CN212370241U - 一种去除Taq酶抑制剂的离心管 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了一种去除Taq酶抑制剂的离心管及其使用方法，离心管包括外管、上盖、下盖、过滤管和纯化管；本实用新型将过滤管和纯化管集成于一两侧均可开口的离心管中，内锥管内填充填料，通过两步离心即可对样品完成过滤和纯化，适用范围广，操作简便，并且实验证明本实用新型有效去除了复杂来源样本中的抑制剂，获得适用于下游基因检测技术的高纯度核酸。
Description
技术领域
本实用新型属于生物技术领域，具体来说涉及一种去除Taq酶抑制剂的离心管。
背景技术
随着生命科学的不断发展，分子生物学、遗传学等领域的生物技术也取得了长足进步。在基础医学研究以及临床分子诊断过程中，基因检测已经成为一种高效、准确的手段，并广泛地应用于各种病理生理过程的遗传特征分析、分子分型以及临床诊断和治疗中的靶点检测。然而，由于检测所用组织标本来源、组成以及前期保存和处理条件的多样性，使得后续用于基因检测的核酸标本质量常常参差不齐，导致基因检测靶点的检出率、结果的重复性等均受到不同程度的影响，甚至由于核酸样本不合格，导致无法进行基因检测，从而需要重新采集标本，最终给患者带来更多的痛苦甚至延误患者的临床诊断和治疗，因此，一种能够广泛地适用于各种不同组织标本并且高效纯化核酸的技术手段尤为重要。
无论是何种组织细胞来源的核酸，在获得高质量核酸之前都需要对组织细胞进行完全裂解。经典的裂解液中几乎都会包含众多去污剂、金属螯合剂和盐离子，一方面在组织细胞裂解时提供适合的裂解环境，同时保护DNA和RNA分子免受降解。裂解液中所包含的去污剂能够使蛋白质变性，从而促进核酸的游离。为了增加核酸的得率，裂解液中还可以加入蛋白酶，通过消化核酸结合蛋白，从而进一步促进核酸游离。此外，也有直接利用高浓度蛋白质变性剂作为组织细胞裂解液，并主要用于RNA的抽提。然而，由于这些裂解液中促进核酸游离释放的成分均主要作用于蛋白质，而目前对核酸进行检测的技术手段，不论是PCR还是高通量测序，其前期样本准备过程中均涉及逆转录酶和/或DNA聚合酶介导的核酸样本扩增，因此，一旦获得的核酸样本中混杂着蛋白质活性抑制剂，将直接影响后续基因检测的结果。
目前核酸纯化技术主要包含两大类，一类为介质分离，一类为非介质分离。比如1)经典的酚/氯仿抽提纯化技术：细胞裂解后离心分离含核酸的水相，加入等体积的酚：氯仿：异戊醇混合液，离心使得蛋白质被保留于有机相，核酸则位于上层水相，最后通过醇沉淀的方式获得纯化的核酸；2)离子交换介质纯化技术：裂解液中的核酸能够联结在离子交换介质上，通过洗涤除去残留杂质并用高盐缓冲液洗脱核酸。最后，再经过标准醇沉淀方式获得纯化的核酸；3)吸附介质纯化技术：裂解液中的核酸选择性吸附于介质，而后通过洗涤除去杂质并用低盐缓冲液直接洗脱，从而获得纯化的核酸并直接用于后续检测；4)密度梯度离心法：由于不同的核酸及蛋白质具有不同的密度，因而可以通过密度梯度离心的方式实现核酸的纯化。然而，这些核酸纯化方法中仍存在许多影响下游基因检测的问题。比如醇沉淀法耗时长、对于低浓度核酸的沉淀效率低且不适合不大规模抽提。虽然介质纯化法适合大规模核酸纯化，核酸纯度高而且操作更便捷。然而，对于一些复杂样本，由于这些方法均不能对某些抑制剂进行高效的清除，最终无法获得适用于下游基因检测技术的高纯度核酸。因此，对于复杂来源样本中抑制剂的高效去除是核酸纯化过程中的一项重要挑战。
实用新型内容
本实用新型的目的在于克服现有技术的不足，提供一种去除Taq酶抑制剂的离心管。
一种去除Taq酶抑制剂的离心管，包括外管、上盖、下盖、过滤管和纯化管；
所述上盖和下盖分别安装于外管的上下两端，所述外管内壁的中部形成有中部卡环，所述外管上端形成有上部卡环、下端形成有下部卡环，所述过滤管设置于外管内中部卡环的上方，所述纯化管设置于外管内中部卡环的下方；
所述过滤管上端开口，管体底部设置过滤膜，上端沿处形成有用于与上部卡环配合限位的上凸缘；
所述纯化管上端面包括位于中心处呈圆形的实心部和呈圆环形的滤孔部，所述纯化管下端面为实心，所述纯化管下端沿处形成有用于与下部卡环配合限位的下凸缘，所述纯化管内部设置有一内锥管，内锥管由上至下外扩，管壁上沿于实心部的边缘处与之固定连接，管壁下沿于纯化管下端面的边缘处与之固定连接，管壁上布设滤孔；所述内锥管内填装有填料。
在上述技术方案中，所述外管与上盖、下盖的连接方式可采用如下两种：一、螺纹连接，外管上端下端外侧形成外螺纹，上盖、下盖内部形成内螺纹；二、通过连接柄连接，上盖和下盖分别通过一连接柄与外管连接，上盖和下盖内侧形成卡接结构。
在上述技术方案中，所述填料为chelex 100螯合树脂。
在上述技术方案中，所述填料呈颗粒状，颗粒粒径为120-220μm。
在上述技术方案中，所述滤孔部分布有直径为150-300μm的圆孔。
在上述技术方案中，所述内锥管管壁的滤孔孔径为60-100μm。
在上述技术方案中，所述过滤膜孔径为5-25μm。
一种去除Taq酶抑制剂的离心管的使用方法，按照下列步骤进行：
步骤一、将组织或细胞通过组织细胞裂解液完全裂解；
步骤二、旋开离心管上盖，用移液器吸取一定体积步骤一得到的裂解液，并沿过滤管管壁缓慢加入过滤管；
步骤三、旋紧上盖，室温离心；
步骤四、旋开上盖，取出过滤管并丢弃；
步骤五、旋紧上盖，将离心管置于金属浴孵育；
步骤六、关闭金属浴并室温冷却；
步骤七、取出离心管，并将收集装置上下颠倒，室温离心；
步骤八、旋开下盖，取出纯化管并丢弃；
步骤九、旋紧下盖，将所收集的液体于低温保存或继续下游操作。
本实用新型的优点和有益效果为：
本实用新型将过滤管和纯化管集成于一两侧均可开口的离心管中，内锥管内填充填料，通过两步离心即可对样品完成过滤和纯化，适用范围广，操作简便，并且实验证明本实用新型有效去除了复杂来源样本中的抑制剂，获得适用于下游基因检测技术的高纯度核酸。
附图说明
图1为本实用新型整体结构示意图。
图2为上盖和下盖结构示意图。
图3为外管结构示意图。
图4为过滤管结构示意图。
图5为纯化管结构示意图。
其中：1为上盖，2为过滤管，2-1为过滤膜，2-2为上凸缘，3为外管，3-1为中部卡环，3-2为上部卡环，3-3为下部卡环，4为纯化管，4-1为实心部，4-2为滤孔部，4-3为内锥管，4-4为填料，4-5为下凸缘，5为下盖。
对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，可以根据以上附图获得其他的相关附图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本实用新型方案，下面结合具体实施例进一步说明本实用新型的技术方案。
实施例一种去除Taq酶抑制剂的离心管的结构及使用方法
一种去除Taq酶抑制剂的离心管，包括外管3、上盖1、下盖5、过滤管2和纯化管4；
所述上盖1和下盖5分别安装于外管3的上下两端，外管3与上盖1、下盖5的连接方式可采用如下两种：一、螺纹连接，外管3上端下端外侧形成外螺纹，上盖1、下盖5内部形成内螺纹；二、通过连接柄连接，上盖1和下盖5分别通过一连接柄与外管连接，上盖和下盖内侧形成卡接结构；所述外管3内壁的中部形成有中部卡环3-1，所述外管上端形成有上部卡环3-2、下端形成有下部卡环3-3，所述过滤管2设置于外管3内中部卡环3-1的上方，所述纯化管4设置于外管3内中部卡环3-1的下方；
所述过滤管2上端开口，管体底部设置过滤膜2-1，过滤膜孔径为5-25μm。上端沿处形成有用于与上部卡环3-2配合限位的上凸缘2-2；
