CS199123B1 - Method for removal of nucleic acids from proteins solution - Google Patents
Method for removal of nucleic acids from proteins solution Download PDFInfo
- Publication number
- CS199123B1 CS199123B1 CS145678A CS145678A CS199123B1 CS 199123 B1 CS199123 B1 CS 199123B1 CS 145678 A CS145678 A CS 145678A CS 145678 A CS145678 A CS 145678A CS 199123 B1 CS199123 B1 CS 199123B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- nucleic acids
- column
- buffer
- removal
- washed
- Prior art date
Links
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims description 18
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims description 18
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 11
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 8
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 5
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 claims description 4
- -1 polyethylene Polymers 0.000 claims description 3
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims description 2
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 claims description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 claims 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 claims 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 claims 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 claims 1
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 8
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 8
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 3
- 239000012501 chromatography medium Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000124033 Salix Species 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- DUCUNRPXPGBAAA-UHFFFAOYSA-N acetic acid;[bis(hydroxymethyl)amino]methanol Chemical compound CC([O-])=O.OC[NH+](CO)CO DUCUNRPXPGBAAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002382 proteosynthetic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Description
POPIS VYNÁLEZU
K AUTORSKÉMU OSVEDČENIU
ČESKOSLOVENSKÁSOCIALISTICKÁREPUBLIKA( 19 ) 199123 I") (Bl) (61) (23) Výstavná priorita(22) Přihlášené 08 03 78(2t) PV 1456-78 (51) Intci? C 07 H 21/00
ÚŘAD PRO VYNÁLEZY
A OBJEVY (40) Zverejnené 17 09 79(45) Vydané 30 09 82
Autor vynálezu SlMUTH J0ZSF lng.CSc.
ZELINKA JÁN doc.lng.DrSc.TURŇA JÁN, BRATISLAVA (54) SpÓsob odstraňovania nukleových kyselin g roztoka blelkovín
Vynález sa týká aposobu odetránenla nukleových kyselin kolonovou lontomenidovouchromátografiou od blelkovín za použltla anexového iontomenlda připraveného naviazanímpolyetylenlminu na karbaxymetyl skupinu celulózy, dextranu, alebo polyakrylamldu, pridomsa využívá schopnosti tohto chromatograflckého média vlazal sa s nukleovýml kyselinamipevnejéle ako s blelkovinaml.
Nukleové kyseliny představuji! značné Sasi vysokopolymérneho materiálu buňky.Vzhladom k tomu, Se sa zúčastňuji! základných biologických procesov a majú výrazný nega-tivny náboj, vlažu sa s ostatnýml složkami buňky, najma vSak s blelkovinaml.
Pre ozoláciu nukleových kyselin od blelkovín bolo vypracovaných viacero metod(napr. extrakcia fenolom, inaktlvácia blelkovín sodnou soiou dodecylsulfátu at3.). VSetkytleto metody spdsobujú denaturáclu blelkovín. Soteraz nemáme k dispozícii jednoduchýspdsob eliminácie nukleových kyselin z roztoku blelkovín. NajdasteJSie sa nukleové kyse-liny odstraňuji! z roztoku blelkovín zráSaním streptomycín sulfátem. Tento spóeob jenevýhodný najma v tých případech, ke3 sa izolujú enzýmy pre proteosyntetický systém invitro. Ďaléí spdsob odstraňovania nukleových kyselin je zrážanle polyetylenglykolom.Nevýhoda tbhto spósobu je nereprodukovatelnosl výsledkov. SpÓsob eliminácie nukleových 199 123 2 199123 kyselin z roztoku blelkovín zrážanlm roztoku polyetylenlmlnom má nevýhodu v tom, Se přisolubllizácil blelkovín z přeclpitátu sa používají! velké objemy tlmivých roztokovv důsledku čoho v získanom roztoku je nízká koncentráda blelkovín, do slažuje 8alSípostup lzolácie enzýmov.
