriální kultury odpovídala 2p mg suěiny / m , pH prostředí bylo 7,0 . Inkubace probíhala v laboratorním tanku při 30 ° C při vzdušnění 1 vzduchu / 1 média za 1 minutu a míchání 600 otáček za 1 minutu · Inkubace trvala 40 minut. Potom byla suspenze buněk odstředěna a v supematantě stanovena proteolytická aktivita Ansonovou metodou. Aktivita neutrální metaloproteázy v 1 m odpovídala 2,00 TU ♦ Příklad 6 *
Kultura Bacillus megaterium vyrostlá jak je uvedeno v příkladě 5 ) byla resuspendována na hustotu 20 mg suěiny / m v 1 módia složeného z 9.dílů roztoku uvedeného v příkladu 5 ) , z něhož byla vypuštěna glukóza a jednoho dílu supernatantu vzniklého ze syrovátkového média po odstředění budek po skončení původní kultuvace. Inkubace probíhala 20 minut za podmínek uvedených v příkladu 5 · Proteolytická aktivita v 1 m supernatantu stanovená podle Ansona odpovídala 1,42 TU»
Proteolytická enzymy jsou využitelné zejména v koželužství, při výrobě pracích prášků a v potravinářském průmyslu, zejména mlékárenském při výrobě sýrů.
Claims (2)
- PŘEDMĚT V-Y N £. L E Z U1· Způeob výroby exocelulárních enzymů, vyznačený tím, že kultura mikroorganismů, β vý·)» hodou Bacillus megaterium nebo Streptomyces griseus, vytvořená v průběhu výroby enzymů, netyg vyprodukovaná za jiným účelem, například pro tvorbu bílkovin, vitaminů nebo antibiotik, se po skončení původní fermentace oddělí od převážné části živné půdy a potom se inkubuje ve vodě, ve zředěném roztoku solí, nebo zředěném roztoku organických živin, popřípadě dalších látek potřebných pro tvorbu enzymu, po dobu 10 nťinut až 24 hodin načež se mikroorganismy od tekutého prostředí oddělí a vytvořený enzym nebo enzymy se buá dále purifikují nebo ponechají v supernatantu a zpracují obvyklým způsobem, například sušením.
- 2. Způsob podle bodu 1, vyznačený tím, že oddělení mikroorganismů od tekutého média a jejioh inkubace ve vodě, ve zředěném roztoku solí, nebo zředěném roztoku organických živin, případně roztoku dalšíoh látek potřebných pro tvorbu enzymu se několikrát za sebou opakují.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS251878A CS200377B1 (cs) | 1978-04-19 | 1978-04-19 | Způsob výroby exocelulárních enzymů |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS251878A CS200377B1 (cs) | 1978-04-19 | 1978-04-19 | Způsob výroby exocelulárních enzymů |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS200377B1 true CS200377B1 (cs) | 1980-09-15 |
Family
ID=5362565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS251878A CS200377B1 (cs) | 1978-04-19 | 1978-04-19 | Způsob výroby exocelulárních enzymů |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS200377B1 (cs) |
-
1978
- 1978-04-19 CS CS251878A patent/CS200377B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4323651A (en) | Thermostable lactase derived from bacillus | |
| US4248966A (en) | Synthesis of isopenicillin derivatives in the absence of living cells | |
| US3136704A (en) | Manufacture of gentamycin | |
| US5252481A (en) | Mutant of bacterium Clostridium histolyticum, a process for the obtaining thereof, and its use in the production of clostripain-free collagenase | |
| US4828998A (en) | Bacteriolytic enzyme product from streptomyces, a process for its preparation, and a strain suitable for this purpose | |
| Al-Juamily et al. | Optimization conditions of production fibrinolytic enzyme from Bacillus lichniformis B4 local isolate | |
| US4492756A (en) | Microorganisms of the genus Hyphomicrobium and process for degrading compounds wich contain methyl groups in aqueous solutions | |
| US3843442A (en) | Immobilized glucose isomerase | |
| WO2005098014A1 (en) | Microbe method for producing valienamine and validamine | |
| US3697378A (en) | Dextrinization of starch with alph-amylase from bacillus coaculans | |
| US4179335A (en) | Thermostable lactase derived from Bacillus coagulans | |
| RU2193063C2 (ru) | Бактериолитический комплекс, способ его получения и штамм для осуществления способа | |
| CS200377B1 (cs) | Způsob výroby exocelulárních enzymů | |
| RU1549227C (ru) | Способ получения комплекса литических ферментов | |
| RU2310685C1 (ru) | Штамм бактерий serratia marcescens, продуцирующий липолитические ферменты, для получения препарата для очистки сточных вод от жиров | |
| DK143714B (da) | Fremgangsmaade til hydrolyse af lactose under dannelse af glucose og galactose | |
| Wahyuni et al. | Isolation and characterization of amylase-producing microbes from the digestive tract of tilapia | |
| US2602043A (en) | Method for producing tyrothricin | |
| NZ221455A (en) | Microbial production of cellulose | |
| SU471380A1 (ru) | Способ получени ферментного препарата дл свертывани молока | |
| KR19980025285A (ko) | 신규한 바실러스 서브틸리스 sy8-24(kfcc-11027)와 대두박을 이용한 대량생산 방법 | |
| UA75352C2 (en) | STRAIN OF BACTERIUM BACILLUS CIRCULANS B-65 û PRODUCER OF CYCLOMALTODEXTRINGLUKANOTRANSFERASE, METHOD FOR ISOLATION THEREOF AND USE FOR THE PREPARATION OF ?-CYCLODEXTRIN | |
| SU885253A1 (ru) | Штамм @ фу-79,продуцент L-амилазы и протеазы | |
| Leonhartsberger et al. | Use of collagen hydrolysate as a complex nitrogen source for the synthesis of penicillin by Penicillium chrysogenum | |
| Yuliatmo et al. | Exploring the potential of proteolytic bacteria for keratinase enzyme synthesis: Study on isolation and screening |