CS176291A3 - Pharmaceutical - Google Patents
Pharmaceutical Download PDFInfo
- Publication number
- CS176291A3 CS176291A3 CS911762A CS176291A CS176291A3 CS 176291 A3 CS176291 A3 CS 176291A3 CS 911762 A CS911762 A CS 911762A CS 176291 A CS176291 A CS 176291A CS 176291 A3 CS176291 A3 CS 176291A3
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- pharmaceutical composition
- composition according
- active ingredient
- substituent
- phenyl
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 36
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 28
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 23
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 14
- -1 N-methylsulfonylamino Chemical group 0.000 claims description 12
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 claims description 11
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 10
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 9
- UHSGPDMIQQYNAX-UHFFFAOYSA-N protoporphyrinogen Chemical compound C1C(=C(C=2C=C)C)NC=2CC(=C(C=2CCC(O)=O)C)NC=2CC(N2)=C(CCC(O)=O)C(C)=C2CC2=C(C)C(C=C)=C1N2 UHSGPDMIQQYNAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 claims description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 108020001991 Protoporphyrinogen Oxidase Proteins 0.000 claims description 4
- 102000005135 Protoporphyrinogen oxidase Human genes 0.000 claims description 4
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 3
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 3
- 125000000951 phenoxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(O*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 2
- 208000017733 acquired polycythemia vera Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037244 polycythemia vera Diseases 0.000 claims description 2
- 125000006413 ring segment Chemical group 0.000 claims description 2
- JDTMUJBWSGNMGR-UHFFFAOYSA-N 1-nitro-4-phenoxybenzene Chemical group C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1OC1=CC=CC=C1 JDTMUJBWSGNMGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 6
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims 6
- 125000001301 ethoxy group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])O* 0.000 claims 4
- WNWOTMKHOLCHRJ-UHFFFAOYSA-N 1,4-dihydrotriazol-5-one Chemical group O=C1CN=NN1 WNWOTMKHOLCHRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims 2
- 125000003262 carboxylic acid ester group Chemical group [H]C([H])([*:2])OC(=O)C([H])([H])[*:1] 0.000 claims 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims 2
- 229910014033 C-OH Inorganic materials 0.000 claims 1
- 229910014570 C—OH Inorganic materials 0.000 claims 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 20
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 12
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229930002875 chlorophyll Natural products 0.000 description 10
- 235000019804 chlorophyll Nutrition 0.000 description 10
- ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M chlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC(C(CC)=C3C)=[N+]4C3=CC3=C(C=C)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 ATNHDLDRLWWWCB-AENOIHSZSA-M 0.000 description 10
- 210000003763 chloroplast Anatomy 0.000 description 10
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 7
- 229950003776 protoporphyrin Drugs 0.000 description 7
- KSFOVUSSGSKXFI-GAQDCDSVSA-N CC1=C/2NC(\C=C3/N=C(/C=C4\N\C(=C/C5=N/C(=C\2)/C(C=C)=C5C)C(C=C)=C4C)C(C)=C3CCC(O)=O)=C1CCC(O)=O Chemical compound CC1=C/2NC(\C=C3/N=C(/C=C4\N\C(=C/C5=N/C(=C\2)/C(C=C)=C5C)C(C=C)=C4C)C(C)=C3CCC(O)=O)=C1CCC(O)=O KSFOVUSSGSKXFI-GAQDCDSVSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N diphenyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1OC1=CC=CC=C1 USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 4
- 240000008067 Cucumis sativus Species 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 4
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- MQJKPEGWNLWLTK-UHFFFAOYSA-N Dapsone Chemical compound C1=CC(N)=CC=C1S(=O)(=O)C1=CC=C(N)C=C1 MQJKPEGWNLWLTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 210000002706 plastid Anatomy 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000009849 Cucumis sativus Nutrition 0.000 description 2
- 235000010799 Cucumis sativus var sativus Nutrition 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- SUSRORUBZHMPCO-UHFFFAOYSA-N MC-4379 Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)OC)=CC(OC=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)=C1 SUSRORUBZHMPCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 2
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 description 2
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 2
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- NUFNQYOELLVIPL-UHFFFAOYSA-N acifluorfen Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(OC=2C(=CC(=CC=2)C(F)(F)F)Cl)=C1 NUFNQYOELLVIPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- XQNAUQUKWRBODG-UHFFFAOYSA-N chlornitrofen Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1OC1=C(Cl)C=C(Cl)C=C1Cl XQNAUQUKWRBODG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N dithioerythritol Chemical compound SC[C@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-ZXZARUISSA-N 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 2
- BGZZWXTVIYUUEY-UHFFFAOYSA-N fomesafen Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)NS(=O)(=O)C)=CC(OC=2C(=CC(=CC=2)C(F)(F)F)Cl)=C1 BGZZWXTVIYUUEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- XITQUSLLOSKDTB-UHFFFAOYSA-N nitrofen Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl XITQUSLLOSKDTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 2
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 2
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 235000021251 pulses Nutrition 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- AEELXMHQIJJMKP-DMTCNVIQSA-N (2r,3s)-3-sulfanylbutane-1,2,4-triol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](S)CO AEELXMHQIJJMKP-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- VGNCBRNRHXEODV-XXVHXNRLSA-N (6r,7r)-1-[(4s,5r)-4-acetyloxy-5-methyl-3-methylidene-6-phenylhexyl]-6-dodecoxy-4,7-dihydroxy-2,8-dioxabicyclo[3.2.1]octane-3,4,5-tricarboxylic acid Chemical compound C([C@@H](C)[C@H](OC(C)=O)C(=C)CCC12[C@H](O)[C@H](C(O2)(C(O)=O)C(O)(C(O1)C(O)=O)C(O)=O)OCCCCCCCCCCCC)C1=CC=CC=C1 VGNCBRNRHXEODV-XXVHXNRLSA-N 0.000 description 1
- HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(4-chlorophenyl)-2-(4-methylphenyl)sulfonylbutane-1,4-dione Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)C(C(=O)C=1C=CC(Cl)=CC=1)CC(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 HTSGKJQDMSTCGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CXKAPDFYKAWQRM-UHFFFAOYSA-N 3-chloro-2-(4-chloro-2-fluoro-5-propan-2-yloxyphenyl)-4,5,6,7-tetrahydroindazole Chemical compound C1=C(Cl)C(OC(C)C)=CC(N2C(=C3CCCCC3=N2)Cl)=C1F CXKAPDFYKAWQRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000497 Amalgam Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005484 Bifenox Substances 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000195585 Chlamydomonas Species 0.000 description 1
- DXXVCXKMSWHGTF-UHFFFAOYSA-N Chlomethoxyfen Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(OC)=CC(OC=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)=C1 DXXVCXKMSWHGTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HHMCAJWVGYGUEF-UHFFFAOYSA-N Fluorodifen Chemical compound C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1OC1=CC=C(C(F)(F)F)C=C1[N+]([O-])=O HHMCAJWVGYGUEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N Hydroxyurea Chemical compound NC(=O)NO VSNHCAURESNICA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 239000005590 Oxyfluorfen Substances 0.000 description 1
- OQMBBFQZGJFLBU-UHFFFAOYSA-N Oxyfluorfen Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(OCC)=CC(OC=2C(=CC(=CC=2)C(F)(F)F)Cl)=C1 OQMBBFQZGJFLBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 230000002152 alkylating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000010 aprotic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 description 1
- 208000027119 bilirubin metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N chlorambucil Chemical compound OC(=O)CCCC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 JCKYGMPEJWAADB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004630 chlorambucil Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 239000007891 compressed tablet Substances 0.000 description 1
- 229910000366 copper(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- SADIMFREDFBEOF-UHFFFAOYSA-N ethoxycarbonyl 5-[2-chloro-4-(trifluoromethyl)phenoxy]-3-methyl-2-nitrobenzoate Chemical compound CC1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)OC(=O)OCC)=CC(OC=2C(=CC(=CC=2)C(F)(F)F)Cl)=C1 SADIMFREDFBEOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003754 ethoxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC)* 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000005534 hematocrit Methods 0.000 description 1
- 108700043100 hereditary spherocytic hemolytic Anemia Proteins 0.000 description 1
- 229960001330 hydroxycarbamide Drugs 0.000 description 1
- 208000036796 hyperbilirubinemia Diseases 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 230000001795 light effect Effects 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229940067631 phospholipid Drugs 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000037039 plant physiology Effects 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 231100001274 therapeutic index Toxicity 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 description 1
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
- A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
- A61K31/235—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids having an aromatic ring attached to a carboxyl group
- A61K31/24—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids having an aromatic ring attached to a carboxyl group having an amino or nitro group
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/50—Pyridazines; Hydrogenated pyridazines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/655—Azo (—N=N—), diazo (=N2), azoxy (>N—O—N< or N(=O)—N<), azido (—N3) or diazoamino (—N=N—N<) compounds
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Farmaceutický prostředek
Oblast techniky ' — -
Vynález se týká farmaceutických prostředků pro léčbuchoroby polycythemia vera.
