CN85106098A - 生物除臭剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明论述了一种生物除臭剂及其制备方法，其生物除臭剂，含有(a)至少选自除臭乳杆菌，清除乳杆菌和硫酸乳杆菌与亚硝酸乳杆菌的混合菌种之中的一种菌种，和(b)具有产生抗生素能力的粪链球菌。

Description

本发明是关于生物除臭剂及其制备方法，更具体的说，是关于含有某种乳杆菌属菌种和粪链球菌的混合物的一种除臭剂。

使用各种微生物以去除分解物及其类似物的臭味，或者降低或去除由分解物或其类似物所产生的讨厌气味，这都是已知的。某些细菌性的已用于体内，而某些细菌则以分散体形式用于环境。例如，日本专利说明书7297/83和英国专利1584693认为以分散体用于环境的细菌是有除臭功能的。此外，在体内有除臭功能的微生物已由有关发明者进行了研究。（例如，参阅美国专利№4345032，英国专利№.1584694等）。

在这些除臭剂中，提及选用于体内的微生物有：除臭乳杆菌（Lactobacillus    dedorans），清除乳杆菌（Lactobacillus    clearans），硫酸乳杆菌（Lactobacillus    sulfurica），亚硝酸乳杆菌（Lactobacillus    nitrous），等等。

可是，这些除臭剂微生物是有缺点的，当给与人和动物使用时，所得的除臭效果往往是不一样的，甚至当给与同样菌种，同样剂量时，也会因个人、或动物品种和给药条件的不同而不同。因此要求进一步改进、以使得在将这些微生物给与人和动物时，可以不考虑个人或动物的类别，而能得到确切的和固定的效果。

在这种情况下，进行了各种研究以提高除臭乳杆菌，清除乳杆菌、硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌的除臭效果，并克服上述缺点，而本发明在这方面已经完成。

发明的概要

因而，本发明的一个目的是提供一种新的生物除臭剂及其制备方法。

本发明的另一个目的是提供一种用于人和动物，不用考虑个人和动物的类别以及给药条件而具有固定除臭作用的新的生物除臭剂及其制备方法。

本发明还有一个目的是提供一种给与人和动物使用的，不用考虑个人和动物类别以及给药条件而具有优良和持久除臭效果的生物除臭剂及其制备方法。

本发明的再一个目的是提供给与人和动物使用的一种生物除臭剂，不用考虑个人和动物类别以及给药条件，在给药不久就显示除臭效果并且在中止给药后长时间内持续有效，以及该除臭剂的制备方法。

在认真研究以后，现在发现，将上述微生物与另外某种微生物结合使用，可以达到上述目的，比改善微生物本身更好。

将（a）至少有一种选自全部属于除臭的乳酸杆菌的除臭乳杆菌、清除乳杆菌、和硫酸乳杆菌与亚硝酸乳杆菌的混合培养物的乳杆菌菌种，与（b）具有产生抗菌能力的粪链球菌相结合而使用，能达到本发明上述的目的。

因而，本发明提供一种生物除臭剂，该剂包括（a）至少选自除臭乳杆菌、清除乳杆菌、和硫酸乳杆菌与亚硝酸乳杆菌的混合菌种中的一种与（a）具有产生抗菌能力的粪链球菌。

本发明提供一种制备生物除臭剂的方法，方法是将（a）至少选自除臭乳杆菌、清除乳杆菌和硫酸乳杆菌与亚硝酸乳杆菌的混合菌种中的一种菌种和（b）具有产生抗菌能力的粪链球菌进行混合。

本发明还提供一种生物除臭剂，该剂是由（a）至少选自除臭乳杆菌、清除乳杆菌和硫酸乳杆菌与亚硝酸乳杆菌的混合菌种中的一种菌种，（b）具有产生抗菌能力的粪链球菌和还有（c）一种双歧杆菌菌种和/或一种芽胞杆菌菌种所组成的一种复合物。

本发明提供一种制备生物除臭剂的方法，该法是将（a）至少选自除臭乳杆菌、清除乳杆菌和硫酸乳杆菌与亚硝酸乳杆菌的混合菌种中的一种菌种，（b）具有产生抗菌能力的粪链球菌和（c）一种双歧杆菌菌种和/或一种芽胞杆菌菌种进行混和。

发明的详述：

在本发明中所使用的除臭乳杆菌的特性和其分离方法都描述于日本专利说明书49193/82中，除臭乳杆菌具有以下的性质：

（1）a）含硫原的臭味化合物（如Na₂S·9H₂O）和含氮原子的有臭味化合物（如NH₂）是使除臭乳杆菌生长的主要物质。例如，甚至当除臭乳杆菌在单独的Stephanson-Whetham（S-W）培养基中不能生长时，在有含硫原子的有臭味化合物和/或含氮原子的有臭味化合物存在时，就变成能够生长。

b）如果除臭乳杆菌在按本发明所使用的培养基中培养，例如，加有酪蛋白氨基酸和维生素的Stephansen-Whetham培养基，则在对数级生长期，在培养基中加入含硫原子的有臭味化合物、含氮原子的臭味化合物和/或含碳原子的臭味化合物会促进或加速生长。

c）如果在培养基中，有含硫原子的臭味化合物、含氮原子的臭味化合物和/或含碳原子的臭味化合物存在时，则除臭乳杆菌继续生长直到这些化合物全部消耗或吸收。

（2）、除臭乳杆菌具有低的营养缺陷性（auxotrophy）并能在含有无机盐和糖的Stephansen-Whetham培养基中或在加有酪蛋白氨基酸或维生素的Stephanson-Whetham培养基中生长。

（3）、除臭乳杆菌对分解物具有高的消化能力和强的内部稳定能力。就是说，它在体内有强的清洁能力。

（4）、除臭乳杆菌是一种非病原菌种。

（5）、为了保持除臭乳杆菌的强除臭能力，要求在营养培养基中掺入含硫原子的氨基酸和/或含硫原子、氮原子或碳原子的臭味化合物。

（6）、为了贮存细胞体，要求将上述的物质和/或甘氨酸、谷氨酸、赖氨酸、丙氨酸、苯基丙氨酸、藻蛋白碱、天门冬氨酸等等放置在除臭乳杆菌细胞体的周围。

按照上述分离方法制备的或具有上述性质的除臭乳杆菌的任何菌种都可以用于本发明。

能用于本发明的除臭乳杆菌的最好菌种是保藏在日本工业科学和技术公司，发酵研究所〔Agency    of    Industrial    Science    and    Technology，Fermentation    Research    Institute（Japan）〕的那些菌种，其国家登记号是FERM-P    1946，2742，2779，2780，2781和2782。

用于本发明的清除乳杆菌的性质和其分离方法描述于日本专利申请（OPI）11177/84，美国专利申请511805中。清除乳杆菌具有以下的性质。

（1）a）含硫原子的臭味化合物（如Na₂S·9H₂O），含氮原子的臭味化合物（如NH₃）和/或含碳原子的臭味化合物（如低脂肪酸）对清除乳杆菌的生长不是主要的。在清除乳杆菌不能生长的培养基中，甚至加入上述物质也不能变成清除乳杆菌能生长的培养基。

b）在对数级生长阶段在清除乳杆菌的培养基中加入含硫原子的臭味化合物，含氮原子的臭味化合物和/或含碳原子的臭味化合物不能导致促进或加速生长。

c）清除乳杆菌对含有硫原子的臭味化合物和含氮原子的臭味化合物都多少有些利用或吸收。（许多菌种约利用其30～90%）。可是，清除乳杆菌不能完全利用这些物料。（注意到除臭乳杆菌完全吸收这些化合物）。

