CN211426906U - 双光子显微镜透明化标本适配器 - Google Patents
双光子显微镜透明化标本适配器 Download PDFInfo
- Publication number
- CN211426906U CN211426906U CN202020141489.5U CN202020141489U CN211426906U CN 211426906 U CN211426906 U CN 211426906U CN 202020141489 U CN202020141489 U CN 202020141489U CN 211426906 U CN211426906 U CN 211426906U
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- photon microscope
- transparentization
- storage chamber
- base
- specimen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 230000007704 transition Effects 0.000 claims abstract description 32
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 24
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims abstract description 18
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 abstract description 16
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 17
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 4
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 4
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000012634 optical imaging Methods 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003364 biologic glue Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Microscoopes, Condenser (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
Abstract
本实用新型公开一种双光子显微镜透明化标本适配器，该双光子显微镜透明化标本适配器包括底座、设置在所述底座上的存储腔和位于所述存储腔上方、且与所述物镜相匹配的观察皿，所述存储腔用于放置所述生物标本，所述观察皿包括本体、设置在所述本体上的贯穿孔和位于所述贯穿孔下方的过渡套筒，所述过渡套筒的一端与所述贯穿孔连通，另一端与所述存储腔连通。本实用新型有利于提高生物标本在双/多光子显微镜成像深度和成像部位的精度。
Description
技术领域
本实用新型涉及3D超景深多光子成像技术领域，具体涉及一种双光子显微镜透明化标本适配器。
背景技术
众所周知，随着组织光透明技术的出现，利用多光子显微成像技术(multi-photonmicroscopy,MPM)获取毫米至厘米量级介观系统(如完整的胚胎、体外器官及活体模式动物等)的高精度三维结构是当今医学分子诊断发展的潮流和趋势。
现代的多光子显微镜在进行超景深成像时，一般需要对生物标本进行透明化并以特定折射率的透明化液置于培养皿或烧杯浸泡，观察时显微镜物镜必须与充分浸泡于透明液中，才能实现mm级以上的标本深层成像。常规的培养皿或烧杯常因高度过浅、过窄、过高或过宽，使得生物标本易在容器中出现与镜头间工作距离不足、漂浮等不利于成像的因素。此外，以生物胶水、琼脂糖或明胶将生物标本粘接在容器(培养皿或烧杯)的方式，往往又因与透明化试剂的接触面过大，使得标本或透明化试剂的折射率改变，进而影响生物标本的透明化效果和成像效果。为此，本实用新型提供了一种适合双/多光子显微镜成像的专用双光子显微镜透明化标本适配器，有效解决了在常规容器内透明化的生物标本难固定、寻找时间长和成像效果差的问题。
实用新型内容
本实用新型的主要目的在于提供一种双光子显微镜透明化标本适配器，旨在解决现有的固定方式会导致生物标本透明化程度和成像效果较差的技术问题。