Tleto nevýhody odstraňuje spósob elimlnácle nukleových kyselin kolonovou chromato-graflou za pouSltla lontomenlča připraveného reakciou karboxymetyl-celulózy a polyetylén-iminom, při ktorom sa využívá schopnosti tohto chromatografického média viazal sas nukleovýml kyselinami pevnejále ako s blelkovlnaml. Vlažené blelkovlny sa z lontomenlčauvolňuji! premývaním tlmlvým roztokom od pH 7 do pH9 o lónovej sile O.25M a nukleovékyseliny tlmlvým roztokom od pH 7 do pH 9 a lónovej sile vySSej ako 1M. Příklad 1
Postupuje sa prl tom tak, Se 5g karboxymetylcelulózy sa dekantuje destilovanouvodou a potom 200 ml 2U NaOH. Karboxymetylcelulóza sa přemývá vodou až hodnota pH klesnena 8. Potom sa přidá 200 ml HC1 a po 1 hodlnovom stáni sa premýva destilovanou vodoudo pH 5.0. Takto aktivovaná celulóza sa premleSa s 20 ml 5 % polyetylénlminu v tlmivomroztoku obsahujúcom O.OUí Tris-hydroxymetyl-amlnometan pH 7,2 a lmM 2-merkaptoetanol.
Po 24 hodlnovom intenzívnom mleáaní sa suspenzla nanesie na kolonu 2x15 cm a premývasa 1000 ml tlmivého roztoku, ktorý obsahuje 0,01M Tris-hydroxymetyl-amlnoetan pH 8,0,lodí ehelatom III a 2M ehlorid draselný. Potom sa premýva opat 500 ml tlmivého roztokuhoře uvedeného zloSenla, ktorý obsahuje mlesto 2M chloridu draselného 0.1M chloriddraselný. Na kolonu 1,5x5 cm sa rýchloslou lml/mln. nanieslo 100 mg hovadzieho serumalbu-mínu v 5 ml tlmivého roztoku uvedeného zloSenla, ktorým kolona bola premytá objemom50 ml. Uvoiňevanle albuaíná z lontomenlča sa sledovalo pomocou UV-analyzátora. EluCnárýchloal bola lml/mln. Za týchto podmlenok sa z kolony neuvolňovala žiadna blelkovlna.Sálej sa eluovalo tlmlvým roztokom uvedeného zloSenla, ktorý eáte obsahoval 0.3M chloriddraselný. Za týchto podmlenok sa uvolnila z chromatografického média prakticky vžetkananesená blelkovlna. Sálej sa kolona premývala 50 ml 0,5M KC1. Nakoniee sa kolonapremyla 50 ml 1M KC1 v uvedenom tlmivom roztoku. 1 ml tohto připraveného chromatografic-kého média vlaže z tlmivého roztoku obsahujúceho O.OIM Tris-hydroxymetyl-amlnoetan pH 8,lmM ehelatom III a β,ΙπΜ 2-merkaptoetanol, minimálně 100 mg hovadzieho serumalbumínu.
Na túto kolonu sa za podmlenok ako prl nanážaní blelkovín nanieslo 15 mg kvasnlčnejribonukleováj kyseliny. Výsledky sú uvedené v tab. 1. Takto premytá kolona je schopnáopal vlazal RNK, Co svedCl o tom, Se eliicia tohto chromatografického média vysokouionovou silou /211 KOI/ prl pH 8.0 neuvolňuje vazbu medzl karboxymetylovou skupinou apolyetylenlmlnom. 3 199123
Tabulka ¢.1
Vazba kvasnlčnej RNA na IEI-CM-celulózoveJ kolona. (Nanesené 15 mg RNA).
Koncentrácla chloridu draselného v tlmivom elučnom roztoku Množstvo uvolněněj RNA v mg % uvolněněj RNA vzhledom ne nanesené množstvo 0.1M 0 0 0.2M 0,005 0,03 0.5M 0,08 0,5 1U 14,9 99,47 2M 0 0 Přiklad 2
Za použitia chromatografického média připraveného podlá příkladu 1 sa odstraňuji!nukleové kyseliny zo surového buňkového extraktu S. aureofacieas tak, že k 10 ml HSI-CMcelulózy sa přidá 30 ml hrubého buňkového extraktu S. aureofaciens v tlmivom roztokuobsahujúcom 0,3M KC1, získaného mechanickou dezintegréciou 50 g vlhkých buniek. Tentosurový extrakt má značný obsah nukleových kyselin, poměr abeorbancie 280/260 = 0,53.
Po dvojhodinovom mieáaní při 4 °C surového extraktu 8 PEI-CM celulózou sa zmes centrifu~govala a v supernatante značné poklesol obsah nukleových kyselin (poměr abeorbancie280/260 - 1,15) viá tab. č. 2.