所述纯化管4上端面包括位于中心处呈圆形的实心部4-1和呈圆环形的滤孔部4-2，所述滤孔部分布有直径为0.2-0.5mm的圆孔；所述纯化管4下端面为实心，所述纯化管4下端沿处形成有用于与下部卡环3-3配合限位的下凸缘4-5，所述纯化管内部设置有一内锥管4-3，内锥管4-3由上至下外扩，管壁上沿于实心部4-1的边缘处与之固定连接，管壁下沿于纯化管4下端面的边缘处与之固定连接，管壁上布设滤孔；滤孔孔径为0.1-0.2mm；所述内锥管4-3内填装有填料4-4，填料为chelex 100螯合树脂，填料呈颗粒状，颗粒粒径为120-220μm。
一种去除Taq酶抑制剂的离心管的使用方法，按照下列步骤进行：
步骤一、将组织或细胞通过组织细胞裂解液完全裂解；
步骤二、旋开离心管上盖，用移液器吸取一定体积步骤一得到的裂解液，并沿过滤管管壁缓慢加入过滤管；
步骤三、旋紧上盖，室温10000xg离心1min；
步骤四、旋开上盖，取出过滤管并丢弃；
步骤五、旋紧上盖，将离心管置于金属浴，99℃孵育12min；
步骤六、关闭金属浴并室温冷却2min；
步骤七、取出离心管，并将收集装置上下颠倒(此时下盖位于离心管上部)，室温10000xg离心2min；
步骤八、旋开下盖，取出纯化管并丢弃；
步骤九、旋紧下盖，将所收集的液体于低温保存或继续下游操作。
以上对本实用新型做了示例性的描述，应该说明的是，在不脱离本实用新型的核心的情况下，任何简单的变形、修改或者其他本领域技术人员能够不花费创造性劳动的等同替换均落入本实用新型的保护范围。
Claims (8)
1.一种去除Taq酶抑制剂的离心管，其特征在于：包括外管、上盖、下盖、过滤管和纯化管；
所述上盖和下盖分别安装于外管的上下两端，所述外管内壁的中部形成有中部卡环，所述外管上端形成有上部卡环、下端形成有下部卡环，所述过滤管设置于外管内中部卡环的上方，所述纯化管设置于外管内中部卡环的下方；
所述过滤管上端开口，管体底部设置过滤膜，上端沿处形成有用于与上部卡环配合限位的上凸缘；
所述纯化管上端面包括位于中心处呈圆形的实心部和呈圆环形的滤孔部，所述纯化管下端面为实心，所述纯化管下端沿处形成有用于与下部卡环配合限位的下凸缘，所述纯化管内部设置有一内锥管，内锥管由上至下外扩，管壁上沿于实心部的边缘处与之固定连接，管壁下沿于纯化管下端面的边缘处与之固定连接，管壁上布设滤孔；所述内锥管内填装有填料。
2.根据权利要求1所述的一种去除Taq酶抑制剂的离心管，其特征在于：所述外管与上盖、下盖之间为螺纹连接，外管上端下端外侧形成外螺纹，上盖、下盖内部形成内螺纹。
3.根据权利要求1所述的一种去除Taq酶抑制剂的离心管，其特征在于：所述外管与上盖、下盖之间通过连接柄连接，上盖和下盖分别通过一连接柄与外管连接，上盖和下盖内侧形成卡接结构。
4.根据权利要求1所述的一种去除Taq酶抑制剂的离心管，其特征在于：所述填料为chelex 100螯合树脂。
5.根据权利要求1所述的一种去除Taq酶抑制剂的离心管，其特征在于：所述填料呈颗粒状，颗粒粒径为120-220μm。
6.根据权利要求1所述的一种去除Taq酶抑制剂的离心管，其特征在于：所述滤孔部分布有直径为150-300μm的圆孔。
7.根据权利要求1所述的一种去除Taq酶抑制剂的离心管，其特征在于：所述内锥管管壁的滤孔孔径为60-100μm。
8.根据权利要求1所述的一种去除Taq酶抑制剂的离心管，其特征在于：所述过滤膜孔径为5-25μm。
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| CN202020755261.5U CN212370241U (zh) | 2020-05-09 | 2020-05-09 | 一种去除Taq酶抑制剂的离心管 |
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|---|---|---|---|---|
| CN111604099A (zh) * | 2020-05-09 | 2020-09-01 | 济宁医学院附属医院 | 一种去除Taq酶抑制剂的离心管及其使用方法 |
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