为解决上述技术问题，本实用新型提出一种双光子显微镜透明化标本适配器，该双光子显微镜透明化标本适配器包括底座以及设置在所述底座上并与光子显微镜物镜相匹配的观察皿，所述底座的顶面上设置有用于放置标本的存储腔，所述观察皿包括本体和设置在所述本体底部的过渡套筒，所述本体的底部设置有与所述过渡套筒连通的贯穿孔，所述贯穿孔可通过所述过渡套筒与所述存储腔内导通。
优选地，所述双光子显微镜透明化标本适配器还包括透明套筒，所述过渡套筒通过所述透明套筒与所述底座连接。
优选地，所述透明套筒的一端与所述过渡套筒螺纹连接，另一端可插装在所述存储腔内。
优选地，所述存储腔位于所述底座的中心位置。
优选地，所述本体的底部呈漏斗状结构。
优选地，所述过渡套筒的外壁上设置有外螺纹，所述存储腔的内壁上设置有内螺纹，所述过渡套筒与所述底座螺纹配合连接。
优选地，所述透明套筒的内径为1.8～2.6mm，外径为2.5～4.8mm，长度为4.2～8.4mm。
优选地，所述底座为圆形板，所述圆形板的直径为35～80mm，厚度为3～5mm。
优选地，所述存储腔为圆形凹槽，所述圆形凹槽的深度为1.5～4mm，直径为2～10mm。
本实用新型实施例提供的双光子显微镜透明化标本适配器，通过在底座上设置用于存储生物标本的存储腔，以此方便在存储腔内注入少量凝胶、胶水后等对生物标本进行固定，并加入透明化试剂进行储存和观察，同时利用观察皿与底座可拆卸连接，从而方便根据物镜的规格更换不同观察皿，从而便于对采样标本的检测。相对现有技术而言，本实用新型有利于提高生物标本的成像深度和成像质量，并能节省透明化试剂的用量。
附图说明
图1为本实用新型中双光子显微镜透明化标本适配器一实施例的结构示意图；
图2为本实用新型中双光子显微镜透明化标本适配器的观察皿的剖视图；
图3为中双光子显微镜透明化标本适配器一实施例的爆炸示意图；
图4为本实用新型中双光子显微镜透明化标本适配器的底座和透明套筒的结构示意图。
具体实施方式
下面详细描述本实用新型的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本实用新型，而不能理解为对本实用新型的限制，基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。
本实用新型提出一种双光子显微镜透明化标本适配器，用于与光子显微镜配合使用以获取生物标本的显微图像，光子显微镜包括用于成像的物镜，该双光子显微镜透明化标本适配器包括底座10、设置在所述底座10上的存储腔11和位于所述存储腔11上方、且与所述物镜相匹配的观察皿20，所述存储腔11用于放置所述生物标本，所述观察皿20包括本体21、设置在所述本体21上的贯穿孔23和位于贯穿孔230下方的过渡套筒22，过渡套筒22的一端与贯穿孔23连通，另一端与存储腔11连通。
在本实施例中，如图1至图3所示，底座10和观察皿20优选采用圆盘形，当然底座10还可以是矩形或其他形状。其中，底座10的顶面上设置有可容纳标本的存储腔11，存储腔11的大小可根据实际情况(即标本的种类或大小)进行确定，而观察皿20则需要按照相应的光子显微镜物镜进行设置，以此可使物镜能通过观察皿20观察位于存储腔11内的标本。通过存储腔11容纳标本，以此有利于解决采用scale A2、SeeDB等部分透明化试剂后，标本在存储腔11内容易产生形变从而影响光子显微镜成像深度和成像部位偏差的问题，同时实现了在8mm长工作距离下，光子显微镜商用物镜视野对吸针采样活检标本整体的多维度光学深层成像。此时，优选观察皿20包括本体21和过渡套筒22，本体21为现有实验室内培养皿的样式，而过渡套筒22则位于本体21的底部，且本体21上还开设有与过渡套筒22连通的贯穿孔23，而贯穿孔23可通过过渡套筒22与存储腔11导通，从而方便物镜通过贯穿孔23观察位于存储腔11内的标本。至于过渡套筒22与底座10连接的方式可以是直接连接，也可以是通过中间部件与底座10连接。本实施例中的双光子显微镜透明化标本适配器具体使用时，将观察皿20从底座10上取下，向存储腔11内注入2～3mm高度的凝胶，将经4％多聚甲醛固定好的穿刺采样标本插入凝胶内，从而可使生物标本悬空置于存储腔11内，后根据实验步骤进行抗体孵育、荧光标记后，根据不同标本的光折射率，加入相应的透明化试剂后，即可利用透明化试剂对生物样本全方位的透明化，从而增加了透明效果，以此提高了生物标本的成像效果。待光子显微镜成像时，在底座10上安装相应规格的观察皿20，注入相应的透明化试剂，将光子显微镜物镜移至标本正上方，设定好扫描波长，进行Z轴层扫，实现超景深的三维/四维光学成像。本实施例中，通过在底座10上设置用于存储生物标本的存储腔11，以此方便在存储腔11内注入凝胶后对生物标本进行存储，同时利用观察皿20与底座10可拆卸连接，从而方便根据物镜的规格更换不同观察皿20，从而便于对采样标本的检测，以及有利于提高光子显微镜成像深度和成像部位的精度。
