CS199123B1 - Spósob odstraňováni» nukleových kyselin z roztoka bielkovín - Google Patents
Spósob odstraňováni» nukleových kyselin z roztoka bielkovín Download PDFInfo
- Publication number
- CS199123B1 CS199123B1 CS145678A CS145678A CS199123B1 CS 199123 B1 CS199123 B1 CS 199123B1 CS 145678 A CS145678 A CS 145678A CS 145678 A CS145678 A CS 145678A CS 199123 B1 CS199123 B1 CS 199123B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- nucleic acids
- column
- buffer
- removal
- washed
- Prior art date
Links
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims description 18
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims description 18
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 8
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 5
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims description 4
- -1 polyethylene Polymers 0.000 claims description 3
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 2
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 claims 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 claims 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 claims 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims 1
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 8
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 8
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 3
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000124033 Salix Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- DUCUNRPXPGBAAA-UHFFFAOYSA-N acetic acid;[bis(hydroxymethyl)amino]methanol Chemical compound CC([O-])=O.OC[NH+](CO)CO DUCUNRPXPGBAAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002382 proteosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Description
Vynález sa týká sposobu odstránenie nukleových kyselin kolonovou iontomenidovou ehromatografiou od bielkovín za použitia anexového iontomenlda připraveného naviazanim polyetyleniminu na karbaxymetyl skupinu celulózy, dextranu, alebo polyakx*ylamidu, pridom ea využívá schopnosti tohto chromatograflckého mádla vlazal sa a nukleovýml kyselinami pevneJšie ako s blelkovinaml.
Nukleové kyseliny predstavujú znadnú žasl vyaokopolymárneho materiálu buňky. Vzhladom k tomu, že sa zúdastňujú základných biologických procesov a majú výrazný negativný náboj, vlažu aa β oetatnýml zložkarni buňky, najma vSak a blelkovinaml.
Pre ozoláciu nukleových kyselin od bielkovín bolo vypracovaných viacero metod (napr. extrakoia fenolom, inaktlvácia bielkovín sodnou eolou dodecylsulfátu at3.). VSetky tieto metody spósobujú denaturáclu bielkovín. Doteraz nemáme k dispozíoii jednoduchý apóeob elimináoie nukleových kyselin z roztoku bielkovín. NajdasteJSie sa nukleové kyseliny odetraňujú z roztoku bielkovín zrážaním etreptomycín eulfátom. Tento spósob je nevýhodný najma v týoh případech, keS sa izolujú enzýmy pre proteosyntetický systám in vitro. ĎalSí spdsob odstraňovania nukleových kyselin je zrážanle polyetylenglykolom. Nevýhoda tohto spóaobu je nereprodukovatelnoel výaledkov. Spósob elimináoie nukleových
199 123 kyselin z roztoku bielkovín zrážanlm roztoku polyetylenlmlnom má nevýhodu v tom, Se pri solublllzécll bielkovín z preelpitátu sa používajú velké objemy tlmlvých roztokov v ddsledku čoho v získanom roztoku je nízká koneentrácia bielkovín, čo slažuje 3alSí postup Izolácie enzýmov.
Tieto nevýhody odstraňuje spósob ellmlnácle nukleových kyselin kolonovou chromatograflon aa použitia lontomsnlča připraveného reakclou karboxymetyl-celulózy a polyetylénlminom, při ktorom sa využívá schopnosti tohto ohromatograflckého média vlazal sa e nukleovýml kyselinami pevnejále ako s blelkovlnaml. Vlazané blslkovlny sa z lontomsnlča uvolňujů premývaním tlmlvým roztokom od pH 7 do pH9 o lónovej sile O.25M a nukleové kyseliny tlmlvým roztokom od pH 7 do pH 9 a lónovej sile vySSeJ ako 1M.