Dosavadní stav techniky
Vynález se týká léčby polycythenia vera, známé choroby,při níž dochází ke zvýšené produkci myeloidních buněk, pro-dukovaných kostní dření, zejména jde o červené krvinky a ohemoglobin. U pokročilé choroby se zvětšuje slezina, kteráodstraňuje zralé červené krvinky z oběhu. Choroba obvyklezačíná ve středních letech nebo o něco později. Nemocní bezléčby přežívají přibližně 2 roky. Při odebírání krve ze žílyje možno dosáhnout přežití 10 až 12 let. Z další léčby byloužito potlačení funkce kostní dřeně ozářením nebo působenímchemických látek alkylační povahy, jako jsou melphalan, bu-sulfan a chlorambucil, tyto látky však mohou vést ke vznikuleukemie nebo jiných nádorů. Dále byla užita také hydroxy-močovina, která brzdí syntézu DNA.
Podstata vynálezu
Podstatu vynálezu tvoří farmaceutické prostředky k léč-bě uvedené choroby, jejichž účinnou složkou je inhibitor en-zymatické přeměny protoporfyrinogenu na hem v buňkách. Bylototiž prokázáno, že některé látky, například určité typy her-bicidních sloučenin, schopné způsobit inhibici enzymaticképřeměny protoporfyrinogenu na chlorofyl v rostlinných buňkáchjsou schopné také způsobit svrchu uvedenou přeměnu této látkyna hem. Tato inhibice pravděpodobně ovlivňuje stupeň, v němždochází k přeměně protoporfyrinogenu na protoporfyrin IXenzymem, protoporfyrinogenázou, takže protporfyrinogen ne-může být normálním enzymatickým postupem převeden na proto-porfyrin IX a místo toho dochází k jeho oxidaci v buňce, na^.příklad v cytosolu, avšak mimo normální enzymatickou přeměnu, 2 například vně organel, takže výsledkem je nahromadění proto-porfyrinu IX na místech, kde je nedostupný pro normální pře-měnu na hem. Účinek uvedených látek na enzymatickou přeměnu je možnoprokázat v pokusech, při nichž se pěstují lidské nádorovébuňky, například buňky Hela ve tmě za přítomnosti 1 nebo 10až 100 /UM uvedené látky, čímž se vytvoří přebytek protoporfy-rinu IX jak v buňkách, tak v živném prostředí. Léčbu je možno provádět napříkload perorálně nebo paren-terálně, jako*nitrožilně nebo intraperitoneálně. K tomuto úče-lu je možno zpracovat účinnou látku na běžné farmaceuticképrostředky, jako jsou tablety, například lisované tablety,které mohou být opatřeny povlakem, například cukru, dále číp-ky, kapsle, například z tvrdé nebo měkké želatiny, suspenze,roztoky , prášky nebo ampule. V těchto prostředcích může býtúčinná složka přítomna ve směsi s pevným a/nebo kapalným, zfarmaceutického hlediska přijatelným nosičem, kterým může býttaké živná látka, v případě pevného nosiče může jít o kukuřič-ný škrob, kapalným ředidlem může být voda, poživatelný nebominerální alej nebo rozpouštědlo, například dimethylsulfoxid.Pro injekční účely může být účinná látka rozpuštěna nebo dis-pergována ve sterilním, z farmaceutického hlediska přijatelnémnosiči, například 0,9¾ vodném roztoku chloridu sodného nebov tomto roztoku s obsahem fosfátového pufru (Dulbecco), PBS,v koncentraci například 2,5 mg/ml, nebo může být účinná látka*zpracována na liposomální systém, například při použití fosfo-lipidu jako nosného prostředí, jak bylo popsáno v publikaciRemington's Pharmaceutical Sciences, 1985, 17. vydání, str. 1659 - 1660, Mack Publishing Company. Oe například možno po-stupovat tak, že se podle publikace Jori a další, 3r. 0. Cancer(1983), 48, str. 307 rozpustí 51,4 mg dipalmitoyldifosfatidyl-cholinu v 10 ml ImM roztoku účinné látky ve směsi chloroformua methanolu v objemovém poměru 9 : 1 a po promísení je možnorozpouštědlo odpařit ve vakuu při teplotě 30 °C, čímž se získápevná látka, kterou je možno znovu uvést do suspenze v 10 ml 3 0,01 M fosfátového pufru o pH 7,4 s obsahem 150 mM NaCl azakalený roztok se pak 30 minut zpracovává ultrazvukem přiteplotě 50 °C.
Zvláště v případě perorálního podání může být žádoucíužít látky, schopné způsobit inhibici enzymů, ve formě vevodě rozpustných solí nebo v případě kyselých látek může jíto sodné a draselné soli, rozpustné ve vodě, tak jako tomu jev případě kyselého sulfonamidu podle přihlášky PCT W0 č.87/03732 nebo W0 č. 85/001939 a W0 č. 87/03873, jako na-příklad v případě dále uvedených látek 6c a 8h, dále můžejít o ve vodě rozpustné soli těchto látek, o karboxylovékyseliny nebo jejich ve vodě rozpustné soli, například osodnou sůl, známou jako acifluorfen.
Nejvhodnější způsob podání a dávka při nejvýhodnějšímtherapeutickém indexu může být stanovena běžnými pokusy,jaké se v oboru běžně provádějí. Látka, působící inhibicienzymu, může být podána laboratorním zvířatům, jako krysámnebo myším ke stanovení účinku různých dávek na počet červe-ných krvinek a na obsah hemoglobinu v krvi. Je možno taképrovádět pokusy in vitro při použití buněk kostní dřeně,odebraných nemocným s uvedenou chorobou, může jít napříklado erythroleukemickou buněčnou linii A.T.C.C. K562, která by-la popsána například v publikaci Bridges, J. Biol. Chem. 260,č. 11, 6811 - 6815, 10. června 1985. V závislosti na údajích,získaných při pokusech in vitro a při pokusech na zvířatechvčetně pokusů na toxicitu u větších zvířat, jako psů nebovepřů, je možno provést klinické pokusy u člověka tak, abybyla zaručena bezpečnost a současně dobrá informace o účin-cích zkoumaných látek, v tomto případě se postupuje podlenařízení Human Experimentation Review Boards. Při pokusech na krysách a myších byla látka 8h, kterábude dále popsána, přidána do krmivá zvířatům v koncentraci3000 ppm a byla podávána 13 týdnů, což vedlo ke statisticky 4 významnému poklesu počtu červených krvinek, koncentrace he-moglobinu, hematokritu, středního objemu krvinek a průměrnéhoobsahu hemoglobinu v nich, aniž by současně došlo k inhibiciprodukce bílých krvinek. Po 28 dnech po vynechání zkoumanélátky z krmivá se uvedené hodnoty vrátily k normálním hodnotám.
