CN2433627Y - 半定量检验装置 - Google Patents

Abstract

一种用于抗体抗原特异结合之免疫分析的半定量检验装置,其包含于一支撑体上粘附有导引区、抗体指示区、测试区、吸收区,其中抗体指示区含有作为指示剂之待测物之第一抗体复合物;测试区含有至少两种不同浓度之待测物之第二抗体。本实用新型可方便简单地判断检体中待测物的浓度范围。

Description

半定量检验装置

本实用新型有关一种用于抗体抗原特异结合之免疫分析的半定量检验装置。

抗体抗原特异结合之免疫分析技术已发展多年，并已配合色层分析法发展出简便、快速之方法，即使是任何无经验之个人，亦可以肉眼判读出现于尿液或血液中之特定抗原。

图1所示的一种传统性检验试片是在一基片上从顶端至末端分别设置吸收区、控制区、测试区、抗体指示剂区及导引滤纸，其中测试区中只有一条测试线，将该试片末端插入检验样本，即可对待测物进行定性分析。

福仁(Fren,1973,Nature(London)Phys.Sci.241:20-22)及豪瑞司伯格(Horisberger)等人(1984,Histochemistry,80:13-18)所发表之检验系统，其中通常需要一对单克隆抗体(第一抗体及第二抗体)，第一抗体及第二抗体能分别与特定抗原之两个不同抗原决定区结合。第一抗体先藉由非共价键紧密地与粉红胶体金悬浮液共轭形成胶体金－第一抗体复合物。第二抗体则被涂布于多孔硝化纤维膜。胶体金－第一抗体复合物与特定抗体结合后，再与第二抗体结合并固着于硝化纤维膜上。然后此复合物会形成可目测之粉红色带。此种试片检验法即为双面三明治免疫分析法。其中最广为使用之商品化产品为奥斯克维茨(Osikowicz)等人(1990,Clinical Chemistry,36:1586)所发展出，检验尿液中绒毛膜促性腺激素(HCG)之单一步骤验孕试片。

单一步骤检验试片虽可快速地检测检体中之待测物，然传统之单一步骤检验试片必须在当抗原大于某一特定浓度时始会出现正结果，且每一试片一次仅能侦测一种判读(cut-off)浓度，故其仅具定性分析之用途。

近期，美国食品及药物管理局公布一项关于摄腹腺癌之研究报告，其包含测量血液中PSA之浓度及数位式直肠检验法，对50岁(含)以上男性进行早期摄腹腺癌之分析。其结果显示，当血液中PSA之浓度介于每毫升4-10毫微克时，便应视为高危险群而需作进一步之生检实验。

传统之单一步骤检验装置无法由单一装置同时侦测一种以上之浓度而达到定量分析之目的。因此，目前极需一种能在处理检体(尤其处理大量检体)时，藉由单一步骤同时侦测检体中待测物至少二种判读浓度范围之方便又简单之单一半定量筛检装置，以利专业与非专业检测人员藉由不同浓度之显示结果，判断待测物之浓度范围，进一步确认病患之病情。