Příklad 1
Postupuje sa pri tom tak, Se 5g karboxymetylcelulózy sa dekantuje destilovanou vodou a potom 200 ml 2M NaOH. Karboxymetylcelulóza aa přemývá vodou aš hodnota pH klesne na 8. Potom sa přidá 200 ml HC1 a po 1 hodlnovom stáni sa přemývá destilovanou vodou do pH 5.0. Takto aktivovaná celulóza sa premieěa s 20 ml 5 % polyetylénlminu v tlmivom roztoku obsahujúcom O.OUí Tris-hydroxymetyl-amlnometan pH 7,2 a lmM 2-merkaptoetanol.
Po 24 hodlnovom intenzívnom mlešaní sa suspenzia nanesie na kolonu 2x15 cm a premýva ea 1000 ml tlmivého roztoku, ktorý obsahuje 0,01M Tris-hydroxymetyl-amlnoetan pH 8,0, lodí ehelatom III a 2M ohlorid draselný. Potom sa premýva opat 500 ml tlmivého roztoku hoře uvedeného zloženia, ktorý obsahuje miesto 2M chloridu draselného 0.1M ohlorid draselný. Na kolonu 1,5x5 cm sa rýchloslou lml/mln. nanieslo 100 mg hovadzieho ssrumalbumínu v 5 ml tlmivého roztoku uvedeného zloženia, ktorým kolona bola premytá objemom 50 ml. Uvoiňevanle albumí&á z lontomsnlča sa sledovalo pomocou UV-analyzátora. Hlučná rýchloal bola lml/mln. Za týchto podmienok sa z kolony neuvolňovala žiadna blelkovlna. Ďalej sa eluovalo tlmlvým roztokom uvedeného zloženia, ktorý ešte obsahoval 0.3M chlorid draselný. Za týchto podmienok sa uvolnila z chromatograflckého média prakticky váetka nanesená blelkovlna. Ďalej sa kolona premývala 50 ml 0,5M KC1. Nakoniee sa kolona premyla 50 ml 1M KC1 v uvedenom tlmivom roztoku. 1 ml tohto připraveného chromatografickáho mádla vlaže z tlmivého roztoku obsahujúceho 0.01M Tris-hydroxymetyl-amlnoetan pH 8, lmM ehelatom III a Ο,ΙπΜ 2-merkaptoetanol, minimálně 100 mg hovadzieho serumalbumínu.
Na túto kolonu sa za podmienok ako pri nanéSaní bielkovín nanieslo 15 mg kvaanlčnej ribonukleováj kyseliny. Výsledky sú uvedené v tab. 1. Takto premytá kolona je schopná opal vlazal RNK, čo svědčí o tom, že elúcia tohto chromatograflckého média vysokou ionovou silou /211 KOI/ pri pH 8.0 nsuvolňuje vazbu medzi karboxymetylovou skupinou a polyetylenlmlnom.
Tabulka ¢.1
Vazba kvasnlčnej RNA na IEI-CM-celulózoveJ kolona. (Nanesené 15 mg RNA).
| Koncentrácla chloridu draselného v tlmivom elučnom roztoku | Množstvo uvolněněj RNA v mg | % uvolněněj RNA vzhíadom ne nanesené množstvo |
| 0.1M | 0 | 0 |
| 0.2M | 0,005 | 0,03 |
| 0.5M | 0,08 | 0,5 |
| 1M | 14,9 | 99,47 |
| 2M | 0 | 0 |
Přiklad 2
Za použitia chromatogreflckého média připraveného podlá příkladu 1 sa odstranujú nukleové kyseliny zo surového buňkového extraktu S. aureofaclene tak, že k 10 ml HSI-CM celulózy sa přidá 30 ml hrubého buňkového extraktu S. aureofaclene v tlmivom roztoku obeahujúcom 0,3M KC1, získaného mechanickou dezintegréclou 50 g vlhkých buniek. Tento surový extrakt mé značný obsah nukleových kyselin, poměr abeorbancie 280/260 = 0,53.
Fo dvojhodinovom mieáaní pri 4 °C surového extraktu β FEI-CM celulózou sa zmes centrifu~ govala a v aupernatante značné pokleeol obsah nukleových kyselin (poměr abeorbancie 280/260 - 1,15) viá tab. č. 2.