（2）、清除乳杆菌的营养缺陷性是低的。在Stephansen-Whetham培养基中仅加入酪蛋白氨基酸和维生素后，它就能生长。

（3）、清除乳杆菌在肉浸膏bauillon培养基中的繁殖能力，与大肠杆菌比较，是在0.9～1.1倍的范围之内。清除乳杆菌使用分解物虽然不完全，但将它引入体内后，一般2-3天在体内多少有些清洁能力，最多约有二个星期。

（4）、清除乳杆菌，在一切性质方面与乳杆菌属相符。但是，与以前已知的菌种相比，就利用或吸收含有硫原子的臭味化合物（如Na₂S·9H₂O）和含有氮原子的臭味化合物（如NH₃）的能力而论，如上所述是十分不相同的。（除除臭乳杆菌以外，以前已知的菌种都不利用这些类型的化合物）。其营养缺陷性是低的。

（5）、清除乳杆菌的内部稳定能力是低于除臭乳杆菌，虽然它比以前已知的乳杆菌菌种为强）。

（6）、用于本发明的清除乳杆菌是非病原菌种。

（7）、要保持用于本发明的清除乳杆菌的强除臭能力，要求在营养介质中掺入含硫原子的氨基酸和/或含硫原子、氮原子和/或碳原子的臭味化合物。

（8）、为了贮存细胞体，要求将上述用于除臭乳杆菌的物质放置在清除乳杆菌的细胞体周围。

按照上述分离方法制备的或具有上述性质的清除乳杆菌的任何菌种都可以用于本发明。

能用于本发明的清除乳杆菌的最好菌种是保藏在日本工业科学和技术公司，发酵研究所的那些菌种，其国家登记号是FERM-P    6587，6588，6589和6590。在这些菌种中，登记号为FERM-P    6587和6590的菌种也保藏在日本、大阪、发酵学院（Institute    of    Fermen-tation，Osaka，Japen）其国际登记号为IFO    14253和14254。

用于本发明的硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌的性质和其各自分离方法描述于日本专利申请4923/84和美国专利申请511805中。

用于本发明的硫酸乳杆菌，仅利用含硫原子的臭味化合物，而亚硝酸乳杆菌仅利用含氮原子的臭味化合物，虽然利用不完全，但是在所有情况下保持在90%或更少些。可是，除了这性质以外，它们具有与清除乳杆菌同样的性质。所以在体内用硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌进行除臭不能得到满意的效果，除非两者结合使用。

按照上述分离方法制备的或具有上述性质的硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌的任何菌种，都可以用于本发明。

最好的硫酸乳杆菌的菌种是保藏在日本工业科学和技术公司、发酵研究所的那些菌种，其国家登记号是FERM-P    7383和7384，该菌种也保藏在日本、大阪、发酵学院，其国际登记号是IFO    14255和14256，最好的亚硝酸乳杆菌是保藏在日本工业科学和技术公司，发酵研究所的那些菌种，其国家登记号是FERM-P    7385和7386，该菌种也保藏在日本、大阪、发酵学院，其国际登记号各为IFO    14257和14258。

上述乳杆菌的四种类型与过去已知的乳杆菌的不同点是：

（1）、过去已知的乳杆菌菌种在其生长期不需要含硫原子的臭味化合物和含氮原子的臭味化合物作为主要物质。甚至当这些化合物加入到已知乳杆菌不能生长的培养基中，菌种也不会开始生长。此外，当这些化合物在已知菌种的对数生长期时加入，也不会引起促进或加速生长。以前已知的乳杆菌菌种完全不消耗这些化合物，所以最后留存的化合物量就是原来的加入量。

（2）、过去已知的乳杆菌菌种是按其营养缺陷性分组：在Stephansen-Whetham培养基中加入酪蛋白氨基酸和维生素能生长的菌种组和除了加入酪蛋白氨基酸和维生素外如果不再加入其他配料，在Stephansen-Whetham培养基中不能生长的菌种组。

（3）、过去已知的乳杆菌菌种在一般培养基中的繁殖能力，与大肠杆菌等比较是较差的。（如，是大肠杆菌的0.5倍）。它们内部的稳定能力是在1或2天。对含碳原子的臭味化合物的清除能力是未知的。

四种乳杆菌菌种全部具有以下的乳杆菌性质：就是，它们是革兰氏阳性，厌氧或微需氧的，成杆状无芽胞的，并取决于菌种，可以是球形杆状，弯曲杆状，棍棒状或线状。它们是不动的，对过氧化氢酶是负性，并且不还原硝酸盐。它们不分解明胶和不产生吲哚或硫化氢。其中有些是双极染色。它们分解蛋白质和脂肪的能力即使有也是很弱的。它们在缺氧或微需氧条件下生长，比在有氧条件下生长最好。它们具有强的分解糖的能力并且是耐酸的。如果用于葡萄糖发酵，则产生乳酸，产量大于50%。在加入醋酸时，促使其生长。对动物和植物来说，它们不是病原的。

清除乳杆菌，如果口服大量，其作用非常缓和并降低在粪便中的臭味物质，在继续服用时，没有不舒服的感觉。可是，当服用停止，则在短期内该菌株通过肠胃道排泄而失去其在体内的除臭剂。

除臭乳杆菌的除臭能力，与清除乳杆菌相比，要高几十倍或更多，而且它除臭完全，就是说，它完全降解有臭味的物质。例如在使用除臭乳杆菌的培养液的十分之一（按重量计算）时，则人粪在48小时内完全没有臭味。

用于本发明的除臭乳杆菌是由乳酸乳杆菌（Lactobacillus    lactis）的培养制得的，该乳酸乳杆菌在示于下表的任一最小营养培养基中，在不影响这些菌种的性质和以后分离的培养基中，繁殖并能够或不能够产生抗菌素。

类别    最小营养培养基

（a）葡萄糖或淀粉，无机盐和水

（b）在（a）中加入粪便中存在的含硫、氮或碳的臭味化合物

（c）在（a）中单独地加入维生素或组合地加入

（d）在（a）中单独地加入氨基酸或组合地加入

（e）在（a）中单独地加入特定的维生素或组合地加入

（f）在（a）中单独地加入特定的氨基酸或组合地加入

（g）在（a）中单独地加入含硫氨基酸或组合地加入。

如有必要，最好给与抗性以抵抗抗菌剂，这样得到的乳酸乳杆菌能按常规方法加工成制剂。不影响乳酸乳杆菌性质的上述培养基是如本发明所述的各最小营养培养基，其结合体或其类似的琼脂培养基。视情况而定，一般琼脂培养基可以在中间使用。

此外，分离清除乳杆菌要使用比分离除臭乳杆菌营养素更高的培养基。例如，分离清除乳杆菌的培养基含有肉浸膏、胨、Na₂S·9H₂O、乳酸钠、葡萄糖和琼脂。对亚硝酸乳杆菌最好的培养基含有肉浸膏，胨、MH₃、乳酸钠、葡萄糖和琼脂。用于硫酸乳杆菌的最好培养基包含肉浸膏、胨、Na₂S·9H₂O、乳酸钠、葡萄糖、Caco₃、和琼脂。