Tabulka č. 2
Odstránenie nukleových kyselin zo surového buněčného extraktu. * Absorbancia /nm/ 280 260 280/260 Pdvodná vzarka 0,63 1,17 0,53 Po opracovaní s íEI-CM-eelulózou 0,575 0,45 1,16
Claims (1)
- 4 199123 PBB DUB I VYNÁLEZU Sp&sob odstraňovaní® nukleových kyselin z roztoka bielkovín vyznačujúci se tým, Sesa zmes bielkovín a nukleových kyselin získaná z biologických materiálov v tlmivomroztoku o ionovej sile 0.25M a pH 7.0 - 9.0, naneste na kolonu s iontomeničom připrave-ným reakciou polyetylenimlnu s karboxymetylovou skupinou viazanou na inertný nosič,například celulózu, polydextran, polyakrylamid a premýva sa tlmivým roztokem o ionovejsile O.25M při pH 7.0 - 9.0. Cena 2,40 Kčs TZ 6/70
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS145678A CS199123B1 (en) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Method for removal of nucleic acids from proteins solution |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS145678A CS199123B1 (en) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Method for removal of nucleic acids from proteins solution |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS199123B1 true CS199123B1 (en) | 1980-07-31 |
Family
ID=5348982
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS145678A CS199123B1 (en) | 1978-03-08 | 1978-03-08 | Method for removal of nucleic acids from proteins solution |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS199123B1 (cs) |
-
1978
- 1978-03-08 CS CS145678A patent/CS199123B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mainwaring et al. | The use of deoxyribonucleic acid–cellulose chromatography and isoelectric focusing for the characterization and partial purification of steroid–receptor complexes | |
| Eichholz et al. | Studies on the organization of the brush border in intestinal epithelial cells: I. Tris disruption of isolated hamster brush borders and density gradient separation of fractions | |
| van der Westhuyzen et al. | A new procedure for the isolation and fractionation of histones | |
| Kish et al. | Ribonucleoprotein organization of polyadenylate sequences in HeLa cell heterogeneous nuclear RNA | |
| SU688124A3 (ru) | Способ отделени протеинов | |
| Beeckmans et al. | A New Purification Procedure for Fumarase Based of Affinity Chromatography: Isolation and Characterization of Pig‐Liver Fumarase | |
| US4303650A (en) | Process for production of erythropoietin | |
| Leser et al. | Reverse micelles in protein separation: the use of silica for the back‐transfer process | |
| US4909944A (en) | Removal of metal ions from aqueous solution | |
| Pricer Jr et al. | [87] A membrane receptor protein for asialoglycoproteins | |
| Montecucco et al. | ATP binding to bovine heart cytochrome c oxidase. A photoaffinity labelling study | |
| US20150184149A1 (en) | Agent and kit for isolating nucleic acids | |
| Adler et al. | Solubilization and characterization of a platelet membrane ADP-binding protein. | |
| JPS6356501A (ja) | アフイニテイークロマトグラフイー用カラム充填剤及びその製造方法 | |
| Beaudet et al. | Formiminotransferase· cyclodeaminase from porcine liver An octomeric enzyme containing bifunctional polypeptides | |
| Andersson | Recognition of phosphate groups by immobilized aluminium (III) ions | |
| Dehm et al. | The Cleavage of Prolyl Peptides by Kidney Peptidases: Isolation of a Microsomal Carboxypeptidase from Swine Kidney | |
| Uren | Affinity chromatography of proteolytic enzymes | |
| CS199123B1 (en) | Method for removal of nucleic acids from proteins solution | |
| JPS61205217A (ja) | γ‐グルタミン酸単位を有する高システインペプチド、その製造方法および用途 | |
| CA1232850A (en) | Purification of superoxide dismutase | |
| Kamra et al. | Crosslinked concanavalin AO-(diethylaminoethyl)-cellulose—an affinity medium for concanavalin A-interacting glycoproteins | |
| Harada et al. | Purification and properties of bovine dental-pulp alkaline-phosphatase | |
| Vennegoor et al. | Effect of a Purified Post‐Microsomal Fraction on Amino Acid Incorporation in vitro | |
| Kawade et al. | [74] Purification of L cell interferon |