Vynález se rovněž týká použití uvedených látek k léčběžloutenky novorozenců nebo hyperbilirubinemia. Jak je uvedenov US patentovém spisu č. 4 831 024 a v publikacích, které jsouv tomto spisu citovány,byly k tomuto účelu již užívány inhibi-tory oxigenázy hernu jako zinek, a cín , pravděpodobně proto,že působí inhibici přeměny hernu na bilirubin. Sloučeniny podlevynálezu, které působí nahromadění protoporfyrinu v místech,kde je nedostupný pro normální přeměnu na hem, budou rovněžsnižovat produkci abnormálního množství bilirubinu. Tímto způ-sobem bude pravděpodobně léčit malé děti s příliš vysokou pro-dukcí oxidu uhlčitého, což je příčinou rizika vážné žloutenky.Testy byly popsány v publikacích Smith a dalších, tak jak jsoucitovány v US patentovém spisu č. 4 831 024. K předběžnýmzkouškám na zvířatech pro zjištění dávek a způsobu podání jemožno užít mutovaný kmen Wistar, tzv. kmen Gunn, u něhož do-chází k hereditární acholurické žloutence, jak je rovněž po-psáno v literatuře, citované v uvedeném patentovém spisu.
Sloučeniny podle vynálezu jsou specifickými inhibitoryenzymatické přeměny protoporfyrinogenu na hem , avšak nepůso-bí jako enzymatické jedy a nedenaturují molekulu tak, jak jetomu u denaturačnícn nebo zesilujících látek se sulfhydrylo-vými skupinami, s výhodou nejde o materiály, které ovlivňujíoxidaci, jako tomu je u akceptorů elektronů. Výhodnými látkamipodle vynálezu jsou sloučeniny, jejichž redox potenciál je ne_gativnější než -500 mV, například méně než -300 mV, měřeno na-příklad běžným způsobem v aprotickém rozpouštědle cyklickýmvoltmetrem nebo polarograficky. Výhodné jsou také látky beztetrapyrrolového kruhu s pro protoporfyrin oxidázu nižším 5 než 10/uM, ρΐ^θ vyšším než 5, s výhodou je nižší než1/uM a PI5Q vyšší než 6, například je hodnota pro nižšínež 0,3 /UM jsko 0,1 nebo 0,03 /UM, popřípadě 0,01/uM. Látka, působící inhibici enzymu má s výhodou vysokou schoo nost rozrušit plasmalemmu rostlinného materiálu. Zkouška na tuto schopnost byla popsána v publikaci Halling a Peters,
Plant Physiology, 84, 1114 - 5 (1987). Při tomto testu, který bude podrobněji popsán v příloze, mají výhodné látky celkovou hodnotu vystupujících materiálů alespoň 50 % při koncentraci 100, s výhodou 1 yuM nebo nižší, například 100 nM. Vysoce účinné látky, jako je 1-(4-chlor-2-fluor-5-propargyloxyfenyl)-9 -3-methyl-4-difluormethy1-delta -1,2,4-triazolin-5-on čililaktofen, který bude dále podrobněji popsán, způsobí úplnývýstup materiálu, uvedené hodnoty jsou tedy nad 90 % při kon-centraci 100 nM.
Další zkouškou, kterou je možno ověřit kapacitu materiálurozrušit plasmolemmu rostlinného materiálu je inhibice zezele-nání nasvětle, která bude dále popsána podrobněji v příloze B.Tímto testem je možno měřit schopnost způsobit inhibici zeze-lenání Chlamydomonas reinhardi, mutanty y-1 na světle. Jde otyp řasy, která při pěstování ve tmě netvoří chlorofyl, takževzniká bílá hmota řas, řasy však počnou produkovat chlorofylpři vystavení světlu. Řada výhodných látek podle vynálezu máschopnost způsobit inhibici zelenání za světla na alespoň50 % při použití v koncentraci 10"^ m, s výhodou 10~^ M neboještě nižší, například 10_7M. Avšak sloučeniny, které jsouve vodě ionizovány, například sloučenina 6c, jejíž operativníion má negativní náboj neposkytuje dobré výsledky při tomtotestu. Je to patrně proto, že buňky řas nedovolují vstup kyse-lé skupiny. Mimoto řada výhodných látek při použitých uvede-ných koncentracích poskytuje supernatant, u něhož je vrcholabsorpce světla při 405 nm, což je vyšší než pro chlorofyl, -6 vrchol při 400 nm je ve srovnání s vrcholem pro chlorofyl,který je v tomto systému při 668 nm dvakrát, třikrát nebočtyřikrát vyšší. Z inhibičních látek, které je možno užít k praktickémuprovedeí vynálezu, jsou vhodné zejména herbicidní sloučeninyz následujících skupin A až G. A. Arylheterocyklické herbicidy obecného vzorce
Ph-NHet v němž Ph je substituovaný fenyl, s výhodou 2,4-disubstituovanýa ještě výhodněji 2,4,5-trisubstituovaný fenyl a NHet je heterocyklický zbytek o 5 nebo 6 atomech v kruhu, s 1 až 4 atomy dusíku v kruhu, obecného vzorce - N - C = 0 nrbo - N- C - OH nebo -N - C - Cl
Q Q-C-R Q-C-R kde Q znamená zbytek heterocyklického kruhu a R znamená atom vodíku nebo substituent.
Tato skupina látek zahrnuje například materiály, označo-vané jako "herbicidy typu cyklických imidů", které byly popsányv publikaci Wakabayashi a další, J. Pesticide Sci., 11, 635až 460 (1986) s následujícími obecnými vzorci. : 7
O 8 (V)
Sloučeina je aryloxadiazol, a to 2-terc.butyl-4-(2,4-o -dichlor-5-isapropoxyfenyl)-delta -1,3,4-oxadiazolin-5-on.
Další 2-alkyl-4-(2,4,5-trisubstituované fenyl)-delta^-l,3,4--oxadiazolin-5-ony, které je možno užít podle vynálezu, bylypopsány například v US patentových spisech č. 3 385 862, 3 836 539 a 3 876 413.
Sloučenina II je aryltetrahydroindazol, a to 3-chlor--2-(4-chlor-2-fluor-5-isopropoxyfenyl)-4,5,6,7-tetrahydro--2H-indazol. Další 3-substituované-2-(2,4,5-trisubstituova-ný fenyl)-tetrahydroindazoly, které lze užít podle vynálezubyly popsány například v US patentovém spisu č. 4 670 043.
Sloučeniny III, IV a V jsou aryltetrahydroftalimidy.
Další látky tohoto typu, které je možno užít podle vynálezu,byly popsány například v US patentových spisech č. 4 431 322, 4 670 046, 4 670 042 a 4 439 229 a ve zveřejněné mezinárodnípřihlášce č.WO 87/07602. V posledních dvou citacích jsou uve-deny také jiné použitelné kruhy typu NHet, a to například vesloupci 4,' řádek 25 až do sloupce 5, řádek 20 v US spisu č. 4 439 229 a na stranách 12 až 14 přihlášky W0 87/07602.