惟于单一半定量筛检装置中包含多种不同浓度之抗体(指示剂－第一抗体复合物及至少两种不同浓度之第二抗体)，故要精确地控制各抗体之浓度非常不易。

本实用新型的目的为提供一种用于侦测检体中待测物的半定量检验装置，通过单一步骤即可对待测物作半定量分析，更可进一步分析待测物之浓度范围。

本实用新型的技术方案是：

一种半定量检验装置，其包含：于一支撑体粘附有

(1)导引滤纸；

(2)抗体指示剂区；

(3)测试区；及

(4)吸收区；

其特征在于：

其中抗体指示剂区含有指示剂－第一抗体复合物；测试区含有至少两种不同浓度之第二抗体。

所述的半定量检验装置，其特征在于：该第一抗体及第二抗体为相异之抗待测物单克隆或多克隆抗体。

所述的半定量检验装置，其特征在于：该检体为尿液、血液、血清或粪便抽取物。

所述的半定量检验装置，其特征在于：该待测物为摄腹腺专一性抗原。

所述的半定量检验装置，其特征在于：该导引滤纸为一种或多种可提供毛细现象并吸附液体之天然或合成多孔性物质。

所述的半定量检验装置，其特征在于：该多孔性物质为玻璃纤维、人造纤维、滤纸、硝化纤维或尼龙。

所述的半定量检验装置，其特征在于：该指示剂为有色乳胶显料或金属胶质溶液。

所述的半定量检验装置，其特征在于：该指示剂－第一抗体复合物为胶体金－第一抗体复合物。

所述的半定量检验装置，其特征在于：该吸收区为厚吸收滤纸。

所述的半定量检验装置，其特征在于：其包含控制区，其中含有抗第一抗体之第三抗体。

本实用新型的效果是：

由于传统之单一步骤检验装置仅能侦测待测物之单一判读浓度，故其仅能用于初步定量分析之目的。

根据本实用新型的之半定量检验装置，除可达成定量分析之目的，更可藉由单一步骤同时观察至少两种不同判读浓度之结果，而能判断待测物的浓度范围。

附图图面的说明：

图1为传统定性检验试片之结构示意图。

图2为本实用新型之一种实施例结构示意图。

图3A-C系为利用本实用新型装置侦测含有PSA检体之判读结果示意图。

参照图2，本实用新型提供一种半定量检验装置，是在一支撑体上粘附有导引滤纸5、抗体指示剂区4、测试区3及吸收区1。其中抗体指示剂区4含有指示剂-第一抗体复合物；测试区含有至少两种不同浓度之第二抗体形成的第一测试线7和第二测试线8。

本实用新型之半定量检验装置中，第一抗体及第二抗体皆为抗待测物之单克隆或多克隆抗体，惟与第一抗体及第二抗体结合之抗原决定区并不相同。

本实用新型之半定量检验装置中，导引滤纸5为可提供毛细现象并吸附液体，而将检体导向本实用新型装置另一端之天然或合成多孔性物质。其可为(非限定为)，例如：玻璃纤维、人造纤维(rayon)、滤纸、硝纤维或尼龙。

本实用新型之半定量检验装置中，抗体指示剂区4中含有指示剂－第一抗体复合物，当检体达到抗体指示剂区时，该指示剂－第一抗体复合物会溶入检体中，并与检体中之待测物形成待测物－指示剂－第一抗体复合物，再向测试区移动。其中该指示剂为(非限定为)，例如：有色乳胶颗粒(colored latex particles)或金属胶质溶液(metalliccolloidal solution)。其中较佳之指示剂－第一抗体复合物为胶体金－第一抗体复合物。

本实用新型之半定量筛检装置中，测试区3含有至少两种不同浓度且固着于载体(如硝化纤维)之第二抗体。当指示剂－第一抗体复合物移入测试区后，便与固着之第二抗体形成第二抗体－指示剂－第－抗体复合物，并于测试区呈现可用肉眼判读之讯号。由于测试区含有不同浓度之第二抗体，故本实用新型半定量检验装置之测试区内可呈现不同待测物判读浓度之结果。

而第二抗体之使用浓度系依据(1)抗原种类、(2)抗体来源及(3)胶体金－第一抗体复合物之浓度予以调配。由于其中有许多变因会直接影响半定量试剂之准确性，故于品质控制上非常困难。

本实用新型之半定量检验装置中，吸收区1可为(非限定为)厚吸收滤纸。其具有吸附液体之能力，且容许检体不断地通过抗体指示剂区及测试区，以获得完全之反应。

本实用新型半定量检验装置可适用之检体包括尿液、血液、血清及粪便抽取物。

本实用新型半定量检验装置可适用之待测物包括所有能引发抗体/抗原结合反应之作用物。其中较佳为摄腹腺专一性抗原。

本实用新型之半定量检验装置可进一步包含一控制区2，其中含有抗第一抗体之第三抗体，其与未反应之指示剂－第一抗体复合物结合后，便于控制区呈现可用肉眼判读之讯号。当讯号出现时，即表示本实用新型之半定量检验装置具有正常之功能。

以下进一步说明本实用新型一种实施例的制法，其不应成为本实用新型之限制条件。

步骤1．抗体指示剂区之制备：

(1)胶体金之制备

取50毫克氯化金加入500毫升蒸馏水，将此溶液以磁棒搅拌直至沸腾。将12.5毫升之新鲜柠檬酸三钠(1％)快速地添入沸腾溶液中，并持续煮沸5分钟直至呈现酒红色之胶体金悬浮液形成。

(2)胶体金－第一抗体复合物之制备

取约50微克之第一抗体(抗PSA第一单克隆抗体；Scripps Lab.)加入10毫升之胶体金悬浮液。搅拌5分钟以使胶体金-第一抗体复合物形成。将此胶体金－第一抗体复合物悬浮液于10000rpm下离心30分钟后，将沉淀物重新悬浮于1毫升保存溶液中。

(3)胶体金－第一抗体复合物干燥物之制备

将浓缩之胶体金－第一抗体复合物涂布并吸附于玻璃纤维片上，以冷冻干燥法干燥一夜后以备使用。

步骤2．测试区之制备：

将获自Scripps Lab.之第二抗体PSA单克隆抗体调配成不同之浓度(每毫升0.1-2毫克)。再将不同浓度之第二抗体涂布于硝化纤维膜上，以形成第一及第二测试线。其中第一测试线上所涂布之抗体浓度较高，故可侦测低判读浓度之PSA(4毫微克/毫升)；而第二测试线上之抗体浓度较低，故可侦测较高判读浓度之PSA(20毫微克/毫升)。

