CN207483773U - 一种可构建表达单克隆抗体的cho细胞株的试剂盒 - Google Patents

Abstract

本实用新型公开了一种可构建表达单克隆抗体的CHO细胞株的试剂盒，包括由隔热材料制成的盒体、可开启的盒盖以及容置在盒体内的存储单元；所述存储单元包括13个试剂瓶放置孔以及对应放置的试剂瓶，和滤器。所述存储单元优选在靠近盒体侧边的位置还设有第一凹槽和第二凹槽用于存放冰袋等保温物质，试剂瓶放置孔和滤器位于两凹槽之间。本试剂盒提供的试剂是慢病毒高效感染CHO细胞的最佳条件所需的，可以有效恢复慢病毒对CHO细胞生长状态的影响；同时使用嘌呤霉素对感染后的CHO细胞进行快速筛选，能高效快速得到高表达单克隆抗体的细胞株，其抗体产量同传统的脂质体转染方法相比，可提高数倍。

Description

一种可构建表达单克隆抗体的CHO细胞株的试剂盒

技术领域

本实用新型涉及一种可构建表达单克隆抗体的CHO细胞株的试剂盒。

背景技术

以哺乳动物细胞为代表的真核表达系统是生物大分子制药行业的发展趋势。哺乳动物表达系统由于具有精确的转录后加工，翻译及修饰(糖基化、酰胺化、磷酸化及二硫键形成)等优势，目前在工业界被普遍应用于治疗性单克隆抗体的表达。

单克隆抗体在哺乳动物悬浮细胞(如CHO或293F)中的表达通常有两种方法。一种是使用脂质体转染，将表达质粒转染至宿主细胞，实现抗体蛋白的瞬时表达。该方法速度快，适用于抗体的小量表达。然而，如果需要大量表达目标抗体就需要进行大量质粒的提取，以及大量的细胞培养和转染，成本高昂，工作量大。此外，抗体的产量通常比较低，不同批次抗体的产量也不稳定。另一种方法是使用筛选标记构建稳定细胞株，主要包括谷氨酰胺合成酶基因扩增系统和二氢叶酸还原酶基因扩增系统。通过抗体基因和筛选基因的共表达，以及对宿主细胞进行加压筛选，最终获得高表达单克隆抗体的稳定细胞株。该方法能得到高产量的细胞株，但是，需要对大量细胞进行反复筛选，耗时长(3～6个月)，工作量大。

目前还缺少一种高效快速得到高表达单克隆细胞株的技术途径。

实用新型内容

本实用新型的目的是针对现有技术中的上述不足，基于对基因重组技术，设计了一款可以快速构建高表达单克隆抗体的稳定CHO细胞株的试剂盒，可以快速高效的利用CHO细胞表达单克隆抗体。

本实用新型提供的一种可构建表达单克隆抗体的CHO细胞株的试剂盒，其包括由隔热材料制成的盒体、可开启的盒盖以及容置在盒体内的存储单元；所述存储单元包括多个试剂瓶放置孔以及对应放置的试剂瓶，和滤器；所述试剂瓶放置孔为13个，分别为:

第一放置孔：放置装有限制性内切酶试剂瓶，第二放置孔：放置装有慢病毒表达载体骨架的试剂瓶，第三放置孔：放置装有连接酶的试剂瓶，第四放置孔：放置装有包装质粒的试剂瓶，第五放置孔：放置装有包膜蛋白质粒的试剂瓶，第六放置孔：放置装有转移质粒的试剂瓶，第七放置孔：放置装有无血清培养基的试剂瓶，第八放置孔：放置装有脂质体转染试剂的试剂瓶，第九放置孔：放置装有293T细胞的试剂瓶，第十一放置孔：放置装有CHO细胞的试剂瓶，第十二放置孔：放置装有嘌呤霉素的试剂瓶，第十三放置孔：放置装有10％胎牛血清的培养基的试剂瓶。

该试剂盒包含了整个制备流程中所需要的全部试剂，在使用过程中，以慢病毒为载体，将单克隆抗体的重链和轻链基因同时导入悬浮培养的CHO细胞，可一次性快速构建高表达和稳定的细胞株。

优选地，所述存储单元在靠近盒体侧边的位置还设有第一凹槽和第二凹槽，所述试剂瓶放置孔和滤器位于两凹槽之间。

优选地，所述第一凹槽和第二凹槽内放置有保温物质。

优选地，所述盒盖通过铰接的方式安装在盒体上。

优选地，所述存储单元为一海绵材质或纸质的固定板，可拆卸地固定在盒体内。

优选地，所述滤器的过滤孔径为0.45μm。

与现有技术相比，本实用新型具有如下有益效果：

本试剂盒提供的试剂是慢病毒高效感染CHO细胞的最佳条件所需的，可以有效恢复慢病毒对CHO细胞生长状态的影响，以及使用嘌呤霉素对CHO细胞进行快速筛选。本试剂盒能高效快速得到高表达的细胞株，其抗体产量同传统的脂质体转染方法相比，可提高数倍。

附图说明

图1为本实用新型其中一个示例的试剂盒的整体结构示意图。

图2为图1试剂盒的内部结构示意图。

图中：

1、第一放置孔，2、第二放置孔，3、第三放置孔，4、第四放置孔，5、第五放置孔，6、第六放置孔，7、第七放置孔，8、第八放置孔，9、第九放置孔，10、滤器，11、第十一放置孔，12、第十二放置孔，13、第十三放置孔，14、盒盖、15、盒体，16、第一凹槽，17、第二凹槽。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本实用新型的结构进行详细说明，以使本领域技术人员能够更好地理解本实用新型。

请参见图1，一种可构建表达单克隆抗体的CHO细胞株的试剂盒，其包括由隔热材料制成的盒体15、可开启的盒盖14以及容置在盒体内的存储单元；所述存储单元为一海绵材质或纸质的固定板，可拆卸地固定在盒体内。存储单元包括多个试剂瓶放置孔以及对应放置的试剂瓶，和滤器10。存储单元在靠近盒体侧边的位置还设有第一凹槽6和第二凹槽17，所述试剂瓶放置孔和滤器10位于两凹槽之间，两凹槽内装有保温物质例如冰袋等，以保持试剂盒处于低温状态。所述试剂瓶放置孔为13个，分别为:

第一放置孔1：放置装有限制性内切酶试剂瓶，第二放置孔2：放置装有慢病毒表达载体骨架的试剂瓶，第三放置孔3：放置装有连接酶的试剂瓶，第四放置孔4：放置装有包装质粒的试剂瓶，第五放置孔5：放置装有包膜蛋白质粒的试剂瓶，第六放置孔6：放置装有转移质粒的试剂瓶，第七放置孔7：放置装有无血清培养基的试剂瓶，第八放置孔8：放置装有脂质体转染试剂的试剂瓶，第九放置孔9：放置装有293T细胞的试剂瓶，第十一放置孔11：放置装有CHO细胞的试剂瓶，第十二放置孔12：放置装有嘌呤霉素的试剂瓶，第十三放置孔13：放置装有10％胎牛血清的培养基的试剂瓶。

使用方法：

目标单克隆抗体的重链和轻链可变区序列来自于公开的序列。使用重链和轻链基因的质粒为模板，进行PCR反应。PCR产物用限制性内切酶(如XbaI和SalI酶)切后，与慢病毒表达载体骨架部分用连接酶连接，慢病毒载体构建完成。

将得到的慢病毒载体用三质粒(包装质粒、包膜蛋白质粒和转移质粒)包装系统，加入无血清培养基和脂质体转染试剂混匀，与293T细胞进行慢病毒的包装。培养后的上清使用滤器10过滤，滤器10的过滤孔径为0.45μm。过滤后获得慢病毒，4℃保存。

CHO细胞与慢病毒培养48小时，并使用嘌呤霉素进行筛选。3天后用胰酶处理，加入10％胎牛血清的培养基终止反应。扩大培养细胞，转移至摇瓶，悬浮培养。

6天后对表达的抗体进行检测与鉴定。

本文中应用了具体个例对发明构思进行了详细阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本实用新型的核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离该发明构思的前提下，所做的任何显而易见的修改、等同替换或其他改进，均应包含在本实用新型的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种可构建表达单克隆抗体的CHO细胞株的试剂盒，其特征在于，包括由隔热材料制成的盒体、可开启的盒盖以及容置在盒体内的存储单元；所述存储单元包括多个试剂瓶放置孔以及对应放置的试剂瓶，和滤器；所述试剂瓶放置孔为13个，分别为:

第一放置孔：放置装有限制性内切酶试剂瓶，第二放置孔：放置装有慢病毒表达载体骨架的试剂瓶，第三放置孔：放置装有连接酶的试剂瓶，第四放置孔：放置装有包装质粒的试剂瓶，第五放置孔：放置装有包膜蛋白质粒的试剂瓶，第六放置孔：放置装有转移质粒的试剂瓶，第七放置孔：放置装有无血清培养基的试剂瓶，第八放置孔：放置装有脂质体转染试剂的试剂瓶，第九放置孔：放置装有293T细胞的试剂瓶，第十一放置孔：放置装有CHO细胞的试剂瓶，第十二放置孔：放置装有嘌呤霉素的试剂瓶，第十三放置孔：放置装有10％胎牛血清的培养基的试剂瓶。

2.根据权利要求1所述的可构建表达单克隆抗体的CHO细胞株的试剂盒，其特征在于，所述存储单元在靠近盒体侧边的位置还设有第一凹槽和第二凹槽，所述试剂瓶放置孔和滤器位于两凹槽之间。

3.根据权利要求2所述的可构建表达单克隆抗体的CHO细胞株的试剂盒，其特征在于，所述第一凹槽和第二凹槽内放置有保温物质。

4.根据权利要求1所述的可构建表达单克隆抗体的CHO细胞株的试剂盒，其特征在于，所述盒盖通过铰接的方式安装在盒体上。

5.根据权利要求1所述的可构建表达单克隆抗体的CHO细胞株的试剂盒，其特征在于，所述存储单元为一海绵材质或纸质的固定板，可拆卸地固定在盒体内。

6.根据权利要求1所述的可构建表达单克隆抗体的CHO细胞株的试剂盒，其特征在于，所述滤器的过滤孔径为0.45μm。