Dalšími vhodnými herbicidy typu Ph-MHet jsou následujícísloučeniny: - aryltriazolinony, popsané například v US patentových spisechč. 4 318 731, 4 398 943, 4 404 019, 4 702 945, 4 705 557, 4 702 763, 4 761 174 a v mezinárodních patentových přihláškáchW0 85/01637, W0 85/04307, W0 37/00730, U0 87/03782, U0 86/04481a W0 33/01133, 9 - aryltetrazolinony, popsané například v US patentovém spisuč. 4 734 124 a v mezinárodních přihláškách WO 85/01939 aWO 87/03873, - aryltriazindiony, například látky, popsané v US patentovýchspisech č. 4 755 217 a 4 766 233 a v mezinárodní přihlášceč. W0/86/00072, - arylhydantoiny, popsané například v US patentovém spisu č. 4 427 438,
-arylimidazolpyrimidiny, popsané například v DE 2 604 989(Derwent Abstract č. 65326X), v japonském Kokai J60-158147A (Derwent Anstracts č. 85-240363) a ve zveřejněné evropské pa- .tentové přihlášce EP 230 874 (Derwent Abstracts č. 87-215141), - arylpyridyldiaziny, například sloučeniny 8x z příkladu 8, - aryldiazindiony, například sloučeniny 8e a 8v z následují-cího příkladu 8, - arylpyradiazinony, například sloučeniny 8f z následujícíhopříkladu 8, - aryloxadiazolinony, popsané například v japonské přihlášceKokái359-148 769 (Derwent Abstracts č. 84-246947) nebo Kokai362-161772 (Derwent Abstract č. 87-238787), - aryloxadiazinany, například sloučeniny 8k a 8m z následují-cího příkladu 8, - arylbenzamidazoly, například sloučeniny typu 8ad z následují-cího příkladu 8, - aryliminotriazolpyridaziny, například sloučeniny, popsané vUS patentových spisech č. 4 913 723, 4 906 281 a 4 906 279, - aryIthiazoly, například sloučeniny typu 3(5, 8r a 8ah z ná-sledujícího příkladu 8, - arylpyrroly, například látky, popsané ve zveřejněných evrop-ských přihlkáškách EP 255601 (Derwent č. 88-037583) a EP č. 260 288 (Derwent č. 83-127433), - arylurazoly, popsané například v US spisu č. 4 452 981 a 10 -arylhexahydropyridaziny, popsané například v US patentovémspisu č. 4 619 687. 8. Heterocyklické arylurethany, například podle US pa-tentového spisu č. 4 521 242. C. Heterocyklické arylmočoviny, například podle japonsképřihlášky Kakai 358-225081 (Oerwent č. 84-034261). D. Arylamidy, například sloučeniny typu 8aj a 8ak znásledujícího příkladu 8. E. Herbicidy typu fenyletheru, například ty, které majíp-halogenovou- nebo p-nitrofenoxyfenylovou strukturu, může jítnapříklad o následující běžně dodávané materiály. 5-(2-chlor-4-(triíluormethyl)-fenoxy)-2-nitro-N-methansulfonyl-benzamid (fomesafen) methyl-5-(2,4-dicnlorfe-noxy)-2-nitrobenzoát(bifenox)
11 5-(2-chlor-4-(frifluormethyl)-fenoxy)-2-nitrobenzoát sodný(acifluorfen) 2-chlor-l-( 3-ethoxy-42.nitrofenoxy)-4-trifluormethyl-benzen (oxyfluorfen}
Další vhodné herbicidy typu difenyletheru, které seběžně dodávají, jsou: laktofen: l-(karbethoxy)ethy1-5-(2-chlor-4-trifluormethyl-fenoxy(-2-nitrobenzoát, fluorglykofen: (karbethoxy)methyl-5-(2-chlor-4-trifluormethyl-fenoxy)-2-nitrobenzoát, chlornitrofen : 2,4,6-trichlor-(4-nitrofenoxy)benzen, fluordifen: 2-nitro-l-(4-nitrofenoxy)-4-trifluormethylbenzen,nitrofen: 2,4-dichlor-l-(4-nitrofenoxy)benzen,chlomethoxyfen: 4-(2,4-dicnlorfenoxy)-2-methoxy-l-nitrobenzen.
Další vhodné herbicidy typu difenyletheru jsou například herbicidy typu methyl-5-(2-chlor-4-trifluormethylfenoxy)-2- -nitroacetofenon-dxim-O-acetátu. 12 F. Arylpyrazolové herbicidy, například podle US patento
vých spisů č. 4 563 210, 4 496 390 a 4 459 150 a podle DOS č. 3 520 327 AI. G. Sloučeniny obecných vzorců
kde
Xb znamená atom kyslíku nebo síry a
Oh má svrchu uvedený význam, sloiučeniny tohoto typu jsou popsány v evropské patentovépřihlášce č. 273 417, Derwent č. 37-040749. Některé herbicidy, schopné způsobit inhibici enzymubyly popsány v publikaci Matringe a další, FE3S Letters, sv.245, č. 1, 2, str. 35 - 33, 1939 a Yanase a další, PesticideBiochemistry and Physiology, sv. 35, str. 70 - 30, 1989. Dále budou uvedeny některé specifické látky, použitelnék inhibici podle vynálezu. 13
O
14
15
O' Ιό
17
19
C = CH 20
21
CH 22
23
24
25 81
CH- CH- 3m 8n
26
27 8s 8t
F
28
Ί 29
Hí h3c ο CH. - 30 -
31
F
O 32
55 o
34 3ao
0 35
Ο
Cl 36
Stanovení a) Při použití enzymu a neporušených chloroplastů:
Protoporfyrinogen IX , dále Protogen IX
Proto IX byl získán od Porfyrin Products, Logan, UT abyl čištěn podle publikace T. P. Fuesler a další, PlantPhysiol., 67, 246 - 249, 1981. Protogen IX byl čerstvě při-praven redukcí Proto IX amalgamem sodíku ve rtuti podlepublikace N. 3. Jacobs a 3. M. Jacobs, Enzyme, 28, 206 - 219,1982, při použití čištěného Proto IX v koncentraci 300/uM.
Rostlinný materiál
Okurky Cucumis sativus L., kultivar "Wisconsin SMR18" byly pěstovány v tmavé komoře na vermikulitu a byly zalévány běžně dodávaným hnojivém 9-45-15. Semenáčky byly pěstovány při teplotě 25 °C a relativní vlhkosti 80 až 90 Bylo užito přerušeného osvětlení, 1 minuta světla při cyklu 60-2 -1 minut, bylo užito intenzity 25/uE m s (PAR) pomocí"světelné tyčinky" (General Electric), řízení bylo pro-vázeno elektronickým časovým spínačem. Tímto způsobem bylazískaná tkán, schopná rychlé synthézy chlorofylu při sou-časných minimálních zásobách škrobu a nízkým počátečnímobsahem chlorofylu.
Izolace chloroplastů
Vyvíjející se chloroplasty byly izolovány podle publi-kace T. P. Fuesler a další, Plant Physiol., 75, 662 - 664,1984, s tím rozdílem, že při konečném stupni čištění bylyplastidy odstředěny přes Percoll s koncentrací 40 a nikoliv45 % objemových. Pak byly chloroplasty znovu uvedeny do sus-penze v pufru k provádění zkoušek, pufr obsahoval 0,5 Mmannitolu, 20 ml-1 TES, 10 mM HEPES o pH 7,7, 1 mM EDTA, 1 mMchloridu horečnatého, 1 ¾ sérového albuminu skotu a 1 mM di- 37 thioerythritolu, konečná koncentrace bílkovin v pufru byla2 mg bílkoviny/ml.