在这样呈现的菌落中，将边缘是透明的菌落进行筛选，并进行气体产生试验，保留不产生气体的细胞。然后，这样得到的细胞进行溶血试验以得到不溶血的细胞，以后在LBS培养基中培养。当确证细胞是属乳杆菌后，则检测Na₂S·9H₂O和NH₂降低的程度和检测乳杆菌菌种加速成长的程度，并分为除臭乳杆菌、清除乳杆菌、硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌。对每种乳杆菌，凡高于μ值的都收集。

用于本发明的乳酸乳杆菌，例如，可按下法分离：

在培养基（A）〔Stephansen Wetham培养基S-W〕+维生素+琼脂（其中〔S-W〕含有1克KH₂PO₄，0.7克MgSO₄·7H₂O，1克Nacl，4克（NH₄）₂HPO₄，0.03克FeSO₄·7H₂O和5克葡萄糖）或培养基（B）〔S-W〕+酪蛋白氨基酸+琼脂中，用粪的无氧培养形成菌落。然后，将菌落在LBS培养基〔用于乳酸乳杆菌的选择培养基，含有胰蛋白酶解酪蛋白10克，5克酵母浸膏，10克肉浸膏、6克KH₂PO₄、2克酒石酸氢铵、20克葡萄糖、1克吐温80（聚氧化乙烯山梨聚糖单油酸的商用名）、40克醋酸钠，15毫升溶液B和3.7毫升冰醋酸（99.5%），该培养基不用调节PH值也不用消毒，溶液B是由0.5克MgSO₄·7H₂O、2.47克MnSO₄·nH₂O、0.5克Nacl、10克MgSO₄·7H₂O和250毫升水组成〕中培养，收集生长在培养基上的细菌细胞。将细胞在正常的琼脂培养基中培养，其中只将生长准确符合乳酸乳杆菌定义的那种菌种保留。

然后，将菌种按营养缺陷性的不同分类，用以下几种营养培养基：

（a）葡萄糖或淀粉，无机盐和水;

（b）在（a）中加入在粪中限于含有一种的，含硫、氮或碳的臭味化合物;

（c）在（a）中单独加入维生素或组合加入;

（d）在（a）中单独别加入氨基酸或组合地加入;

（e）在（a）中单独加入特定维生素或组合加入;

（f）在（a）中单独加入特定的氨基酸或组合加入;

（g）在（a）中单独加入含硫氨基酸或组合加入;

在上述培养基中，维生素包括维生素A、维生素B₁、维生素B₂、维生素B₆、维生素B₁₂、尼克酰胺、泛酸钙、维生素C、维生素D₁₂，等等，特定的维生素包括除上述维生素以外的维生素，如维生素、维生素等。氨基酸包括除特定氨基酸以外的氨基酸和含硫氨基酸，如甘氨酸、谷氨酸、赖氨酸、丙氨酸、苯基丙氨酸、藻蛋白碱、天冬氨酸等等，而特定氨基酸包括色氨酸。

含硫氨基酸包括胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、氨基乙磺酸、等。

用于本发明的粪链球菌是常常加在家畜饲料中的那种。然而，它必需是能产生抗菌素的菌种，因为所产生的抗菌素抑制内部腐生生物的生长和繁殖并间接帮助用于本发明的乳酸杆菌的繁殖。

为了分离这种粪链球菌，使用人或家畜的粪便作为分离源，并将它们在用于粪链球菌的选择培养基中，如含有20克蛋白胨、5克葡萄糖、4克K₂HPO₄、15克KH₃PO₄、0.5克NaNO₃、5克Nacl、0.032克BCP（溴甲酚紫）、15克琼脂和1升水并有6.9～7.2的PH值的SF培养基中在有氧的条件下，温度约为34～39℃时进行培养。将所得的粪链球菌进行溶血试验以保留不溶血的菌种，从中将具有产生抗菌素能力的菌种继续保存。将这样保存的菌种接种到含有脱脂牛奶和蔗糖的培养基中。从产生的细菌细胞中，选出具有好气味和好味道的细胞并用于本发明。

一种测定菌种是否产生抗菌素的代表性试验方法包括：在含有糖类和CaCO₃的琼脂培养基上涂上一层直径为10毫米量的粪链球菌，在37℃时培养48-72小时，在培养基上，从所培养的粪链球菌中心以辐射状划线培养病菌，并继续培养24～48小时，以测试粪链球菌产生抗菌素。

由粪链球菌形成的抗菌素是耐热的氨基葡糖苷，并从一种菌种中形成4～5种具有狭的抗微生物活性谱的抗菌素。具有狭的抗微生物活性谱的四、五种抗菌素全体呈现出同样的性质，犹如具有很广的抗微生物活性谱的单一抗菌素。

关于毒性，与总共达1000亿的其他内部细菌的活性和代谢比较，粪链球菌的毒性是低的。至于产生抗菌素的不溶血的粪链球菌，认为这样的菌种十分有利于乳杆菌和双歧杆菌的活性并抑制病原细菌的活性。

粪链球菌的最好菌种是保藏在日本发酵研究所的那些菌种，其国家登记号是FERM-P    2082和7382。

如上所述，按本发明在除臭乳杆菌、清除乳杆菌和硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌的混合菌种中至少有一种菌种与上述粪链球菌混合使用。乳酸杆菌对粪链球菌的组合比例，按重量计，为150～0.01∶1，较好的是100～0.01∶1，最好的是30～0.03∶1。首先，常常使用的比例是约10∶1，这是肠微生物区系的比例。直接用于皮肤粘膜的，则乳杆菌的用量少于链球菌，即，乳杆菌对链球菌的比例，按重量计，最好是1～0.03∶1。另外，为了在使用硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌时达到与清除乳杆菌同样效果，则使用硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌的混合物就够了，其每种用量与清除乳杆菌相同。

为了制备这种乳杆菌和粪链球菌的干细菌制剂，如需要还可以加入双歧杆菌和芽胞杆菌，最好的加入比，按重量计，为5～15分乳杆菌，10～100分的双歧杆菌，0.05～0.15分的芽胞杆菌对1分粪链球菌，将它们一起混和就可以。

按本发明，在上述四种乳杆菌菌种和粪链球菌组合使用时，在其组合中，也可以用双歧杆菌，芽胞杆菌或双歧杆菌和芽胞杆菌的混合物。在停止服用后，双歧杆菌对仍然保持除臭效果是有效的。而芽胞杆菌对提高乳杆菌和链球菌在消化臭味物质以除臭的能力是有效的。

在本发明所用的双歧杆菌可以是常用于生产酸乳酪的双歧杆菌，也可以是用于饲料或食品的双歧杆菌。在本发明中是使用保藏在ATCC中的菌种。

在本发明中作为芽胞杆菌使用的最好是：在酸乳酪中用作种菌最好的凝固杆菌菌种，在用于生产发酵大豆最好的枯草杆菌菌种，及其类似菌种。其他的用于饲料和食品的芽胞杆菌菌种也可以使用。