Tabulka č. 2
Odstránenie nukleových kyselin zo surového buněčného extraktu.
| * | Absorbancia /nm/ | ||
| 280 | 260 | 280/260 | |
| Pdvodná vzarka | 0,63 | 1,17 | 0,53 |
| Po spracovaní e íEI-CM-eelulózou | 0,575 | 0,45 | 1,16 |
Claims (1)
- Sp&sob odstraňovaní® nukleových kyselin z roztoku blelkovín vyznačujúci sa tým, Se sa zmes blelkovín a nukleových kyselin získané z biologických materiálov v tlmivom roztoku o lonovej eile 0.25M a pH 7.0 - 9.0, nanesle na kolonu e iontoneničom připraveným reakciou polyetylenlmlnu e karboxymetylovou skupinou viazanou na inertný nosič, například celulózu, polydextran, polyakrylamid a premýva sa tlmivým roztokom o ionovej sile O.25M při ρΗ7·0 - 9.0.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS145678A CS199123B1 (sk) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Spósob odstraňováni» nukleových kyselin z roztoka bielkovín |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS145678A CS199123B1 (sk) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Spósob odstraňováni» nukleových kyselin z roztoka bielkovín |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS199123B1 true CS199123B1 (sk) | 1980-07-31 |
Family
ID=5348982
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS145678A CS199123B1 (sk) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Spósob odstraňováni» nukleových kyselin z roztoka bielkovín |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS199123B1 (sk) |
-
1978
- 1978-03-08 CS CS145678A patent/CS199123B1/sk unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mainwaring et al. | The use of deoxyribonucleic acid–cellulose chromatography and isoelectric focusing for the characterization and partial purification of steroid–receptor complexes | |
| Eichholz et al. | Studies on the organization of the brush border in intestinal epithelial cells: I. Tris disruption of isolated hamster brush borders and density gradient separation of fractions | |
| van der Westhuyzen et al. | A new procedure for the isolation and fractionation of histones | |
| Kish et al. | Ribonucleoprotein organization of polyadenylate sequences in HeLa cell heterogeneous nuclear RNA | |
| SU688124A3 (ru) | Способ отделени протеинов | |
| Beeckmans et al. | A New Purification Procedure for Fumarase Based of Affinity Chromatography: Isolation and Characterization of Pig‐Liver Fumarase | |
| US4303650A (en) | Process for production of erythropoietin | |
| Leser et al. | Reverse micelles in protein separation: the use of silica for the back‐transfer process | |
| US4909944A (en) | Removal of metal ions from aqueous solution | |
| Montecucco et al. | ATP binding to bovine heart cytochrome c oxidase. A photoaffinity labelling study | |
| US20150184149A1 (en) | Agent and kit for isolating nucleic acids | |
| Adler et al. | Solubilization and characterization of a platelet membrane ADP-binding protein. | |
| JPS6356501A (ja) | アフイニテイークロマトグラフイー用カラム充填剤及びその製造方法 | |
| Beaudet et al. | Formiminotransferase· cyclodeaminase from porcine liver An octomeric enzyme containing bifunctional polypeptides | |
| Andersson | Recognition of phosphate groups by immobilized aluminium (III) ions | |
| Uren | Affinity chromatography of proteolytic enzymes | |
| CS199123B1 (sk) | Spósob odstraňováni» nukleových kyselin z roztoka bielkovín | |
| JPS61205217A (ja) | γ‐グルタミン酸単位を有する高システインペプチド、その製造方法および用途 | |
| CA1232850A (en) | Purification of superoxide dismutase | |
| Kamra et al. | Crosslinked concanavalin AO-(diethylaminoethyl)-cellulose—an affinity medium for concanavalin A-interacting glycoproteins | |
| Harada et al. | Purification and properties of bovine dental-pulp alkaline-phosphatase | |
| US5976382A (en) | Removal of proteins from aqueuos media by precipitation | |
| Vennegoor et al. | Effect of a Purified Post‐Microsomal Fraction on Amino Acid Incorporation in vitro | |
| Kawade et al. | [74] Purification of L cell interferon | |
| Schwabe | Peptide hydrolases in mammalian connective tissue. II. Leucine aminopeptidase. Purification and evidence for subunit structure |