Zkouška na protoporfyrinogen oxidázu
Zkoušky byly prováděny podle publikace 3. M. Jacobs ati. 3. Jacobs, Arch. Biochem. Biophys, 229, 312 - 319, 1984.Vzorky 0,2 ml suspenze chloroplastů byly předem inkubovány15 minut ve tmě při různé koncentraci acifluorfenmethyluAPM nebo s 0,2 % objemovými acetonu jako kontrolním vzorkem.50 mikrolitrú čerstvě připraveného Protogenu IX, tj. při-bližně 15 nM se k suspenzi přidá k zahájení reakce. Zkouškase ukončí přidáním 2,75 ml fluorometrického prostředí podlepublikace M. 3. 3acobs a 3. M. 3acobs, Enzyme, 28, 206 až219, 1982, toto prostředí je tvořeno 1 ¾ objemovým poly-oxyethylensorbitanmonolaurátu, tj. Tween-20, 50 mM tris-HCl,o pH 8,5, 1 mM EOTA, 1 mM dithioerythritolu DTE bylo užitomísto 5 mM glutathionu. Pak byly suspenze přímo odečítányna spektrofluorometru SPEX fluorolog-2, opatřeném fluoro-scenčním stínítkem pro zakalené biologické vzorky. Množstvíprodukovaného Proto IX bylo kvantitativně odečítáno ze stan-dardní křivky, získané z čištěného Proto IX ve fluorometric-kém prostředí, šlo o množství Proto IX ve srovnání s emisípři 640 nm při excitaci P5I 400 nm.
Aby bylo možno stanovit množství neenzymatické oxida-ce na Proto IX v tomto pokusu, byl pokus prováděn tak, žemísto suspenze aktivních chloroplastů bylo vkontrolnímvzorku užito také suspenze, v níž byly chloroplasty inakti-vovány zahřátím 15 minut na 85 °C. Odečtením množství ProtoIX, vzniklého za těchto podmínek od množství téže látky,získané za přítomnosti aktivních chloroplastů se získámnožství- enzymaticky vytvořeného Proto IX. Výsledky jsougraficky znázorněny na obr. I, v němž LSO znamená nejmenšístatistcky významný rozdíl, tak jak se běžně uvádí. 38 Z obr. I je zřejmé, že hodnota Ι^θ, tj. koncentrace,při níž dochází k 50¾ inhibici je nižší než 0,1 mikromol,tj. přibližně 0,03 mikromol. Při zkouškách na účinek 10 mikromol AFM na enzymatickoupřeměnu Proto IX na hořečnatou sůl Proto IX v suspenzi chloro-plastů za přítomnosti ATP je možno prokázat, že AFM nemážádný inhibiční účinek na tuto přeměnu. i b) Při použití izolovaného enzymu
Rostlinný materiál a homogenizace
Hrách (Pisum sativum var. Little Marvel) byl uložen keklíčení na 10 dnů do temné komory při teplotě 20 °C. Rost-linky byly osvětlovány 1 hodinu denně, což dovolilo vývojlistů, avšak udrželo na nejmenší míře tvorbu chlorofylu. Lástky měly bledě zelenou barvu. Lístky byly homogenizovány v 500 ml homogenizačníhoprostředí, které obsahovalo 0,5 M mannitolu, 10 mM HEPES, 20 mM TES, 1 mM EOTA, 1 mM chloridu hořečnatého, 5 mM cysteinu0,2 8SA při pH 7,7. Získaná kaše byla přefiltrována při po-užití čtyř vrstev gázy a pak nylonovou sítí. s oky o veli-kosti 43 mikrometrů. Pak byl monogenát odstředěn 3 minutypři 4000 g. Výsledná usazenina byla užita pro izolaci plas-tidú.
Izolace etioplastú a jejich čištění
Usazenina, tj. frakce plastidů, byla znovu uvedena dosuspenze ve 40 ml prostředí k provádění zkoušek, šlo o pro-středí se stejným složením jako homogenisační prostředí,avšak bez cysteinu a s obsahem 1 mM OTE 81¾ ESA. Pak bylmateriál odstředěn při 150 g k odstranění buněčné drti. Vý- 39 sledný supernatant byl odstředěn při 4000 g a usazenina bylaznovu uvedena do suspenze a převrstvena na 40¾ Percoll. Podalším odstředění 3 m.,inuty při 6500 g se neporušené etio-plasty usadily na dně zkumavky.
Obsah bílkovin byl stanoven při použití metody, dopo-ručené BioRad.
Solubilizace enzymu
Enzym byl solubilizován postupem,který nevrhli Jacobsa Jacobs. Plastidy byly odstředěny a jejich usazenina bylaznovu uvedena do suspenze ve 2,5 ml pufru s obsahem 20 mMtris-HCl, 30 h glycerolu a 1 mM OTE o pH 7,6. Směs bylazpracována ultrazvukem při 60 mHz a pak byl přidán stejný ob-jem extrakčního prostředí s obsahem 10 ¾ smáčedla Triton 10QX,8 ¾ KC1, a 10 mM PMFS, do konečného hmotnostního poměru smá-čedla k bílkovině 0,7. Po 3 hodinách při teplotě 48 °C bylroztok odstředěn ultracentrifugou 1 hodinu při 100 000 g apři použití odstředivky Beckman L2-65B.
Filtrace na gelu
Ze supernatantu s obsahem solubilizovaného enzymu pakbyly odstraněny soli filtrací na sloupci Sephadex G-25M (Phar-macia PD-10). Sloupce byly promyty 25 ml elučního pufru s obsahem 20 mM Bistris-HCl, 20 ¾ glycerolu a 0,1 ¾ Tritonu X opH 6,8. Vzorky byly naeseny na sloupce a vymývány 3,5 mlpufru. První frakce o velikosti 1 ml byla odložena, zbýva-jící frakce v množství 2,5 ml byly odebrány a pak lyofilizo-vány v atmosféře dusíku při teplotě -77 °C. Čištění při použití DEAE-chromatografie 0,75 ml solubilizovaného enzymu se nanese na sloupec0EAE-5PW s rozměrem 8 mm x 7,5 cm (Waters Protein-Pak) 40 v rovnovážném stavu v elučním pufru. Po 60 minutách promýváníelučním pufrem rychlostí 1 ml za minutu se enzym vymývá připoužití lineárního gradientu 0,1 M chloridu sodného v průbě-hu 100 minut. Pak se gradient změní v průběhu 30 minut z0,1 M na 0,8 M NaCl. Odebírají se frakce s objemem 4 ml asledují se na účinnost. Vrcholy se prokazují při použitídetektoru UV záření (Waters 494) při 260 nm, citlivost je1AU. Účinnost protoporfyrinogenoxidázy
Enzymatická přeměna protoporfyrinogenu IX na protoporfy-rin IX se sleduje jako ve svrchu uvedeném odstavci a). Při tomto testu měla sloučenina 6c hodnoty Ι^θ v roz-mezí 0,8 až 0,3 yuM, což odpovídá ρΐ^θ 6,1 až 6,5, přičemžpI5Q je záporný logaritmus v molární koncentraci. ProAFM je tato hodnota 0,8 ^uM, ρΙ5θ = 7,1 a pro sloučeninu8v je tato hodnota v rozmezí 0,08 až 0,03/uM, pI5Q je 7,1až 7,5.
Doplněk A
Test na výstup materiálu v procentech Při pokusu bylo užito kotyledonů z ethiolovaných okur-kových semenáčků. V počátečním stupni se na kotyledony pů-sobí ve tmě vodným roztokem pufru s obsahem radioaktivněznačeného cukru. Měří se množství cukru, které je přijatokotyledony, pomocí počítače. Množství kotyledonů se pak roz-dání na dvě části. Na jednu část kotyledonů se působí ve tměvodným roztokem pufru s obsahem zkoumané látky, na druhou částse působí stejným způsobem roztokem pufru bez zkoumané látky,jde o kontrolní skupinu. Pak se kotyledony ve styku s vodnýmiroztoky vystaví na 16 hodin působení světla a pak se z vodnýchroztoků vyjmou. Roztoky se měří počítačem ke stanovení obsahuradioaktivně značeného materiálu. Výsledky se vyjadřují jako 41 výstup materiálu v procentech, který je možno vypočítatpodle následujícího vztahu: výstup materiálu v ¾ = -
S kde S je počet radioaktivně značeného materiálu, přijatéhone jeden kotyledon při počátečním působení,
Sy je počet impulsů radioaktivně značeného materiálu najeden kotyledon ve vodném roztoku s obsahem zkoumanélátky po působení světla a
Sg je počet impulsů radioaktivně značeného materiálu najeden kotyledon v kontrolním vodném roztoku po půso-bení světla. Při provádění testu bylo užito následujících materiálůa podmínek pokusu.