双歧杆菌的用量按重量计，最好是本发明所用的乳杆菌量的1～10倍，而芽胞杆菌的用量，按重量计，为本发明所用乳杆菌的1～0.01倍。

发现本发明所用菌种在培养后，所得到的各菌种之比相当于原来在培养基中加入的各菌种之比。然而，要培养包括双歧在内的几种菌种，要求选择一种培养基，在该培养基中，双歧杆菌的生长良好并和同时培养它们的培养基一样，这样，具有低生长速率的双歧杆菌可以比其他菌种早些开始繁殖。

本发明的除臭剂主要是制成活的细菌制剂，例如，按下面的方法：

一种方法是（1）、其中将用于本发明的乳杆菌和用离心法收集的粪链球菌的湿细胞的水分降低（最好按重量），将细胞与赋形剂混和并在真空中干燥（最好到水分含量，按重量计约为2%）。另一种方法是（2）、其中将本发明所用的乳杆菌和用离心法收集的粪链球菌的湿细胞分散在赋形剂的溶液中，将所得溶液冷冻，干燥并再与干赋形剂混和。此外，还有方法（3），其中将由上述方法（1）和（2）所制备的含单菌种或多菌种的制剂混和以获取含有适量各菌种的制剂。

合适的赋形剂，包括淀粉、乳糖、蔗糖、脱脂的牛奶、糊精、明胶、碳酸钙和含硫的氨基酸，可以单独使用也可以将其中二种或更多种混合使用。赋形剂的用量，按重量计，最好是每分湿细胞使用1～50分赋形剂。如果要求将双歧杆菌和/或芽胞杆菌与上述湿细胞一起使用，则将双歧杆菌和/或芽胞杆菌混入以便形成一种乳化液，该乳化液得出一种具有各菌种有效比的干的细菌制剂。最好是按重量计，每一分粪链球菌使用5～100分在本发明中所用的乳杆菌和0.05～0.15分双歧杆菌和/或芽胞杆菌。

在上面方法（2）中所用的合适赋形剂溶液包括乳糖溶液、蔗糖溶液、脱脂的牛奶溶液、淀粉溶液及其类似的溶液。

在上面方法（1）到（3）中，至少有一种化合物是选自含硫氨基酸，如胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、氨基乙磺酸等等，特定的氨基酸，如谷氨酸、谷氨酸钠、甘氨酸、丙氨酸、组氨酸、酪氨酸等等，或含氮原子、硫原子或碳原子的臭味化合物，其含量最好为0.1～10的重量百分数。含硫氨基酸、特定氨基酸或臭味化合物，在阻止除臭剂在培养或贮存时引起的除臭能力的降低中是有效的。由效果看来，含硫氨基酸是最好的，在特定氨基酸中，其效果是按谷氨酸，谷氨酸钠、甘氨酸、丙氨酸、组氨酸和酪氨酸的次序而降低。

本发明的除臭剂能用于栓剂、外科用脱脂棉的制剂。另外最好使用予先将乳杆菌和粪链球菌转变成对灭菌剂有抗性的菌种。将乳杆菌和粪链球菌与等渗氯化钠溶液按所要求比例，如，10∶1混和，将混合物放置适当时间，例如，5分钟到2小时，用溶液吸满棉条而制成栓剂。为制备外科用脱脂棉，将两种菌种分别干燥并相继粘结到棉花上，或者将两种菌种与等渗氯化钠溶液混合，将棉花浸入所得的混合物中并干燥。当然制备栓剂或外科用脱脂棉的方法是不限于上述这些方法。就是说，除臭剂最好是在干燥的条件下以保持其能力。

本发明的除臭剂能用作饲料及类似物的有价值的添加剂。

为添加到饲料中，将乳杆菌和粪链球菌在一个培养基中按所要求的比例，如，10∶1，同时培养，离心后，将培养溶液干燥并用作饲料的添加剂，或者将乳杆菌和粪链球菌分开培养而制成干细胞，将两种干细胞按所要求的比例，如，10∶1的比例，混合而用作饲料的添加剂。因为在乳杆菌和粪链球菌之间的耐热性是不同的（后者比前者更为耐热），所以为增加生产制剂使用后面的方法更为经济。

一般说来，当考虑进入粘膜的稳定能力，是使用需氧菌种还是使用厌氧菌种，这决定于加上菌种的粘膜是在有氧条件下存在还是在无氧条件下存在。虽然乳杆菌和链球菌是对粘膜具有很好亲和力的细菌代表，喜欢有氧条件的链球菌适宜用于嘴的粘膜，而甚至在缺氧条件还有活性的乳杆菌适宜用于阴道区域的粘膜。

然而，如果诸如腐生生物和病原体之类的污染细菌存在于阴道区和有关阴道的部位（尤其是阴部），在许多情况下只使用乳杆菌要达到予期效果是困难的。虽然为降低这些污染细菌予先用消毒剂并使用抗消毒剂的乳杆菌进行，要得到予期的效果还是困难的，因为消毒剂的作用并不长期持续。

本发明的除臭剂特别在这种部位是有效的。由于由粪链球菌所形成的抗菌素作用和粪链球菌在有氧条件下对粘膜的高亲合力的作用，乳杆菌能有效地显示其遗传性质。这样，本发明的除臭剂在用作栓剂和其他外用药中是有价值的。最好予先使用消毒剂，然后使用已有抗消毒剂的本发明的栓剂或外用药。

这样，本发明的除臭剂显示有优良的作用，不仅是在肠内，而且也在其他粘膜处尤其是在阴部。

下面，详细说明在本发明中所用的链球菌的分离方法。但是，不能认为发明是限于这种方法。

粪链球菌的分离方法：

（1）、SF培养基（含有20克胨，5克葡萄糖、4克K₂HPO₄、1.5克KH₂PO₄、0.5克NaNO₃、5克Nacl、0.032克BeP、15克琼脂和1升水，其PH值为6.9～7.2）是粪链球菌的选用培养基，将该培养基用作培养基。将人和动物粪便悬浮在SF培养基中，在有氧条件下，在37℃培遍48小时。

（2）用分类识别是粪链球菌的细胞进行溶血试验，并保留非溶血的细胞。

（3）测试产生抗菌素的能力，保留具有产生抗菌素能力的菌种。

（4）然后，将所保留的菌种接种到酸乳酪的培养基（含有100克的脱脂牛奶和100克蔗糖）中，并在37℃培养48小时以制备酸乳酪。将酸乳酪进行气味和味道的试验，将具有好的气味和味道的细胞保留。

从培养基溶液中收集细胞：

在本发明所用的清除乳杆菌、除臭乳杆菌、硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌、粪链球菌和芽胞杆菌的情况中，将每种菌种单独接种到上述MRS-乳糖培养基中，即含有10克肉浸膏、10克

、5克酵母浸膏，20克乳糖、1毫升吐温80.2克KH₂PO₄、5克醋酸钠、2克酒石酸铵、0.2克MgSO₄·7H₂O和0.05克MnSO₄·4H₂o的培养基，在37℃培养72小时，用冷冻的离心机收集细胞。