在一较佳实施例中，为了方便在存储腔11内放入采样标本，还包括透明套筒30。此时，透明套筒30的一端可安装存储腔11内，另一端可与过渡套筒22连接。本实施例中的双光子显微镜透明化标本适配器在使用时，将透明套筒30安装在存储腔11内，并通过透明套筒30向存储腔11内注入2～3mm高度的凝胶，此时有利于通过透明套筒30观察注入凝胶的情况(即凝胶量的多少)，然后移去透明套筒30，并将经4％多聚甲醛固定好的穿刺采样标本插入凝胶内，最后再次将透明套筒30安装在存储腔11内，后根据实验步骤进行抗体孵育、荧光标记后，根据不同标本的光折射率，加入相应的透明化试剂保存备用。待光子显微镜成像时，将观察皿20与透明套筒30连接，并注入相应的透明化试剂，将光子显微镜物镜移至标本正上方，设定好扫描波长，进行Z轴层扫，实现超景深的三维/四维光学成像。
此时，过渡套筒22的长度为2～7mm，而透明套筒30的内径优选为1.8～2.6mm，外径优选为2.5～4.8mm，长度优选为4.2～8.4mm。
在一较佳实施例中，为了方便透明套筒30分别连接底座10和过渡套筒22(即观察皿20)，优选透明套筒30的一端插装在存储腔11内，且透明套筒30的外壁可与存储腔11的内壁相贴合，以此保证透明套筒30位于存储腔11内时的稳定性，而透明套筒30与过渡套筒22连接的方式可以是螺纹连接的方式，即透明套筒30的内壁上设置有内螺纹，而过渡套筒22的外壁上设置有外螺纹，以此通过螺纹配合将观察皿20设置在底座10上。
在一较佳实施例中，为了将观察明设置在底座10上后的平稳性，优选存储腔11位于底座10顶面的中心位置，即当底座10为圆形板体时，存储腔11与底座10同心布置。此时，圆形板的直径优选为35～80mm；厚度优选为3～5mm。
在一较佳实施例中，为了方便透明化试剂由贯穿孔23进行入存储腔11内，优选本体21的底部呈漏斗状结构，且优选漏斗状结构倾斜的角度为2～5度，其中漏斗结构的较小开口端与过渡套筒22连接，从而有利于避免出现浪费透明化试剂的现象，以此节约成本。此时，优选本体21为圆盘体，本体21的高度优选为10～15mm，直径比Olympus、Leica、Nikon、Zeiss等长工作距离物镜(WD≥4mm)长20～80mm(即75～110mm)，而贯穿孔23的内径优选为2.51～4.81mm。
在一较佳实施例中，为了方便过渡套筒22与底座10直接连接，此时优选过渡套筒22的外壁上设置有外螺纹，而存储腔11的内壁上设置有内螺纹，以此通过螺纹配合将观察皿20固定在底座10上，同时也可方便观察皿20的拆装。此时，底座10为圆形板，该圆形板直径为40mm，厚度为8mm，且侧边均有45度倒角；存储腔11的深度为4mm，直径为10mm；本体21为一端呈开口端状的筒体，该筒体的外径为44mm，内径为40mm，长度为12mm；贯穿孔23的内径为6.5mm；过渡套筒22的外径为10mm，内径为6.5mm，长度为7mm，且过渡套筒22上外螺纹的长度为4mm。
在一较佳实施例中，优选存储腔11为圆形凹槽，且圆形凹槽的深度为1.5～4mm，直径为2～10mm。其中，最佳深度取值为4mm，最佳直径取值为6mm，从而有利于在减少透明化试剂的同时还可保持对标本观察的准确度。
本实用新型中的双光子显微镜透明化标本适配器使用的具体方法为：
第一步，向存储腔内注入适量的凝胶并将处理好的生物标本放置在凝胶内。
本步骤中，向存储腔内注入凝胶的方式可采用相应的注射器，也可以是其他工具，而凝胶的种类可以是现有的适当种类即可。当然在将生物标本放置在凝胶内之前还包括对标本进行前置处理，如生物标本利用4％多聚甲醛固定。
第二步，对位于凝胶内的生物标本进行抗体孵育和荧光标记处理。
本步骤中，抗体孵育的条件(如稀释度和温度)则根据实际的生物标本进行设置，以符合该待测生物标本的最佳条件即可。而进行荧光标记的染料则根据实际情况进行设置，如生物样本的种类以及需要成像的颜色等。
第三步，将观察皿安装在底座上并向存储腔内注入相应的透明化试剂。
本步骤中，通过在底座上安装相应规格的观察皿，并由观察皿上的贯穿孔向存储腔内注入相应的透明化试剂，从而可使生物标本在预设时间后呈透明状态，以方便对生物标本进行观察。
第四步，将生物标本移动至光子显微镜的物镜正下方，并设定扫描波长以进行Z轴层扫，获得光学图像。
本步骤中，通过将双光子显微镜透明化标本适配器放置在光子显微镜的载物台上并使存储腔内的生物标本位于物镜的正下方，从而即可在光子显微镜上设置相关的参数后即可获得相应的光学图像，相应的操作步骤参照现有的光子显微镜的使用方法即可，在此不作详细描述。
具体采用本实用新型中的双光子显微镜透明化标本适配器时：常规双光子显微镜透明化生物标本专用镜头直径为75-100mm，测试用OLYMPUS FMPE-RS，物镜XLSLPLN25XSVMP2，工作距离为8mm，倍数25X，折射率：1.33-1.42。