Rostlinný materiál:
Okurková semena (Cucumis sativus L. kultivar WisconsinSMR 18) se nechá klíčit a růst na vemikulitu, který se zavla-žuje běžným hnojivém 9-45-15. Semenáčky se pěstují při teplotě25 °C a relativní vlhkosti 80 - 90 % v tmavé inkubační komoře.Kotyledony se odeberou z etiolovaných semenáčků po 5 dnech apropláchnu se v 1,0 mM chloridu vápenatém, vše se provádí vzeleném světle.
Roztok pufru:
Ode o roztok s obsahem 1 mM KC1, 1 mM chloridu vápenaté-ho a 2,0 mM fosforečnanu draselného, pH se upraví na 6,5 na-příklad hydroxidečm sodným. 42
Radioaktivně značený cukr:
Byla užita 3-0-methyl-3-/U-14C/glukosa se specifickouúčinností 10,9 GBq/mmol (Amersham Corp., Arlington Heights IL)
Počáteční zpracování:
Promyté kotyledony v množství 180 až 230 se přidají doErlenmeyerovy baňky s objemem 250 ml se širokým hrdlem a pro-tipěnivou zátkou a s obsahem 50 ml pufru, načež se přidá zna-čený cukr do koncentrace 600 nM. Baňka se protřepává 24 hodinpři 125 otáčkách za minutu na třepacím zařízení ve tmě. Pakse kotyledony oddělí pomocí nylonové sítě a třikrát se promyjívždy 20 ml 1 mM chloridu vápenatého. Zabudování radioaktivní-ho cukru se měří tak, že se tři vzorky vždy po pěti kotyledo-nech rozruší v homogenizačním zařízení NCS (Amersham Corp.)a výsledný macerát se měří na spektrometru pro kapalinovouscintilaci. Výsledky těchto zkoušek jsou ekvivalentní stejné-mu stanovení, které je prováděno spálením kotyledonů v auto-□xidačním zařízení. Působení zkoumané látky a kontrolní pokus: Pět kotyledonů se uloží abaxiální stranou vzhůru do•3 ml roztoku pufru v uzavřené Petriho misce z plastické hmotys průměrem 35 mm. Zkoumaná látka se pak přidá v acetonovémroztoku v takovém množství, aby bylo dosaženo předem stanove-né koncentrace v pufru. Koncentrace acetonu je nakonec 0,1 %objemových ve zkušebním i v kontrolním vzorku. Nádobky splovoucími kotyledony se pak protřepávají při 90 otáčkáchza minutu na třepacím zařízení lóhodin. Působení světla:
Misky s obsahem kotyledonů se vystaví na 16 hodin půso-bení světla ze čtyř fluorescenčních lamp GE F2CT12-CU přiintenzitě 150/uE m 2 s -1 νθ Qtosynteticky účinné oblastispektra (PAR), měřeno na povrchu kotyledonů při třepání mis-kami . 43 Měření radioaktivně značeného materiálu v kapalině: Všechna kapalina se od kotyledonu oddělí, k počítání seužřije spektrometr pro kapalinovou scintilaci.
Zpracování ve tmě: Všechna zpracování před osvětlením se provádějí ve tměnebo při zeleném fluorescenčním světle, které se filtrujepřes zelený filtr z plastické hmoty, který propouští pouzesvětlo o 450 až 600 nm.
Doplněk B Živná prostředí
Prostředí M sůl molarita zásobní r. ml zásobního roztoku/1 citrát sodný. 6H20 1,7 x 10' 10 ¾ 5 stopové prvky hodnoty dále uvedeny 10 FeCl3.6H20 0,37 x 10'3M 1 h 1 CaCl2.2H20 0,36 x 10"3M 5,3 \ 1 MgS04.7H20 1,2 x 1Q'3M 10 % 3 NH.NO, 4 i » 3,7 x 10'3M 10 h 3 kh2po4 2,2 x 10'3M 10 ¾ 3 k2hpo4 1,7 x 10'3M 10 h 3 - 44 - Zásobní roztok směsi stopových prvků H38Q3 100 mg/1 ZnS04.7H20 100 mg/1 MnS04.4H20 40 mg/1 C0Cl2.6H20 20 mg/1 NaMo04.2H20 20 mg/1 CuS04 4 mg/1 Živné prostředí A se připraví tak, že se přidá 10 ml/1 vodného 10¾ roztoku octanu sodného s molární koncentrací 7,5 x ÍQ-^M k prostředí M.
Složky se přidají k destilované vodě ve svrchu uvedenémpořadí a pak se směs zahřívá 15 minut v autoklávu při tlaku0,15 MPa. Zásobní kultury, pěstovaná za přítomnosti světla: Zásobní kultury buněk y-1 se udržují v kapalné kultuře v prostředí A nebo M, s výhodou v prostředí M při cyklech 14 hodin světla a 10 hodin tmy při teplotě 25 °C v Erlen- meyerově baňce, uzavřené pólyurethanovou zátkou. Zásobní kultury se inkubují bez doplňkového provzdušnění na rotační třepačce při 125 ot/min. Intenzita světla v kultuře je 12Q,uE-2-1 m s (PAR). Za těchto podmínek rostou kultury v semi-synchronním způsobu růstu tak dlouho, až se dosáhne sta-cionární fáze 2 až 4 x 10ó buněk/ml. 45
Kultury, pěstované bez světla ve tmě: 7,5 ml buněk ze stacionární fáze zásobní kultury,pěstované za přítomnosti světla se přenese do 750 ml pro-středí A v Erlenmeyerově baňce. Suňky se inkubují ve tměza provzdušnění pomocí ponořené trubice pro přívod vzduchupři teplotě 25 °C celkem 3 až 4 dny. V průběhu této dobyse buňky y-1 7 nebo 8x rozdělí buněčným dělením a přitomztratí veškerý viditelný chlorofyl, koncentrace buněk sepak upraví na 2 až 3 x 10ó buněk/ml. Příprava buněk pro použití v pokusu:
Buňky se oddělí ze 750 ml čerstvě připravené kultury,pěstované ve tmě odstředěním nízkou rychlostí, přibližně2000 ot/min po dobu přibližně 5 mninut při 20 °C. Pak sebbuňky opatrně uvedou znovu do suspenze v 50 ml prostředí A.Vzorek suspenze přibližně 0,25 ml se podrobí zkoušce na po-hyblivost a pak se po fixaci 1¾ vodným roztokem glutaraldehy-du stanoví počet buněk v ml. Normální počet je 5 x 10? buněkv ml. Podíly po 1 ml, s 10? buňkami se uloží do zkušebníchnádobek, například do ploten s 24 vyhloubeními (Falcon). V tomto okamžiku jsou buňky velmi pohyblivá a mají žlutoubarvu.
Zkoumaná látka se rozpustí v rozpouštědle jako acetonu,ethanolu, dimethylsulfoxidu nebo ve vodě, s výhodou v aceto-nu na koncentraci, která je lOOQx vyšší než konečná koncen-trace. Pak se přidá l^ul tohoto zkoumaného roztoku do kaž-dého z obou vyhloubení pomocí injekční stříkačky s obsahem5 nebo 10 mikrolitrú. Připraví se čtyři kontrolní vyhloubení na jednu deskusvrchu popsaným způsobem bez zkoumané látky. Pak se plotnypřekryjí průhlednou fólií z plastické hmoty a uloží do růs-tové komory při teplotě 25 °C na 13 až 16 hodin při intenzitě -2 -1 světla 70 až 90 ^uE m sec . V případě, že je obsah zkušeb-ních vyhloubení žlutý, extrahují se tato vyhloubení způsobem, - 46 - který bude dále uveden. V případě, že je obsah průhledný nebo má světle zelenou barvu, uloží se na rotační třepačku při přibližně 125 ot/min a ozáří na 2 hodiny při intenzitě-2 -1 světla 600/uE m sec před extrakcí.
Vyhodnocení výsledku:
Do každého vyhloubení se přidá 10¾ vodný roztok dodecyl-síranu sodného v množství 250 mikrolitrů a 1 ml methanolu asměs se promíchá. Pak se směs nechá stát 5 až 4 hodiny vetmě, načež se plotny odstředí 5 minut při teplotě místnostinízkou rychlostíé přibližně 2000 ot/min. Supernatanty se ode-berou a analyzují ve spektrofotometru (Beckman Model 35) vrozmezí 350 až 500 nm na přítomnost protoporfirinu IX při668 nm, což je vrchol pro absorpci chlorofylu v tomto systémurozpouštědel a při 720 nm, aby bylo možno odečíst hodnotupro zakalení roztoku.
Analýza hodnot:
Pro každé vyhloubení se získá hodnota pro zelené zbarve-ní odečtením hodnoty, získané při 720 nm od hodnoty, získanépři 668 nm. Vypočte se průměr pro každou koncentraci zkoumanélátky a pro kontrolu. Inhibice v procentech se vypočítá zevztahu průměrná hodnota pro zelené zbarvení pro100 x (1 - Poslušnou koncentraci . průměrná hodnota pro zelené zbarvení kontroly
Claims (32)
- PATENTOVÉ N1. Farmaceutický prostředek pro léčbu choroby poly-cythemia vera u $savců, vyznačující se tím,že jako svou účinnou složku obsahuje specifický inhibitorenzymatické přeměny protoporfyrinogenu na hem v buňkách|savců v množství, dostatečném k inhibici této přeměny a mimoto nosič, přiajtelný z farmaceutického hlediska.
- 2. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyzna-čující se tím, že účinná složka je odlišná odlátky typu tetrapyrolu a její redox potenciál je negativnějšínež -500 mV.
- 3. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyzna-čující setím, že účinné složky pro protopor-fyrinogen oxidázu je nižší než 10 ^uM.
- 4. Farmaceutický prostředek podle nároku 3, vyzna-čující se tím, že I^účinné složky je nižší než 1 mikromol.
- 5. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyzna-čující se tím, že jako účinnou složku obsahujeherbicid typu nitrodifenyletheru.
- 6. Farmaceutický prostředek podle nároku 5, vyzná-čujícíse tím, že účinný nitrodifenylether ob-sahuje jako substituent ester karboxylové kyseliny.
- 7. Farmaceutický prostředek podle nároku 6, vyzna-čující se tím, že uvedeným substituentem jenižší alkoxykarbonyl-nižší alkoxykarbonyl.3. Farmaceutický prostředek podle nároku 5, vyzna-čující se tím, že substituentem na nitrodifenyl-etheru je nižší alkoxyskupina. 48
- 9. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyzna-čující se tím, že obsahuje účinnou složku obec-ného vzorce Ph - NHet kde Ph znamená substituovaný fenyl a NHet je heterocyklický zbytek o 5 nebo 6 atomech v kruhu,obsahující 1 až 4 atomy dusíku, obecného vzorce -N - C = 0 nebo -N - C - OH nebo -N - C - Clkde Q znamená zbytek heterocyklického kruhu a R znamená atom vodíku nebo substituent.
- 10. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyzna-čující se tím, že účinnou složku je možno vyjádřitobecným vzorcemkde Ph znamená substituovaný fenyl.
- 11. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyzná-č u j í c i s e t í m , že účinnou složku je možno vy-jádřit obecným vzorcem 49kde Ph znamená substituovaný fenyl.
- 12. Farmaceutický prostředek podle nároku 9, vyzna-čující se tím, že Ph znamená fenyl se substituen-tem obecného vzorce \ N - S02 - R kde R znamená nižší alkyl.
- 13. Farmaceutický prostředek podlenároku 9, vyzna-čující se t í m , že Ph znamená fenyl se substituen-tem, obsahujícím terminální l-(nižší alkoxykarbonyl)ethoxy-skupinu.
- 14. Farmaceutický prostředek podle nároku 9, vyzna-čující se tím, že uvedeným substituentem je /1-9nižší alkoxykarbonyl)ethoxy/fenoxyskupina.
- 15. Farmaceutický prostředek pro použití k léčbě zvý-šené hladiny bilirubinu u novorozenců, vyznačujícíse tím, že jako svou účinnou složku obsahuje sloučeninu,která je specifickým inhibitorem enzymatické přeměny proto-porfyrinogenu na hem v buňkách ssavcú v množství, dostateč-ném k innibici této přeměny a mimoto nosič, přijatelný zfarmaceutického hlediska.
- 16. Farmaceutický prostředek podle náropku 15, vy-značující se tím, že účinná složka je 50 odlišná od tetrapyrrolu a její redox potenciál je negativněj-ší než -500 milivoltů.
- 17. Farmaceutický prostředek podle nároku 15, vy-značující se tím, že účinné složky proprotoporfyrinogen oxidázu je nižší než 10 mikromol.
- 18. Farmaceutický prostředek podle nároku 17, vy-značující se tím, že Σ50 účinné složkyje nižší než 1 mikromol.
- 19. Farmaceutický prostředek podle nároku 15, vy-značující se tím, že jako účinnou složku obsa-huje herbicid typu nitrodifenyletheru.
- 20. Farmaceutický prostředek podle nároku 19, vy-značující se tím, že účinná složka typu nitrodifenyletheru nese jako substituent ester karboxylovékyseliny.
- 21. Farmaceutický prostředek podle nároku 20, vy-značující se tím, že uvedeným substituentemje nižší alkoxykarbonyl-nižší alkoxykarbonyl.
- 22. Farmaceutický prostředek podle nároku 19, vy-značující se tím, že substituentem na nitro-dif enyletheru je nižší alkoxyskupina.
- 23. Farmaceutický prostředek podle nároku 15, v y - z n a č u j í c í s e t í m , že jako svou účinnou složkuobsanuje sloučeninu obecného vzorce Ph - NHet kde Ph znamená substituovaný fenyl a NHet znamená heteracyklický zbytek o 5 až 6 atomech v kruhu s obsahem 1 až 4 atomů dusíku, obecného vzorce 51 - N - C = O nebo -N - C - OH nebo - N - C -Clkde Q znamená zbytek heterocyklického kruhu aR znamená atom vodíku nebo substituent.
- 24. Farmaceutický prostředek podle nároku 15, vy-značující se tím, že účinnou složku jemožno vyjádřit obecným vzorcemkde Ph znamená substituovaný fenyl.
- 25. Farmaceutický prostředek podle nároku 15, vyz n a č u j í c í s e t í m , že účinnou složku je možnovyjádřit obecným vzorcem52 kde Ph znamená substituovaný fenyl.
- 26. Farmaceutický prostředek podle nároku 23, vy-značující se tím, že Ph znamená fenyl sesubstituentem obecného vzorce \ S H - S02 - R kde R znamená nižší alkyl.
- 27. Farmaceutický prostředek podle nároku 23, vy-značující se tím, žePh znamená fenyl sesubstituentem, obsahujícím terminální l-(nižší alkoxy-karbonyl)ethoxyskupiny.23. Farmaceutický prostředek podle nároku 23, vy-značující se tím, že uvedeným substituentemje /l-(nižší alkoxykarbonyl)ethoxy/fenoxyskupina.
