CS158992A3 - Process for preparing 6-0-acylelasmycin a derivatives - Google Patents

Description

Oblast vynálezu

Vynález se týká nových derivátů elsamycinu A-, kterémají zvýšený protinádorový účinek, nižší toxicitu a/nebolepší farmakokinetické vlastnosti, jejich výroby, pros-tředků, které je obsahují jako účinnou složku a therapeu-tických metod využívajících tyto prostředky.

Dosavadní stav techniky

Elsamycin A je antibiotikum·s protinádorovým účinkem,vyráběné kultivací kmene aktinomycet, který produkuje elsa-mycin A a je označen jako kmen J907-21 /ATCG 39417/, nebojeho mutanty. Elsamycin A projevuje antibakteriálni úči-nek vůči aerobním gram-positivním bakteriím a vůči anaerob- v ním organismům. Rovněž vykazuje účinek proti různým buňkámtumoru u myší, zahrnujících leukémii P388, lymfoidní leuké-mii L1210 a melanom Bl6,in vitro a in vivo. Konishi, et al,Elsamicins, new antitumor antibiotics related to chartreusin. I. Production, isolation, cnaracterization and antitumoractivity, J. Antibiotics, 39: 784 - 791, /1986/, US patentč. 4 518 589 Konishi, et al, zveřejněno 21. května 1985.

Struktura elsamycinu A /vzorec I uvedený dále/ bylastanovena a ukázala se být v úzkém vztahu k chartreusinu/vzorec II uvedený dále/. Sugawara, et al, Elsamicins A andB, new antitumor antibiotics related to chartreusin. II.Structures of elsamicins A and B. J. Org. Chem., 52: 996 -1001, /1987/.

I

II - 3 -

Jak elsamycin A tak chartreusin mají týž aglykon, char-tarin, ale obě antibiotika se liší disacharidovým zbytkem.Leacn, et al, Chartreusin, a new antibiotic produced byStreptomyces chartreusis, a new species, J. Am. Chem. Soc., 75: 4011 - 4012, /1953/, Beisler, J.A., Chartreusin, a glyco-sidic antitumor antibiotic for Streptomyces, In progress inMedicinal Chemistry, Ed., G.P. Ellis a G.B. West J_9: str. 247268, Elsevier Biomedical Press, Amsterdam, /1982/, Simonitsch,et al: Uber die Struktur des Chartreusins I, Helv. Chim. Acta,47: 1459 - 1475, /1964/, Eisenhuth, et al, Uber die Strukturdes Chartreusins II, Helv. Chim. Acta, 47, 1475 - 1484, /1964/Vzájemná konverze obou sloučenin chemickou cestou dosud ne-byla popsána. Během chemické modifikace elsamycinu A jsme zjistili,že acylace v poloze 6 elsamycinu A poskytuje nové derivátyse zvýšeným protinádorovým účinkem, nižší toxicitou a/nebolepšími farmakokinetickými vlastnostmi.

Podstata vynálezu Předložený vynález poskytuje nové deriváty elsamyci-nu A, které vykazují zvýšený protinédorový účinek, nižšítoxicitu a/nebo lepší farmakokinetické vlastnosti. Zvláštěumožňuje předložený vynález synthesu 6-0-acylelsamycinu Aa jeho 3 ,4 -O-isopropylidenovýeh derivátů.

Vynález dále poskytuje protinádorový prostředek obsa-hující jako účinnou složku alespoň jeden derivát vybranýze skupiny zahrnující deriváty elsamycinu A podle vynálezu. Dále vynález poskytuje způsob léčby rakoviny s použi-tím shorauvedeného protinádorového prostředku. Dále je poskytnut způsob výroby shorauvedeného derivá- 4 UStpatent č. 4 518 589 Konishi et al, popisuje produkci a isolaci protinádorovéno činidla označenéno elsamycin A/vzorec I uvedený sfiora/. Shorauvedená sloučenina, elsamy-cin A, je hlavní složkou fermentace kmene aktinomycet, kte-rý produkuje elsamycin A a je označen jako kmen J907-21A-.TCC 39417/.

Nyní bylo podle předloženého vynálezu zjištěno, žeacylace v poloze 6 elsamycinu a poskytuje nové derivátyse zvýšeným protinádorovým účinkem, nižší toxicitou a/nebolepšími farmakokinetickými vlastnostmi.

Deriváty elsamycinu a podle vynálezu mají obecný vzo-rec III a IV

III 5

kde P znamená COP a R je alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku, kte-rý může být nesubstituovaný nebo substituovaný, přednostněamino neoo acylaminoskupinou. Výrazem "alkyl s 1 az 5 atomy uhlíku", jak je užitzde i v nárocích, /pokud není uvedeno jinak/ se rozumí roz-větvený nebo přímý řetězec uhlovodíkové skupiny mající 1až 5 atomů uhlíku, jako je metnyl, ethyl, propyl, isopro-pyl, Dutyl, isobutyl, t-butyl apod. Výrazem "substituova-ný nebo nesubstituovaný", jak je užit zde a v nárocích jemíněna uhlovodíková skupina, kde atom, prvek nebo skupinanahrazuje atom vodíku, zmíněné substituované alkylskupinyjsou přednostně substituovány amino nebo acylaminoskupinou,jinak je blíže specifikováno v konkrétním příkladu.

Deriváty elsamycinu a podle vynálezu lze vyrobitnapříklad syntnetickým postupem znázorněným graficky veschématu 1. Jak ukazuje schéma 1, O-acylace N-t-butoxy-elsamycinu A /3/ příslušnou karboxylovou kyselinou a di- - 6 - cyklohexylkarbodiimidem /DCC/ v přítomnosti béze, jako je .pyridin, poskytla 6-0-aeylderiváty /7/. 6-O-Acyl-3*,4 -0-isopropylidenaeriváty /8/ byly připraveny podobně, acyla-eí N-t-butoxykarbonyl-3*,4*-0-isopropylidenelsamycinu A/4/ a následným odštěpením t-butoxykarbonylové skupinymeziproduktu 6. pomocí kyseliny p-toluensulfonové /TsOH/v acetonu nebo kyseliny trifluoroctové /TFA/. Isopropyli-denová skupina meziproduktů 6 zůstává během shora uvedenéhoodblokování zachována. Reakce meziproduktů 6, s vodnou TFAodštěpuje souběžně jak t-butoxykarbonylovou skupinu, taki isopropylidenovou skupinu za vzniku sloučeniny 7. V tabulce 1 jsou uvedeny sloučeniny podle vynálezua jejich číselné značeni. TABULKA 1

Sloučeniny podle vynálezu a jejich číselné značení sloučenina č. název

Elsamycin A 2 Chartreusin

2, 2**-N-t-butoxykarbonylelsamycin A 4 2**-N-t-butoxykarbonyl-3 *,4*-0-isopropyliden-

elsamycin A

^a 6-O-aeetyl-2'*-N-t-butoxykarbonylelsamycin A 5c 2 *z-N-t-butoxykarbonyl-6~0-/N-trifluoracety1-