步骤3．半定量检验装置之制备

将26×7.5公分之硝化纤维膜(Millipore Corp.)粘贴于同尺寸之塑料片支持物上。于距顶端3.2厘米处之控制区内涂上一条羊抗鼠抗体(Scripps Lab.)。并于距顶端3.5厘米处之测试区内依前述之方法将不同浓度之第二抗体涂布于硝化纤维膜上，以形成第一及第二测试线。含胶体金－第一抗体复合物之玻璃纤维片则贴于距顶端5厘米的抗体指示区。最后将26×2.5厘米之厚吸收滤纸(Whatman)贴至位于顶端之吸收区，并将26×3厘米之导引滤纸(Whatman)分贴至末端。经裁切成0.3×7.5厘米之条片后待测活性。

步骤4．活性测试

69件由台湾彰化秀传医院所提供之血清检体样本中(其中29号、58号样本遗失)，PSA含量分别以半定量检验装置及以Abbott AxSYM系统予以测定。

利用本实用新型的半定量检验装置检测含有PSA检体的判断方法如图3A-C所示，图3A：为本实用新型装置只显现一条线时(控制区)，表示PSA之浓度低于每毫升3毫微克；图3B：当本实用新型装置分别于控制区及测试区各显现一条线时，表示PSA之浓度介于每毫升3-10毫微克之间；图3C：当本实用新型装置显现三条线，一条于控制区而两条于测试区时，表示PSA之浓度大于每毫升10毫微克。

用上述两种方式得到的检验结果的比较列于表1中，在表1中所注的十一符号的含义是：“-”表示负反应；“+”表示3-10毫微克/毫升；“++”表示大于10毫微克/毫升。由表1显示本实用新型确是可以简单方便地对待测物中PSA浓度范围作出判断，以帮助医师进一步确认患者的病情。

表1血清检验样本    以.Abbott AxSYM测定之    半定量检验装置

            PSA结果(毫微克/毫升)1                      1.6                      -2                      0.58                     -3                      5.9                      +4                      0.89                     -5                      1.2                      -6                      2.8                      +7                      1.5                      -8                      8.5                      +9                      8.8                      +10                     7.8                      +11                     6.7                      +12                     1.4                      -13                     6.4                      +14                     2.6                      -15                     2.7                      -16                     5.0                      +17                     2.9                      -18                     8.0                      +19                     6.0                      +20                     1.8                      -21                     9.8                      +22                     3.8                      +23                     9.5                      +24                     1.0                      -25                     1.4                      -26                     3.1                      +27                     8.6                      +28                     2.5                      -30                     2.6                      +31                     4.7                      +32                     1.0                      -33                     3.3                      +34                     4.1                      +35                     1.3                      -36                     5.4                      +37                     7.5                      +38                     5.8                      +39                    20.0                      ++40                     2.4                      +41                     5.4                      +42                     6.6                      +43                     6.6                      +44                     0.64                     -45                    14.5                      ++46                     2.3                      +47                     0.81                     -48                     1.6                      -49                     1.5                      -50                     1.2                      -51                     3.5                      +52                     5.2                      +53                     1.6？                    ++？54                     1.7                      +55                     1.4                      +56                     6.5                      +57                     5.0                      +59                     1.4                      -60                     8.5                      ++61                    19.0                      ++62                     3.2                      +63                     3.5                      +64                     3.8                      +65                    12.0                      ++66                    15.0                      ++67                     6.7                      +68                     5.0                      +69                     6.1                      +

Claims (10)

1、一种半定量检验装置，其包含：于一支撑体粘附有

(1)导引滤纸；

(2)抗体指示剂区；

(3)测试区；及

(4)吸收区；

其特征在于：

其中抗体指示剂区含有指示剂一第一抗体复合物；测试区含有至少两种不同浓度之第二抗体。

2、根据权利要求1所述的半定量检验装置，其特征在于：该第一抗体及第二抗体为相异之抗待测物单克隆或多克隆抗体。

3、根据权利要求1所述的半定量检验装置，其特征在于：该检体为尿液、血液、血清或粪便抽取物。

4、根据权利要求1所述的半定量检验装置，其特征在于：该待测物为摄腹腺专一性抗原。

5、根据权利要求1所述的半定量检验装置，其特征在于：该导引滤纸为一种或多种可提供毛细现象并吸附液体之天然或合成多孔性物质。

6、根据权利要求5所述的半定量检验装置，其特征在于：该多孔性物质为玻璃纤维、人造纤维、滤纸、硝化纤维或尼龙。

7、根据权利要求1所述的半定量检验装置，其特征在于：该指示剂为有色乳胶显料或金属胶质溶液。

8、根据权利要求7所述的半定量检验装置，其特征在于：该指示剂-第一抗体复合物为胶体金-第一抗体复合物。

9、根据权利要求1所述的半定量检验装置，其特征在于：该吸收区为厚吸收滤纸。

10、根据权利要求1所述的半定量检验装置，其特征在于：其包含控制区，其中含有抗第一抗体之第三抗体。