在双歧细胞的情况中，菌种是接种到加有1毫克维生素B₂、8毫泛酸钙和0.1毫克生物素的MRS-乳糖培养基中，在37℃培养96小时，用冷冻的离心机收集细胞。

给出下面的实例以更详细地阐述本发明，在这里，除了另有指明，全部分量、百分率、比率及类似量度都是按重量计。

例1

用乳杆菌属菌种和粪链球菌的混合物检测对Na₂S·9H₂O和NH₃的除臭程度。

将下面的乳杆菌属菌种和粪链球菌，接种在含有5克肉浸膏，5克胨，1克葡萄糖，1克CaCO₃和1克粪便，并含有0.5克Na₂S·9H₂O或0.5克的培养基中，并培养以检测对Na₂S·9H₂O和NH₃的减小程度。其结果示于表1。

为了比较，除了单独使用下面的乳杆菌来代替上面的乳杆菌和粪链球菌的混合物之外，其他都重复同样的方法。其结果示于表2。

由表明显看到，与单独使用乳杆菌相比较，混合使用乳杆菌和粪链球菌的结果，增加吸收能力达10%到20%。

在吸收能力方面，除臭乳杆菌比清除乳杆菌为更强。前者在72小时内完全吸收Na₂S·9H₂O和NH₃，而后者在这个时间内不能完全吸收而有剩余，亚硝酸乳杆菌和硫酸乳杆菌也不能完全吸收它们。

用于试验的菌种示于表3：

表1

Na₂S·9H₂O 500ppm NH₃500ppm

乳杆菌属    粪链球菌

24    48    72小时    24    48    72小时

清除乳杆菌

6587

390 280 220ppm 400 280 225ppm

6588

300 225 180 300 225 180

6589

300 225 180 330 225 190

6590

250 110 90 300 135 110

亚硝酸乳杆菌

7385

510 510 530 400 280 225

7386

515 515 520 400 280 225

硫酸乳杆菌

7383

400 280 220 520 580 610

7384

400 280 220 520 580 620

续表1

除臭乳杆菌

1946

180 30 0 180 40 0

2742

140 20 0 140 40 0

2779

225 80 0 225 90 0

2780

225 80 0 225 90 0

2781 180 60 0 180 70 0

2782

225 70 0 225 85 0

表2

Na₂S·9H₂O 500ppm NH₂500ppm

乳杆菌属

24    48    72小时    24    48    72小时

清除乳杆菌    6587    400    300    250ppm    400    300    250ppm

6588    300    250    200    350    250    200

6589    300    250    200    350    250    200

亚硝酸乳    6950    250    125    100    300    150    125

杆菌    7385    510    515    525    400    300    250

7386    515    520    525    400    300    250

硫酸乳杆菌    7383    400    300    250    515    590    625

7384    400    300    250    530    650    650

除臭乳杆菌    1946    200    50    0    200    50    0

2742    150    30    0    150    50    0

2779    250    100    0    250    100    0

续表2

除臭乳杆菌    2780    250    100    0    250    100    0

2781    200    70    0    200    80    0

2782    250    90    0    250    100    0

表3

用于试验的菌种

寄存

发酵研究所    大阪发酵学院    美国标准

菌库

（ATCC）

种类    国内登记号    国际登记号    国际登记号

FERM-P    FERM-BP    IFO

清除乳杆菌    №    6587    №    14253

№    6588

№    6589

№    6590    №    14254

除臭乳杆菌    №    1946

№    2742

№    2779

№    2780

№    2781

№    2782

亚硝酸乳杆菌    №    7385    №    14257

№    7386    №    14258

续表3

硫酸乳杆菌    №    7383    №    14255

№    7384    №    14256

粪链球菌    №    2082

（b菌种）

№    7382

（a菌种）

№ 6569（ 菌种）

№ 14506（

菌种）

双歧杆菌 № 11146（

菌种）

№ 11863（

菌种）

芽胞杆菌    №    2930

（A菌种）

№    3335

（B菌种）

（注）：在同一线上给与的登记号表示同一菌种。用于类别的缩写名写在登记号后面的园括号内。

粪链球菌的

菌种和

菌种产生抗菌素。

粪链球菌的 菌种和 菌种不能产生抗菌素。杆菌属的A菌种为用于酸乳酪（凝固杆菌）的种子细胞。杆菌属的B菌种是用于发酵大豆（枯草杆菌）的种子细胞。

例2

除臭试验是用FERM-P № 7382菌种（在下面称 菌种）作为粪链球菌进行的。

在1克新鲜的人粪中加入9毫升等渗性的氯化钠溶液。在这样取得的一组混合物（1）中，加入1毫升的清除乳杆菌培养细胞液，而另一组混合物（2）中加入1毫升的清除乳杆菌培养细胞液和0.5毫升的

菌种培养细胞液，然后把这些混合物在37℃放置48小时。

通过气味的判断，注意到混合物（2）的试验组其除臭程度较高，并且没有除臭的粪便量与混合物（1）的相比较减小到一半，而后者的试验情况下，十例中有二例的粪便没有除臭。

通过只口服清除乳杆菌和口服清除乳杆菌加上

菌种，对其排泄粪便除臭程度的检测情况下看到，其中服用清除乳杆菌加上 菌种的情况，除臭作用较高，并且没有除臭的实例少些。

这些试验（在体内）表示，清除乳杆菌和清除乳杆菌加上

菌种一样，在有粪便的肠内（含有生腐菌，其中大部易是厌氧的，数量相当于1.5×10¹¹细胞/克粪便）是有效的。

尽管注意到，虽然在接触清除乳杆菌和清除乳杆菌加上 菌种时都有相当好的效果，但正如所料到的，与单独清除乳杆菌相比较，清除乳杆菌加上

菌种的结合使用更为有效。这里有效，其意思是指达到高的除臭程度并且没有除臭的实例减少。

虽然上述试验是关于清除乳杆菌的，但对除臭乳杆菌和硫酸乳杆菌加上亚硝酸乳杆菌也进行了同样的比较试验。那就是说，除臭乳杆菌同除臭乳杆菌加上

菌种之间，硫酸乳杆菌加上亚硝酸乳杆菌同硫酸乳杆菌加上亚硝酸乳杆菌加上

菌种之间，进行比较试验。

在硫酸乳杆菌加上亚硝酸乳杆菌中观察到和清除乳杆菌同样的倾向。

在除臭乳杆菌的情况中，

菌种的作用更大，并且更显著。即，约用

菌种，产生抗菌素的粪链球菌，显示出对臭味有非常显著的作用，不仅口服，而且也可应用于妇女阴部。

所得的结果示于表6。

例3（生物除臭剂的制备）

酸乳酪的制备

（1）、通过清除乳杆菌和粪链球菌的发酵，制备酸乳酪：

将用于种子细胞的培养基（含有脱脂乳30克和氧化钙3克，并且PH值为7.0）分成2分，并灭菌。然后将上述的菌种分别接种在每一个培养基上，在37℃培养24小时，得到清除乳杆菌的种子细胞和粪链球菌的种子细胞。（清除乳杆菌的细胞数目为1.5×10⁹细胞/毫升，而粪链球菌的细胞数目为2×10⁹细胞/毫升）。