- 29. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznáčující se tím, že jako svou účinnou složku obsa-huje aryltriazolinon.
- 30. Farmaceutický prostředek podle nároku 29, vy-značující se tím, že jako svou účinnou složku obsahuje 1-/2,4-dichlor-5-(N-methylsulfonylamino)-2 fenyl/-3-methy1-4-difluormethyl-delta -1,2,4-triazolin-5-on.
- 31. Farmaceutický prostředek podle nároku 12, v y -zn ačující se tím, že jako svou účinnou složku obsahuje sloučeninu, v níž NHet znamená zbytektriazolinonového kruhu. 53
- 32. Farmaceutický prostředek podle nároku 15, vy-značující setím, že jako svou účinn ou slož-ku obsahuje aryltriazolinon.
- 33. Farmaceutický prostředek podle nároku 32, v y-značující se tím , že jako účinnou složkuobsahuje l-/2,4-dichlor-5-(N-methylsulfonylamino)fenyl/--3-methyl-4-difluormethyl-delta^-l,2,4-triazolin-5-on.
- 34. Farmaceutický prostředek podle nároku 32, vy-značující se tím, že jako účinnou složkuobsahuje sloučeninu, v níž NHet znamená triazolinonovýkruh.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US53579490A | 1990-06-11 | 1990-06-11 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS176291A3 true CS176291A3 (en) | 1992-08-12 |
Family
ID=24135791
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS911762A CS176291A3 (en) | 1990-06-11 | 1991-06-10 | Pharmaceutical |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| AU (1) | AU8185491A (cs) |
| CS (1) | CS176291A3 (cs) |
| IE (1) | IE911971A1 (cs) |
| IL (1) | IL98405A0 (cs) |
| PT (1) | PT97937A (cs) |
| WO (1) | WO1991019418A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA914435B (cs) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TW492975B (en) * | 1993-07-26 | 2002-07-01 | Novartis Ag | Tryptase inhibitor |
| US5767373A (en) | 1994-06-16 | 1998-06-16 | Novartis Finance Corporation | Manipulation of protoporphyrinogen oxidase enzyme activity in eukaryotic organisms |
| US6023012A (en) * | 1996-02-28 | 2000-02-08 | Novartis Finance Corporation | DNA molecules encoding plant protoporphyrinogen oxidase |
| US5939602A (en) * | 1995-06-06 | 1999-08-17 | Novartis Finance Corporation | DNA molecules encoding plant protoporphyrinogen oxidase and inhibitor-resistant mutants thereof |
| US6084155A (en) * | 1995-06-06 | 2000-07-04 | Novartis Ag | Herbicide-tolerant protoporphyrinogen oxidase ("protox") genes |
| WO1997032011A1 (en) * | 1996-02-28 | 1997-09-04 | Novartis Ag | Dna molecules encoding plant protoporphyrinogen oxidase and inhibitor-resistant mutants thereof |
| CN103694243B (zh) * | 2013-12-20 | 2015-09-09 | 中国农业大学 | 2-取代吡啶基-1,2,4-三唑并[1,2-a]哒嗪化合物 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1193786B (it) * | 1980-12-18 | 1988-08-24 | Wellcome Found | Composti eterei dotati di attivita' mitigatrice delle emoglobinopatie intermedi e procedimento per la loro preparazione |
| CA1192545A (en) * | 1982-02-16 | 1985-08-27 | Glaxo Group Limited | Heterocyclic derivatives as histamine h.sub.2- antagonists |
| US5025029A (en) * | 1986-10-10 | 1991-06-18 | Children's Hospital Medical Center Of Northern California | Method for augmenting fetal hemoglobin |
| US4820722A (en) * | 1987-08-14 | 1989-04-11 | Eli Lilly And Company | Disubstituted tetrazoles and their use as leukotriene antagonists |
| US4847276A (en) * | 1988-09-06 | 1989-07-11 | Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. | Treatment of thromobocytosis with 5-(4-chlorophenyl)-2,4-diemthyl-3H-1,2,4-triazole-3-thione |
-
1991
- 1991-06-06 IL IL98405A patent/IL98405A0/xx unknown
- 1991-06-10 IE IE197191A patent/IE911971A1/en unknown
- 1991-06-10 AU AU81854/91A patent/AU8185491A/en not_active Abandoned
- 1991-06-10 WO PCT/US1991/004087 patent/WO1991019418A1/en not_active Ceased
- 1991-06-10 CS CS911762A patent/CS176291A3/cs unknown
- 1991-06-10 ZA ZA914435A patent/ZA914435B/xx unknown
- 1991-06-11 PT PT97937A patent/PT97937A/pt not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT97937A (pt) | 1992-04-30 |
| ZA914435B (en) | 1992-03-25 |
| IE911971A1 (en) | 1991-12-18 |
| WO1991019418A1 (en) | 1991-12-26 |
| AU8185491A (en) | 1992-01-07 |
| IL98405A0 (en) | 1992-07-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5407808A (en) | Method and composition for photodynamic treatment and detection of tumors | |
| KR930003116B1 (ko) | 종양의 광역학적 치료용 조성물 | |
| AU648886B2 (en) | Transdermal composition | |
| Ajagbonna et al. | Haematological and biochemical changes in rats given water extract of Calotropis procera. | |
| TNSN98199A1 (fr) | Composes therapeutiquement actifs bases sur le remplacement bio- isosterique du catechol par l'indazole dans des inhibiteurs de pde4, leur procede de production et composition pharmaceutique les contenant | |
| Viner et al. | Identification of oxidation-sensitive peptides within the cytoplasmic domain of the sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase | |
| US4898878A (en) | Antioxidant thiohistidine compounds | |
| CS176291A3 (en) | Pharmaceutical | |
| JP2003002840A (ja) | 脂肪性物質を基材とする脂溶性剤中にコートおよび／またはマイクロカプセル化されたＣｕｃｕｍｉｓｍｅｌｏ抽出物 | |
| Kondo et al. | Coproporphyrin isomers in Dubin-Johnson syndrome | |
| Beaven et al. | Inhibition of histamine methylation in vivo by the dimaprit analog, SKF compound 91488 | |
| US4771130A (en) | Target-entrapped drugs | |
| Davila et al. | Modification of the effects of aflatoxin B1 and warfarin in young pigs given selenium | |
| RU2074719C1 (ru) | Способ разрушения опухолевых клеток млекопитающих и фармацевтическая композиция для разрушения опухолевых клеток млекопитающих | |
| Hiroyoshi et al. | Decreased erythrocyte δ-aminolevulinate dehydratase activity after styrene exposure | |
| Conaway et al. | Subchronic toxicity of benzyl selenocyanate and 1, 4-phenylenebis (methylene) selenocyanate in F344 rats | |
| FR2459658A1 (fr) | Procede de preparation d'une composition pharmaceutique a base de methoxsalen administrable par voie orale | |
| Ali et al. | Hemolysis of human red blood cells by riboflavin-Cu (II) system | |
| FR2642310A1 (fr) | Association d'un inhibiteur de la squalene synthetase et d'un autre type d'agent d'abaissement de la cholesterolemie | |
| LT3997B (en) | Process for preparing protoporphyrins and use thereof | |
| Nabih et al. | Structure and activity in molluscicides II. Activity assay of catalase and peroxidase in snails | |
| HRP930762A2 (en) | Preparation and use of porphyrin | |
| Gill | TOXICOLOGICAL STUDIES ON FENVALERATE, NITRATE AND THEIR INTERACTION IN BUFFALO CALVES | |
| Bhatnagar et al. | INTERNATIONAL JOURNAL OF SCIENTIFIC RESEARCH | |
| HERBERT | results. A mixture of oxalacetic decarboxylase, malic de |