/5-alanyl/elsamycin A - 7 -

TABULKA Žd 5e ¥ 6a 6b 6c 6d 6e 6f 7a 7b /pokračování/

2 * *-N-t-butoxykarbonyl-6-0-/N-t-butoxykarbo-nyl- -alanyl/elsamycin A 2 * *-N-t-butoxykarbonyl-6-0-/N-t-butoxykarbo-

nyl-L-alanyl/elsamycin A

2 * *-N-t-butoxykarbonyl-6-0-/N-t-butoxykarbo-nyl-D-alanyl/elsamycin A

6-O-acetyl-2* '-N-t-butoxykarbonyl-3 *,4*-0-isopropylidenelsamycin A

2 * *-N-t-butoxykarbonyl-6-0-n-hexanoyl-3 *, 4 **-O-isopropylidenelsamycin A

2 *-N-t-butoxykarbonyl-3*,4*-0-isopropyliden6-O-/N-trifluoracetyl-/^-alanyl/elsamycin A

2' *-N-t-butoxykarbonyl-6-0-/N-t-butoxykarbo-nyl-/?-alanyl/-3 ,4 -O-isopropylidenelsamy-cin A

2 *-N-t-butoxykarbonyl-6-0-/N-t-butoxykarbo-nyl-L-alanyl/-3 ,4'-O-isopropylidenelsamy-cin A

2 -N-t-butoxykarbonyl-6-0-/N-t-butoxykarbo-nyl-D-alanyl/-3 *,4 -O-isopropylidenelsamy-cin A

6-0-aceiylelsamycin A

6-0-n-hexanoylelsamycin A 3 TABULKA 1 7c 7d 7e 7f 8a

Sb 8c 8d 8e 8f /pokračování/

6-0-/N-trifluoracetyl- -alanyl/elsamycin A

6-0- -alanylelsamycin A

6-0-L-alanylelsamyein A

6-0-D-alanylelsamyein A

6-0-acetyl-3 ,4 -O-isopropylidenelsamycin A

6-0-n-hexanoyl-3*,4*-0-isopropylidenelsamycin A

3 ,4 -0-isopropyliden-6-0-/N-trifluoracetyl-/3-alanyl/elsamycin A

6-O-/$-alanyl-3 *,4 *-0-isopropylidenelsamycin A

o-O-L-alanyl-3 ,4 -O-isopropylidenelsamycin A

6-O-D-alanyl-3*,4 *-0-isopropylidenelsamycin A

Schéma 1 1/

Postup synthesy 6-0-acylderivátů elsamycinu 3/ 4/ 3.-5> 5, /a, c, d, e, f /-> 7 /a, b, c , d,

4->6 /a, b, c, d, e, f/-?8 /a, b, c, d, e, f/ 1 1/ /t-BOC/20 / NEt^ 2/ /CH3O/2G/CH3/2 / TsOH 3/ R'COOH / Pyr / DCC 4/ TFA 5/ TFA nebo TsOH/aceton schéma 1 /pokračování/

meziprodukt P -Z- 3 H (-H), 4 H C(CH3)2 5 COR’ (-h)2 6 COR’ C(CH5)2 sloučenina _p_ 7 COR (-H)2 8 COR C(CH5)2 R’ a: -CHj b: -(ch2vch5 c: -(CH2)2-NHCOCF3 d: -(CH2)2-NHi-BOC e: -CHCH, (L) 1 NH-l-BOC f: -CHCHj (D)

NH-l-BOC R a: -CHj b: -(CH2)4-CH5c: -(CH2)2-NHCOCF5d: -<CH2)2-NH2c: -CHCH5 (L) nh2 f: -CHCH3 (D)nh2

Protinádorový účinek derivátů 6-0-acylelsamyeinu

Dvanáct derivátů 6-0-acylelsamycinu bylo synthetizovánoa testováno ve srovnání s mateřskou sloučeninou na protinádo-rový účinek in vitro a in vivo.

Pro zkoušku cytotoxicity in vitro byly vypěstoványbuňky myšího melanomu 316-F10, které se udržovaly v mini-málním esenciálním mediu podle Eaglea /Nissui/, obsahují-cím 60/Ug/ml kanamycinu, které je doplněno tepelně inakti-vovaným fetálním telecím sérem /10 %/ a neesenciálnímiaminokyselinami /0,6 %/, při 37 °C ve zvlhčené atmosféřev 5 % C02 inkubátoru. Exponenciálně rostoucí buňky B16-F10 Λ se shromáždily, spočítaly a suspendovaly v kultivačním mediuv koncentraci 2,0 x 10^ buněk/ml. Buněčná suspenze /180 /Ul/se pěstovala v jamkách 96 jamkové mikrotitrační destičkya inkubovala se 24 hodin. Testované sloučeniny /20 /Ul/ sepřidaly do jamek a destičky se dále inkubovaly 72 hodin.Cytotoxický účinek se stanovil kolorimetricky při 540 nmpo obarvení životaschopných buněk neutrálním červeným roz-tokem. Z dvanácti testovaných 6-0-acylderivátů sedm derivá-tů vykazovalo přibližně stejně silnou cytotoxicitu vůči buň-kám B16-F10 jako mateřská sloučenina. Jak je patrné z ta-bulky 2, je to těchto sedm derivátů- 6-0-acetylelsamycin A/^a/, 6-0-n-hexanoylelsamycin A /Jb/, 6-0-/N-trifluoracetyl-/3-alanyl/elsamycin A /7c/, 6-O-/J-alanylelsamycin A /2d/,6-0-n-hexanoyl-3*,4*-0-isopropylidenelsamycin A /8b/, 3 ,4 -0-isopropyliden-6-0-/N-trifluoracetylyj5-alanyl/elsamycin A/8c/ a 6-O-/ó-alanyl-3 *,4 *-0-isopropylidenelsamycin A /8d/.Dalších pět derivátů bylo méně účinných.

Protinádorový účinek in vivo dvanácti shora uvedených 6-0-acylderivátů se testoval v systémech lymfocytární leu- kémie P388 a melanomu B16. Samice myší ODF] /pro P388/ a samci myší BDF^ /'pro B1 6/ se naočkovali i.p. injekcí 10 buněk Pj8S a 0,5 ml 10 %ní suspenze 816 na myš /den O/.Tes- 1 1 tované sloučeniny se podávaly myším intraperitoneálně jeden-krát denně ve dnech 1 až 3 /Q1D x 3/ u systému P388 nebojedenkrát denně ve dnech 1, 5 a 9 /Q4D x 3/u systému B1 6a zvířata byla pozorována 50 dní. Percentuální vzrůst střed-ní doby přežití /MST/ ošetřených zvířat ve srovnání s neo-šetřenou kontrolou byl stanoven a označen jako T/C %. Slou-čeniny vykazující hodnoty T/C % 125 nebo vyšší byly považo-vány za sloučeniny s výrazným protinádorovým účinkem. Jakje patrno z tabulky 2, několik derivátů vykázalo příznivýprotinádorový účinek proti leukémii P388 a hodnoty minimál-ní účinné dávky /MED/ sedmi derivátů, které vykazují cyto-toxicitu stejně velkou jako mateřská sloučenina byly rov-něž stejné jako u elsamycinu A,/£/.