另一方面，将由脱脂乳100克，蔗糖100克和琼脂2克组成的酸乳酪培养基200毫升灭菌。

对这样获得的培养基中，加入10毫升的清除乳杆菌种子细胞和0.8毫升的粪链球菌。然后，在37℃培养24小时，以制备酸乳酪。

制成的酸乳酪含有清除乳杆菌2.5×10⁹细胞/毫升和粪链球菌2.5×10⁸细胞/毫升。清除乳杆菌与粪链球菌之比为10∶1（以重量计）。这种酸乳酪用于人和动物。

（2）、以清除乳杆菌，粪链球菌和双歧杆菌的发酵，制备酸乳酪：

清除乳杆菌和粪链球菌的种子细胞是通过制备种子细胞培养基，把每个菌种接种在培养基上，并在37℃培养24小时的方法得到。双歧杆菌另外接种在由脱脂乳30克，半胱氨酸1克，维生素B₂l克，泛酸钙8克和生物素0.1毫克组成的种子细胞培养基上，并在37℃培养72小时。

另一方面，将由脱脂乳100克，蔗糖100克，琼脂2克和半胱氨酸1克组成的酸乳酪培养基200毫升灭菌，并进行灭菌过滤。然后在培养基中加入维生素B₂l毫克，泛酸钙8毫克，生物素0.1毫克。

对如此制得的培养基中，加入10毫升的双歧杆菌的种子细胞，并在37℃培养36小时而完成。

然后，在培养基中再同时加入清除乳杆菌种子细胞10毫升和粪链球菌种子细胞0.8毫升，并在37℃再继续培养36小时制备酸乳酪。

这样制得的酸乳酪，含有2×10⁹细胞/毫升的清除乳杆菌，2×10⁸细胞/毫升的粪链球菌和3×10⁹细胞/毫升的双歧杆菌。清除乳杆菌∶粪链球菌∶双歧杆菌之比＝10∶1∶15（以重量计）。

例4（生物除臭剂的制备）

湿细胞制剂的制备：

由肉浸膏10克，胨10克，酵母浸膏5克，乳糖20克，吐温801毫升，KH₂PO₄2克，乙酸钠5克，柠檬酸铵2克，MgSO₂·7H₂O0.2克和MnSO₄·4H₂O 0.05克组成的MRS-乳糖培养基中分别接种清除乳杆菌，粪链球菌和芽孢杆菌，并将每个菌种在37℃，纯粹培养72小时。完成培养后，通过离心分离收集细胞。（每1000毫升的产额为，清除乳杆菌1克，粪链球菌1.2克，芽孢杆菌1克。）在双歧杆菌的情况下，将1克半胱氨酸，1毫克维生素B₂，8毫克泛酸钙以及0.1毫克生物素加入到MRS-乳糖培养基中，并在37℃培养96小时。培养结束后，以离心分离收集细胞。（每1000毫升的产量为0.5克）。

（a）含有清除乳杆菌和粪链球菌的制剂：

将上面收集的清除乳杆菌细胞10克与粪链球菌细胞1克相混合做成制剂。将该制剂与饲料混和。（用于鸡的，在1公斤饲料中加入0.5克制剂，而用于猪的，在1公斤饲料中加入0.8克制剂）。

（b）含有清除乳杆菌，粪链球菌和芽孢杆菌的制剂：

将上面收集的清除乳杆菌细胞10克，粪链球菌细胞1克和双歧杆菌细胞100克一起混合做成制剂。将该制剂与饲料混和（例如，用于鸡的每公斤饲料中混和量为0.5克，而用于猪的，每公斤中混和量为1克）。

（c）含有清除乳杆菌，粪链球菌，双歧杆菌和芽孢杆菌的制剂：

将上面收集的清除乳杆菌细胞10克，粪链球菌细胞1克，双歧杆菌细胞100克以及芽孢杆菌细胞0.5克一起混合做成制剂。在饲料中加入该制剂（例如，用于鸡的，每公斤饲料中的制剂量为0.6克，而用于猪的，每公斤饲料中制剂量为1克）。

干的细胞制剂的制备：

（1）、半干性细胞制剂：

在上述的MRS-乳糖培养基和上述的用于双歧杆菌，清除乳杆菌，粪链球菌和双歧杆菌（原文可能有误，估计是“芽胞杆菌”）的培养基中分别接种并完成每个菌种的纯粹培养。

在用离心分离收集的每种湿细胞10克中加入300克的，加热到湿度为0.12%的干淀粉和加入1克胱氨酸并混合成最终湿度为2%或更小的湿的制剂。

（a）含有清除乳杆菌和粪链球菌的制剂：

将如此干燥和封口的清除乳杆菌10克和定样干燥和封口的粪链球菌1克相混合，做成半干制剂。将该制剂放入小瓶，在氮气下密封并存放在阴凉暗处。

（b）含有清除乳杆菌，粪链球菌和双歧杆菌的制剂：

将如此干燥和封口的清除乳杆菌10克，如此干燥并封口的粪链球菌 1克和如此干燥并封口的双歧杆菌100克一起混合，做成半干制剂。将该制剂放入小瓶，在氮气下密封并存放在阴凉暗处。

（2）、干的细胞制剂：

在上述MRS-乳糖培养基和上述用于双歧杆菌，清除乳杆菌，粪链球菌和双歧杆菌（原文可能有误，估计是“芽孢杆菌”）的培养基上分别接种，并完成纯粹培养每种菌种。将通过离心分离所收集的每种湿细胞10克分散在含1%乳糖和0.1%胱氨酸的溶液100毫升中，然后将溶液冷冻干燥。

（a）含有清除乳杆菌和粪链球菌的制剂：

将这样获得的清除乳杆菌活细胞制剂10克与这样获得的粪链球菌1克相混合，做成干细胞制剂。将该制剂装在胶囊中保存。

（b）含有清除乳杆菌，粪链球菌和双歧杆菌的制剂：

将上面得到的清除乳杆菌10克，上面得到的粪链球菌1克和在上面得到的双歧杆菌100克一起混合，做成干细胞制剂。将该制剂加工成药片，并贮藏在小瓶内。

例5

方法：

（1）、清除乳杆菌，除臭乳杆菌或硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌的等量混合菌种和/或芽胞杆菌的菌种的混合培养，可以使用由脱脂乳100克，蔗糖100克和琼脂2克组成的培养基来实现。首先，将该培养基在三天内间隙地灭菌30分钟。然后，将上面的菌种以所要求的细胞数的比例，同时接种在培养基上，并在37℃培养24小时以制备产品。

（2）、用于上面（1）中的菌种与双歧杆菌的混合培养，是在无菌条件下，在加有1克胱氨酸，1毫克维生素B₂，8毫克泛酸钙和0.1毫克生物素的上述培养基中实现的，双歧杆菌是在37℃下予先培养36小时，然后同时接种其他菌种，并在37℃，再继续培养36小时，以制备产品。

（3）、这样制备的产品，病人一天早、晚用二次，连续四天。

除臭试验的结果示于表4，表5和表6。表4表示以清除乳杆菌用作乳杆菌属菌种的试验结果。表5表示用除臭乳杆菌的试验结果。而表6表示用等量混合的硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌作为乳杆菌属菌种的试验结果。