实施例：双/多光子显微镜专用适配器(本体尺寸为标注尺寸范围内，类漏斗状结构倾斜角度为5℃)
对比例1：双/多光子显微镜专用适配器(非标)，顶部圆盘，开口>110mm，以直径150mm为例；
对比例2：双/多光子显微镜专用适配器(非标)，顶部圆盘，平底
对照例1：标准培养皿(100mm直径，高度21mm)
对照例2：烧杯300ml(85mm直径，高度108mm)
对象：cubic透明化试剂处理的小鼠半脑10mm切片，DEXTRAN-FITC标记，成像。
表1
如表1所示，与传统放置生物标本工具培养皿、烧杯等相比，该适配器能与较少的透明化试剂用量、达到最快及最优的成像效果。
以上的仅为本实用新型的部分或优选实施例，无论是文字还是附图都不能因此限制本实用新型保护的范围，凡是在与本实用新型一个整体的构思下，利用本实用新型说明书及附图内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本实用新型保护的范围内。
Claims (9)
1.一种双光子显微镜透明化标本适配器，用于与双光子显微镜配合使用以获取生物标本的显微图像，所述光子显微镜包括用于成像的物镜，其特征在于，所述双光子显微镜透明化标本适配器包括底座、设置在所述底座上的存储腔和位于所述存储腔上方、且与所述物镜相匹配的观察皿，所述存储腔用于放置所述生物标本，所述观察皿包括本体、设置在所述本体上的贯穿孔和位于所述贯穿孔下方的过渡套筒，所述过渡套筒的一端与所述贯穿孔连通，另一端与所述存储腔连通。
2.根据权利要求1所述的双光子显微镜透明化标本适配器，其特征在于，还包括透明套筒，所述过渡套筒通过所述透明套筒与所述底座连接。
3.根据权利要求2所述的双光子显微镜透明化标本适配器，其特征在于，所述透明套筒的一端与所述过渡套筒螺纹连接，另一端可插装在所述存储腔内。
4.根据权利要求1所述的双光子显微镜透明化标本适配器，其特征在于，所述存储腔位于所述底座的中心位置。
5.根据权利要求1所述的双光子显微镜透明化标本适配器，其特征在于，所述本体的底部呈漏斗状结构。
6.根据权利要求1所述的双光子显微镜透明化标本适配器，其特征在于，所述过渡套筒的外壁上设置有外螺纹，所述存储腔的内壁上设置有内螺纹，所述过渡套筒与所述底座螺纹配合连接。
7.根据权利要求2所述的双光子显微镜透明化标本适配器，其特征在于，所述透明套筒的内径为1.8～2.6mm，外径为2.5～4.8mm，长度为4.2～8.4mm。
8.根据权利要求1所述的双光子显微镜透明化标本适配器，其特征在于，所述底座为圆形板，所述圆形板的直径为35～80mm，厚度为3～5mm。
9.根据权利要求1所述的双光子显微镜透明化标本适配器，其特征在于，所述存储腔为圆形凹槽，所述圆形凹槽的深度为1.5～4mm，直径为2～10mm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202020141489.5U CN211426906U (zh) | 2020-01-21 | 2020-01-21 | 双光子显微镜透明化标本适配器 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202020141489.5U CN211426906U (zh) | 2020-01-21 | 2020-01-21 | 双光子显微镜透明化标本适配器 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN211426906U true CN211426906U (zh) | 2020-09-04 |
Family
ID=72245473
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202020141489.5U Expired - Fee Related CN211426906U (zh) | 2020-01-21 | 2020-01-21 | 双光子显微镜透明化标本适配器 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN211426906U (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021147198A1 (zh) * | 2020-01-21 | 2021-07-29 | 广东湛江海洋医药研究院 | 多光子显微镜透明化标本适配器及其成像方法 |
-
2020