Zejména 6-0-acetylelsamycin A /7a/, 6-0-/N-trifluoracetyl-/3-alanyl/elsamycin A /2c/ a 6-0-yá-alanylelsamycin A /7d/vykazují větší protinádorový účinek než elsamycin A /j_/ vhodnotách therapeutického indexu /toxická dávka/MED/. Z pě-ti méně účinných derivátů nebyl protinádorový účinek čtyřz nich, s výjimkou 6-0-n-hexanoyl-3*,4*-0-isopropylidenelsamyci-nu A /8b/, výrazně odlišný od mateřské sloučeniny. V systému B16 byly 6-0-acetylelsamycin A /7a/, 6-0-n-hexa-noylelsamycin A /7b/, 6-0-/fl-alanylelsamycin A /]&amp;/, 6-O-n- • hexanoyl-3*,4*-0-isopropylidenelsamycin A /8b/ a 6-O-D-ala-nyl-3*,4*-0-isopropylidenelsamycin A /8f/ stejně účinnéjako elsamycin A /]/ /tabulka 3/· Je zajímavé, že zatímcoderiváty 6-O-acetyl-3*,4*-isopropylidenelsamycin A /8a/ a6-O-L-alanyl-3*,4*-0-isopropylidenelsamycin A /8e/ bylyméně účinné než mateřská sloučenina, prodlužovaly pozoru-hodně délku života myší zasažených B16. TABULKA 2 vitro cytotoxicita proti melanomu 316 a in vivo proti—nádorový účinek proti leukémii P388 u myší

T/C % MST*J

Cvioioxicifa sloučenina -COR IC5Q 20*2 10 3 1 0.3 OJ 2s COCHj 0.06 247 185 160 145 130 120 7b CO(CH2)#CH5 0.04 170 165 140 130 110 7c CO(CH2)2NHCOCF5 0.03 211 170 150 130 125 110 7d CO(CH2)2NH2 0.03 255 160 170 150 135 115 7e COCH(NH2)CHj(L) 0.3 186 176 157 124 114 105 7f COCH(NH2)CH/D) 0.3 182 200 152 133 124 119 8a COCHj 0.09 255 224 171 152 124 114 8b CO(CH2)2CH, 005 225 210 150 130 115 Es CO(CH,),NHCOCFj 0.04 260 230 160 135 110 8d CO(CH,)?NH, 0.04 230 175 160 130 110 Es COCH(KH,)CHj(L) 0.16 248 210 152 124 124 Eí COCH(NH,)CHj(D) 0.3 200 171 157 135 124 1 0.04 Tox 201 171 152 136 123 +1 střední doba přežití udaná ve dnech +2 dávka v mg/kg/den, Q1D x 3 ip

TABULKA 3

In vivo protinédorový účinek proti melanomu B16 u myší T/C% MSI'·'7 sloučenina 10 2 3 1 0.3 0.1 2» 229 182 154 136 121 7b 257 186 154 136 114 , 7c 184 158 134 116 113 7d 315 215 173 146 123 7f 210 173 137 110 8a 287 (1/4)*3 280 (1/4) 170 123 8b 254 182 164 132 111 8c >250 (2/4) 179 121 115 8d 296 211 139 121 118 8c >.333 (3/4) 180 153 123 8f 240 180 153 140 107 i 287 (6/24) 211 (3/24) 179 142 122 +1 střední doba přežití udaná ve dnech 2 dávka v mg/kg/den, Q4D x 3 ip 3 počet přeživáích/testovaných 50.den V rozsahu předloženého vynálezu je zahrnut způsobvýroby derivátů elsamycinu A podle vynálezu.

Dalším aspektem vynálezu jsou farmaceutické kompozi 14 - ce, které obsahují účinné, tumor inhibující množství slouče-niny vzorce III nebo IV v kombinaci s inertním, farmaceutic-ky přijatelným nosičem nebo ředidlem.

Podle dalšího aspektu vynálezu je poskytnut způsobtherapeutiekého ošetřování živočichů, především savců, za-sažených tumorem, který spočívá v podávání účinné, tumorinhibující dávky antibiotika, sloučeniny vzorce III nebo IV. Příklady vhodných kompozic zahrnují pevné kompozicepro orální podávání, jako jsou tablety, tobolky, pastilky,prášky a granule, kapalné kompozice pro orální podávání,jako jsou roztoky, suspenze, sirupy a elixíry a přípravkypro parenterální podávání, jako jsou sterilní roztoky,suspenze nebo emulze. Mohou být rovněž zpracovány do formysterilních pevných kompozic, které mohou být rozpuštěnyve sterilní vodě, fysiologickém roztoku nebo jiném steril-ním mediu vhodném pro injekce bezprostředně před použitím.

Je třeba si uvědomit, že aktuální preferované dávko-vání derivátu elsamycinu A podle vynálezu se může měnitpodle konkrétní sloučeniny, která je užita, konkrétní for-my prostředku, způsobu aplikace a konkrétní lokalizacechoroby, pacienta a choroby, která je léčena. Mnohé fakto-ry, které modifikují působení léčiva, jako je věk, tělesnáhmotnost, pohlaví, strava, doba podávání, rychlost exkrece,kondice pacienta, kombinace léků, senzitivita a obtížnostchoroby. Podávání se může provádět kontinuálně nebo perio-dicky, v rámci maximálně tolerované dávky. Optimální apli-kační rychlosti pro daný soubor podmínek může odborník voboru snadno zjistit pomocí testů ke stanovení konvenčníhodávkování. Předložený vynález je ilustrován následujícími pří-klady, jejichž účelem nemá být omezení rozsahu vynálezu. 15 Příklady specifické synthesy meziproduktů 3-6 /f/jsou uvedeny níže. Z těchto meziproduktů se způsoby uvede-nými shora synthetizují sloučeniny Ta - 7f a 8a - 8f podlevynálezu. Příklady provedení vynálezu Příklad 1

Synthesa 2**-N-t-butoxykarbonylelsamycinu A /2/

Směs 653 mg /1mmol/ elsamycinu A /_!_/, 348 mg /1 ,6 mmol/di-t-butyldikarbonátu a 0,14 ml /1 mmol/ triethylaminu v10 ml dioxanu se míchala při teplotě místnosti přes noc.Reakční směs se odpařila ve vakuu, čímž se získal částeč-ně krystalický odparek, který se překrystaloval ze směsiCHgC^/ether a získalo se 768 mg /100 %/ meziproduktu 3.ve formě žlutého krystalického prášku. T.t. 183 - 184 °C. IRv^x /KBr/ cm“1 3410, 1700, 1505, 1370, 1255, 1120, 1065, 875, 780. υνλ-aax /Me0H/ nm 236 /38300/, 266 /37800/, 333 /6180/, 380 /8770/, 400 /14500/, 423 /15900/. 1H NMR /CDC13/<To,73 /9H, široké s/, 1,31 /3H, d, J = 7,0Hz/, 1,36 /3H, s/, 1,39 /3H, d, J = 6 Hz/,2,68 /3H, s/, 3,35 /3H, s/, 5,37 /1H, d, J = 8,0 Hz/, 4,66 /1Ή, d, J = 4 Hz/, 8,18/1H, dd, J = 8,0 a 1,5 Hz/, 11,59 /1H, s/.

Analýza vypočteno pro C38H43NO15 x H2O: C 59,14, H 5,88, N 1,81 nalezeno: C 59,12, H 6,06, N 2,27 16 Příklad 2

Synthesa 2 * *-N-t-butoxykarbonyl-3*,4 *-0~isopropylidenelsa-mycinu A /4/ K roztoku 200 mg meziproduktu 3a 1,2 ml 2,2-dimethoxy-propanu ve 4 ml suchého CH2C12 se přidalo 5 mg TsOH a směsse udržovala na teplotě místnosti přes noc. K reakční směsise přidal nasycený vodný roztok NaHCO^ a organická vrstvase oddělila, vysušila nad MgSO^ a odpařila ve vakuu. Získa-lo se 190 mg /90 £/ meziproduktu 4 ve formě žluté pevnélátky. T.t. 168 - 169 °C. IRUmax /KBr/ 3420> 1740’ l 690> 1505’ '375> '250, ‘G65> 780. UVJLffiax /MeOH/ nm /€./ 236 /40600/, 266 /391 00/, 333 /6370/,380 /8850/, 399 /14200/, 422 /15500/. NMR /CDCl3/íTl,34 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,37 /3H, d, J = 7

Hz/, 1,37 /3H, s/, 1,42 /3H, s/, 1,68 /3H, s/, 2,87 /3H, s/, 3,35 /3H, s/, 5,23 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,80 /1H, d, J = 4 Hz/, 8,33 /1H, dd, J = 8 a 1,5 Hz/, 1,63 /1H, br/.

Analýza vypočteno pro C^H^NO.^ x H^O: G 60,66, H 6,08, N 1,73nalezeno: C 60,92, H 6,03, N 2,00 Příklad 3

Synthesa 6-0-acetyl-2 -N-t-butoxykarbonylelsamycinu A /5a/

Roztok 79 mg /0,1 mmol/ 2**-N-t-butoxykarbonylelsamyci-nu A /3/, 12 mg /0,2 mmol/ kyseliny octové, 33 mg /0,16 mmol/ 17 - a 0,5 ml suchého pyridinu v 1 ml ethylacetátu se udržovalpři teplotě místnosti pres noc. Směs se vlila do 30 mlzředěného vodného roztoku HC1 a extrahovala se pomocí EtOAe,extrakt se promyl postupně zředěným vodným roztokem HC1,vodou a nasyceným vodným roztokem NaCl a potom se odpařilve vakuu. Odparek se vyčistil chromatografií na silikage-lu s použitím roztoku MeOH/CHCl^ jako elučního činidla.Získalo se 66 mg /79 %/ meziproduktu 5a ve formě žlutéhoamorfního prášku. T.t. 184 - 186 °C. IR l/max /KBr/ cm"1 1775, 1735, 1365, 1 250, 1 165, 1065, 1035,770. UVAmax /MeOH/ nm /£ / 236 /36500/, 267 /41200/, 311 /6190/,326 /7380/, 366 /10800/, 389 /12300/,410 /13000/. ]H NMR /CDCl^/<5*0,77 /9H, s/, 1,27 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,37/3H, s/, 1,42 /3H, d, J = 6 Hz/, 2,59 /3H,s/, 2,80 /3H, s/, 3,38 /3H, s/, 5,39 /1H,d, J = 8 Hz/, 5,60 /1H, d, J = 4 Hz/, 7,93/1H, dd, J = 8,0 a 1 ,5 Hz/.

Analýza vypočteno pro Ο^θΗ^ΝΟ^ x H20: C 59,03, H 5,82, N 1,72nalezeno: C 59,33, H 5,76, N 1,68 Příklad 4

Synthesa meziproduktů 5c - jjf

Meziprodukty 5c - j?f byly připraveny metodou podob-nou metodě přípravy meziproduktu z meziproduktuAcylační kyseliny a výtěžky isolace jsou uvedeny. 18 a/ Synthesa 2**-N-t-Dutoxykarbonyl-6-0-/N-trifluoracetyl-/3-alanyl/elsamycinu A /5c/ N-Trifluoracetyl-/j-alanin /82 %/. T.t. 170 - 173 °C. IHP /KBr/ ca“1 1740 /sh/, 1720, 1370, 1250, 1160, 1070,max 775. UVA /MeOH/ nm /£./ 236 /36600/, 267 /40800/, 311 /6280/,nisx 325 /7460/, 366 /9210/, 390 /12100/,411 /12600/. ]H NMR /CDCl^/^0,73 /9H, s/, 1,33 /3H, d, J = 7 Hz/, 1,38/3H, s/, 1,40 /3H, d, J = 6 Hz/, 2,78 /3H,s/, 3,38 /3H, s/, 5,43 /1H, s, J = 8 Hz/,5,69 /1H, d, J = 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro C^H^^O.] yFj x H^O: C 55,01, H 5,26, N 2,98nalezeno: C 54,95, H 5,16, N 3,19 b/ Synthesa 2 -N-t-butoxykarbonyl-6-0-/N-t-butoxykarbonyl-/3-alanyl/elsamycinu A /5d/ N-t-Butoxykarbonyl-yS-alanin /71 %/. T.t. 171 - 173 °C. IR 1/ _ /KBr/ cm"1 3420, 1740, 1710, 1610, 1580, 1370, 1255,max ' 1165. uVAmax /MeOH/ nm /£/ 236 /36700/, 268 /41800/, 311 /6410/,326 /7630/, 365 /9400/, 390 /12700/,410 /13100/. 1H NMR /CDC13/ $ 0,79 /9H, s/, 1,1 - 1,75 /22H, m/, 2,84 /3H,s/, 3,40 /3H, s/, 5,40 /1H, d, J = 8 Hz/,5,63 /1H, d, J = 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro ^45^-55^2^18 x ^2θ: θ ^8,59, Η 6,20, N 2,97 19 - nalezeno: C 58,44, H 5,90, N 2,78 c/ Synthesa 2 "-N-t-butoxykarbony1-6-O-/N-t-butoxykarbony1-L-alanyl/elsamycinu A /5e/ N-t-Butoxykarbonyl-L-alanin /80 %/

T.t. 180 - 182 °C IR i/ v /KBr/ cm"1 3420, 1740, 1610, 1500, 1370, 1250, 1160,1 070. UVAmax /MeOH/ nm /£/ 237 /35700/, 267 /40000/, 31 2 /6250/,326 /7380/, 367 /9200/, 389 /12100/,410 /12800/. 1H NMR /CDCl^/<70,75 /9H, s/, 1,27 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,37 /3H, s/, 1,40 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,50 /9H, s/, 1,77 /3H, d, J = 7 Hz/, 2,81 /3H, s/, 3,38 /3H, s/, 5,39 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,63 /1H, d, J = 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro Ο^^Η^^Ν^θ^β x ^2θ: θ ^8,59, H 6,20, N 2,97nalezeno: C 58,70, H 6,12, N 2,72 d/ Synthesa 2 **-N-t-butoxykarbonyl-6-0-/N-t-butoxykarbonyl-D-alanyl/elsamyeinu A /£f/ N-t-Butoxykarbonyl-D-alanin /81 %/

T.t. 180 - 182 °C IRUmax /KBr/ 342θ» 174θ, 161°» 145θ> 137θ, 125θ» 11β5> 1 070. UVJt /MeOH/ nm /«^/ 236 /35500/, 267 /39800/, 312 /6260/,326 /7420/, 366 /9210/, 389 /12200/,410 /12900/. 1Η NMR /CDC13/cTo,8 /9Η, s/, 1,26 /3Η, d, J = 6 Hz/, 1,38 20 /3H, s/, 1 ,40 /3H, d, J = 6 Hz /, 1 ,49 /9H, s/, 1 ,78 /3H, d, J = 7 Hz/, 2, 81 /3H, s/, 3,39 /3H, s/, 5,38 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,60 /1H, d, d = 4 Hz/. Analýza vypočteno pro C^H^N 2°1 8 x 3/- 2H20: C 59,15, H 6, 15, N 3,00 nalezeno: C 59,36, H 6, 18, N 2,71 Příklad 5

Synthesa 6-O-acetyl-2 **-N-t-butoxykarbonyl-3 *,4*-0-isopro-pylidenelsamyeinu A /6a/

Roztok 123 mg meziproduktu 4, 20 mg kyseliny octové, 33 mg DCC a 0,75 ml pyridinu ve 2 ml EtOAc se udržovalopřes noc při teplotě místnosti. Reakční směs se zfiltro-vala a odpařila ve vakuu. Odparek se vyčistil sloupcovouchromatografií na silikagelu /4,5 x 16 mm/, jako elučníčinidlo se použil roztok MeOH v CHCl^. Získalo se 1 28 mg/99 %/ žádaného produktu.

T.t. 188 - 190 °C IRt?max /KBr/ cm_1 345θ» 178°» 1745’ 15θ0’ 137θ» 1255’ 117°»1 070. UVXmax /Me0H/ 1101 /£/236 /36500/, 267 /41900/, 310 /6310/,324 /7620/, 364 /9280/, 389 /12000/,409 /12300/. 1H NMR /CDC13/<To,67 /3H, s/, 1,3 - 1,5 /12H, m/, 1,70 /3H,s/, 2,60 /3H, s/, 2,90 /3H, s/, 3,39 /3H,s/, 5,25 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,82 /1H, d, J= 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro C^H^NO-j &amp; x 1/2H20: C 61,13, H 5,97, N 1,66 21 nalezeno: C 60,86, H 5,84, N 1,73 Příklad 6

Synthesa meziproduktů _6b - _6f

Meziprodukty 6b - č>f byly připraveny metodou podob-nou té, která byla popsána pro přípravu meziproduktu 6az meziproduktu 4. Acylační kyseliny, reakční doba a vý-těžky isolace jsou uvedeny. a/ Synthesa 2**-N-t-butoxykarbonyl-6-0-n-hexanoyl-3*,4*-O-isopropylidenelsamycinu A /6b/

Kyselina kapronová, přes noc, /76 %/. T.t. 184 - 186 °C. IR^max /KBr/ cm“1 1740, 1495, 1370, 1250, 1170, 11 25, 1070,780. UVAmax /Me0H/ nm 236 /38300/, 267 /43000/, 311 /6380/, 325 /7910/, 365 /9550/, 389 /12500/,409 /13000/. 1H NIúH /CDC13/<To,67 /9H, s/, 1,34 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,41 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,42 /3H, s/, 1,46 /3H, s/, 1,71 /3H, s/, 2,92 /3H, s/, 3,40 /3H,

s/, 5,25 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,77 /ΊΗ, d, J = 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro C^H^NO^ θ x 1/2H20: C 62,66, H 6,49, N 1,55nalezeno: C 62,81, H 6,37, N 1,58 b/ Synthesa 2z*-N-t-butoxykarbonyl-3,,4*-0-isopropyliden-6-0-/N-trifluoracetyly3-alanyl/elsamycinu A /6c/ 22 N-Trifluoracetyl-y^-alanin, 24 hodin, /93 %/·

T.t. 169 - 170 °C IR v* /KBr/ cm"1 1740, 1720, 1500, 1370, 1255, 1215, 1165,max 1120, 1070, 780. UVA /MeOH/ nm /e/ 236 /36500/, 267 /41500/, 31 0 /6500/,max 325 /7720/, 365 /939 0/, 390 /1; 2100/, 410 /12200/. 1H NMR /CDCK /cT 0,66 /9H, s/, 1,36 /3H, d, , J = 6 Hz/, 1 ,38 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,42 /3H , s/, 1,46 /3H, s/, 1,71 /3H, s/, 2,92 /3H, s/, 3,38 , /3H, s/, 5,24 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,84 /1H, d, J = 4 Hz/. Analýza vypočteno pro C46H51 N2°17F3 x H2O: C 56,44, H 5,46, N 2,86 nalezeno: C 56,50, H 5,23, N 2,74 c/ Synthesa 2 **-N-t-butoxykarbonyl-6-0-/N-t-butoxykarbonyl-/J-alanyl/-3 ,4 *-0-isopropylidenelsamycinu A /6d/ N-t-Butoxykarbonyl-yd-alanin, 67 hodin, /81 %/.

T.t. 171 - 173 °C IR ν' max /KBr/ cm*1 3400, 1740, 171 0, 1 61 0, UVAmax /Me0H/ nm /e/ 236 /35200/, 267 /40200/, 310 /6240/,325 /7540/, 364 /9020/, 389 /11800/,409 /11900/ 1H NMR /CDCl3/<^0,67 /9H,.s/, 1,40 /18H, m/, í,62 /3H, s/,1,71 /3H, s/, 2,82 /3H, s/, 3,10 /2H, t, J= 6 Hz/, 3,40 /3H, s/, 5,24 /1H, d, J = 8Hz/, 5,80 /1H, d, J = 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro C49H6oN2°18: G ^0,99, H 6,27, N 2,90 nalezeno: C 60,79, H 6,12, N 2,83 - 23 - d/ Synthesa 2 **-N-t-butoxykarbonyl-6-0-/N-t-butoxykarbony1-L-alanyl/-3*,4*-0-isopropylidenelsamycinu A /6e/ N-t-Butoxykarbonyl-L-alanin, 93 hodin, /86 %/.

T.t. 174 - 176 °C IR)/ /KBr/ cm"1 3420, 1745, 1710, 1500, 1370, 1250, 1070.υνλ ZMeOH/ nm /€/ 236 /35800/, 267 /40500/, 311 /6290/, ΓΒ Q . . 324 /7510/, 364 /9160/, 389 /12000/,410 /12300/. 1H NMR /CDCl3/áo,67 /9H, s/, 1,40 /21H, m/, 1,70 /3H, s/,1,77 /3H, d, J = 7 Hz/, 2,92 /3H, s/, 3,39/3H, s/, 5,24 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,81 /1H,d, J = 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro C^^H^qN^O^S^θ x 1/2H20: C 60,42, H 6,31, N 2,88nalezeno: C 60,21, H 6,32, N 2,74 e/ Synthesa 2**-N-t-butoxykarbonyl-6-O-/N-t-butoxykaΓbonyl-D-alanyl/-·3 *,4*-0-isopropylidenelsamycinu A /6f/ N-t-Butoxykarbonyl-D-alanin, 46 hodin, /87 %/

T.t. 174 - 176 °C IRVmax /KBr/ cm_1 3420, 1745, 1710, 1450, 1370, 1250, 1070.UV^max /Me0H/ /<£/ 236 /34400/, 267 /39300/, 31 1 /6180/, 324 /7410/, 364 /8960/, 389 /11600/,409 /11900/. 1H NMS /CDC13/cTo,65 /9H, s/, 1,4 - 1,76 /32H, m/, 2,90/3H, s/, 3,36 /3H, s/, 4,85 /1H, q, J = 7,5 Hz/, 5,23 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,79 /1H,d, J = 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro ^49Η6θΝ2Ο18 x 3/2H2O: C 60,42, H 6,31, N 2,88 nalezeno: C 60,19, H 6,33, N 2,74 24 Příklad 7

Synthesa 6-0-acetylelsamycinu A /7a/

Směs 55 mg meziproduktu 5a a 0,5 ml kyseliny trifluoroctové se míchala 5 minut při teplotě místnosti, potom seodpařila za sníženého tlaku a získala se lepkavá pevná lát-ka, která se rozetřela s etherem a získalo se 60 mg slouče-niny 7a ve formě žlutého prášku.

T.t. 189 -191 °C IRl/ /KBr/ cm"1 1 780, 1735, 1 680, 1 370, 1260, 1 210, 11401075, 780. UV^max /Me0H/ nm /6L/ 237 /35500/, 267 /401 00/, 309 /61 10/324 /7350/, 365 /8770/, 388 /11600/,408 /11900/, 1H NMH /CDC1. + CD3OD/<Tl,19 /3H, d, J = 7,6 Hz/, 1,37 /3H,d, J = 6 Hz/, 1,42 /3H, s/, 2,52/3H, s/, 2,71 /3H, s/, 3,45 /3H, s/ 5,74 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,83 /1H, dJ = 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro C35H3?N014 x CÍ9COOH x 3H?O: C 51,45, H 5,13, N 1,62 nalezeno: C 51,42, H 4,32, N 1,47 MS: /SIMS/ M/Z 696 /M + H/+, 377, 334, 160 Příklad 8

Synthesa 6-0-n-hexanoylelsamycinu A /7b/

Směs 60 mg meziproduktu 6b a 0,5 ml 90 ^ního vodného roztoku kyseliny trifluoroctové se udržovala při teplotě 25 - místnosti 20 minut. Směs se zahustila a rozetřela, získalse žlutý prášek, který se vyčistil sloupcovou chromatogra-fií na silikagelu, jako eluční činidlo se použil MeOH vCHCl^ /2 % - 10 %/. Získalo se 29 mg /57 %/ žádaného pro-duktu .

T.t. 184 - 187 °C IR 1/ x /K3r/ cm”1 1735, 1675, 1255, 1205, 1135, 1070, 805,max 780, 720. UV% /MeOH/ nm /<£/ 237 /26800/, 267 /29700/, 310 /4590/,ma 325 /5590/, 365 /6660/, 388 /8760/, 409/9110/. 1H NMR /CDCl-j/cf 0,99 /3H, t, J = 7 Hz/, 1,23 /3H, d, J = 6Hz/, 1,37 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,43 /3H, s/,2,85 /3H, s/, 3,43 /3H, s/, 5,63 /1H, d, J= 8 Hz/, 5,76 /1H, d, J = 4 Hz/. MS /SIMS/: M/Z 752 /M + H/+, 654, 433, 334, 320, 100, 99, 86 Příklad 9

Synthesa ó-O-ZN-trifluoracetyiyS-alanyl/elsamycinu A /7c/

Směs 110 mg meziproduktu 5c a 0,5 ml kyseliny tri-fluoroctové se míchala pomocí ultrazvukových vibrací do-kud se nezhomogenizovala, potom se odpařila za sníženéhotlaku. Odparek se rozpustil v malém množství vodného roz-toku t-BuOH a lyofilizoval se. Získalo se 104 mg /93 %/titulní sloučeniny.

T.t. 169 - 171 °C IR max /KBr/ cm"1 1740 /sh/, 1720, 1365, 1255, 1200, 1170,1070, 800, 755, 720. UV max /Me0H/ nm / / 237 /36100/, 267 /40200/, 310 /6230/, 324 /7490/, 365 /8900/, 388 /11700/,408 /12000/, 26 1H NME /CDC13 + CD3OD/cTi,19 /3H, d, J = 7 Hz/, 1,28 /3H, d,J = 7 Hz/, 1,43 /3H, s/, 2,72 /3H,s/, 3,46 /3H, s/, 5,73 /1H, d, J =8 Hz/, 5,87 /1H, d, J = 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro ^38^39^2^15^3 x CF^COOH x 5/2H20: C 49,03, H 4,63, N 2,86 nalezeno: C 48,91, H 4,08, N 3,12 Příklad 10

Synthesa sloučenin Č. 7č - 7f

Sloučeniny 7d - 7f byly připraveny z meziproduktů 5d - 5.f metodou podobnou té, která byla popsána pro pří-pravu sloučeniny 7c z meziproduktu £c. Výtěžky isolacejsou uvedeny. a/ Synthesa ό-Οη/3-alanylelsamycinu A /7d/ 94 mg /91 %/, t.t. 177 - 179 °C /rozkl./ IRVmax /K3r/ em“1 3400, Ϊ740, 1730, 1 670, 1 255, 1170, 1070.UV/L v /MeOH/ nm /e/ 236 /34700/, 268 /38800/, 309 /6180/, 324 /6910/, 365 /8400/, 390 /10900/,409 /10700/. ]H NMH /D2O/<Tl,43 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,49 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,59 /3H, s/, 2,92 /3H, s/, 3,52 /3H, s/, 5,90 /ΊΗ, d, J = 8 Hz/, 6,15 /1H, d, J = 4 Hz/.

Analýza vypočteno pro (Χ<Η,ΩΝ901Α x 2CF-.COOH x 3,5H^C: C 47,29, H 4,86, N 2,76C 47,18, H 4,22, N 2,71 nalezeno: 27 b/ Synthesa 6-0-L-alanylelsamycinu A /7e/ 93,7 ag /98 %/, t.t. 173 - 175 °C /rozkl./ IRV . /KSr/ cm"1 3400, 1780, 1610, 1370, 1260, 1180. υνλ^ /MeOH/ nm /^/ 237 /37400/, 268 /34400/, 341 /5800/,max 41 3 /11100/. 1H KMS /0^0/ $ 1,1 - 1,7 /9H, m/, 1 ,85 /JH, d, J = 7 Hz/, 2,8/3H, s/, 3,5 /3H, s/, 5,85 /1H, br./, 6,05/ΊΗ, br./, analýza vypočteno pro 8^6^40^2^14 x x 3,5^0: C 47,29, H 4,86, N 2,76 nalezeno: C 47,49, H 4,26, N 2,69 c/ Synthesa ó-O-D-alanylelsamycinu A /7f/ 91,2 mg /96 %/, t.t. 187 - 189 °C /rozkl./ IRVmax/KBr/ cm"1 3400, 1780, 1730, 1370, 1205, 1 155, 11 05.UV%m /MeOH/ nm /€/ 237 /37100/, 268 /35000/, 327 /5790/, 412 /10900/. 1H NMR /D2O/&amp; 1,1 - 1,75 /9H, m/, 2,06 /3H, d, J = 7 Hz/, 2,9 /3H, s/, 3,45 /3H, s/, 5,88 /1H, d, J = 8 Hz/, 6,17 /1H, d, J = 4 Hz/,

Analýza vypočteno pro 0^^Η^θΝ20^ x 3CF3COOH: C 47,29, H 4,06, N 2,63 nalezeno: C 47,55, H 4,12, N 2,62 Příklad 11 28

Synthesa 6-0-aeetyl-3*,4*-0-isopropylidenelsamycinu A /8a/

Roztok 239 mg meziproduktu 6a a 150 mg monohydrátukyseliny p-toluensulfonové v 0,5 ml acetonu se udržovalna teplotě místnosti 10 minut a odpařil se. Odparek serozpustil ve 20 ml CHCl^ a roztok se promyl vodou a so-lankou. Organický roztok se vysušil nad Na2SO^ a odpařilve vakuu. Odparek se vyčistil sloupcovou chromátografiína silikagelu /15 x 120 mm/, jako eluční činidlo se pou-žil roztok MeOH v CHCl^ a získalo se 89 mg /42 %/ titul-ní sloučeniny. T.t. 220 - 230 °C /rozkl./ IRl7max /KBr/ cm"1 1740, 1 500, 1370, 1 255, 1 21 5, 1 130, 1 1 1 0,1070, 1050, 780. UV^max /Me0H/ 11111 237 /33500/, 267 /36800/, 309 /5420/, 324 /6560/, 363 /7960/, 388 /10200/,408 /10500/, 449 /1250/. 1H NMR /CDCl3/ď1,3 - 1,5 /12H, m/, 1,73 /3H, s/, 2,48 /3H,s/, 2,80 /3H, s/, 3,34 /3H, s/, 5,46 /1H, d,J = 8 Hz/, 5,88 /1H, d, J = 4 Hz/. Příklad 12

Synthesa 6-0-n-hexanoyl-3*,4*-0-isopropylidenelsamycinu A /8b/

Směs 60 mg meziproduktu 6b a 0,5 ml 99%ní kyselinytrifluoroctové se udržovala při teplotě místnosti . Po5 minutách se směs odpařila za sníženého tlaku. Odparek serozetřel s isopropyletherem a získal se žlutý prášek, kte-rý se vyčistil sloupcovou chromatografií na silikagelu,jako eluční činidlo se použil roztok MeOH v CHCl^ a získa-lo se 32 mg /66 %/ žádaného produktu. T.t. 160 - 164 °C. - 29 - IHx/max /KBr/ em_1 173°’ 1355’ 124°’ 1115’ 106°’ 765’ /MeOH/ nm /r/ 236 /36200/, 267 /39500/, 309 /6140/, max , t 324 /7440/, 364 /8760/, 388/11300/, 408 /11600/. 1H NMR /CDC13/ (Vo,97 /3H, t, J = 7 Hz/, 1,30 /3H, d, J = 6 Hz/,1,37 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,42 /3H, s/, 1,46/3H, s/, 1,70 /3H, s/, 2,87 /3H, s/, 3,37/3H, s/, 5,25 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,80 /1H,d, J = 4 Hz/. MS /SIMS/: M/Z 792 /M + H/+, 694, 433, 360, 334, 160, 99, 86. Příklad 13

Synthesa 3*,4*-0-isopropyliden-6-0-/N-trifluoracetyl- -alanyl/elsamycinu A. /8c/

Roztok 127 mg meziproduktu 6c a 77 mg TsOH v 1,5 mlacetonu se udržoval při teplotě místnosti 15 minut. Reak-ční směs se odpařila a odstranilo se tak rozpouštědlo.Odparek se opět rozpustil v acetonu a udržoval se 15 minutna teplotě místnosti. Odpařování a rozpouštění se opakova-lo do vymizení výchozího materiálu na TLC /CHCl^/MeOH = 9 : 1/. Odparek se rozpustil v 1,5 ml acetonu a 0,5 ml 2,2-dimethoxypropanu se přidalo k roztoku. Reakční směsse nechala stát při teplotě okolí 1 hodinu a odpařila seve vakuu, získal se olejovitý odparek, který se rozpustilv 10 ml CHCl^ a roztok se dvakrát promyl ledovou vodou,vysušil nad MgSO^ a odpařil za sníženého tlaku. Získalase žlutá látka, která se rozetřela s etherem a získalo se1 1 0 mg /81 %/ sloučeniny 8c ve formě žlutého prášku.

T.t. 186 - 187 °C IR max /KBr/ cm'1 1740, 1720, 1500, 1370, 1255, 1215, 1170, 1120, 1070. 30 - UY^-max /Me0H/ nm /é7/ 229 /35500/, 236 /37300/, 267 /12500/,309 /6680/, 323 /8020/, 364 /9260/, 388 /11800/, 427 /11700/. 1H NMS /CDC13 + CD3OD/cTl,18 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,40 /3H, s/,1,43 /3H, d, J = 6 Hz/, 1,49 /3H, s/„1,64 /3H, s/, 2,38 /3H, s/, 3,47 /3H,s/, 5,73 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,96 /1H,d, J = 4 Hz/, 7,10 /2H, d, J = 8 Hz/,7,58 /2H, d, J = 8 Hz/.

Analýza vypočteno pro C4iΗ43Ν2θ15F3 x Ts0H x 3/2H20: C 54,39, H 5,13, N 2,64 nalezeno: C 54,37, H 4,94, N 2,54 Příklad 14

Synthesa 6-Oy3-alanyl-3 ,4*-0-isopropylidenelsamycinu A /8d/

Roztok 96,5 mg meziproduktu 6d a 85 mg p-TsOH ve 2 mlsuchého acetonu se míchal při teplotě místnosti 2,5 hodiny,načež se odpařil ve vakuu. Odparek se rozpustil ve směsi10 % MeCH v CHC13 a roztok se promyl vodou a solankou, vy-sušil nad MgSO^ a odpařil ve vakuu. Odparek se rozetřel setherem a získalo se 44 mg /47 %/ sloučeniny 8d. T.t. 191 - 193 °G /rozkl./ ISv/max /KSr/ cm~1 338θ> 173θ· uvAmax /MeOH/ nm /β/ 236 /29600/, 267 /32800/, 309 /5080/,324 /6180/, 364 /7170/, 388 /9150/, 407 /9130/. NMR /CDC13 + CD3CD + D20/S\ , 1 - 1,6 /15H, m/, 2,32 /'3H, s/, 2,85 /3H, s/, 3,07 /2H, m/, 3,45 /3H, s/, 5,56 /1H, d, J = - 31 8 Hz/, 5,96 /1H, d, J = 4 Hz/, 7,02 /2H, d, J = 8 Hz/, 7,64 /2H, d, J = 8 Hz/. Příklad 15

Synthesa ó-O-L-alanyl-3*,4'-O-isopropylidenelsamyeinu A /8e/

Roztok 145 mg meziproduktu 6e a 143 mg p-TsOH ve 3 mlsuchého acetonu se míchal při teplotě místnosti 2 hodinya odpařil se ve vakuu. Odparek se rozpustil ve 20 ml CHCl^a roztok se promyl vodou a solankou, vysušil se nad MgSO^a odpařil se ve vakuu v přítomnosti malého množství CH^COOH.

Odparek se rozetřel s etherem a sraženina se odfiltrovala. Získalo se 71,7 mg /51 %/ sloučeniny 8e. T.t·. 208 - 210 °C /rozkl./ IRV/max /KBr/ ΟπΓ1 340θ» 1735> 1495’ 1370’ 12'5’ 1070’ /MeOH/ nm /<£/ 237 /36700/, 267 /39200/, 309 /6150/, 324 /7400/, 363 /8740/, 388 /11200/,407/11300/. 1H H.MR /CDC13/cT 1,45 /21H, a/, 2,68 /3H, s/, 3,29 /3H, s/, 5,45 /1H, br./, 5,85 /1H, br./.

Analýza vypočteno pro C-^H^^O^ x 1/2TsOH x 5/2AcOH x 3/2H2O: C 55,49, H 5,98, N 2,72, S 1,52 nalezeno: C 55,55, H 5,64, N 2,73, S 1,62 Příklad 16

Synthesa 6-O-D-alanyl-3 ,4 -O-isopropylidenelsamycinu A /8f/

Roztok 145 mg meziproduktu 6f a 143 mg p-TsOH ve 3 ml - 32 - suchého acetonu se míchal při teplotě místnosti 2 hodiny aodpařil se ve vakuu. Odparek se rozpustil ve 20 ml GHCl^a roztok se promyl vodou a solankou, vysušil se nad MgSO^a odpařil se ve vakuu v přítomnosti malého množství CH^COOH.Odparek se rozetřel s etherem a sraženina se odfiltrovala.Získalo se 95,6 mg /68 %/ sloučeniny 8f. T.t. 217 - 219 °C /rozkl./ IHV ZKBr/ cm"1 3400, 1730, 1495, 1370, 1215, 1-70, 1025. UV^ /MeOH/ nm Z<^/ 236 /32900/, 267 /36400/, 309 /5730/,

IUQ X 324 /6900/, 363 /6610/, 388 /1030 /,407 /10300/. 1H NMS /CDCl3/cFl,45 /21H, m/, 2,67 /3H, s/, 3,4 /3H, s/, 5,24 /1H, d, J = 8 Hz/, 5,91 /1H, br./.

Analýza vypočteno pro x 1/2TsOH x 5/2AcOH x 2^0: C 55,01, H 6,02, N 2,70, S 1 ,54C 54,90, H 5,81, N 2,60, S 1 ,43 nalezeno:

Claims (15)

1. - 33 - PATE NÁROKY

   kde P znamená OOR a R je alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku, kterýmůže být nesubstituovaný nebo substituovaný aminoskupinounebo acylaminoskupinou, vyznačující se tím, že se N-t-butoxykarbo-nylelsamycin A O-acyluje příslušnou karboxylovou kyselinoua dicyklohexylkarbodiimidem v přítomnosti báze, načež seodštěpí chránící skupina. - 34 -
2. 2. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce

   kde P znamená COR a R je alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku, kterýmůže být nesubstituovaný nebo substituovaný aminoskupinounebo acylaminoskupinou, vyznačující se tím, že se N-t-outoxykarbo- z z nyl-3 ,4 -0-isopropyliden.elsamycin A O-acyluje příslušnoukarboxylovou kyselinou, načež se odštěpí chránící skupinakyselinou trifluoroctovou. í - 35 -
3. 3. Způsob přípravy sloučeniny obecného vzorce

   kde P znamená COR a R je alkyl s 1 až 5 atomy uhlíku, kterýmůže být nesubstituovaný nebo substituovaný aminoskupinounebo acylaminoskupinou, vyznačující se tím, že se N-t-butoxykarbo-nyl-3 ,4 -O-isopropylidenelsamycin A acyluje příslušnoukarboxylovou kyselinou a dicyklohexylkarbodiimidem v pří-tomnosti báze, načež se chránící skupina odštěpí kyseli-nou p-toluensulfonovou v acetonu nebo kyselinou trifluor-octovou.
4. 4. Sloučenina připravená způsobem podle kterého-koliv z nároků 1 a 2, kterou je6-0-acetylelsamycin A, 6-0-n-hexanoylelsamycin A, 6-0-/N-trifluoracetyl- -alanyl/elsamycin A,6-O-/3-alanylelsamycin A, 6-0-L-alanylelsamycin A nebo - 36 - "frč 6-0-D-alanylelsaaycin A.
5. 5. Sloučenina připravená způsobem podle nároku 3, kterou je 6-O-acetyl-3*,4 *-Q-isopropylidenelsamycin A, 6-0-n-nexanoyl-3 ,4 -O-isopropylidenelsamyein A, 3 *,4 *-0-isopropyliden-6-0-/N-trifluoraeetyl-^-alanyl/elsa-mycin A, * * 6-0- -alanyl-3 ,4 -O-isopropylidenelsamycin A, 6-O-L-alanyl-3*,4'-O-isopropylidenelsamycin A nebo # z 6-O-D-alanyl-3 ,4 -O-isopropylidenelsamycin A.
6. 6. Způsob přípravy meziproduktu, 2**-N-t-butoxy-karbonylelsamycinu A, vyznačující se tím, že se smísí elsamycinA, di-t-butyldikarbonát a triethylamin v dioxanu a mícháse při teplotě místnosti.
7. 7. Způsob přípravy meziproduktu, 2**-N-t-butoxy-karbonyl-3 ,4'-O-isopropylidenelsamycinu A,vyznačující se tím, že se k roztoku 2**-N-t-butoxykarbonylelsamycinu A a 2,2-dimethoxypropanu v su-chém dichlormethanu přidá za teploty místnosti kyselinap-toluensulfonová a potom nasycený vodný roztok hydrogen-uhličitanu sodného.
8. 8. Způsob přípravy meziproduktu, 6-0-acetyl-2**-N-t-outoxykarbonyl-3 *,4 *-0-isopropylidenelsamycinu A,vyznačující se tím, že se smísí 2*z-N-t-butoxykarbonyl-3*,4'-O-isopropylidenelsamycin A, kyselinaoctová, dicyklohexylkarbodiimid a báze v EtOAc při teplotě - 37 - místnosti a odparek se potom vyčistí.
9. 9. Způsob přípravy meziproduktu, 2 -N-t-butoxy-karbonyl-6-0-n-hexanoyl-3*,4*-0-isopropylidenelsamycinu A,vyznačující se tím, že se smísí 2 -N-t- butoxykarbonyl-3*,4*-0-isopropylidenelsamycin A, kyselinaoctová, dicyklohexylkarbodiimid a báze v EtOAc při teplotěmístnosti a odparek se potom vyčistí.
10. 10. Způsob přípravy meziproduktu, 2 -N-t-butoxy-karbonyl-3 *,4 *-0-isopropyliden-6-0-/N"-trif luoracetyl-^-ala-nyl/elsamycinu A, vyznačující se tím, že se smísí 2 -N-t- butoxykarbonyl-3*,4*-0-isopropylidenelsamycin A, kyselinaoctová, dicyklohexylkarbodiimid a báze v EtOAc při teplotěmístnosti a odparek se potom vyčisti.
11. 11 . Způsob přípravy meziproduktu, 2**-N-t-butoxy-karbonyl-6-O-/N-t-butoxykarbonyl-/0-alanyl/-3 *,4 *-0-isopro-pylidenelsamyčinu A, vyznačující se t í m, že se smísí 2**-N-t- * # butoxykarbonyl-3 ,4 -Q-isopropylidenelsamycin A, kyselinaoctová, dicyklohexylkarbodiimid a báze v EtOAc při teplotěmístnosti a odparek se potom vyčistí.
12. 12. Způsob přípravy meziproduktu, 2**-N-t-butoxy-karbony 1-6-0-/N-t-butoxykarbonyl-3j-alanyl/-3 *,4 *-O-isopro-pylidenelsamyčinu A, vyznačující se tím, že se smísí 2z*-N-t-butoxykarbonyl-3 ,4 -O-isopropylidenelsamycin A, kyselinaoctová, dicyklohexylkarbodiimid a báze v EtOAc při teplotěmístnosti a odparek se potom vyčistí. - 38 -
13. 13. Způsob přípravy meziproduktu, 2**-N-t-butoxy-karbonyl-6-0-/N-t-butoxykarbonyl-D-alanyl/-3 ,4 *-0-isopro-pylidenelsamycinu A, vyznačující se t í m, že se smísí 2**-N-t-butoxykarbonyl-3*,4*-0-isopropylidenelsamycin A, kyselinaoctová, dicyklohexylkarbodiimid a báze v EtOAc při teplotěmístnosti a odparek se potom vyčistí.
14. 14. Způsotj přípravy farmaceutického prostředku,vyznačující se tím, že se smísí slouče-nina z kteréhokoliv z nároků 1 až 13 s jedním nebo vícefarmaceutickými nosiči, ředidly nebo excipienty.
15. 15. Sloučenina podle kteréhokoliv z nároků 1 až13 pro použití při léčení nebo k prevenci tumorů.