除臭效果：

表4、5、和6所示的除臭效果按下面四项予与评价：

1）除臭作用是否迅速，即速率

2）除臭能力强还是不强，即强度

3）除臭效果能维持多少天，即有效期

4）排泄感觉是否正常，即感觉

对于上面每一项，若接受治疗的病人中有一半以上认为其效果显著，就在该项上注◎符号表示。若半数以上病人认为是有效果的，就在该项上符号○。若一半以上病人认为没有效果，就在该项上打符号△表示。

表4的说明：

清除乳杆菌和其它菌种结合使用的效果。

Ⅰ、两种菌种结合使用：

虽然

菌种和

菌种生长速率不同，

菌种比

菌种在生长速率方面更优越，但是不论

菌种和

菌种都可以产生很好的复合抗菌素。仅管

菌种和

菌种在生长速率和繁殖方面比

菌种更为优越，但是不论 菌种还是

菌种都不能产生抗菌素。

实验1：清除乳杆菌加 菌种的除臭效果比单独使用清除乳杆菌更快、更强。而且比单独使用的除臭有效期也更长;并且有三分之二的病人表示排泄感觉良好。

实验2：清除乳杆菌加

菌种的除臭效果比单独使用清除乳杆菌更强。然而，这种结合使用并没有使有效期延长。

实验3和4：清除乳杆菌加

菌种或清除乳杆菌加

菌种的除臭效果几乎和清除乳杆菌单独使用相同。

从实验1-4明显看出，清除乳杆菌的除臭效果可以用与能产生抗菌素的粪链球菌结合使用的方法进行改进。可是，清除乳杆菌与不能产生抗菌素的粪链球菌结合使用，其除臭效果得不到任何改进。

（2）实验5和6：对于清除乳杆菌加

菌种或清除乳杆菌加

菌种的情况，有三分之一接受实验的病人注意到除臭有效期比单独使用清除乳杆菌时有所延长。然而，还有三分之二的病人没有意识到这种延长。

按照生物学实验的已有经验，一般认为有30%左右达到效果，就表示其结合是相当有益的。

（3）A菌种是凝固杆菌，它的一个极好的性质是作为酸乳酪的种子细胞（参见US专利号4、210，672）。B菌种是枯草杆菌，它的一个极好性质是用作发酵大豆的种子细胞。它易于从市场买到。

实验7和8：对于清除乳杆菌加A菌种或清除乳杆菌加B菌种的使用情况，没有收到其除臭效果或除臭有效期比单独使用清除乳杆菌更强或更长的反映。用气相层析方法检测，也没有显于出与单独使用清除乳杆菌有什么显著区别。

Ⅱ、三种菌种的结合使用

（1）与产生抗菌素的粪链球菌和双歧杆菌结合使用。以实验结果可以看到，使用

菌种所获得的效果几乎和使用

菌种的效果一致（虽然

菌种比

菌种更为优越。因此，考虑到所获得的实验结果，将使用 菌种在下文中略去。

实验9和10：对于清除乳杆菌与

菌种和

菌种或

菌种的结合使用，有大约70%病人的除臭效果比单独使用清除乳杆菌更强，有效期更长，也没有令人不快的排泄感觉。在认识到该效果的病人中，20%反映三种菌种结合使用比实验1（清除乳杆菌加

菌种）的结合使用更为有效，30%反映与实验1的结合使用没有差别，剩下的60%反映三种菌种结合使用比实验1的结合使用要差些。它效果柔和而且有效期长。

实验17、18、21和22：对于清除乳杆菌与

菌种或 菌种和

菌种或

菌种的结合使用，其效果与实验3和4的情况相同。没有接到有关除臭效果增强或除臭有效期加长的反映。

按上面所述的实验结果，50%接受实验的患者反映向清除乳杆菌和产生抗菌素的粪链球菌中加入双歧杆菌，其除臭效果要优于单独使用清除乳杆菌。另外，50%接受试验的患者反映这三种菌种结合使用的效果和清除乳杆菌与产生抗菌素的粪链球菌结合使用的效果相同或更好些。仅有15%接受试验的患者反映两种菌种的结合使用比三种菌种的结合使用更好。

一般认为与不产生抗菌素的粪链球菌的结合使用没有这样的效果。

（2）与产生抗菌素的粪链球菌和芽孢杆菌的结合使用：

实验11和12：对于清除乳杆菌与

菌种和A菌种或B菌种的结合使用，有50%以上患者认为其除臭效果比单独使用清除乳杆菌要强些。然而对有些患者，除臭效果比清除乳杆菌和

菌种的结合使用或清除乳杆菌和

菌种和 或

菌种的结合使用要差些。

实验19和20：不结合是有效的

从上面的实验结果可以看出，在清除乳杆菌和产生抗菌素的粪链球菌中添加一种助消化杆菌（digestive    Bacillus）所得的除臭效果与不做此添加的效果相似。

而且发现与不产生抗菌素的粪链球菌结合使用并没有如此效果。

（3）与双歧杆菌和芽孢杆菌结合使用

实验25、26、27和28：对于它们之间任意结合中，大约有40%的患者认为除臭有效期延长了。在认为有效期延长的人中，约有20%认为其强度比单独使用清除乳杆菌要弱。

Ⅲ、四种菌种的结合使用

（1）与粪链球菌、双歧杆菌和芽孢杆菌的结合使用：

实验29、30、31和32：对于清除乳杆菌与

菌种、

菌种或

菌种和A菌种或B菌种的结合使用，其除臭效果有时比清除乳杆菌和

菌种结合使用的情况要差的多。然而，当四种菌种结合使用时，除臭有效期是最长的。

实验37、38、39、40、41、42、43和44：在清除乳杆菌与不产生抗菌素的粪链球菌，双歧杆菌和芽孢杆菌的结合使用时，其除臭效果不及单独使用清除乳杆菌。从这些实验结果可以发现，在清除乳杆菌和产生抗菌素的粪链球菌中添加双歧杆菌和芽孢杆菌时，与不做此添加比较，在其它方面没有明显变化，却可获得柔和的除臭效果和最长的有效期。

结论：

综合由清除乳杆菌与各种菌种结合使用所得的效果，由上面的结果明显看到，与单独使用清除乳杆菌比较，以下结合：

1、清除乳杆菌和产生抗菌素的粪链球菌。

2、清除乳杆菌和产生抗菌素的粪链球菌和双歧杆菌。

3、清除乳杆菌和产生抗菌素的粪链球菌和芽孢杆菌和。

4、清除乳杆菌和产生抗菌素的粪链球菌、双歧杆菌和芽孢杆菌。

具有更好的和/或更长的除臭效果。

表5和表6的解释：

表5表示用除臭乳杆菌代替清除乳杆菌的除臭试验结果，表6表示用硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌的混合菌种代替清除乳杆菌的除臭试验结果。

用除臭乳杆菌代替清除乳杆菌的试验结果几乎与表4中所示结果的趋势相同。

这里要指出，在粪便的除臭程度方面，在使用乳杆菌加上

菌种的情况中，是由附号◎表示除臭效果不同于在使用清除乳杆菌加上

菌种的情况中，由相同附号◎表示的除臭效果。例如，如果在停止单独使用清除乳杆菌时，则已经减少到原来一半的臭味立刻就恢复，而当清除乳杆菌与 菌种结合使用时，则臭味恢复到原来四分之一时就停止，使用的作用在臭味停止后持续三天。相反，如果单独使用除臭乳杆菌，则臭味暂时完全除去。可是，如果除臭乳杆菌与

菌种结合使用，则缩短了完全除臭所需的时间，并且在许多情况下，在使用停止后效果持续6～10天。

关于粪便臭味的恢复检测了试验对象的肠细菌状态，如果使用清除乳杆菌或硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌的混合菌种，则观察到肠细菌没有变化。即使当清除乳杆菌或硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌的混合菌种与

菌种结合使用时，肠细菌大约在5天内恢复到原来状态。可是，如果使用除臭乳杆菌，则一般大约需要15天才恢复，多数情况下，该肠菌时而表现出有改变（减少），这时，在某些情况，恢复是不完全的。由清除乳杆菌和除臭乳杆菌在肠细菌上所产生的不同效果是由于这些杆菌的特性不同。

表7表明：如果使用硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌的混合菌种，在关于除臭效率的周期和强度方面得到比使用清除乳杆菌几乎同样的结果。

例6

正如表4～6所示，根据本发明，当两种、三种或四种菌种以组合物形式给予人体时，在上文提到的判断标准中，有许多实验部分几乎判断不出明显的差异，因此，也试验了鸡和猪的生长程度。

按如下加入量将菌种加到饲料中：

对于鸡：每1公斤鸡的普通混合饲料中，以含有填充剂的无水细胞形式，加入0.2克各种菌种。

对于猪：每1公斤猪的普通混合饲料中，以含有填充剂的无水细胞形式，加入0.4克的各种菌种。

主要是通过比较使用前和使用后鸡肉或猪肉的重量与状态来完成试验的。

于是发现：与除臭乳杆菌、清除乳杆菌或硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌的混合菌种单独加入饲料中的情况进行比较，在除臭乳杆菌，清除乳杆菌或硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌的混合菌种与双歧杆菌（

菌种或

菌种）结合使用，或者与芽胞杆菌（A菌种或B菌种）结合使用的实验部分中;以及在除臭乳杆菌，清除乳杆菌或硫酸乳杆菌和亚硝酸乳杆菌的混合菌种与粪链球菌和双歧杆菌或芽胞杆菌结合使用，或者与粪链球菌、双歧杆菌和芽胞杆菌结合使用的实验部分中，饲料效果都改善了约10%。

例7

将在250毫升水的5毫克盐酸洗必太溶液中浸泡好的脱脂棉每15分钟三次插入病人的阴道，在该病人阴道中乳杆菌减少到百分之一或低于正常值，然后，将在清除乳杆菌，清除乳杆菌加上

菌种，除臭乳杆菌，和除臭乳杆菌加上

菌种的各种培养液中浸泡好的另一个棉杆，（这些对5γ洗必太溶液具有抗药性的）插入上述病人的阴道，每隔1小时更换一次新脱脂棉共5次，每种试验由15人来进行。

同时，将病人阴部用消毒剂处理三次以控制所污染的细菌，然后在阴道使用在上述菌种的各种培养液中浸泡好的脱脂棉。

以上处理过程持续一周，2天后，毫无例外地在阴道中观察到有许多乳杆菌存在，然而，再过5天后，尽管在用清除乳杆菌处理的某些病人中，观察到所提及的实验开始前乳杆菌有减少，但在清除乳杆菌与

菌种结合使用的实验部分的乳杆菌残存率比不与

菌种结合使用的乳杆菌残存率要高。

关于除去臭味的速率，认识到在与

菌种结合使用的实验部分和不与

菌种结合使用的实验部分之间存在明显的差异，（前者比后者除臭效率高）。

然而，本发明已详细描述并具有特殊方案的参考例，只要不违背本发明的精神和范围，对于技术熟练的人显然可以进行各种变化和更改的。

Claims (22)

1、一种生物除臭剂，含有(a)至少选自除臭乳杆菌、清除乳杆菌和硫酸乳杆菌与亚硝酸乳杆菌的混合菌种之中的一种菌种，和(b)具有产生了抗生素能力的粪链球菌。

2、权利要求1的生物除臭剂，其中乳杆菌对粪链球菌的比例约为150∶1到0.01∶1。

3、权利要求1的生物除臭剂，另外还含有（c）双歧杆菌和/或芽胞杆菌。

4、权利要求3的生物除臭剂，其中生物除臭剂，按重量计，按每分粪链球菌，含有约5-15分乳杆菌，约10-100分双歧杆菌和约0.05-0.15分芽胞杆菌。

5、权利要求4的生物除臭剂，其中所述的芽胞杆菌是凝固杆菌或枯草杆菌。

6、权利要求1的生物除臭剂，其中所说的生物除臭剂是一种活的细菌制剂。

7、权利要求1的生物除臭剂，其中所说的生物除臭剂另外含有一种药物上可接受的赋形剂。

8、一种活性饲料，含有饲料和权利要求1的除臭剂。

9、权利要求1的除臭剂，是成栓剂型的。

10、权利要求1的除臭剂，是成脱脂棉型的。

11、一种生物除

剂的制备方法，其中包括混合的（a）至少一种菌种是选自除

乳杆菌，清除乳杆菌和硫酸乳杆菌与亚硝酸乳杆菌的混合菌种，和（b）具有产生抗生素能力的粪链球菌。

12、权利要求11的方法，其中乳杆菌对粪链菌的比例约为150∶1到0.01∶1。

13、权利要求11的方法，另外还含有（c）双岐杆菌和/或芽胞杆菌。

14、权利要求3的方法，其中生物除 剂包括按重量计，每份粪链球菌中含有约5-15份乳杆菌，约10-100份双岐杆菌和约0.05-0.15份芽胞杆菌。

15、权利要求14的方法，其中所述的芽胞杆菌是凝固杆菌或枯草杆菌。

16、权利要求11的方法，其中所说的生物除

剂是一种活的细菌制剂。

17、权利要求11的方法，其中所说的生物除

剂另外含有一种药物上可接受的赋形剂。

18、权利要求11的方法，其中所说的除

乳杆菌、清除乳杆菌，硫酸乳杆菌和硝酸乳杆菌是选自至少在一种有气味的化合物存在下养成，该化合物包括含硫原子的化合物、含氮原子的化合物，含碳原子化合物和含硫的氨基酸。

19、一种生物除

剂的制备方法，包括降低湿细胞的水份，将该细胞与赋形剂混和并在真空中干燥，而湿细胞（a）至少一种菌种是选自除

乳杆菌，清除乳杆菌和硫酸乳杆菌与亚硝乳杆菌的混合菌种，和（b）由离心分离法所收集的具有产生抗生素能力的粪链球菌。

20、一种生物除

剂的制备方法，将湿细胞分散在赋形剂的溶液中并冻干所获得的分散体，而湿细胞（a）至少一种菌种是选自除

乳杆菌，清除乳杆菌和硫酸乳杆菌与亚硝酸乳杆菌的混合菌种和（b）由离心分离法所收集的具有产生抗生素能力的粪链球菌。

21、一种生物除 剂的制备方法，包括由权利要求19和20的方法而得到的混合菌种。

22、在体内除

的方法，所提供的一种生物除

剂包括（a）至少一种菌种选自除 乳杆菌，清除乳杆菌和硫酸乳杆菌与亚硝酸乳杆菌的混合菌种，和（b）具有产生抗生素能力的粪链菌。