CS200022B1 - Sposob izoláoie cefalosporinu C z fermentačnsj pody - Google Patents

Sposob izoláoie cefalosporinu C z fermentačnsj pody Download PDF

Info

Publication number
CS200022B1
CS200022B1 CS369078A CS369078A CS200022B1 CS 200022 B1 CS200022 B1 CS 200022B1 CS 369078 A CS369078 A CS 369078A CS 369078 A CS369078 A CS 369078A CS 200022 B1 CS200022 B1 CS 200022B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
cephalosporin
isolation
aqueous
pat
solution
Prior art date
Application number
CS369078A
Other languages
Czech (cs)
English (en)
Inventor
Richard Frimm
Eva Lucinova
Ladislav Welward
Original Assignee
Richard Frimm
Eva Lucinova
Ladislav Welward
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Richard Frimm, Eva Lucinova, Ladislav Welward filed Critical Richard Frimm
Priority to CS369078A priority Critical patent/CS200022B1/sk
Publication of CS200022B1 publication Critical patent/CS200022B1/sk

Links

Landscapes

  • Cephalosporin Compounds (AREA)

Description

Vynález sa týká sposobu izolácie cefalosporinu C z fermentačnej pody pri súčasnom snížení obsahu nežiadúcich nečistot v Izolovaném produkte.
Izoláola a Čistenia cefalosporinu C navazuje na jeho přípravu fsrmentačnou cestou. Je známe, že keá fsrmsntujeme živná mádlům určitými mlkroorganlzmarni například kmeňom Cephaloeporium acrsmonlum ATCC 14553 obsahuje mádlům biologicky aktívnu látku /Craeford K. a kol.: Zntlbiotio productlon by a species of Cephaloeporium. J. Cen. Mlcrobiol. 6 /1952/, str. 47 - 59} Newton Q. G, F., Abraham E. P.j Cephaloeporium C a new antibiotlc containlng sulphur and 0-aminoadlpic acld. Nátuře 175 /1955/, str. 548; Hewitt W, L.s The čepil alospor ins. The Journal of Infeetlons Dissares 128 /1973/, str. 312. Tieto ferraentačná postupy sú uvedené tiež vo Svajčiarakych patentech 565246, 570459, 570460, v NSR pat. č.
492 053, 2 239 321, USA pat. č. 3 082 155, v brit. pat. č. 820 422. Tieto patenty obsahujú tisž postupy získavanla a čistenia cefalosporinu C zo surověj fermentačnsj pody, zahrnu júce tieto následné operácie: acldifikácia, flltrácla, dekolorizácia, odstránenie anorganických lontov, adsorpclu antibiotika a elúclu. Bodla iných izolačnýeh postupov napr. US pat. č. 3 739 002, 3 931 161, 3 835 129, NSR pat. č. 2 157 693, 2 255 973, pat.
ZSSR č. 282 174 aa cefalosporín C z fermentačnsj pody získává vo formo roznych N-halogenalkanoyl čl N-benzoyl dsrlvátov, ktoré sa áalsj prevedú na soli.
Významnou skupinou izolačnýeh postupov sú postupy založená na principe delenia bázických a aoidických látok pomocou syntetických ionexov. Tieto Izolačné postupy a roznými
200 022
200 022 úpravami fermentačnej pody, obměnami použitých ionexov a kombinácii ionexov rozneho stupňa bázicity, resp. acidity popisuje například franc. pat. o, 1 210 823, USe«a»t. č. 3 467 654, pat. NSR č. 1 125 564 a 1 617 456 a švéd. pat. č. 215 561.
Hydrofilné antibiotiká, medzi ktoré patří tiež cefalosporín C sa móžu zo zložitých zmesi napr. zo surověj fermentačnej pody obsahujúoej velké množstvo organických a anorganických zlúčenín, získal pomocou makroporéznych neionogénnych aorbentov typu Amberlite XAD-2, resp. XAD-4, Diaion HP-20, resp. Ostion SP-1, reep. SP-2.
Izolácia týmito spoeobmi je uvedené napr. v US pat. č. 3 725 400, švéd. pat, č.
541 579 a v pat. ZSSR č, 350 265. Podía uvedených spósobov sa antibiotikum získané pomocou neionogénnych sorbentov áalej purifikuje na slabo béziokýeh anexoch /napr. typu Amberlite IRA-68, IR-4B, IR-45, XB-265 alebo IMAC A 131 a A 17 i?/.· Z takto přečištěného filtrátu sa može po jeho prípadnom zahuštění Izolovat cefalosporín’0 buá vo formě voínej kyseliny, alebo vo formě solí s alkalickými kovmi, reep. kovmi alkalických zemin, amonných solí, či eolí s organickými bázemi, alebo tiež vo formě lažkorozpuetných komplexov e tažkými kovmi ako sú Cu, Hg, Mn a hlavně Zn, Kvalita Zn komplexu a rýchlosl jeho zrážania eú vo veíkej miere závislé od obsahu znečistenín, hlavně rozkladných tiobuténových kyselin, vznikajúcich v priebehu bioeynťézy cefalosporínu C z metloníau /F, Benz aj.: Metionine Metaboliem and CFS-C Synthesis in Cephaloeporium acremonium. Eur. J„ Bleohem. 20 /1971/, etr. 81-88}
J, Nueeoh H, J. Treichleť: Genet. Ind, Macroorg., Prague, 1973, etr. 324-325/.
Purifikácia cefalosporínu C si doteraz vyžadovala dvojstupňový postup, pozostávajúol z čistenia na neionogénnych živiciach a néslednom čistění na snexe.
Túto zložitosl doterajších izolačných postupov odstraňuje předložený vynález, ktorého predmetom je spóeob Izolácie cefalosporínu C z fermentačnej pódy upravenej močovinou, spracováním filtrátu okyalenej fermentačnej pódy neionogénnymi sorbentami, deeorpoiou vodným roztokom n-butanolu alebo acetátovým tlmivým roztokom a vyzréžaním cefalosporínu C z eluátov do formy voínej kyseliny, nerozpustných solí, alebo zrážaním v podobě lažko rozpustných komplexov,
Týmto sa celý postup zjednodušuje na jednoetupňovú purifikáciu na živiciach bez dočieíovánia na anexe.
Cefaloeporin C ea eorbuje na živicu z roztoku - obvykle z filtrátu fermentačnej pódy - kde je přítomné aj veíké množstvo látok podobných tomuto antibiotiku z híadiska fyzikálně j a chemlckej povahy, Cefaloeporin C ea adsorbuje kvantitativné, neadeorbuje ea však vačšia časl nečistot, ktoré přešli ešte do filtrátu zo surověj fermentačnej pódy.
Antibiotikum naadeorbované na eorbente sa z něho desorbuje 3 až 6,5% vodným roztokem n-butanolu, alebo 0,05 až 1 M vodnými roztokmi aoetátového tlmivého roztoku o pH 4,0 až 7,0.
Vhodná pracovně oblasl pH neionogénnych eorbentov je 1 až 8 s výhodou 2 až 3. Na túto hodnotu sa surová fermentačná póda, predom upravená s 5 až 10 mg/ml močoviny, obeahujúca cefalosporín C može upravil buá katexami v H* formě, alebo róznymi kyselinami, najČaetej šie kyselinou sírovou, chlorovodíkovou, fosforečnou, šlavelovou, Ako neionogenné sorbenty pre izoláoiu cefalosporínu C dobré použiteíná eú syntetické živice o veíkoeti pórov 4 až 20 mm, mernom povrchu 100-1000 m2/g a veíkoeti častíc 0,3 až 1 mm. Sú to například eorben3
200 022 ty typu Oetion SP-1 a SP-2, Amberlité XAD-2 a XAD-4, Diaion HP-20, ktoré aú kopolymérmi styrénu s divinylbenzénom. Sorbenty sa regenerujú vodnými alebo vodno-acetonovými alkalickými roztokmi napr. 25% vodným roztokom acetonu, obsahujúcim 2 % NaOH. Výhodná je tiež regenerácia vodným roztokom NaOH s následným premývaním živice acetónom. Na regeneráciu sa móže tiež použil vodný roztok alkalického chlornanu a zbytok oxidovadla odstránit vhodným redukčným činidlom.
Z takto získaných eluátov obsahujúcich rozpuštěný cefalosporín C sa vyzráža cefalosporín C vo formě nerozpustných solí alebo komplexov z lažkými kovmi,
Prednoslou postupu izolácie cefalosporínu C podía předloženého vynálezu je zjednodušené získanie antibiotika sposobom zaistujúcim súčasne získanie produktu z dostatoČnou čistotou potřebnou napr. pre chemickú konverziu na 7-aminocefalosporínovú kyselinu, Predmet vynálezu je áalej podložený príkladmi, ktoré však rozsah vynálezu neobmedzujú.
Příklad 1
K surověj fermentačnej pode sa přidá 10 mg/ml močoviny a hodnota pH sa upraví s kyselinou sírovou zriedenou s vodou v pomere 1 »4 na pH 2,6, Biomasa a áalšie zložky sa oddelia a získá sa číry roztok z obsahom 3000/x4g/ml cefalosporínu C. 5000 ml tohoto filtrátu sa podrobí perkolácii cez 4000 ml Ostionu SP-1 pri memom zaležení 1 hodina*1. Zbytok adsorbátu sa odstráni dvomi litrami vody. Zo sorbentu ea cefalosporín C eluuje 6,2% vodným roztokom n-butanolu. Získá sa 2540 ml hlavných eluétových frakcii obsahujúcich 4300,/tg cefalosporínu C v 1 ml eluátu. K takto získanému eluátu sa za chladenia a miešania přidá 5 mg octanu zinočnatého v pevnej formě na 1 mg cefalosporínu C přítomného v eluáte. Po 30 minutách miešania sa ešte přidá 2500 ml acetonu. Po 5 hodinách miešania pri teplote 3 až 5 °C sa v matečných lúhoch nameralo 200^/tg cefalosporínu C v 1 ml. Vylúčený, lažko rozpustný Zn-komplex cefalosporínu C sa oddělí, premyje studenou vodou, acetonem a vysuší. Týmto postupom sa získá 11,8 g Zn-komplexu CPS-C o čistotě 85,3 %.
Použitý sorbent Ostion SP-1 sa regeneruje 1212% vodného roztoku NaOH. Náplň sa potom premýva 2 1 vody, 411% kyseliny sírovej a potom znovu 8 1 vody. Za týmto sa náplň premyje 151 acetonu a nakoniec sa dokonale premyje vodou. Měrné zalaženie vo všetkých
Μ — 1 stupnoch sa pohybovalo v rozmédzí 1 až 2 hodiny .
Příklad 2
Postupuje sa ako v příklade 1, s tým rozdielom, že na elúciu cefalosporínu C zo sorbentu sa použije 3,2% vodný roztok n-butanolu a filtrát sa spracuje na sorbente Diaion HP-20, Na 250 ml náplně Diaion HP-20 sa adsorbuje 500 ml kyslého filtrátu obsahujúceho 3400/Ag/ml cefalosporínu C. Po desorpcii cefalosporínu C zo sorbentu za použitia vyššie uvedeného eluentu sa namsria v eluétoch 73 % z povodně purifikovaného množstva cefalosporínu C, K eluátu, ktorý obsahuje 7500/cg cefalosporínu C v 1 ml, Ba přidá 8 mg octanu zinočnatého na 1 mg cefalosporínu C a potom 1,25 ml acetonu na 1 ml eluátu. Získá sa 1,3 g Zn-komplexu cefalosporínu C o čistotě 80 %.
200 022
Použitý sorbent Diaion HP-20 sa regeneruje postupom uvedeným v příklade 1,
Příklad 3
Postupuje sa ako v příklade 1, s tým rozdielom, že na desorpciu cefalosporínu C zo sorbentu SP-1 sa použije 0,2 M vodný roztok octanu amónneho o pH 5,5. 5000 ml filtrátu získaného postupom v příklade 1 a obsahujúcom 2850 z«g/ml cefalosporínu C sa purifikuje na sorbente Ostion SP-1. Po dssorpcii cefalosporínu C za použitia hoře uvedeného roztoku octanu amónneho sa získá 3100 ml hlavných eluátových frakcií, ktoré obsahovaly δΟδΟ^β/ιηΙ cefalosporínu C. V sekundárných eluátových frakoiách sa nameria 5,2 % z povodně purifikovaného. množstva cefalosporínu C. Hlavné eluátové frakcie sa rozdelia na dve časti a připraví sa
A
Zn-komplex cefalosporínu C nižáie uvedenými sposobmi.
Jedna část eluátov sa zráža 8 mg octanu zinočnatého na 1 ml cefalosporínu C a 1 ml acetonu na 1 ml eluátu. Získá sa 8,6 g Zn-komplexu cefalosporínu C o čistotě 81,5
V druhej časti eluátov sa hodnota pH z povodněj 4,7 upraví s hydroxidom amonným na hodnotu 5,3 a potom sa zráža ako v prvej časti. Získá sa 8,1 g Zn-komplexu cefalosporínu C o čistotě 77 %.
Příklad 4
500 ml filtrátu sa purifikuje na 250 ml náplně sorbentu Diaion HP-20 sposobom uvedeným v příklade 3, s tým rozdielom, že na elúciu sa použije 0,05 M octan amónny o pH 4,2. Získá sa sluát obsahujúci VSOO^g/ml cefalosporínu 0, v ktorom js přítomné 75 % z purifikovaného množstva cefalosporínu C. Z takto získaného eluátu sa postupom uvedeným v příklade 1 připraví Zn-komplex cefalosporínu C o čistotě 87 %.
Příklad 5
Postupuje sa ako v příklade 3, s tým rozdielom, že cefalosporín C sa zo sorbentu SP-1 desorbuje 1 M vodným roztokom octanu amónneho o pH 6,9 a na vyzrážanie Zn-komplexu cefalosporínu C z eluátu sa použije 10 mg octanu zinočnatého na 1 mg cefalosporínu C a 1,5 ml acetonu na 1 ml eluátu. Získá sa jemná zrazenina Zn-komplexu cefalosporínu C o čistoto 80 % a množstve 68 % z purifikovaného množstva cefalosporínu C.
PREDMET VYNÁLEZU

Claims (3)

PREDMET VYNÁLEZU
1· Spósob izolácie cefalosporínu C z fermentačnej pódy, βpracováním získaného filtrátu okyslenej fermentačnej pódy neionogsnnými sorbentami vyznačujúci sa tým, že desorpcia na živici adsorbovaných zložiek sa robí elúolou vodným roztokom n-butanolu, alebo acetátovým tlmivým roztokom, pričom z takto získaných bohatých eluátov sa získajú vyzráža5
200 022 ním íažko rozpustné soli, alebo komplexy cefalosporínu C, ktoré sa odseparujú a vysušia,
2. Sposob podía bodu 1, vyznačujúci sa tým, že ako elučné činidlo sa použije 3 až 6,5% vodný roztok n-butanolu.
3. Sposob podía bodu 1, vyznačujúci sa tým, že ako elučné činidlo sa použije 0,05 až 1,00 M acetátový tlmivý vodný roztok zložený z kyseliny octovej a hydroxidu amonného, majúci pH 4,0 až 7,0.
CS369078A 1978-07-07 1978-07-07 Sposob izoláoie cefalosporinu C z fermentačnsj pody CS200022B1 (sk)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS369078A CS200022B1 (sk) 1978-07-07 1978-07-07 Sposob izoláoie cefalosporinu C z fermentačnsj pody

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS369078A CS200022B1 (sk) 1978-07-07 1978-07-07 Sposob izoláoie cefalosporinu C z fermentačnsj pody

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CS200022B1 true CS200022B1 (sk) 1980-08-29

Family

ID=5377695

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS369078A CS200022B1 (sk) 1978-07-07 1978-07-07 Sposob izoláoie cefalosporinu C z fermentačnsj pody

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS200022B1 (sk)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US2541420A (en) Purification of streptomycin by carboxylic acid type ion exchange resins
GB2133005A (en) Purification of anthracycline glycosides
US3725400A (en) Process for the recovery of hydrophilic antibiotics
US4440753A (en) Purification of glycopeptide antibiotics using non-functional resins
US5149784A (en) Process for making vancomycin
SK832006A3 (sk) Spôsob izolácie polymyxínu B z vyfermentovanej pôdy
EP0640095B1 (en) Process for making vancomycin
US2789983A (en) Recovery of cycloserine
CS200022B1 (sk) Sposob izoláoie cefalosporinu C z fermentačnsj pody
US2656347A (en) Streptomycin broth clarification with sequestering agents
US2793978A (en) Ion exchange purification of neomycin
US5574135A (en) Process for making vancomycin
US3983108A (en) Antibiotic purification process
US4987229A (en) Purification of salts of riboflavin 5'-phosphate, in particular of monosodium riboflavin 5'-phosphate
DE1492229A1 (de) Verfahren zur Gewinnung von kristallinem Insulin
US3493558A (en) Purification of adenosine triphosphate
DE1966849A1 (de) Schwerloesliche schwermetallkomplexe von cephalosporin c und deren verwendung zur herstellung von 7-aminocephalosporansaeure
US2709669A (en) Process for separating vitamin b12 active substances from contaminants
Chaiet et al. Phosphonomycin: Isolation from fermentation sources
US3005815A (en) Ion exchange recovery of neomycin from crude culture broths
US4115644A (en) Process for preparing pure cefamandole from alkali metal and ammonium salts thereof
US3124590A (en) Recovery of cycloserine
US2505318A (en) Recovery and purification of antibiotics
US4196285A (en) Antibiotic purification process
US2643210A (en) Vitamin b12-active substance elution from montmorillonite absorbent