- 2020-01-21 CN CN202020141489.5U patent/CN211426906U/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021147198A1 (zh) * | 2020-01-21 | 2021-07-29 | 广东湛江海洋医药研究院 | 多光子显微镜透明化标本适配器及其成像方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gardner | Specification of embryonic axes begins before cleavage in normal mouse development | |
| CN100587452C (zh) | 一种卵母细胞石蜡切片的制备方法 | |
| US10232364B2 (en) | Aspiration tip | |
| CN211426906U (zh) | 双光子显微镜透明化标本适配器 | |
| US20200116989A1 (en) | Microscope slide | |
| Susaki et al. | Perspective: extending the utility of three-dimensional organoids by tissue clearing technologies | |
| CN111142250A (zh) | 双光子显微镜透明化标本适配器及其成像方法 | |
| Kim et al. | Optimized single-step optical clearing solution for 3D volume imaging of biological structures | |
| WO2021147198A1 (zh) | 多光子显微镜透明化标本适配器及其成像方法 | |
| McMillan et al. | Transmission electron microscopy for analysis of mitochondria in mouse skeletal muscle | |
| CN211718614U (zh) | 标本适配器及标本适配装置 | |
| US11841491B2 (en) | Observation vessel, sample preparation method, and observation method | |
| WO2016047676A1 (ja) | 生体由来細胞を用いたがん細胞の検出方法 | |
| CN103116215A (zh) | 基于硝酸纤维素膜的脱落细胞学检查的新型细胞载片构件 | |
| CN104931327B (zh) | 微米级生物材料石蜡切片方法 | |
| Campinho et al. | Three-dimensional microscopy and image analysis methodology for mapping and quantification of nuclear positions in tissues with approximate cylindrical geometry | |
| Mogessie | Visualization and functional analysis of spindle actin and chromosome segregation in mammalian oocytes | |
| Carvalho et al. | Imaging zebrafish embryos by two-photon excitation time-lapse microscopy | |
| Vagionitis et al. | Visualization and time-lapse microscopy of myelinating glia in vivo in zebrafish | |
| CN203117514U (zh) | 基于硝酸纤维素膜的脱落细胞学检查的新型细胞载片构件 | |
| CN220063565U (zh) | 一种改进的浮游动物液基封制标本容器 | |
| CN213007238U (zh) | 一种盖玻片重点标记笔 | |
| CN111763692B (zh) | 用于核移植盲吸法去核体积的度量方法 | |
| JPH0345213Y2 (zh) | ||
| CN102735839A (zh) | 一种研究食道癌组织转移抑制基因nm23-H1分期分级微阵列组织芯片 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20200904 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |